Name: Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Leer de dissectie van Drosophila popnetvliezen voor immunohistochemie, western analyse en RNA-isolatie. Deze efficiënte methode behoudt weefselintegriteit en ondersteunt meerdere downstream toepassingen in ontwikkelingsbiologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Wij danken Zack Drum en onze recensenten voor nuttige opmerkingen op het manuscript. Dit werk werd gesteund door R15GM114729.

1. de weefsels voorbereiding
<ol><li>Instellen van Drosophila kruist (zoals eerder beschreven20) of specifieke Drosophila stammen voor poppen van het gewenste genotype cultuur. Om ervoor te zorgen dat een groot aantal poppen zich toevallig voordoen, stellen deze vliegen culturen in tweevoud op voedselrijke voedsel media of standaard voedsel media royaal aangevuld met gist-plakken.</li>
	<li>Handhaven van Drosophila culturen bij 25 ° C. Voor kruisen met behulp van de UAS-GAL4 systeem, is GMR-GAL4 een ideale stuurprogramma uitgedrukt in larvale oog schijf cellen posterieure de morfogenetische furrow en in de hele pop ontwikkeling21,22,23, 24. de Kruis UAS-lacZ X GMR-GAL4 dient als een ideale besturingselement Kruis zoals het drijft expressie van het niet-endogene en inert β-galactosidase-eiwit.</li>
	<li>Gebruik het puntje van een bamboe spalk 6", die al natte met gedestilleerd water zachtjes heffen witte pre poppen (figuur 1B) van de kant van gezonde cultuur flesjes (figuur 1A) en de plaats in een 1,5 mL microcentrifuge buis (Figuur 1 c).</li>
	<li>Plaats de buizen in een plastic pipet tip doos samen met een klein stukje weefsel gedrenkt in gedestilleerd water te handhaven van de zaal bij voldoende vochtigheid aan de poppen beschermen tegen uitdroging (Figuur 1 d). Incubeer de poppen bij 25 ° C tot dissectie.</li>
	<li>Gebruik een droge 6" bamboe spalk om voorzichtig uitduwen de poppen van de buis van de microcentrifuge en op een zwarte ontrafeling van de schotel. Leg een vers stuk dubbelzijdige tape op de ontleden schotel uit de buurt van de poppen.</li>
	<li>Plaats de dorsale zijde van de poppen omhoog (dat wil zeggen, operculums naar boven, figuur 1B) met een paar pincet, zorgvuldig op de tape (figuur 2A). Zorg ervoor dat de poppen ook aan de tape voldoen. Opmerking: Vocht over de pop zaak zal remmen veilige hechting aan de tape, in welk geval, laat de poppen te drogen alvorens op de dubbelzijdige tape.</li>
</ol>2. dissectie van oog-hersenen complexen
<ol><li>Gebruik pincet te verwijderen van de operculum van elke Verpopping (figuur 2C).</li>
	<li>Gebruik microdissection schaar om te slice of het pop geval van elke Verpopping opengesneden. Klep open de pop aanvraag te onthullen van de kop, borststuk en anterior abdominale segment, de beveiliging van de randen van de pop zaak naar de dubbelzijdige tape (figuur 2C). Opmerking: Het is niet nodig om volledig onthullen de poppen.</li>
	<li>De buik van elke Verpopping doorboren met een scherpe Tang, te begrijpen van het dier, en verwijder deze uit haar pop zaak (figuur 2C).</li>
	<li>Plaats de poppen op de zwarte dissectie schotel, uit de buurt van de tape, en bedek met ongeveer 400 µL van ijskoude fosfaat gebufferde-oplossing (PBS, pH 7.4).</li>
	<li>Elke Verpopping begrijpen door de buik met een tang, en met een microdissection schaar, maken een schone transversale cut door de gehele thorax, de verpopping snijden in de helft (figuur 2D).</li>
	<li>Verwijder de achterste overblijfsel van elk karkas van de PBS en zet aan de ene kant op de ontleden schotel (niet negeren, zie stap 3.2.1).</li>
	<li>Open met twee paar fijne pincet, de borstkas en het hoofd van elke Verpopping te onthullen het oog-hersenen complex (figuur 2E). Om dit te doen, pak de cut-randen van het epitheel van de thorax en geleidelijk scheuren om te openen de thorax en vervolgens hoofd capsule, bloot de oog-hersenen complex en omliggende vetweefsel.</li>
	<li>Zonder grijpen het weefsel, via pincet leiden het oog-hersenen complex uit de buurt van de restanten van de hoofd capsule of schep het oog-hersenen complex van de hoofd heen en weer geslingerd-open-capsule. Opmerking: Het oog-hersenen complex is halter-vormige, naturel en meer doorschijnend dan het omliggende crème-gekleurde vet (figuur 2B, E).</li>
	<li>Met een tang, verwijder zorgvuldig de meeste vet geassocieerd met de oog-hersenen complexen zonder het aanraken van het oogweefsel.</li>
</ol>3. de verwerking van weefsels voor immunofluorescentie
<ol><li>Het ontleden van ten minste 6-10 poppen als beschreven (stappen 2.1-2.9). Opmerking: Drie tot vier onafhankelijke replicatieonderzoeken van elke dissectie neiging om voldoende gegevens om te testen een hypothese opleveren.</li>
	<li>
Wassen en fixatie
	<ol>
<li>De tip van een P20 of P100 pipette uiteinde met een schone scheermesje te verhogen van de tip-opening tot ~ 1 mm straal en smeren door een mix van PBS en vet op en neer pipetteren knippen. Dit vet kan worden verkregen bij de karkas restanten verwijderd in stap 2.6.</li>
		<li>Breng de oog-hersenen complexen in ~ 400 µL van PBS in een 9-well glazen schotel, op ijs. Het condoom met Uiteinde en een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet gebruiken om te zetten. Opmerking: Oog-hersenen complexen zal houden op unlubricated tips tijdens pipetteren en worden beschadigd of verloren gegaan.</li>
		<li>Verwijder de resterende vet in verband met het oogweefsel door pipetteren de PBS omhoog en omlaag om het zachtjes swirl de oog-hersenen complexen. In dit en alle latere wassen stappen, niet direct Pipetteer oog-hersenen complexen op en neer zoals dit zal schade toebrengen aan de fragiele oogweefsel.</li>
