Name: Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Leer een orthotopisch muismodel van hepatocellulair carcinoom ontwikkelen met leverfibrose en intrasplenische injectie. Dit model bootst klinische kenmerken van menselijke leverkanker na en ondersteunt onderzoek naar tumor-geïnduceerde immunotolerantie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt ondersteund door NIH/NCI R01 CA164335-01A1 (K. F. Staveley-O'Carroll, PI) en NIH/NCI R01CA208396 (Mark Kester, Guangfu Li, Kevin F. Staveley-O'Carroll).

Opmerking: alle procedures inclusief dierproef personen zijn goedgekeurd door de IACUC aan de Universiteit van Missouri. Alle muizen kregen humane verzorging volgens de criteria die zijn uiteengezet in de "gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren". De volgende procedure voor celisolatie en inoculatie moet worden uitgevoerd in een afzuigkap. Alle performers moeten de standaard persoonlijke beschermingsmiddelen dragen voor het hanteren van de muizen en weefsels.
1. inductie van leverfibrose en cirrose met IP-injectie van tetrachloorkoolstof (CCl4)
Opmerking: Zie afbeelding 1. (CCl4 is zeer gevaarlijk reagens, moet zorgvuldig worden behandeld en met chemicaliën bestendige handschoenen)
<ol><li>Verkrijg mannelijke C57BL/6J muizen die zes tot acht weken oud zijn (Zie tabel met materialen).</li>
	<li>Bereid 10% CCl4 (v/v) oplossing in maïsolie in een centrifugebuis. Bepaal het totale volume op basis van het aantal te injecteren muizen (zie stap 1,6).</li>
	<li>Gebruik geschikte muizen handlingtechniek om één muis voor injectie te selecteren.</li>
	<li>Handmatig de muis met de rugzijde (buik) omhoog te rebelasten.</li>
	<li>Reinig de injectieplaats op de buikwand van de muis door te schrobben met 70% alcohol.</li>
	<li>Injecteer mannelijke C57BL/6J muizen met 160 μL 10% CCl4 oplossing door intraperitoneale (IP) injectie met een 25-gauge wegwerp naald.</li>
	<li>Zorg ervoor dat de naald door de buikwand dringt (ongeveer 4-5 mm) met schuine kant naar boven en licht schuin op 15-20 graden.</li>
	<li>Injecteer muizen twee keer per week gedurende een totaal van vier weken-elke muis krijgt in totaal acht injecties. Opmerking: twee weken na de laatste injectie zijn behandelde muizen klaar voor ISPL-inoculatie van oncogene hepatocyten van MTD2 muizen.</li>
</ol>2. isoleren van tag-transgene hepatocyten van lijn MTD2 muizen
Opmerking: Zie tabel 1 voor oplossings recepten.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>een uitgebalanceerde zoutoplossing van 10x Earle zonder CA of mg (EBSS zonder CA of mg)</td>
			<td>4 g KCl 68 g NaCl 1,4 g NaH2PO4 · H2O 10 g dextrose Voeg water toe aan 1 liter, pH tot 4,32 Doorlopen filter</td>
		</tr>
<tr>
<td>Oplossing 1</td>
			<td>20 mL 10x EBSS zonder CA of mg 44 g NaHCO3 1,33 mL 1,5 M Hepes 10 mL van 10 mL EGTA Voeg water toe aan 200 mL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Oplossing 2</td>
			<td>100 mL 10x EBSS 2,2 g NaHCO3 6,67 mL 1,5 M Hepes Voeg water toe aan 1 liter</td>
		</tr>
<tr>
<td>0,75% Collagenase-oplossing</td>
			<td>15 mg Collagenase type 1 20 mL oplossing 2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Volledige medium</td>
			<td>2 RPMI 50 mL FBS 5 mL 100x Penicillaire-streptomycine</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: oplossings recepten.
