Name: Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Leer orthotopische implantatie van plaveiselcelcarcinoomcellen in muizen voor oncologisch onderzoek naar het tumormicro-milieu en behandelingsresistentie. Dit model bootst menselijke klinische symptomen nauwkeurig na.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Alle dierlijke procedures werden uitgevoerd overeenkomstig een goedgekeurde institutionele dierlijke zorg en gebruik Comité (IACUC) protocol van de Universiteit van Colorado Denver (protocol # 00250).
1. tumor celkweek
Opmerking: B4B8 en LY2-cellijnen werden gebruikt voor het genereren van orthotopic HNSCC tumoren: B4B8 tumorcellen waren afgeleid van mucosal keratinocyten carcinogeen-getransformeerd (van BALB/C muizen)11. LY2 tumorcellen waren afgeleid van lymfeknoop metastasen van een spontaan getransformeerde BALB/C Keratinocyt lijn (Pam 212)12,13. Beide cellijnen werden beschikbaar gesteld door Dr Nadarajah Vigneswaran (UTHealth, Houston, TX, Verenigde Staten).
<ol><li>Dulbecco van gemodificeerde Eagle's medium (DMEM) F/12 aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS) en 1% antimicrobiële reagens voor het onderhoud van de lijn cel gebruiken Deze cellijnen in een steriele incubator bij 37 ° C en 5% CO2handhaven. Cellen moeten worden gebruikt voor inoculatie voor meer dan 15 passages.</li>
	<li>Plaat 2 x 10,6 tot en met 4 x 106 cellen in 175 cm2 cel cultuur kolven. Opmerking: Controleer de cellen minder dan 90% heuvels te vermijden inducerende een stress-respons.</li>
	<li>Wanneer de cellen zijn 70% heuvels (~ 48 h), verwijder de kolf uit de incubator en wassen van de cellen 3 x met koude-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS).</li>
	<li>Loskoppelen van de cellen van de kolf met behulp van 0,25% trypsine, genoeg ter dekking van het oppervlak van de plaat.<ol>
<li>Om dit te doen, afzien 4 mL trypsine in een maatkolf van 175 cm2 met 70% confluente cellen. Incubeer de cellen met trypsine gedurende 3-4 min. in de cel cultuur incubator bij 37 ° C en 5% CO2.</li>
		<li>Visualiseer de cellen onder een microscoop om mobiele-detachement.</li>
		<li>Voeg 12 mL DMEM F/12 media met FBS te neutraliseren trypsine activiteit.</li>
	</ol>
</li>
	<li>De celsuspensie gecombineerd en leg deze in een conische tube van 50 mL.</li>
	<li>Schudden van de buis met de cellen die door het omkeren van het 3 x-4 x.</li>
	<li>Optioneel, een aliquoot 10 µL celsuspensie meng met 10 µL van Trypan blauw in een microcentrifuge buis en met behulp van een hemocytometer cellen tellen. Levensvatbaarheid van cellen bepalen door het aantal Trypan-blauw-positieve cellen van het totale aantal cellen af te trekken en gedeeld door het totale aantal cellen.</li>
	<li>Centrifugeer de celsuspensie bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C.</li>
	<li>Resuspendeer de cellen in serumvrij en antibiotica-vrij DMEM op een passende omvang zodat 1 x 106 cellen in 50 µL van media aanwezig zijn. Opmerking: Op basis van de in vivo cel lijn agressiviteit (empirisch bepaald), 1 x 106 cellen per injectieplaats per muis werd geacht voor B4B8 en LY2 cellen.</li>
	<li>Plaats de ampul met de celsuspensie op ijs.</li>
	<li>Plaats de vooraf ontdooide kelder membraan matrix op ijs. Opmerking: De kelder membraan matrix was's nachts ontdooid bij 4 ° C.</li>
</ol>2. cel injectie in muizen
<ol><li>Voorbereiden van een 1:1-mengsel van cellen: basement membraan matrix (van elk 50 µL).</li>
	<li>Voeg de cellen eerst; daarna Pipetteer geleidelijk de kelder membraan-matrix. Vermijd invoering van luchtbellen. Zorgen ervoor dat het mengsel is onmiddellijk vóór de dierlijke injectie. Cellen toevoegen aan kelder membraan matrix voor een langere periode van tijd kan resulteren in cel zich vestigen in het mengsel van de matrix, waardoor het mengsel moeilijk is te schudden rigoureus. Hierdoor wordt een aanzienlijke variabiliteit in de grootte van de tumor tussen muizen.</li>
	<li>Meng voorzichtig. Zorgen dat alle maatregelen met betrekking tot de matrix worden uitgevoerd op het ijs. Kelder membraan matrix zal polymeriseren bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Spuiten voorbereiden door inoculatie.</li>
	<li>0,5 mL insuline spuiten (23 G) laden met 100 µL van de cel/kelder membraan matrix oplossing.</li>
	<li>Houd de spuiten op ijs te vermijden kelder membraan matrix polymerisatie.</li>
	<li>Anesthetize muizen door ze te plaatsen in een kamer met Isofluraan en zuurstof (2,5%).</li>
	<li>Zorgen dat de muizen zijn diep verdoofd alvorens de injectie uit te voeren (door te zorgen voor een gebrek aan respons naar een snuifje teen).</li>
	<li>Steek de naald in de linker- of buccale regio. Dit gebeurt via de beschikbare open ruimte aan weerszijden van de mond.</li>
	<li>Ervoor zorgen dat de tong van de muis niet op de manier. Opmerking: Het is gemakkelijk om te porren van de tong, die in tong tumoren resulteren zal. De tong naar de overkant verplaatsen indien nodig.</li>
	<li>Houd de injectiespuit parallel aan de buccale regio terwijl hij in de mondholte.</li>
	<li>Als u klaar bent om te injecteren, terugtrekken van de spuit en voeg langzaam de spuit in een hoek van 10°.</li>
	<li>Injecteren van 100 µL van de cel/kelder membraan matrix schorsing gedurende een periode van 5 s.</li>
	<li>De spuit op zijn plaats voor een extra 5 houden s om al het materiaal wordt geïnjecteerd. Opmerking: Voor controle nontumor-bevattende muizen, injecteren een mengsel van serum-vrije media en matrix (zoals hierboven beschreven) zonder de tumorcellen.</li>
	<li>De spuit zachtjes trekken.</li>
	<li>De bovenstaande procedure met de resterende muizen voortzetten.</li>
	<li>Voorzien van 1 week tot tumoren beginnen te verschijnen grove (50 – 200 mm3 voor B4B8 en LY2 cellen).</li>
</ol>3. de controle muis
<ol><li>De eerste meting met behulp van remklauwen op 1 week na de injectie van de cel tumor uit te voeren. Oog op de berekening van het volume van de tumor met behulp van externe remklauwen, bepalen de grootste longitudinale diameter (lengte) en de grootste dwarse diameter (breedte) en gebruik de gemodificeerde ellipsvormige formule14,15. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/59195/59195eq1.jpg">