		<li>Overdracht van de oog-hersenen complexen in een minimale volume (< 20 µL) van PBS in ten minste 250 µL van fixeerspray. Meng door pipetteren de oplossing op en neer. Incubeer gedurende 35 min, op ijs. Opmerking: De dezelfde condoom met tip bereid in stap 3.1.1 kan worden gebruikt voor deze transfer.</li>
		<li>Breng de oog-hersenen complexen in een goed met ~ 400 µL van PBS met de dezelfde Pipetteer tip. Meng door de oplossing op en neer pipetteren en incubeer gedurende 5-10 min op het ijs, om te wassen. Herhaal de stap van wassen ten minste tweemaal. Opmerking: Oog-hersenen complexen kunnen worden gehandhaafd voor enkele uren in de laatste PBS wash, op ijs, of bij 4 ° C, voordat u verdergaat met stap 3.3.1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Antilichaam kleuring
	<ol>
<li>Voor het blokkeren van het weefsel voorafgaand aan blootstelling aan antilichaam oplossingen, door het oog-hersenen complexen te overbrengen in ~ 400 µL van PBT. Gebruik het condoom met Uiteinde en een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet voor de overdracht. Incubeer gedurende 10 tot 60 min., op ijs.</li>
		<li>Bereid de oplossing van primair antilichaam door verdunning van de antilichamen van de geschikte in PBT. Omdat het oog-hersenen complexen worden geïncubeerd in 10 µL aliquots van antilichaam oplossing, zullen het volume bereid een kopie van 10.</li>
		<li>Aliquot 10 µL van antilichaam oplossing in een schone put voor een 72-well microwell tray (zie discussie).</li>
		<li>Snijd het puntje van een P10 pipette uiteinde met een schone scheermesje smeren door pipetting PBT omhoog en omlaag te verhogen van de tip-opening tot ~0.5 mm in straal.</li>
		<li>Overdracht van niet meer dan 5 oog-hersenen complexen, in een hoeveelheid < 3 µL van PBS, in elke 10 µL van antilichaam oplossing met een P10 lucht verplaatsing micropipet en de condoom met tip.</li>
		<li>Meng de antilichaam-oplossing waarbij de oplossing op en neer. Pipetteer de oog-hersenen complexen omhoog en omlaag niet zoals dit aan het weefsel schade zal.</li>
		<li>Om te minimaliseren van verdamping van de antilichaam-oplossing, plaatst u een klein stukje weefsel gedrenkt in gedestilleerd water in de lade, microwell en verzegel de lade (bijvoorbeeld met het deksel geleverd). Na een nacht bebroeden bij 4 ° C.</li>
		<li>Breng de oog-hersenen complexen uit de lade microwell in ~ 400 µL van PBT in een 9-welled glazen schotel, te wassen. Gebruik een P10 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip (bereiden zoals beschreven in stap 3.3.4). Meng door pipetteren de oplossing op en neer. Incubeer gedurende 5-10 min op ijs.</li>
		<li>Herhaal de stap van wassen ten minste tweemaal. Gebruik een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip voor overdracht van de oog-hersenen-complexen tussen wassen oplossingen.</li>
		<li>Bereid de oplossing van secundair antilichaam door verder verdunnen van passende fluorophore-gelabeld secundaire antilichamen in PBT zoals vereist. 100 µL van secundair antilichaam oplossing volstaat per batch van 6-10 poppen. Aliquot de secundair antilichaam-oplossing in een schotel van de dissectie 9-welled glas.</li>
		<li>Breng de oog-hersenen complexen in secundair antilichaam oplossing. Gebruik een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip voor de overdracht.</li>
		<li>Incubeer de oog-hersenen complexen in secundair antilichaam oplossing voor 1-2 uur bij kamertemperatuur, of 3-5 uur bij 4 ° C. Om te voorkomen dat bleken van fluorophores door licht, hebben betrekking op de voorbereiding met folie. Opmerking: Optimale duur van incubatie in secundair antilichaam oplossing kan verschillen naar gelang van de primaire en secundaire antilichamen gebruikt.</li>
		<li>Breng de oog-hersenen complexen in ~ 400 µL van PBT in een 9-well glazen schotel, te wassen. Meng door pipetteren de oplossing op en neer. Incubeer gedurende 5-10 min op ijs. Deze wassen stap moet ten minste tweemaal worden herhaald.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Secundaire fixatie
	<ol>
<li>Voor een secundaire fixatie, de oog-hersenen complexen overdragen aan ten minste 200 µL van fixeer en incubeer gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur of 35 min bij 4 ° C. Opmerking: Secundaire fixatie verstijft de oogweefsel, die montage (stap 3.5 helpt).</li>
		<li>Gebruik een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip oog-hersenen complexen overbrengen naar ~ 400 µL van PBT in een 9-well glazen schotel, op ijs, te wassen voor 5 min.</li>
		<li>Herhaal de stap van wassen ten minste eenmaal.</li>
		<li>Gebruik een P20 of de P100 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip om overdracht van de oog-hersenen complexen in ~ 400 µL van PBS in een 9-well glazen schotel, op ijs, te spoelen voor 1-2 min. houden het weefsel in beweging door pipetting PBS, maar niet het weefsel , op en neer om te voorkomen dat oog-hersenen complexen van regelen en vast te houden aan de glazen schotel tijdens PBS-spoelen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Montage
	<ol>
<li>Breng de oog-hersenen complexen in ~ 200 µL media te monteren. Gebruik een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en de PBT-gesmeerd tip om over te brengen van de oog-hersenen complexen. Het toestaan van het weefsel te equilibreer in montage van media voor 1-2 h.</li>
		<li>Breng een druppel van de µL 5-8 van verse montage media op een schone microscoopglaasje.</li>
		<li>Snijd een P10-tip met een schone scheermesje gebruiken van dit en een P10 lucht verplaatsing micropipet voor het overbrengen van de oog-hersenen complexen in 5-8 µL van de montage van de media in de daling van de media te monteren op de dia te verhogen van de tip-opening tot ~0.5 mm in straal.</li>