<ol><li>Verkrijg lijn MTD2 muizen38 om te dienen als de bron van oncogene hepatocyten.</li>
	<li>Anesthetize 5-week-oude MTD2 muizen met 2,5% isoflurane. Opmerking: goede anesthetisering zal worden gecontroleerd door middel van de teen pinch methode. In het kort, met behulp van twee vingers, geef de muis teen/voet een goede squeeze. Als er geen terugtrekkings reactie is, wordt het dier diep genoeg beoordeeld om een operatie te starten.</li>
	<li>Plaats muizen in een liggende positie en fixeer de extremiteiten met tape om voldoende blootstelling van het buik oppervlak te bieden.</li>
	<li>Voer een middellijn laparotomie incisie met behulp van een schaar langs de lengte van de linea alba groot genoeg om te zorgen voor een adequate blootstelling van de lever.</li>
	<li>Verplaats de darmen naar links om een betere blootstelling van de lever en portaal triade te bieden.</li>
	<li>Ontleden boven de lever om de onderste vena cava (IVC) bloot te leggen.</li>
	<li>Ligate de IVC boven de lever met behulp van een slagader klem.</li>
	<li>Terugkeren naar de inferieure grens van de lever, gebruik een vlindernaald (Zie materialen) te krijgen IV toegang tot de poortader. Repareer katheter met de hand.</li>
	<li>Achtereenvolgens parfumeer de muis lever met behulp van een injectiespuit op 8,9 mL/min met 15 mL oplossing 1, 15 mL 0,75% Collagenase oplossing 2, en 15 mL oplossing 2 via de katheter.</li>
	<li>Oogst de geperfundeerd lever door snijden en het nemen van de tumor massa van MTD2 muizen in een 50 ml conische buis met 10-15 ml PBS.</li>
	<li>Verwijder PBS en was een extra tijd met PBS; niet centrifugeren bij deze stap.</li>
	<li>Snijd de lever in kleinere stukken met behulp van een schaar en spoel vervolgens opnieuw met PBS 2x om het resterende bloed te verwijderen.</li>
	<li>Voeg 5 mL volledig RPMI medium toe aan de conische buis en de lever voortdurend met een schaar op kleine stukjes (< 3 mm)-weefsel moet soepel door een 5 mL pipet gaan.</li>
	<li>Voeg complete RPMI toe aan een eindvolume van 30 mL en onderbreek de lever met een 5 mL pipet.</li>
	<li>Filtreer de gemengde oplossing met een 70 μm zeef in een conische buis van 50 mL.</li>
	<li>Was de zeef meerdere malen met volledige RPMI en stel het eindvolume in op 50 mL door extra RPMI-medium toe te voegen.</li>
	<li>Draai de suspensie snel door te centrifugeren tot een maximum van 500 rpm; Zodra de snelheid wordt versneld tot 50 x g, moet de centrifuge worden gestopt.</li>
	<li>Decanterende de supernatant en Suspendeer pellets in 20 mL PBS.</li>
	<li>Tel cellen met behulp van Trypan blauwe uitsluiting en een hemocytometer, stel vervolgens de celconcentratie in op 2,5 x 106/ml voor de volgende celinoculatie. Opmerking: de verwachte opbrengst van 5 gram tumorweefsel is 80.000.000 hepatocyten met levensvatbaarheid > 95%.</li>
</ol>3. Inoculating van de hepatocyten van MTD2 muizen naar de lever van wild type C57BL/6J muizen door ISPL injectie
<ol><li>De aseptische techniek moet worden gebruikt in alle procedures</li>
	<li>Anesthetiseer de CCl4-behandelde mannelijke C57BL/6j-muizen met 2,5% Isofluraan, de muizen moeten worden behandeld met een ooglube om te voorkomen dat de ogen uitdrogen.</li>
	<li>Bereid spuiten met 200 μL hepatocyten voor injectie.</li>
	<li>Plaats muizen met de linker kant omhoog wanneer ze voldoende verdoofd zijn.</li>
	<li>Scheer de hele linkerflank van de muizen en schrobben het gebied af, afgewisseld tussen 70% alcohol en Betadine drie keer.</li>
	<li>Dien 5 mg/kg carprofen subcutaan toe vóór de chirurgische incisie.</li>
	<li>Maak een incisie van 1 cm op de linkerflank evenwijdig aan de 13e rib van de dorsale extreme beginnend net onder de rugspier.</li>
	<li>Identificeer de milt en exterioriseer het met behulp van bot-puntige Tang.</li>
	<li>Klem de milt met twee middelgrote Titanium klemmen. Plaats beide clips tussen de milt slagader en de ader, laat de ruimte tussen de clips na de inoculatie later knippen. Opmerking: het doel is om de inferieure pool van de milt te isoleren om het risico op zaaien te verminderen.</li>
	<li>Injecteer 200 μL (500.000) van de bereide hepatocyten in de onderste pool van de milt met een naald van 27 G.</li>
	<li>Clip de inferieure tak van de pedile (inferieure milt Pole vaten) met één middelgrote clip.</li>
	<li>Snijd de milt tussen de twee in eerste instantie geplaatste clips.</li>
	<li>Verwijder de inferieure pool van de milt die direct met tumorcellen werd geïnjecteerd.</li>