</li>
	<li>Blijven metingen uit te voeren regelmatig remklauw voor tumor volume (1 x-2 x per week op gezette tijden).</li>
	<li>Dierlijke gewicht te beoordelen van de gevolgen van de tumorgroei op het vervoederen aan te meten.</li>
</ol>4. het oogsten van tumoren
<ol><li>Wanneer de experimentele eindpunt wordt bereikt, euthanaseren de dieren met behulp van passende maatregelen (bijvoorbeeld CO2 verstikking, onthoofding of cervicale dislocatie). Opmerking: In deze studie was het eindpunt bereikt als de muizen werd stervende (met een gewichtsverlies van > 15% van hun begingewicht, een gebrek aan verzorging, cachexia) en/of als de grootte van de tumor 1.000 mm3bereikt.</li>
	<li>
Begin ontrafeling van het dier door het creëren van een lange incisie door de middellijn in de nek regio.
	<ol>
<li>Botte pincet gebruiken om te grijpen van de huid en scherpe schaar te snijden van de huid.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Invoegen van schaar voorzichtig onder de huid over de tumor en maak luchtzakken door duwen de schaar over en in de huid.</li>
	<li>Zodra de huid voldoende losgemaakt van de tumor is, identificeren de zuig lymfklieren (DLNs) en de accijnzen hen om te voorkomen dat de tumor weefsel verward door de aanwezigheid van lymfklieren. Opmerking: Grote tumoren kunnen bereiken en/of dekking van de DLN. Afhankelijk van de soort test wordt uitgevoerd, is het isolement van intact lymfklieren essentieel om te vermijden morsen van immune cellen in de tumor, die resulteren zal in het scheeftrekken van de resultaten van de test.</li>
	<li>Snijden door de grenzen van de tumor totdat het gehele volume is losgekoppeld.</li>
</ol>5. de verwerking voor Downstream toepassingen tumor
<ol><li>Voor de downstream histologische onderzoek, tumoren in 10% formaline bij kamertemperatuur te plaatsen. Om te voorkomen dat overfixation, door de formaline te vervangen door 70% ethanol. Voor stroom cytometry analyse, door de tumoren te verwerken zoals hieronder beschreven. Opmerking: Het weefsel kan worden gehouden in formaline gedurende 72 uur voordat de overfixation kan worden problematisch voor bepaalde soorten vlekken.</li>
	<li>Snijd de tumor in 1 – 2 mm-gerangschikte stukken met behulp van een steriele scheermesje of scherpe schaar.</li>
	<li>Leg de gesneden tumor stukjes in een conische buis van 50 mL met collagenase III (4.250 eenheden per monster), DNase ik (0.1 mg per monster) en trypsine remmer (1 mg per monster).</li>
	<li>Incubeer bij 37 ° C gedurende 30 minuten met schudden elke 10 min. Opmerking: De monsters kunnen worden geplaatst in een hersluitbare zak, gesteriliseerd met 90% ethanol, en geplaatst in een cel cultuur incubator.</li>
	<li>Na 30 min, Voeg 20 mL Henks evenwichtig zoutoplossing (HBSS) en spin bij 300 x g gedurende 5 min. Opmerking: HBSS bestaat uit kaliumchloride, natriumchloride, natriumbicarbonaat, sodium fosfaat dibasische, natriumfosfaat monobasisch en glucose.</li>
	<li>Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet in 2 – 3 mL lysis-buffermengsel van rode bloedcellen (RBC). Pipetteer rigoureus. Opmerking: RBC lysis-buffermengsel bestaat uit ammoniumchloride, natriumbicarbonaat en dinatrium.</li>
	<li>Incubeer gedurende 2 minuten bij kamertemperatuur. Opmerking: Langere incubatietijd kunnen giftig voor andere cel populaties.</li>
	<li>Voeg 20 mL HBSS te neutraliseren van het effect van lysis buffer.</li>
	<li>Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 minuten en verwijder het supernatant.</li>
	<li>Resuspendeer de pellet in 10 mL HBSS.</li>
	<li>Laat de oplossing door een 70 µm nylon afdekking en centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min. Verwijder het supernatant.</li>
	<li>Herhaal stap 5.8 – 5.10 en doorgeven van de celsuspensie via een afdekking nylon 40 µm om ervoor te zorgen dat elke extra vuil wordt verwijderd uit de suspensie.</li>
</ol>6. cel kleuring en Data-acquisitie
<ol><li>Resuspendeer de cel pellet in 1 mL HBSS.</li>
	<li>De cellen met behulp van een hemocytometer of een geautomatiseerde cel teller, tellen, zoals beschreven in stap 1.7</li>
	<li>
Bepaal het totale celaantal en juiste concentratie voor kleuring. Opmerking: de ideale cel concentratie voor stroom cytometry kleuring is 1-2 miljoen cellen. Bijvoorbeeld, als de kleuring wordt uitgevoerd in een 96-wells-plaat en er zijn 10 miljoen cellen, resuspendeer de steekproef in 1 mL en plaat 100 µL voor 1 miljoen cellen per putje.</li>
	<li>
Voeg Fc blok (CD16/CD32) met een concentratie van 1:100 om te voorkomen dat nonantigen-specifieke binding van immunoglobulinen aan de FcγIII en FcγII-receptoren. Incubeer gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur.
	<ol>
<li>Centrifugeren en resuspendeer de pellet cel in 100 µL van stroom cytometry cel kleuring buffer (bestaat uit zoutoplossing met 5% FBS, EDTA van 2% en 1% HEPES).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Uitvoeren celoppervlak kleuring volgens leverancier geleverde instructies (het toevoegen van elke antilichaam bij de juiste verdunning). Incubeer gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur.
	<ol>
<li>Centrifugeren en resuspendeer de pellet cel in 100 µL van HBSS. Herhaal 2 x om zich te ontdoen van overtollige antilichaam.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Voorbeelden van op een passende stroom cytometer uitvoeren.
	<ol>
<li>Als het analyseren van intracellulaire markeringen (bijvoorbeeld foxp3), voert u cel permeabilization en kleuring volgens de instructies van de leverancier.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chaturvedi, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worldwide+trends+in+incidence+rates+for+oral+cavity+and+oropharyngeal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers.</a> Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).</li>
<li>Ang, K. K., Sturgis, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+as+a+marker+of+the+natural+history+and+response+to+therapy+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus as a marker of the natural history and response to therapy of head and neck squamous cell carcinoma.</a> Seminars in Radiation Oncology. 22 (2), 128-142 (2012).</li>