		<li>Gebruik twee wolfraam naalden te scheiden van de ogen van optische kwabben. PIN een oog-hersenen complex aan de dia met een stevige wolfraam naald en elk oog uit de buurt van de bijbehorende optic lobe snijd met een fijn wolfraam naald (figuur 2F).</li>
		<li>Gebruik de fijne wolfraam naald te manoeuvreren van elk van beide ogen op het oppervlak van het microscoopglaasje met het basale oppervlak van elk van beide ogen grenzend aan de dia. Zachtjes lager een schone cover-slip over het weefsel en veilig met nagellak. Opmerking: De ogen op de dia te schikken zodat ze dicht bij elkaar of in een lijn zal vergemakkelijken latere microscopie.</li>
		<li>Het imago van het netvlies met behulp van fluorescerende of confocal microscopie. Opmerking: Dia's moeten worden opgeslagen bij 4 ° C of zelfs beeld onmiddellijk.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. voorbereiding van oogweefsel voor het westelijke bevlekken:
<ol><li>Ontleden van 10-16 poppen (stappen 2.1-2.9) met de volgende wijzigingen: a) verzamelen en ontleden de poppen in twee partijen, 10-15 minuten uit elkaar en b) ontleden in PBS aangevuld met protease en phosphatase inhibitors (PBS + pi).</li>
	<li>Overdracht van de complexen van de oog-hersenen met behulp van een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en gesmeerd tip (bereid zoals in stap 3.2.1) in ~ 400 µL van PBS + pi in een 9-well glazen schotel, op ijs, te kort spoelen. Opmerking: Deze condoom met tip kan worden gebruikt voor volgende stappen 4.3 en 4.4.</li>
	<li>Herhaal de spoeling stap tweemaal.</li>
	<li>Breng alle oog-hersenen complexen in ~ 400 µL van ijs koud PBS + pi gedecanteerd op een schoon zwart ontleden schotel.</li>
	<li>Verwijder elk van beide ogen van de optische kwabben met behulp van een stevige wolfraam naald (om stabiele het oog-hersenen-complex) en een fijne scheermesje of microdissection scharen om netjes knippen elk van beide ogen toe uit de optiek kwab. Opmerking: Ogen 'sticky' zijn in dit stadium en licht kunnen houden aan de ontleden schotel. Dit is voordelig omdat het de opheffing vergemakkelijkt van de ogen van de optische kwabben helpen kan (zie discussie).</li>
	<li>'Vegen' alle ogen in een 'stapel' in de PBS + pi op de ontleden schotel, met een lemmet van een fijn paar pincet.</li>
	<li>Knip een puntje van de P10 met een schone scheermesje te verbreden van de tip-opening tot ~0.5 mm in straal en smeer het uiteinde-interieur door pipetting Western weefsel Lysis Buffer (WTLB) op en neer.</li>
	<li>Breng de oog-hersenen complexen in 5 µL van PBS + pi in een 500 µL microcentrifuge buis. Gebruik dit condoom met Uiteinde en een P10 lucht verplaatsing micropipet om te voltooien van de overdracht.</li>
	<li>Plaats de microcentrifuge buis op ijs. Voeg 1 deel (5 µL) van WTLB aan het monster, en 10 µL van 2 x geconcentreerd eiwit monster buffer (of 2,5 µL van 5 x geconcentreerd eiwit monster buffer). Meng door te onttrekken.</li>
	<li>Vortex de microcentrifuge tube kort en spin omlaag monster met behulp van een desktop mini centrifuge.</li>
	<li>Het bewaren van het monster bij-20 ° C tot analyse. Analyseren met standaardprotocollen.</li>
</ol>5. bereiding van oogweefsel RNA extractie:
<ol><li>Het dragen van handschoenen, schone benchtop, Microscoop, dissectie tools en zwarte ontrafeling van schotel eerst met 70% ethanol en vervolgens RNase decontaminatie reagens. Laten drogen.</li>
	<li>Ontleden van 30-40 poppen als beschreven (stappen 2.1-2.9) met de volgende wijzigingen: een) verzamelen en ontleden van 6 tot en met 8 poppen in batches, 15-20 min uit elkaar; b) ontleden in nuclease-vrije PBS en c) isoleren van elke batch van ogen afzonderlijk maar accumuleren alle retinale weefsel in de dezelfde microcentrifuge buis (stap 5.5). Opmerking: Met twee mensen gelijktijdig ontleden efficiënte isolatie van goede oogweefsel zal versnellen.</li>
	<li>Voor elke partij isoleren de oog-hersenen complexen (stappen 2.1-2.9) en overdracht in ~ 400 µL van PBS nuclease-gratis in een 9-well glazen schotel te spoelen in het kort op het ijs, met behulp van een P20 of P100 lucht verplaatsing micropipet en condoom met tip (opgesteld zoals beschreven in stap 3.1.2). Opmerking: Deze condoom met tip kan worden gebruikt voor volgende stappen 5.4, 5.5 en 5,8.</li>
	<li>Herhaal de spoeling stap tweemaal.</li>
	<li>Breng de oog-hersenen complexen in een verse 400 µL druppel ijskoud nuclease-vrije PBS op een schone zwart ontrafeling van de schotel.</li>
	<li>Verwijder elk van beide ogen van de optische kwabben met behulp van een stevige wolfraam naald (om stabiele de complexe oog-hersenen) en een fijne scheermesje of microdissection scharen om netjes knippen elk van beide ogen toe uit de optiek kwab. Opmerking: Ogen 'sticky' zijn in dit stadium en licht kunnen houden aan de ontleden schotel. Dit is voordelig omdat het de opheffing vergemakkelijkt van de ogen van de optische kwabben helpen kan (zie discussie).</li>
	<li>'Sweep' alle ogen in een 'stapel' in de nuclease-vrije PBS op de ontleden schotel, met een lemmet van een fijn paar pincet.</li>
	<li>De ogen overbrengen in een steriele RNase-vrije microcentrifuge buis en flash-freeze in vloeibare stikstof.</li>
	<li>Herhaal dissectie (stappen 5.3-5.8) van elke batch van poppen. Breng elke batch van ogen in de dezelfde microcentrifuge buis die in vloeibare stikstof (stap 5.5) te accumuleren alle ogen in één buis is gehandhaafd.</li>
	<li>Het bewaren van de monsters bij-80 ° C tot RNA extractie.</li>
</ol>