	<li>Gebruik 3-0 polyglactin 910 onderbroken hechten om de binnenste spier laag te sluiten.</li>
	<li>Gebruik gesteriliseerde stalen wond klemmen om de buitenste huidlaag te sluiten. Opmerking: stalen klemmen hebben de voorkeur boven hechtingen om te voorkomen dat dieren hechtingen uitkauwen en een gapende wond achterlaten.</li>
	<li>Dien 5 mg/kg carprofen subcutaan toe na hecht.</li>
	<li>Plaats alle herstellende dieren op een temperatuurgestuurde verwarmingspad en monitor nauwkeurig tot volledig hersteld van anesthesie.</li>
	<li>Geef muizen vrije toegang tot water na de operatie. Als de muis tijdens een operatie gedehydrateerd wordt, dien dan subcutane vloeistoffen toe (< 1 mL).</li>
	<li>Verwijder skin clips op 7-10 dagen na de operatief.</li>
</ol>

<ol><li>O'Connor, S., Ward, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma+-+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma - United States.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).</li>
<li>Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+of+Hepatocellular+Carcinoma+Incidence+in+the+United+States+Forecast+Through+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+clinical+oncology%3A+official+journal+of+the+American+Society+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Future of Hepatocellular Carcinoma Incidence in the United States Forecast Through 2030.</a> Journal of clinical oncology: official journal of the American Society of Clinical Oncology. 34, 1787-1794 (2016).</li>
<li>Greten, T., Lai, C., Li, G., Staveley-O'Carroll, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+and+Immune-based+Therapies+for+Hepatocellular+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Targeted and Immune-based Therapies for Hepatocellular Carcinoma.</a> Gastroenterology. 156, 510-524 (2019).</li>
<li>Llovet, J., Zucman-Rossi, J., Pikarsky, E., Sangro, B., Schwartz, M., Sherman, M., Gores, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Disease+primers%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular Carcinoma.</a> Nature reviews. Disease primers. 2, 16018(2016).</li>
<li>Ding, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+medicine+for+hepatocellular+carcinoma%3A+driver+mutations+and+targeted+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Precision medicine for hepatocellular carcinoma: driver mutations and targeted therapy.</a> Oncotarget. 8, 55715-55730 (2017).</li>
<li>Colombo, M., Maisonneuve, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+liver+cancer+mortality+on+a+global+scale%3A+still+a+long+way+to+go%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Controlling liver cancer mortality on a global scale: still a long way to go.</a> Journal of Hepatology. 67, 216-217 (2017).</li>
<li>Llovet, J., Burroughs, A., Bruix, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Hepatocellular carcinoma.</a> Lancet. 362, 1907-1917 (2003).</li>
<li>Parkin, D., Bray, F., Ferlay, J., Pisani, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+world+cancer+burden%3A+Globocan+2000%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Estimating the world cancer burden: Globocan 2000.</a> International Journal of Cancer. 94, 153-156 (2001).</li>
<li>Thomas, M., Zhu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepocellular+carcinoma%3A+the+need+for+progress%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Hepocellular carcinoma: the need for progress.</a> Journal of Clinical Oncology. 23, 2892-2899 (2005).</li>
<li>Llovet, J., Bruix, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targeted+therapies+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Molecular targeted therapies in hepatocellular carcinoma.</a> Hepatology. 48, 1312-1327 (2008).</li>
<li>Bruix, J., Sherman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+hepatocellular+carcinoma%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Management of hepatocellular carcinoma: an update.</a> Hepatology. 53, 1020-1022 (2011).</li>
<li>Pang, T., Lam, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+management+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Surgical management of hepatocellular carcinoma.</a> World Journal of Hepatology. 7, 245-252 (2015).</li>