<li>Amin, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Eighth+Edition+AJCC+Cancer+Staging+Manual%3A+Continuing+to+build+a+bridge+from+a+population-based+to+a+more+%26%2334%3Bpersonalized%26%2334%3B+approach+to+cancer+staging%5BTitle%5D)+AND+%22CA%3A+A+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">The Eighth Edition AJCC Cancer Staging Manual: Continuing to build a bridge from a population-based to a more &#34;personalized&#34; approach to cancer staging.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (2), 93-99 (2017).</li>
<li>Salley, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+carcinogenesis+in+the+cheek+pouch+of+the+Syrian+hamster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental carcinogenesis in the cheek pouch of the Syrian hamster.</a> Journal of Dental Research. 33 (2), 253-262 (1954).</li>
<li>Morris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+experimental+carcinogensis+in+the+hamster+cheek+pouch%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Factors influencing experimental carcinogensis in the hamster cheek pouch.</a> Journal of Dental Research. 40, 3-15 (1961).</li>
<li>MacDonald, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+epithelial+dysplasia+in+hamster+cheek+pouch+carcinogenesis+and+human+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of epithelial dysplasia in hamster cheek pouch carcinogenesis and human oral mucosa.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 10 (3), 186-191 (1981).</li>
<li>Hawkins, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4NQO+carcinogenesis%3A+a+mouse+model+of+oral+cavity+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Head+%26+Neck%22%5BJournal%5D)">4NQO carcinogenesis: a mouse model of oral cavity squamous cell carcinoma.</a> Head & Neck. 16 (5), 424-432 (1994).</li>
<li>Tang, X. H., Knudsen, B., Bemis, D., Tickoo, S., Gudas, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+cavity+and+esophageal+carcinogenesis+modeled+in+carcinogen-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Oral cavity and esophageal carcinogenesis modeled in carcinogen-treated mice.</a> Clinical Cancer Research. 10 (1 Pt 1), 301-313 (2004).</li>
<li>Vered, M., Yarom, N., Dayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((4NQO+oral+carcinogenesis%3A+animal+models%2C+molecular+markers+and+future+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">4NQO oral carcinogenesis: animal models, molecular markers and future expectations.</a> Oral Oncology. 41 (4), 337-339 (2005).</li>
<li>Bornstein, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smad4+loss+in+mice+causes+spontaneous+head+and+neck+cancer+with+increased+genomic+instability+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Smad4 loss in mice causes spontaneous head and neck cancer with increased genomic instability and inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 119 (11), 3408-3419 (2009).</li>
<li>Thomas, G. R., Chen, Z., Oechsli, M. N., Hendler, F. J., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+expression+of+CD80+is+a+marker+for+increased+tumorigenicity+in+a+new+murine+model+of+oral+squamous-cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decreased expression of CD80 is a marker for increased tumorigenicity in a new murine model of oral squamous-cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 82 (3), 377-384 (1999).</li>
<li>Yuspa, S. H., Hawley-Nelson, P., Koehler, B., Stanley, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+transformation+markers+in+differentiating+epidermal+cell+lines+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A survey of transformation markers in differentiating epidermal cell lines in culture.</a> Cancer Research. 40 (12), 4694-4703 (1980).</li>
<li>Chen, Z., Smith, C. W., Kiel, D., Van Waes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+variants+derived+following+in+vivo+tumor+progression+of+an+in+vitro+transformed+squamous+cell+carcinoma+line+acquire+a+differential+growth+advantage+requiring+tumor-host+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Metastatic variants derived following in vivo tumor progression of an in vitro transformed squamous cell carcinoma line acquire a differential growth advantage requiring tumor-host interaction.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 15 (5), 527-537 (1997).</li>
<li>Euhus, D. M., Hudd, C., LaRegina, M. C., Johnson, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+measurement+in+the+nude+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor measurement in the nude mouse.</a> Journal of Surgical Oncology. 31 (4), 229-234 (1986).</li>
<li>Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+subcutaneous+tumor+size+in+athymic+%28nude%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemotherapy+and+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).</li>
<li>Yushkevich, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((User-guided+3D+active+contour+segmentation+of+anatomical+structures%3A+significantly+improved+efficiency+and+reliability%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroImage%22%5BJournal%5D)">User-guided 3D active contour segmentation of anatomical structures: significantly improved efficiency and reliability.</a> NeuroImage. 31 (3), 1116-1128 (2006).</li>
<li>Dutta, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+tumour+necrosis%2C+tumour+proliferation%2C+local+and+systemic+inflammation%2C+microvessel+density+and+survival+in+patients+undergoing+potentially+curative+resection+of+oesophageal+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Britisch+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">The relationship between tumour necrosis, tumour proliferation, local and systemic inflammation, microvessel density and survival in patients undergoing potentially curative resection of oesophageal adenocarcinoma.</a> Britisch Journal of Cancer. 106 (4), 702-710 (2012).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+lines+and+human+tumors%3A+a+rational+approach+to+preclinical+model+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human tumors: a rational approach to preclinical model selection.</a> Molecular Cancer Research. 12 (4), 571-582 (2014).</li>