<ol><li>Cagan, R. L., Ready, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+order+in+the+Drosophila+pupal+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">The emergence of order in the Drosophila pupal retina.</a> Developmental biology. 136 (2), 346-362 (1989).</li>
<li>Wolff, T., Ready, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWolff%2C+T+%22The+development+of+Drosophila+melanogaster%22">The development of Drosophila melanogaster</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview. 1277-1325 (1993).</li>
<li>Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pattern+formation+in+the+Drosophila+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+genetics+%26+development%22%5BJournal%5D)">Pattern formation in the Drosophila eye.</a> Current opinion in genetics & development. 17 (4), 309-313 (2007).</li>
<li>Kumar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+an+ommatidium+one+cell+at+a+time%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Building an ommatidium one cell at a time.</a> Developmental Dynamics. 241 (1), 136-149 (2012).</li>
<li>Hayashi, T., Carthew, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+mechanics+mediate+pattern+formation+in+the+developing+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Surface mechanics mediate pattern formation in the developing retina.</a> Nature. 431, 647(2004).</li>
<li>Bao, S., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+Adhesion+Mediated+by+Hibris+and+Roughest+Regulates+Morphogenesis+and+Patterning+in+the+Drosophila+Eye%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Preferential Adhesion Mediated by Hibris and Roughest Regulates Morphogenesis and Patterning in the Drosophila Eye.</a> Developmental Cell. 8 (6), 925-935 (2016).</li>
<li>Cordero, J. B., Larson, D. E., Craig, C. R., Hays, R., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+Decapentaplegic+signaling+regulates+patterning+and+adhesion+in+the+Drosophila+pupal+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Dynamic Decapentaplegic signaling regulates patterning and adhesion in the Drosophila pupal retina.</a> Development (Cambridge, England). 134 (10), 1861-1871 (2007).</li>
<li>Larson, D. E., Liberman, Z., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+behavior+in+the+developing+Drosophila+pupal+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+development%22%5BJournal%5D)">Cellular behavior in the developing Drosophila pupal retina.</a> Mechanisms of development. 125 (3-4), 223-232 (2008).</li>
<li>Martín-Bermudo, M. D., Bardet, P. L., Bellaïche, Y., Malartre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vav+oncogene+antagonises+EGFR+signalling+and+regulates+adherens+junction+dynamics+during+Drosophila+eye+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The vav oncogene antagonises EGFR signalling and regulates adherens junction dynamics during Drosophila eye development.</a> Development. 142 (8), 1492-1501 (2015).</li>
<li>Chan, E. H., Chavadimane Shivakumar, P., Clément, R., Laugier, E., Lenne, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterned+cortical+tension+mediated+by+N-cadherin+controls+cell+geometric+order+in+the+Drosophila+eye%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Patterned cortical tension mediated by N-cadherin controls cell geometric order in the Drosophila eye.</a> eLife. 6, e22796(2017).</li>
<li>Lin, H. V., Rogulja, A., Cadigan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wingless+eliminates+ommatidia+from+the+edge+of+the+developing+eye+through+activation+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Wingless eliminates ommatidia from the edge of the developing eye through activation of apoptosis.</a> Development. 131 (10), 2409-2418 (2004).</li>
<li>Cordero, J., Jassim, O., Bao, S., Cagan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+wingless+in+an+early+pupal+cell+death+event+that+contributes+to+patterning+the+Drosophila+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+development%22%5BJournal%5D)">A role for wingless in an early pupal cell death event that contributes to patterning the Drosophila eye.</a> Mechanisms of development. 121 (12), 1523-1530 (2004).</li>
<li>Mendes, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+c%E2%80%90d+regulates+developmental+apoptosis+in+the+Drosophila+retina%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+reports%22%5BJournal%5D)">Cytochrome c‐d regulates developmental apoptosis in the Drosophila retina.</a> EMBO reports. 7 (9), 933-939 (2006).</li>
<li>Monserrate, J., Brachmann, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+death+zone%3A+a+spatially+restricted+region+for+programmed+cell+death+that+sculpts+the+fly+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Identification of the death zone: a spatially restricted region for programmed cell death that sculpts the fly eye.</a> Cell Death & Differentiation. 14 (2), 209-217 (2007).</li>
<li>Bushnell, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JNK+is+antagonized+to+ensure+the+correct+number+of+interommatidial+cells+pattern+the+Drosophila+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">JNK is antagonized to ensure the correct number of interommatidial cells pattern the Drosophila retina.</a> Developmental Biology. 433 (1), 94-107 (2018).</li>
<li>Wolff, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+techniques+for+pupal+and+larval+Drosophila+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Dissection techniques for pupal and larval Drosophila eyes.</a> CSH Protoc. 2007, (2007).</li>
<li>Hsiao, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+Immunohistochemistry+of+Larval%2C+Pupal+and+Adult+Drosophila+Retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Dissection and Immunohistochemistry of Larval, Pupal and Adult Drosophila Retinas.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (69), e4347(2012).</li>
<li>Tea, J. S., Cespedes, A., Dawson, D., Banerjee, U., Call, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+Mounting+of+Drosophila+Pupal+Eye+Discs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Dissection and Mounting of Drosophila Pupal Eye Discs.</a> Journal of Visualized Experiments : JoVE. (93), e52315(2014).</li>
<li>Johnson, R. I., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Quantitative+Method+to+Analyze+Drosophila+Pupal+Eye+Patterning%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A Quantitative Method to Analyze Drosophila Pupal Eye Patterning.</a> PLoS ONE. 4 (9), e7008(2009).</li>
<li>Greenspan, R. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreenspan%2C+RJ+%22Fly+pushing+%3A+the+theory+and+practice+of+Drosophila+genetics%22">Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2004).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118 (2), 401-415 (1993).</li>
<li>Ellis, M. C., O'Neill, E. M., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Drosophila+glass+protein+and+evidence+for+negative+regulation+of+its+activity+in+non-neuronal+cells+by+another+DNA-binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Expression of Drosophila glass protein and evidence for negative regulation of its activity in non-neuronal cells by another DNA-binding protein.</a> Development. 119 (3), 855-865 (1993).</li>
<li>Duffy, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GAL4+system+in+drosophila%3A+A+fly+geneticist%27s+swiss+army+knife%5BTitle%5D)+AND+%22genesis%22%5BJournal%5D)">GAL4 system in drosophila: A fly geneticist's swiss army knife.</a> genesis. 34 (1-2), 1-15 (2002).</li>
<li>Li, W. Z., Li, S. L., Zheng, H. Y., Zhang, S. P., Xue, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+broad+expression+profile+of+the+GMR-GAL4+driver+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genet+Mol+Res%22%5BJournal%5D)">A broad expression profile of the GMR-GAL4 driver in Drosophila melanogaster.</a> Genet Mol Res. 11 (3), 1997-2002 (2012).</li>
<li>Song, Z., McCall, K., Steller, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DCP-1%2C+a+Drosophila+Cell+Death+Protease+Essential+for+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">DCP-1, a Drosophila Cell Death Protease Essential for Development.</a> Science. 275 (5299), 536-540 (1997).</li>
<li>Hay, B. A., Wassarman, D. A., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+homologs+of+baculovirus+inhibitor+of+apoptosis+proteins+function+to+block+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila homologs of baculovirus inhibitor of apoptosis proteins function to block cell death.</a> Cell. 83 (7), 1253-1262 (1995).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De methode van Drosophila pop oog dissectie hier beschreven staat voor de isolatie van 6 tot en met 10 oog-hersenen complexen binnen 10 tot 15 min. Echter, geduld en oefening zijn onontbeerlijk voor de dissectie techniek beheersen en verbeteren van de kwaliteit en de snelheid van dissecties. Ditmaal van korte dissectie zorgt ervoor dat elk oog ongeveer de zelfde ontwikkelingsstadium, vermindering van de variabiliteit in het fenotype of gen expressie van het netvlies in een gegevensverzameling. Terwijl alternatie...