<li>Llovet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+endpoints+of+clinical+trials+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institution%22%5BJournal%5D)">Design and endpoints of clinical trials in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of the National Cancer Institution. 100, 698-711 (2008).</li>
<li>Mueller, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+immunology+and+immunotherapy.+Realizing+the+promise.+Introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer immunology and immunotherapy. Realizing the promise. Introduction.</a> Science. 348, 54-55 (2015).</li>
<li>Gajewski, T., Schreiber, H., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+cells+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment.</a> Nature Immunology. 14, 1014-1022 (2013).</li>
<li>Ribas, A., Wolchok, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combining+cancer+immunotherapy+and+targeted+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Combining cancer immunotherapy and targeted therapy.</a> Current Opinion in Immunology. 25, 291-296 (2013).</li>
<li>Postow, M., Callahan, M., Wolchok, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+blockade+in+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%3A+Official+Journal+of+the+American+Society+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint blockade in cancer therapy.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 33, 1974-1982 (2015).</li>
<li>Gao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VISTA+is+an+inhibitory+immune+checkpoint+that+is+increased+in+ipilimumab+therapy+in+patients+with+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">VISTA is an inhibitory immune checkpoint that is increased in ipilimumab therapy in patients with prostate cancer.</a> Nature Medicine. 23, 551-555 (2017).</li>
<li>Hahn, A., Gill, D., Pal, S., Agarwal, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+immune+checkpoint+cancer+therapy+after+PD-1+and+CTLA-4%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">The future of immune checkpoint cancer therapy after PD-1 and CTLA-4.</a> Immunotherapy. 9, 681-692 (2017).</li>
<li>Remon, J., Besse, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+inhibitors+in+first-line+therapy+of+advanced+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint inhibitors in first-line therapy of advanced non-small cell lung cancer.</a> Current Opinion in Oncology. 29, 97-104 (2017).</li>
<li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+blockade+in+hepatocellular+carcinoma%3A+2017+update%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint blockade in hepatocellular carcinoma: 2017 update.</a> Liver Cancer. 6, 1-12 (2017).</li>
<li>Kudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+inhibition+in+hepatocellular+carcinoma%3A+Basics+and+ongoing+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint inhibition in hepatocellular carcinoma: Basics and ongoing clinical trials.</a> Oncology. 92, 50-62 (2017).</li>
<li>Breous, E., Thimme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+immunotherapy+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Potential of immunotherapy for hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Hepatology. 54, 830-834 (2011).</li>
<li>Sprinzl, M., Galle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facing+the+dawn+of+immunotherapy+for+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Facing the dawn of immunotherapy for hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Hepatology. 59, 9-10 (2013).</li>
<li>Liu, D., Staveley-O'Carroll, K., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-based+therapy+clinical+trials+in+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Cell+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immune-based therapy clinical trials in hepatocellular carcinoma.</a> Journal of Clinical Cell Immunology. 6, 376(2015).</li>
<li>Greten, T., Wang, X., Korangy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+concepts+of+immune+based+treatments+for+patients+with+HCC%3A+from+basic+science+to+novel+treatment+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Current concepts of immune based treatments for patients with HCC: from basic science to novel treatment approaches.</a> Gut. 64, 842-848 (2015).</li>
<li>Koster, B., de Gruijl, T., van den Eertwegh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+developments+and+future+challenges+in+immune+checkpoint+inhibitory+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Oncology%22%5BJournal%5D)">Recent developments and future challenges in immune checkpoint inhibitory cancer treatment.</a> Current Opinion in Oncology. 27, 482-488 (2015).</li>