<li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li>
<li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ionizing+radiation+sensitizes+tumors+to+PD-L1+immune+checkpoint+blockade+in+orthotopic+murine+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22OncoImmunology%22%5BJournal%5D)">Ionizing radiation sensitizes tumors to PD-L1 immune checkpoint blockade in orthotopic murine head and neck squamous cell carcinoma.</a> OncoImmunology. 6 (10), e1356153(2017).</li>
<li>Ferris, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+evaluations+of+nivolumab+%28nivo%29+versus+investigator%E2%80%99s+choice+%28IC%29+chemotherapy+for+recurrent+or+metastatic+%28R%2FM%29+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+%28SCCHN%29%3A+CheckMate+141%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Further evaluations of nivolumab (nivo) versus investigator’s choice (IC) chemotherapy for recurrent or metastatic (R/M) squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN): CheckMate 141.</a> Journal of Clinical Oncology. 34, (2016).</li>
<li>Ferris, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+for+Recurrent+Squamous-Cell+Carcinoma+of+the+Head+and+Neck%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nivolumab for Recurrent Squamous-Cell Carcinoma of the Head and Neck.</a> The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1856-1867 (2016).</li>
<li>Harrington, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nivolumab+versus+standard%2C+single-agent+therapy+of+investigator%27s+choice+in+recurrent+or+metastatic+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck+%28CheckMate+141%29%3A+health-related+quality-of-life+results+from+a+randomised%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Nivolumab versus standard, single-agent therapy of investigator's choice in recurrent or metastatic squamous cell carcinoma of the head and neck (CheckMate 141): health-related quality-of-life results from a randomised, phase 3 trial.</a> The Lancet Oncology. 18 (8), 1104-1115 (2017).</li>
<li>Kiyota, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized%2C+open-label%2C+Phase+III+clinical+trial+of+nivolumab+vs.+therapy+of+investigator%27s+choice+in+recurrent+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck%3A+A+subanalysis+of+Asian+patients+versus+the+global+population+in+checkmate+141%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">A randomized, open-label, Phase III clinical trial of nivolumab vs. therapy of investigator's choice in recurrent squamous cell carcinoma of the head and neck: A subanalysis of Asian patients versus the global population in checkmate 141.</a> Oral Oncology. 73, 138-146 (2017).</li>
<li>Ling, D. C., Bakkenist, C. J., Ferris, R. L., Clump, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Immunotherapy+in+Head+and+Neck+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Role of Immunotherapy in Head and Neck Cancer.</a> Seminars in Radiation Oncology. 28 (1), 12-16 (2018).</li>
<li>Perri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+Biological+bases+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Head+%26+Neck%22%5BJournal%5D)">Radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma: Biological bases and therapeutic implications.</a> Head & Neck. 37 (5), 763-770 (2015).</li>
<li>Yamamoto, V. N., Thylur, D. S., Bauschard, M., Schmale, I., Sinha, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+radioresistance+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Overcoming radioresistance in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncology. 63, 44-51 (2016).</li>
<li>Bonner, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+plus+cetuximab+for+locoregionally+advanced+head+and+neck+cancer%3A+5-year+survival+data+from+a+phase+3+randomised+trial%2C+and+relation+between+cetuximab-induced+rash+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy plus cetuximab for locoregionally advanced head and neck cancer: 5-year survival data from a phase 3 randomised trial, and relation between cetuximab-induced rash and survival.</a> The Lancet Oncology. 11 (1), 21-28 (2010).</li>
<li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+EphB4-Ephrin-B2+Signaling+Enhances+Response+to+Cetuximab-Radiation+Therapy+in+Head+and+Neck+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Inhibition of EphB4-Ephrin-B2 Signaling Enhances Response to Cetuximab-Radiation Therapy in Head and Neck Cancers.</a> Clinical Cancer Research. 24 (18), 4539-4550 (2018).</li>
<li>Bhatia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+radiosensitization+in+EphB4+receptor-expressing+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Enhancing radiosensitization in EphB4 receptor-expressing Head and Neck Squamous Cell Carcinomas.</a> Scientific Reports. 6, 38792(2016).</li>
<li>Tang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+radiation+and+immunotherapy%3A+a+new+systemic+therapy+for+solid+tumors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunology+Research%22%5BJournal%5D)">Combining radiation and immunotherapy: a new systemic therapy for solid tumors?</a> Cancer Immunology Research. 2 (9), 831-838 (2014).</li>
<li>Oweida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistance+to+radiotherapy+and+PD-L1+blockade+is+mediated+by+TIM-3+upregulation+and+regulatory+T-cell+infiltration%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Resistance to radiotherapy and PD-L1 blockade is mediated by TIM-3 upregulation and regulatory T-cell infiltration.</a> Clinical Cancer Research. , (2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Strenge analyse en karakterisering van de tumor communicatie vertegenwoordigen een belangrijke strategie voor het begrijpen van mechanismen van ontwikkeling van de tumor, progressie en metastasen en voor de ontwikkeling van effectieve therapieën. Hoofd en nek kanker is een complexe ziekte die afkomstig van meerdere anatomische sites binnen het hoofd en de nek regio zijn kan. Een belangrijke belemmering voor begrip van de mechanismen van de ziekte en verbetering van de therapie is een gebrek aan lymfkliertest muis cellijn...