Het netvlies Drosophila bestaat uit ongeveer 750 ommatidia omringd door pigmentcellen gerangschikt in een honingraat rooster1,2,3,4. Elk ommatidium bevat acht fotoreceptor neuronen, vier lens-afscheidende cellen van de kegel en twee primaire pigmentcellen. Rondom elke ommatidium zijn pigment-producerende cellen van het lattice en zintuiglijke bristle groepen. Vanwege haar post mitotische aard en stereotiepe zeshoekige regeling biedt de Drosophila pop netvlies een uitstekende modelsysteem voor het bestuderen van morfogenetische processen, met inbegrip van cel adhesie5,6, 7,8,9,10 en apoptosis11,12,13,14,15.
Aantal gepubliceerde protocollen gebruiken luchtdruk uitpakken van oog-hersenen complexen van Drosophila poppen16,17,18. Het protocol beschreven hier in plaats daarvan maakt gebruik van microdissection tools om zorgvuldig en juist oog-hersenen complexen met als doel het verkrijgen van onbeschadigde retinale weefsel te isoleren. Dit is cruciaal als netvlies willen worden gebruikt voor morfologische, eiwit, of genexpressie analyseert omdat schade aan het netvlies kan resulteren in cellulaire stress of dood, die kan de cellulaire fenotype of gen expressie wijzigen. Bovendien na praktijk kunnen 6 tot 10 oog-hersenen complexen in 10 tot 15 min, vergemakkelijking van het doel van het minimaliseren van de variabiliteit in de leeftijd en ontwikkelingsstadium van ontleed oogweefsel worden geïsoleerd.
De fixatie, immunokleuring en geheel-koppelingsprotocol hieronder beschreven is geschikt voor de bereiding van Drosophila ogen voor fluorescent microscopie. Netvlies kunnen worden geïncubeerd met antilichamen gericht op proteïnen van belang. Bijvoorbeeld kunnen antistoffen tegen onderdelen van de kruising van de adherens worden gebruikt om het visualiseren van de apicale omtrek van cellen, zodat de kenmerken waaronder celtype, vorm en opstelling beoordeeld-19 worden kunnen. Voorafgaand aan de fixatie, kunnen ogen in plaats daarvan worden cleaved van de hersenen met het oog op de winning van proteÃ¯ne voor westelijke analyse, of RNA voor gebruik in qRT-PCR of RNA-sequencing.