<li>Johnson, D., Sullivan, R., Menzies, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+checkpoint+inhibitors+in+challenging+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune checkpoint inhibitors in challenging populations.</a> Cancer. 123, 1904-1911 (2017).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+cell+death-1+%28PD-1%29+checkpoint+blockade+in+combination+with+an+mTOR+inhibitor+restrains+hepatocellular+carcinoma+growth+induced+by+hepatoma+cell-intrinsic+PD-1%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Programmed cell death-1 (PD-1) checkpoint blockade in combination with an mTOR inhibitor restrains hepatocellular carcinoma growth induced by hepatoma cell-intrinsic PD-1.</a> Hepatology. 66, 1920-1933 (2017).</li>
<li>Heindryckx, F., Colle, I., van Vlierberghe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+mouse+models+for+hepatocellular+carcinoma+research%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research.</a> International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).</li>
<li>Qi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+inCVAX%2C+in+situ+cancer+vaccine%2C+and+its+immune+response+in+mice+with+hepatocellular+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+and+Cellular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development of inCVAX, in situ cancer vaccine, and its immune response in mice with hepatocellular cancer.</a> Journal of Clinical and Cellular Immunology. 7, 438(2016).</li>
<li>Qi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+radiofrequency+ablation+platform+in+a+clinically+relevant+murine+model+of+hepatocellular+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Development of a radiofrequency ablation platform in a clinically relevant murine model of hepatocellular cancer.</a> Cancer Biology and Therapy. 16, 1812-1819 (2015).</li>
<li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sunitinib+represses+regulatory+T+cells+to+overcome+immunotolerance+in+a+murine+model+of+hepatocellular+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Sunitinib represses regulatory T cells to overcome immunotolerance in a murine model of hepatocellular cancer.</a> Oncoimmunology. 7, 1372079(2017).</li>
<li>Staveley-O'Carroll, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+ligation+of+CD40+enhances+priming+against+the+endogenous+tumor+antigen+and+promotes+CD8%2B+T+cell+effector+function+in+SV40+T+antigen+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vivo ligation of CD40 enhances priming against the endogenous tumor antigen and promotes CD8+ T cell effector function in SV40 T antigen transgenic mice.</a> Journal of Immunology. 171, 697-707 (2003).</li>
<li>Avella, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+established+hepatocellular+carcinoma+is+induced+by+chemoimmunotherapy+in+an+orthotopic+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Regression of established hepatocellular carcinoma is induced by chemoimmunotherapy in an orthotopic murine model.</a> Hepatology. 55, 141-152 (2012).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+chemoimmunotherapy+against+hepatocellular+cancer+in+a+novel+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Successful chemoimmunotherapy against hepatocellular cancer in a novel murine model.</a> Journal of Hepatology. 66, 75-85 (2017).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoliposome+C6-ceramide+increases+the+anti-tumor+immune+response+and+slows+growth+of+liver+tumors+in+ice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Nanoliposome C6-ceramide increases the anti-tumor immune response and slows growth of liver tumors in ice.</a> Gastroenterology. 154, 1024-1036 (2018).</li>
<li>Held, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+antigen+expression+and+tumorigenesis+in+transgenic+mice+containing+a+mouse+major+urinary+protein%2FSV40+T+antigen+hybrid+gene%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">T antigen expression and tumorigenesis in transgenic mice containing a mouse major urinary protein/SV40 T antigen hybrid gene.</a> EMBO Journal. 8, 183-191 (1989).</li>
<li>Hanahan, D., Weinber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
</ol>

Er zijn geen declareren.