HNSCC is de vijfde meest voorkomende maligniteit wereldwijd, met meer dan 600.000 patiënten gediagnosticeerd jaarlijks1. Ondanks agressieve behandeling met chemotherapie en radiotherapie (RT), blijft de totale (OS) overlevingskansen voor HNSCC patiënten zonder infectie van het humaan papillomavirus (HPV) minder dan 50% na 5 jaar2. Dit wordt grotendeels toegeschreven aan een zeer complexe tumor communicatie als tumoren afkomstig van verschillende verschillende anatomische sites in het hoofd en de nek gebied zijn kunnen, waaronder de buccale mucosa, de tong, de verdieping van de mond, de neusholte, de mondholte, de keelholte, orofarynx en hypopharynx. Bovendien, het hoofd en de nek regio is zeer gevacuoliseerd en bevat bijna de helft van alle lymfeklieren in het lichaam3. Een meerderheid van de studies die onderzoeken van hoofd en nek tumor biologie is afhankelijk van tumor modellen in de flank gebied. Dergelijke modellen kunnen bieden inzicht in tumor-intrinsieke mechanismen, maar het gebrek aan de inheemse hoofd en nek communicatie kan beduidend beïnvloeden het translationeel potentieel van deze bevindingen. Een methode die is gebruikt voor het opwekken van mondelinge tumoren is door blootstelling aan de kankerverwekkende stof 9,10-dimethyl-1,2-benzanthracene (DMBA)4. Deze methode is echter gekoppeld aan een langdurig proces, induceert tumoren in ratten en hamsters, maar niet in muizen, en de resulterende tumoren niet beschikken over veel van de histologische kenmerken van gedifferentieerde SCCs5,6. De invoering van de carcinogen4-nitroquinoline 1-oxide (4-NQO), een in water oplosbare quinolone derivaat, resulteerde in mondelinge tumoren van de muis wanneer toegepast mondeling maar ook te lijden hebben onder lange belichtingstijden (16 weken) en een beperkte nemen tarief binnen en tussen partijen van muizen7,8,9. Verscheidene groepen gebruikt om het ontwikkelen van klinisch relevante modellen, genetisch gemanipuleerde modellen waarbij de manipulatie van stuurprogramma oncogenen of tumor suppressor genen, inclusief TP53, TGFB, KRAS, HRAS en SMAD410. Deze modellen bieden inzicht in tumoren met bekende stuurprogramma genen maar doen niet recapituleren de complexe heterogeniteit van menselijke HNSCCs.
In dit werk tonen we de haalbaarheid van het uitvoeren van een intramucosal inenting van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen. Geënte cellen uitgroeien tot agressieve tumoren binnen 1 week na de injectie. Vergelijkbaar met menselijke HNSCCs, de tumoren metastaseren naar de regionale lymfeklieren. We karakteriseren histologische en klinische kenmerken van de ziekte en de tumor immuun communicatie inzicht verschaffen. Wij stellen voor dat dit model van de orthotopic van HNSCC toepassingen in Kankerbiologie, tumorimmunologie en preklinische studies kent. Mechanismen van immuun belastingontduiking, tumor progressie, behandeling weerstand en metastasen vertegenwoordigen inzake klinische betekenis die kunnen worden aangepakt met behulp van het voorgestelde model.