<table><tbody><tr><td>Adobe Photoshop</td><td>Adobe</td><td></td><td>Beeldverwerkingssoftware</td></tr><tr><td>Bamboe-splinters, 6"&nbsp;</td><td>Ted Pella Inc</td><td>116</td><td></td></tr><tr><td>Beta mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Beta-glycerol fosfaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50020</td><td></td></tr><tr><td>Zwarte dissectiebak</td><td></td><td></td><td>Glazen petrischaal gevuld tot aan de rand met SYLG170 of SYLG184 (zwart gekleurd met fijngemalen houtskoolpoeder). Laat 24-48 uur op kamertemperatuur staan om te polymeriseren.</td></tr><tr><td>Meshouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>10053</td><td></td></tr><tr><td>Rundserumalbumine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, EDTA-vrije protease-remmercocktailtabletten</td><td>Roche</td><td>4693132001</td><td></td></tr><tr><td>Confocale microscoop (Zeiss LSM 501)</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>of een soortgelijke microscoop</td></tr><tr><td>Diethylpyrocarbonaat (DEPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>40718</td><td></td></tr><tr><td>Dubbelzijdig plakband</td><td>3M</td><td>665</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila voedingsmedia, voedingsrijk&nbsp;</td><td></td><td></td><td>7,5% sucrose, 15% glucose, 2,5% agar, 20% biergist, 5% pepton, 0,125% MgSO4.7H2O, 0,125% CaCl2.2H20</td></tr><tr><td>Drosophila voedingsmedia, standaard</td><td></td><td></td><td>Bloomington Drosophila Stock center cornmeal recept.&nbsp; (https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.html)</td></tr><tr><td>Etheen-diaminetetra-azijnzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>Fixeeroplossing</td><td></td><td></td><td>4% formaldehyde in PBS, pH 7,4.</td></tr><tr><td>Fluorescentiemicroscoop (TCS SP5 DM microscoop)</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>of een soortgelijke microscoop</td></tr><tr><td>Pincet&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td>Pincet dient regelmatig geslepen te worden.</td></tr><tr><td>Formaldehyde</td><td>Thermo Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>Glazen 9-welsschalen&nbsp;</td><td>Corning</td><td>7220-85</td><td>Ook bekend als 9-welsschalen&nbsp;</td></tr><tr><td>Glazen dekplaatjes (22 x 22 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Glazen microscoopglaasjes (25 x 75 x 1 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-413</td><td></td></tr><tr><td>Glazen petrischaal</td><td>Corning</td><td>3160-100BO</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Image Studio-software versie 5.2.5</td><td>LI-COR Biosciences</td><td></td><td>Beeldverwerkingssoftware voor kwantificering van Western blots.</td></tr><tr><td>Laemmli monsterbuffer</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0737</td><td>2X geconcentreerde eiwitmonsterbuffer, aangevuld met beta mercaptoethanol volgens de instructies van de fabrikant.</td></tr><tr><td>Lane marker reducerende monsterbuffer&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>39000</td><td>5X geconcentreerde eiwitmonsterbuffer.</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuisjes&nbsp;</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Microdissectiescharen&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>Microwellplaten (72 x 10 µL putjes)</td><td>Nunc</td><td>438733</td><td></td></tr><tr><td>Montagemedia</td><td></td><td></td><td>0,5% N-propylgallaat en 80% glycerol in PBS</td></tr><tr><td>N-propylgallaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-vrij PBS (PBS in 0,1% DEPC, pH 7,4)</td><td></td><td></td><td>Voeg het juiste volume DEPC toe aan PBS, meng goed en incubeer een nacht bij kamertemperatuur met constant roeren. Autoclaveer gedurende ten minste 20 minuten. Bewaar bij 4°C</td></tr><tr><td>PBS (fosfaatgebufferde zoutoplossing pH 7,4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5368</td><td>Bereid volgens de instructies van de fabrikant</td></tr><tr><td>PBS+pi (PBS plus protease- en foshataseremmers)</td><td></td><td></td><td>10mM NaF, 1mM beta-glycerol fosfaat en 1mM Na3VO4 in PBS, pH 7,4.&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>PBT</td><td></td><td></td><td>0,15% TritonX en 0,5% runder serum albumine in PBS, pH 7,4</td></tr><tr><td>Pinhouder</td><td>Fine Science Tools</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>Primaire antilichaam: geit anti-GAPDH</td><td>Imgenex</td><td>IMG-3073</td><td>Voor Western blotting. Gebruikt bij 1:3000</td></tr><tr><td>Primair antilichaam: konijn anti-cleaved Dcp-1</td><td>Cell signaling</td><td>9578S</td><td>Voor immunofluorescentie. Gebruikt bij 1:100</td></tr><tr><td>Primair antilichaam: rat anti-DEcad</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>DCAD2</td><td>Voor immunofluorescentie. Gebruikt bij 1:20</td></tr><tr><td>Primair antilichaam: rat anti-DEcad</td><td>DOI: 10.1006/dbio.1994.1287</td><td>DCAD1</td><td>&nbsp;Cadeau van Tadashi Uemura. Gebruikt bij 1:100.</td></tr><tr><td>RNA extractiekit: Relia Prep RNA tissue Miniprep kit&nbsp;</td><td>Promega</td><td>Z6110</td><td></td></tr><tr><td>Rnase ontsmettingsreagens (RNase Away)</td><td>Molecular BioProducts</td><td>7002</td><td></td></tr><tr><td>Schelpmessen</td><td>Fine Science Tools</td><td>10050</td><td>Breek een klein stukje van het scalpelmes af en bevestig het in de meshouder.</td></tr><tr><td>Secundair antilichaam: 488-geconjugeerd  ezel anti-rat IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>712-545-153</td><td>Voor immunofluorescentie. Gebruikt bij 1:200</td></tr><tr><td>Secundair antilichaam: cy3-geconjugeerd geit anti-konijn IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>111-165-144</td><td>Voor immunofluorescentie. Gebruikt bij 1:100</td></tr><tr><td>Secundair antilichaam: HRP-geconjugeerd geit anti-rat IgG (H+L)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>7077</td><td>Voor Western blotting. Gebruikt bij 1:300