Met dit protocol hebben we een betrouwbaar en reproduceerbaar muriene model van HCC opgezet dat menselijke HCC initiatie en progressie nabootst. Klinisch, veel risicofactoren achtereenvolgens induceren leverletsel, leverfibrose, cirrose en de laatste fase van HCC. In ons protocol wordt IP-injectie van CCl4 gebruikt om eerst leverfibrose te produceren in wild type muizen, waardoor de daaropvolgende oncogene hepatocyten de tumoren vormen in de setting van leverfibrose. We ontdekten dat tumorvorming het meest suc...

Hepatocellulaire kanker (HCC) is de snelst groeiende vorm van kanker in de Verenigde Staten (VS)1,2,3. Elk jaar worden ongeveer 850.000 nieuwe gevallen gediagnosticeerd4,5 en 700.000 patiënten sterven aan deze dodelijke ziekte6,7,8,9,10 , waardoor het de op één na hoogste oorzaak van kanker-gerelateerde dood wereldwijd. Het beheer van HCC omvat chirurgische resectie, transplantatie, ablatie, chemoembolisatie of systemische therapieën, zoals sorafenib11. Vroegtijdige diagnose en behandeling met chirurgische resectie of transplantatie hebben het hoogste totale overlevingsvoordeel4. Helaas, de meerderheid van de patiënten aanwezig in een later stadium en vereisen Management met ablatie, chemoembolisatie of sorafenib12. Sorafenib, een receptor tyrosine kinase remmer (rtki), werd goedgekeurd door de Food and Drug Administration in 2008 als de enige systemische medicamenteuze therapie beschikbaar voor de behandeling van inoperabel HCC. Hoewel het medicijn alleen een bescheiden toename van de totale overleving biedt, van 7,9 tot 10,7 maanden13, voorzag het in een nieuwe therapeutische strategie die kon worden gebruikt om HCC te beheren.
Het manipuleren van het immuunsysteem om gevestigde kankers te elimineren is een snel groeiend veld in kankeronderzoek14. Immuun Checkpoint studies hebben aanzienlijk geavanceerde immunotherapeutische drug ontwikkeling in de behandeling van kanker15,16. De FDA keurde het gebruik van antilichamen (ABS) goed tegen cytotoxisch T-lymfocyten antigeen 4 (CTLA-4), geprogrammeerde celdood proteïne 1 (PD-1), en zijn ligand PD-L1 voor de behandeling van melanoom, longkanker, hoofd-en nekkanker, en blaaskanker17, 18 , 19 , 20. klinische studies met monotherapie-of combinatietherapie waarbij gebruik wordt gemaakt van één of meerdere antilichamen tegen pd-1, PD-L1 of ctla-4 voor de behandeling van Advanced HCC zijn aan de gang21,22,23, en sommige proeven hebben gunstige resultaten opgeleverd. In 2017, de FDA verleende versnelde goedkeuring voor anti-PD-1 antilichaam voor de behandeling van HCC patiënten, die resistentie tegen sorafenib zijn, maar de totale responspercentage van deze therapie is slechts 14,3%. Andere strategieën zijn niet vertaald in de klinische praktijk op dit moment24,25. Overwinnen van tumor-geïnduceerde diepgaande immuun tolerantie ter verbetering van immune Checkpoint therapie26; voorspellen van de werkzaamheid van immuuncontrolepunt therapie; preventie van immuungerelateerde ongewenste voorvallen; het optimaliseren van de toedieningsroute, dosering en frequentie; en het vinden van effectieve combinaties van therapieën27,28,29 blijven allemaal uiterst uitdagende taken.