<table><tbody><tr><td>Collagenase III</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td>LS004183</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td>LS006328</td><td></td></tr><tr><td>Fc Block (CD16/32)</td><td>BD Biosciences</td><td>553141</td><td>&nbsp;Clone 2.4G2&nbsp;</td></tr><tr><td>Flow Cytometry Staining Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4222-26</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14175079</td><td>geen calcium, geen magnesium, geen pheno red</td></tr><tr><td>Helois massa cytometer</td><td>Fluidigm</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel membraanmatrix</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CB-40234B</td><td></td></tr><tr><td>MRI Scanner</td><td>Bruker</td><td>NA</td><td>7.4 Tesla</td></tr><tr><td>RBC lysis buffer</td><td>BioLegend</td><td>420301</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-remmer</td><td>Worthington Biochemical Corp.</td><td>LS002830</td><td></td></tr></tbody></table>

intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling

Intramucosal Inoculation of Squamous Cell Carcinoma Cells in Mice for Tumor Immune Profiling and Treatment Response Assessment

Hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) is een slopende en dodelijke ziekte met een hoge prevalentie van herhaling en falen van de behandeling. Als u wilt betere therapeutische strategieën te ontwikkelen, begrip tumor microenvironmental factoren die bijdragen aan de weerstand van de behandeling is belangrijk. Een belangrijke belemmering voor begrip van de mechanismen van de ziekte en verbetering van de therapie is een gebrek aan lymfkliertest cellijnen die lijken op de agressieve en metastatische aard van menselijke HNSCCs. Bovendien, een meerderheid van lymfkliertest modellen dienst subcutane implantaties van tumoren die geen belangrijke fysiologische functies van het hoofd en de nek regio, met inbegrip van hoge vasculaire dichtheid, uitgebreide lymfatische therapieën en resident mucosal flora. Het doel van deze studie is om te ontwikkelen en karakteriseren van een orthotopic model van HNSCC. We gebruiken twee genetisch verschillende lymfkliertest cellijnen en gevestigde tumoren in de buccale mucosa van muizen. Wij optimaliseren collagenase gebaseerde tumor spijsvertering methoden voor de optimale terugwinning van afzonderlijke cellen uit gevestigde tumoren. De hier gepresenteerde gegevens laten zien dat muizen ontwikkelen hoogst gevacuoliseerd tumoren die naar regionale lymfeklieren metastaseren. Eencellige multiparametric massa cytometry analyse toont de aanwezigheid van diverse immuun populaties met myeloïde cellen die de meerderheid van alle immuuncellen. Het model voorgesteld in deze studie kent toepassingen in Kankerbiologie Tumorimmunologie en preklinische ontwikkeling van roman therapeutics. De gelijkenis van het orthotopic-model aan klinische kenmerken van ziekten bij de mens zorgt een hulpmiddel voor verbeterde vertaling en verbeterde patiëntenoutcomes.

De in vitro beoordeling van LY2 en B4B8 celproliferatie bleek dat beide cellijnen soortgelijke verdubbeling keer hebben (21 h en 23 h, respectievelijk). In vivo beide cellijnen gevormd binnen 1 week na inoculatie (figuur 1A) de massa van een enkele, zichtbaar en voelbaar. In muizen die LY2 tumoren, was de kaak verdreven door 3 weken als gevolg van de tumor last (figuur 1A). Controle muizen die geen tumorcellen heb niet de ontwikk...

Hier presenteren we een reproduceerbare methode voor het ontwikkelen van een model orthotopic lymfkliertest van hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom. Tumoren tonen klinisch relevante histopathologische kenmerken van de ziekte, met inbegrip van necrose, arme differentiatie, knooppunten metastasen en immuun infiltratie. Tumor-dragende muizen ontwikkelen klinisch relevante symptomen zoals dysfagie, verplaatsing van de kaak en gewichtsverlies.

Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a debilitating and deadly disease with a high prevalence of recurrence and treatment failure. To develop ...