dissectie van de drosophila pop netvlies voor immunohistochemistry, westelijke analyse en rna isolatie

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

De Drosophila pop netvlies biedt een uitstekende modelsysteem voor het bestuderen van morfogenetische processen tijdens ontwikkeling. In deze paper presenteren we een betrouwbaar protocol voor de dissectie van de delicate Drosophila pop netvlies. Onze chirurgische aanpak maakt gebruik van gemakkelijk verkrijgbare microdissection tools om te openen poppen en juist uitpakken oog-hersenen complexen. Dit kunnen worden vastgesteld, onderworpen aan immunohistochemistry en netvlies dan gemonteerd op Microscoop dia's en beeld als het doel is om het detecteren van cellulaire of subcellular structuren. Anderzijds kunnen nietgefixeerde netvlies worden geïsoleerd van hersenweefsel, lysed in passende buffers en gebruikt voor eiwit gel elektroforese of mRNA extractie (om te beoordelen eiwit of gen expressie, respectievelijk). Aanzienlijke praktijk en geduld kunnen worden verlangd dat de meester van het microdissection-protocol beschreven, maar eenmaal onder de knie, kunnen via het protocol relatief snelle Isolatievan voornamelijk onbeschadigd netvlies.

De pop eye is een gemakkelijk toegankelijke weefsel dat als een uitstekend model dient te onderzoeken van ontwikkelingsstoornissen processen dat station morfogenese. Hier, we netvlies hebben ontleed en immunofluorescentie gebruikt voor het detecteren van de apicale adherens-verbindingen (figuur 3A, C) of de Dcp-1 caspase (figuur 3D) dat wordt geactiveerd tijdens apoptosis (Figuur 3)25. Deze b...