Er zijn verschillende conventionele benaderingen gebruikt voor het induceren van HCC in muismodellen momenteel en worden gebruikt, afhankelijk van de onderzoeker specifieke onderzoek vraag30. Chemisch geïnduceerde HCC-Muismodellen met genotoxische verbindingen bootsen letsel geïnduceerde maligniteit na. Xenograft-modellen via ectopische of orthotopic implantatie van HCC-cellijnen zijn geschikt voor geneesmiddelen screening. Een aantal genetisch gemodificeerde muizen is ontwikkeld om de pathofysiologie van HCC te onderzoeken. Transgene muizen die virale genen, oncogenen en/of groeifactoren uitdrukken, maken de identificatie mogelijk van trajecten die betrokken zijn bij hepatocarcinogenese. Vanwege inherente beperkingen, deze modellen niet recapituleren de typische immuunkenmerken gezien in humaan HCC, die aanzienlijk heeft belemmerd verheldering van de onderliggende mechanismen en ontwikkeling van innovatieve immunotherapeutische strategieën14 ,15. Onlangs hebben we een klinisch relevant Murine model gecreëerd. Dit nieuwe model bootst niet alleen menselijke HCC initiatie en progressie na, maar weerspiegelt ook de meest typische kenmerken van menselijke ziekte, waaronder immuun disfunctie. We hebben de biologische en immunologische kenmerken ervan gekenmerkt. Gebruikmakend van dit nieuwe model hebben we verschillende immunotherapeutische strategieën onderzocht voor de behandeling van HCC31,32,33,34,35,36, 37. dit unieke platform stelt ons in staat om mechanismen van tumor-geïnduceerde immunotolerance te bestuderen en om proof-of-concept therapeutische strategieën te ontwikkelen voor HCC naar uiteindelijke klinische vertaling.

<table><tbody><tr><td>Anesthesieapparaat</td><td>VETEQUIP</td><td>IMPAC6</td><td>anesthesieapparaat voor chirurgie</td></tr><tr><td>Vlindernaald</td><td>BD</td><td>8122963</td><td>Naald gebruikt voor leverperfusie</td></tr><tr><td>C57BL/6 muizen</td><td>Jackson Lab</td><td>000664&nbsp;</td><td>muizen gebruikt in prototol</td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>CRESCENT CHEMICAL</td><td>20402</td><td>carprofen voor pijnverlichting</td></tr><tr><td>Celzeef&nbsp;</td><td>CORNING</td><td>REF 431751</td><td>Celzeef, 70&micro;m, voor hepatocytenisolatie</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>Allegra X-30R</td><td>centrifuge voor celaisolatie</td></tr><tr><td>Klemmen&nbsp;</td><td>Teleflex Medical</td><td>REF 523700</td><td>Titanium klemmen voor milt</td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Zeiss</td><td>Primovert&nbsp;</td><td>microscoop voor celaobservatie</td></tr><tr><td>Mtd2 muizen</td><td>N/A</td><td></td><td>Gift van Dr. William A Held bij het Roswell Park Cancer Institute in 2002, onderhouden in ons lab</td></tr><tr><td>Naald</td><td>BD</td><td>REF 305109</td><td>BD precisionglide naald, 27G x 1/2 (0.4mm x 13mm)</td></tr><tr><td>Hechtdraad</td><td>ETHICON</td><td>J303H</td><td>gecoate VICRYL hechtdraad</td></tr><tr><td>SV40 T Ag antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab16879</td><td>anti-SV40 T-antigeenantilichaam voor IHC</td></tr><tr><td>Spuit</td><td>BD</td><td>REF 309626</td><td>1 mL TB spuit voor celainjectie</td></tr><tr><td>Trypan blauw</td><td>SIGMA</td><td>T 8154</td><td>Trypan blauw oplossing voor celalevensvatbaarheidstest</td></tr><tr><td>Wondklemmen</td><td>Reflex</td><td>reflex9, Part. No. 201-1000</td><td>roestvrijstalen wondklemmen voor wondsluiting</td></tr></tbody></table>

een oncogene hepatocyte-geïnduceerde orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose

An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis

De afwezigheid van een klinisch relevant diermodel dat de typische immuunkenmerken van hepatocellulaire kanker (HCC) aanpakt, heeft de verheldering van de onderliggende mechanismen en de ontwikkeling van innovatieve immunotherapeutische strategieën aanzienlijk belemmerd. Om een ideaal diermodel te ontwikkelen dat het humaan HCC samenvoert, krijgen immunocompetente mannelijke C57BL/6J-muizen eerst een koolstoftetrachloride (CCl4)-injectie om leverfibrose te induceren, waarna ze histologisch-normale oncogene hepatocyten van jonge mannen krijgen SV40 T antigeen (TAg)-transgene muizen (MTD2) door intra-splenic (ISPL) inoculatie. Androgeen gegenereerd in de ontvangende mannelijke muizen in de puberteit initieert TAg expressie onder controle van een lever-specifieke promotor. Als gevolg daarvan, de overgedragen hepatocyten worden kankercellen en vorm tumor massa's in de setting van leverfibrose/cirrose. Dit nieuwe model bootst Human HCC initiatie en progressie na in de context van leverfibrose/cirrose en weerspiegelt de meest typische kenmerken van humaan HCC inclusief immuun disfunctie.