Kankers van het hoofd-halsgebied komen steeds vaker voor. Toch is er een beperkt begrip van de tumormicro-omgeving en de mechanismen van behandelingsresistentie in deze regio. Deze techniek kan worden gebruikt om de inheemse micro-omgeving van hoofd/nektumoren op een toegankelijke manier samen te vatten en produceert klinische manifestaties die vergelijkbaar zijn met die bij de mens.Wanneer de tumorcelcultuur 70% samenvloeiing heeft bereikt, was de cellen drie keer met koude PBS per wasbeurt en bevestig de cellen met genoeg 0,25% trypsine om het onderste oppervlak van de kweekkolf te bedekken. Na drie tot vier minuten in de celkweek incubator, bevestig detachement onder een lichte microscoop en neutraliseer de trypsine met 12 milliliter DMEM F12 medium, aangevuld met foetale runderserum. Breng de celsuspensie over in een conische buis van 50 milliliter en meng de cellen drie tot vier keer door inversie.Verzamel vervolgens de cellen door centrifugatie en schort de pellet opnieuw op in serum en antibioticavrije DMEM op een één keer 10 tot de zesde tumorcellen per 50 microliters van gemiddelde concentratie op ijs. Onmiddellijk voor de injectie, meng de cellen op een een-op-een tumorcellen suspensie tot kelder membraan matrix verhouding op ijs. Laad een spuit van 0,5 milliliter uitgerust met een naald van 23 meter met 100 microliter cellen per ontvangerdier.Plaats de spuiten op ijs en bevestig een gebrek aan reactie op teen knijpen in een verdoofde muis. Steek vervolgens de naald in het rechter- of linker buccale gebied door de beschikbare open ruimte aan weerszijden van de mond, waarbij de spuit parallel aan het buccaalgebied wordt gehouden terwijl deze zich in de mondholte bevindt om de injectie van het volledige 100 microlitervolume van de celkeldermatrbramopsie over een periode van vijf seconden te vergemakkelijken. Houd de spuit nog vijf seconden op zijn plaats om ervoor te zorgen dat al het materiaal is geïnjecteerd voordat u de spuit voorzichtig terugtrekt.De tumoren zullen in ongeveer een week schromelijk zichtbaar worden. Een week na de injectie, gebruik remklauwen om de lengte en breedte van elke tumor te meten om het tumorvolume een tot twee keer per week te bepalen. En meet het gewicht van elk dier om de effecten van de tumorgroei op het voeden te beoordelen.Gebruik bij het juiste experimentele eindpunt een scherpe schaar en stompe tangen om een huidincisie door de middellijn in de nek te maken. En steek de schaar zachtjes onder de huid die de tumor om luchtzakken te creëren door het duwen van de schaar over en in de huid. Zodra de huid voldoende is losgemaakt van de tumor, accijns op de drainerende lymfeklieren om te voorkomen dat het tumorweefsel verward door de aanwezigheid van lymfeweefsel en snijd door de grenzen van de tumor totdat het hele volume is losgemaakt.Om de tumor te verwerken voor downstream-analyse, snijd de tumor in een tot twee millimeter grote stukken en plaats de stukken in een 50 milliliter conische buis met collagenase drie, DNAs een, en trypsine remmer. Na het uitbroeden van de tumor stukken op 37 graden Celsius gedurende 30 minuten, met schudden om de 10 minuten, voeg 20 milliliter HBSS aan de buis en passeer de suspensie met de tumor stukken door middel van een 70 micrometer giet nylon zeef. Gebruik een vijf milliliter spuit zuiger om de tumor stukken in de zeef mash en voeg een extra 10 milliliter HBSS door de zeef.Draai de cellen naar beneden door centrifugatie. Stel de pellet opnieuw op in twee tot drie milliliter rode bloedcellysebuffer met rigoureuze pipetting, waardoor de lyse met 20 milliliter verse HBSS na twee minuten bij kamertemperatuur wordt geneutraliseerd. Dan opnieuw schorsen de cellen in een extra 20 milliliter HBSS voor een andere centrifugatie en stam de cellen door middel van een 40 micrometer giet filter om eventuele definitieve puin te verwijderen uit de tumorcel suspensie.LY2 tumoren groeien in een hoger tempo, in vergelijking met B4B8 tumoren. En muizen die kaakverplaatsing vertonen, ontwikkelen snel gewichtsverlies, als gevolg van dysfagie. De mediane overleving bij LY2 muizen is ook minder dan de helft van die waargenomen voor B4B8 tumordragende muizen.Magnetische resonantie beeldvorming van tumordragende muizen toont goed afgebakende tumoren die zich uitstrekken tot in de binnenste laag van het buccale slijmvlies, maar niet in de tong of andere nabijgelegen organen. Histologisch onderzoek geeft aan dat alle LY2 tumordragende muizen slecht gedifferentieerde plaveiselcelcarcinoom ontwikkelen, terwijl muizen met B4B8-tumoren matig gedifferentieerd plaveiselcelcarcinoom ontwikkelen. Alle LY2 tumordragende muizen hebben ook histologisch bevestigde necrose, waarbij de meerderheid matige tot ernstige necrose aantoont.In dit representatieve experiment werd een LY2-tumor geoogst en drie weken na buccale-gebiedstumorcelinjectie verwerkt, zoals aangetoond. CD45-positieve immuuncellen vertegenwoordigden 7,3% van de totale tumorcelpopulatie. CD11b-positieve myeloïde cellen vertegenwoordigden 37,8% van alle CD45-positieve cellen, waarvan de meerderheid werd vastgesteld op F480-positieve macrofagen, met kleine populaties van neutrofielen en myeloïde-afgeleide suppressor cellen ook waargenomen.T-cellen bestonden uit 15,9% van de CD45-positieve immuuncelpopulatie, waarvan 53,4% CD4-positieve FoxP3-positieve regulerende T-cellen waren. Natuurlijke killer cellen bestonden uit minder dan 2% van alle CD45-positieve cellen. Het is belangrijk om injectie te oefenen om vertrouwen en comfort te ontwikkelen bij het vasthouden van de naald en de ontvangermuis en bij het blootstellen van de mond van het dier.Zodra de procedure met succes is uitgevoerd, kunnen experimenten met de beoordeling van tumorrespons op therapie of beoordeling van de intrinsieke en micro-milieufactoren van de tumor worden uitgevoerd. Deze techniek heeft de weg geëffend in het ontwerpen van een door onderzoekers geïnitieerde klinische studie, waarbij de effecten van het combineren van radiotherapie met anti-PL1-therapie bij hoofd- en nekkankerpatiënten worden beoordeeld.

intramucosal-inoculation-squamous-cell-carcinoma-cells-mice-for-tumor

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Een orthotope Model van sereuze eierstokkanker in immunocompetente muizen voor In vivo Tumor Imaging en Bewaking van de Tumor Immuunrespons

Een uitgebreid overzicht van de technieken die betrokken zijn bij het genereren van een muismodel van orale kanker en kwantitatieve controle van de tumor invasie in de tong door middel van multi-foton microscopie van gelabelde cellen wordt gepresenteerd. Dit systeem kan dienen als een nuttig platform voor de moleculaire beoordeling en werkzaamheid van het geneesmiddel van anti-invasieve verbindingen.