Dit document stelt een chirurgische methode voor het ontleden van Drosophila pop netvlies samen met de protocollen voor de verwerking van weefsels voor RNA-extractie, immunohistochemistry en westelijke analyse.

Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...

Dit protocol is belangrijk omdat dit een efficiënte methode is voor de isolatie van Drosophila popweefsel voor meerdere downstream toepassingen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het de snelle dissectie van een groot aantal poppenogen mogelijk maakt zonder het weefsel te beschadigen. Dissectie van de Drosophila popal netvlies zal een uitdaging zijn voor beginners.Het beoefenen van de techniek is de beste manier om de snelheid van de dissecties en de kwaliteit van de resultaten te verbeteren. Na het plaatsen van de Drosophila pop op een zwart ontleden schotel, leg een vers stuk van dubbelzijdige tape op de ontleden schotel, uit de buurt van de pop, en gebruik een paar tangen om zorgvuldig plaats de poppen dorsale kant op de tape. Plaats de schotel onder een stereomicroscoop, en gebruik tangen om het operculum van elke pop te verwijderen.Gebruik microdissection schaar om elke pop geval snijden, waardoor het open worden geflapt om het hoofd, thorax, en voorste buiksegment onthullen, en zet de randen van de pop geval aan de dubbelzijdige tape. Doorboor de buik van elke pop met scherpe tangen en verwijder de pop uit zijn popgeval. Plaats de pop op de dissectie schotel,

dissection-drosophila-pupal-retina-for-immunohistochemistry-western

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

De voorbereiding van de ontwikkeling en Adult Drosophila Hersenen en retinae voor Live Imaging

De beperkende factor in het gebruik van de...

Single Drosophila Ommatidium Dissection en Imaging

Een standaard aanpak voor volwassenen voor te...

De voorbereiding van Adult Drosophila Ogen voor Thin Sectioning en microscopisch onderzoek

Drosophila popstadium Buik Immunohistochemie

Dissectie en Immunohistochemie van larven, popstadium en Volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Netvliezen

Deze video beschrijft hoe je het oog-hersencomplex kunt ontleden en isoleren van Drosophila poppen. Het aanbevolen protocol demonstreert de procedure die hoogwaardig weefsel oplevert, compatibel met bijvoorbeeld immunostaining en andere genexpressie-experimenten.

Dissectie van het oog-hersencomplex van Fly Pupae: een methode om netvliesweefsel te isoleren

De volwassen structuren van Drosophila zijn afgeleid van zak-achtige structuren die imaginale schijven worden genoemd. Analyse van deze schijven biedt inzicht in vele ontwikkelingsprocessen, waaronder weefselbepaling, oprichting van compartimentgrenzen, celproliferatie, celbestemmingsspecificatie en cellulaire planaire polariteit. Dit protocol wordt gebruikt om imaginale schijven voor te bereiden op licht-/fluorescentiemicroscopie.

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit Drosophila melanogaster

Het doel van deze techniek is om onderzoekers in staat te stellen dissectie, immunokleuring en montage van poppenoogschijfjes uit Drosophila melanogaster van elke leeftijd uit te voeren.

Dissectie en Plaatsing van<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye Discs

De mogelijkheid om nauwkeurig detecteren afschriften of eiwitten in Drosophila weefsels is essentieel voor de studie van hun overvloed en localisatie gerelateerde aan het ontwikkelingsproces. Hier is de beschrijving van een eenvoudige procedure om te ontleden pop vleugels. Deze vleugels kunnen worden gebruikt als de monsters in verschillende technieken (PCR assay, immunohistochemistry, enz.).

Een snelle en doeltreffende methode om te ontleden pop vleugels van Drosophila geschikt voor Immunodetections of PCR-testen

Dit protocol beschrijft de dissectie en immunokleuring van volwassen Drosophila melanogaster brain weefsels. Dit protocol benadrukt in het bijzonder het gebruik van Drosophila paddestoel lichaam en fotoreceptor neuronen als voorbeeld neuronale subsets kunt weergeven die nauwkeurig kunnen worden gebruikt voor het ontdekken van de algemene beginselen die ten grondslag liggen aan vele aspecten van neuronale ontwikkeling.

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Hier presenteren we een protocol om te stagen en ontleden olfactorische weefsel van Drosophila diersoorten te ontwikkelen. Het ontleed weefsel kan later worden gebruikt voor moleculaire analyses, zoals kwantitatieve RT-PCR (Reverse transcriptie-Polymerase Chain Reaction) of RNA sequencing (RNAseq), evenals in vivo analyses uitgevoerd, zoals immunohistochemistry of in situ hybridisatie.

Voorbereiding van de ontwikkeling van de perifere olfactorische weefsel voor moleculaire en analyse van Immunohistochemical in Drosophila

Leer de dissectie van Drosophila popnetvliezen voor immunohistochemie, western analyse en RNA-isolatie. Deze efficiënte methode behoudt weefselintegriteit en ondersteunt meerdere downstream toepassingen in ontwikkelingsbiologie.

Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie

Meer video's verkennen