Multi-foton Imaging van de tumorcel invasie in een orthotope Muis Model van Oral plaveiselcelcarcinoom

In this video, we develop an orthotopic head and neck cancer murine model by intramucosal inoculation of the squamous cell carcinoma cell line. The tumor-bearing mouse would show resemblance to clinically relevant symptoms of human disease and can thus be used to study cancer progression and discover novel therapeutic strategies.

Intramucosal Inoculation of Cancer Cells in Murine Model: A Procedure to Establish an Orthotopic Head and Neck Cancer Mouse Model

This video demonstrates a cell-based tumor vaccination assay. A mouse, intradermally injected with B16-F10 melanoma cells for tumor formation, is vaccinated with B16-F10 cells secreting Flt3L cytokine near the developed tumor. The secreted Flt3L from the vaccine promotes the maturation and proliferation of dendritic cells that then present tumor antigens to T cells in lymph nodes, triggering a targeted anti-tumor immune response.

Tumor Implantation and Injection of a Tumor Vaccine in a Mouse Model

Een N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) nitrosamine-geïnduceerde blaaskanker model werd ontwikkeld in humane mucine 1 (MUC1) transgene muizen voor de beproeving van de MUC1-gerichte immunotherapie. Na toediening van een MUC1-gericht peptide vaccin was een cytotoxische T-lymfocyt respons tegen MUC1 bevestigd door metingen van serum cytokinen en T-cel-specifieke activiteit.

Inductie van Invasieve Transitional Cell blaascarcinoom in Immune Intact Human MUC1 transgene muizen: Een model voor Immunotherapie Ontwikkeling

Dit protocol beschrijft de generatie van muizen orthotope blaastumoren bij vrouwelijke C57BL / 6J muizen en de monitoring van tumorgroei.

Een muizen orthotope Blaas Tumor Model en Tumor Detection System

Hier presenteren we een tumortransplantatieprotocol voor de karakterisering van tumor-inherente en periferie-afgeleide tumor-geïnfiltreerde lymfocyten in een muistumormodel. Specifieke tracering van de instroom van van de ontvanger afgeleide immuuncellen met flowcytometrie onthult de dynamiek van de fenotypische en functionele veranderingen van deze cellen tijdens antitumorimmuunresponsen.

Tumortransplantatie voor het beoordelen van de dynamiek van tumorinfiltrerende CD8 + T-cellen bij muizen

De vertaling van de bevindingen van intravitale microscopie wordt uitgedaagd door de geringe dieptepenetratie in het weefsel. Hier beschrijven we een muismodel met dorsale vensterkamer dat co-registratie van intravitale microscopie en klinisch toepasbare beeldvormingsmodaliteiten (bijv. CT, MRI) mogelijk maakt voor directe ruimtelijke correlatie, waardoor de klinische vertaling van intravitale microscopiebevindingen mogelijk wordt gestroomlijnd.

Een dorsaal huidplooi raamkamer tumor muismodel voor gecombineerde intravitale microscopie en magnetische resonantie beeldvorming in translationeel kankeronderzoek

Deze studie richt zich op de in vivo subcutane inductie van luminescente colorectale kankercellen in een muizenmodel en de daaropvolgende luminescentiemeting met behulp van een beeldvormingssysteem. De procedure heeft tot doel een reproduceerbaar tumorgroeimodel op te zetten voor real-time monitoring en therapeutische evaluatie.

Subcutane injectie van menselijke colorectale kankercellen bij athymische naakte muizen om de werkzaamheid van antitumoren te evalueren

Een unieke methode om chirurgisch orale plaveiselceltumoren die in de mondholte zijn gevestigd, te verwijderen, wordt hier getoond.

Translationeel relevant tumorresectiemodel voor muispreklinische modellen van orale plaveiselcelcarcinoom

Met de toenemende interesse in intratumorale immunotherapie is het kiezen van tumormodellen die toegankelijk en praktisch zijn, van essentieel belang. Subcutane tumoren zijn gemakkelijk vast te stellen, maar moeilijk te visualiseren en te manipuleren. In dit protocol beschrijven we methoden om intradermale tumoren te genereren die zorgen voor betere zichtbaarheid en toegankelijkheid.

Intradermale tumorimplantatie als robuust model voor intratumorale immunotherapiestudies bij muiskanker

Leer orthotopische implantatie van plaveiselcelcarcinoomcellen in muizen voor oncologisch onderzoek naar het tumormicro-milieu en behandelingsresistentie. Dit model bootst menselijke klinische symptomen nauwkeurig na.

Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling (Video) | JoVE Journal

Intramucosal enten van plaveiselcelcarcinoom cellen in muizen voor Tumor immuun profileren en evaluatie van de reactie van de behandeling

Meer video's verkennen