Oncogene hepatocyten die zijn geïsoleerd van TAg-transgene muizen (Figuur 2) werden in de lever van wild type muizen geënt door intra-milt injectie (Figuur 3). De getransplanteerde hepatocyten succesvol en betrouwbaar groeide orthotopic HCC tumoren (Figuur 4) met tumor specifieke antigeen SV40 TAg (Figuur 5) in de setting van hepatische ontsteking en fibrose (Figuur 1).
<img al...

Hier beschrijven we de ontwikkeling van een klinisch relevant muriene model van leverkanker die de typische immuunkenmerken van hepatocellulaire kanker (HCC) recapituleren.

Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded ...

Met behulp van slechts een model om een hepatocellulaire kanker massa model te ontwikkelen kan mensen helpen hun tumor-geïnduceerde immunotolerantie en specifieke behandeling-geïnduceerde, elke tumor immunoresponses. De orthotopische tumor die zich ontwikkelt met de leverfibrose techniek bootst de klinische kenmerken van menselijke leverkanker na. Deze methode kan een nuttig hulpmiddel bieden in hepatocellulaire kanker immunologische studie.Visuele demonstratie van deze methode kan illustreren de meer technisch uitdagende stappen, zoals de intrasplenic injectie, die essentieel zijn voor een succesvolle uitvoering van dit protocol. Vervolgens handmatig beperken een mannetje, zes tot acht weken oude C57 zwarte 6 muis dorsal-side omhoog. Gebruik alternatieve 70% ethanol en Betadine scrubs om de injectieplaats drie keer schoon te maken.Lever vervolgens 160 microliter koolstoftetrachloride aan de muis door intraperitoneale injectie en breng het dier terug naar zijn kooi thuis. Na bevestiging van een gebrek aan respons op teen knijpen, in een vijf maanden oude simian virus 40 T antigeen transgene muis, plaats de muis in de supine positie en zet de ledematen met tape. Maak een midline laparotomie incisie langs de lengte van de linea alba, groot genoeg om een adequate blootstelling van de lever te bieden, en verdringen de darmen naar links.Ontleden boven de lever aan blootstelling aan de inferieure vena cava. Induceer een slagaderklem om het vat te binden. Gebruik een vlindernaald om intraveneuze toegang tot de poortader te krijgen en de katheter handmatig vast te stellen.Zorgvuldig schakelen spuiten voor elke oplossing, met succes leveren 15 milliliter oplossing een, 15 milliliter van 0,75%collagenase oplossing twee, en 15 milliliter oplossing twee zonder collagenase via katheter, bij een geschatte 8,9 milliliter oplossing per minuut stroomsnelheid. Aan het einde van de perfusie, oogst de tumormassa in een 50-milliliter conische buis met 10 tot 15 milliliter PBS. Accijns de tumor van de volgende MTD2 muis zoals net aangetoond.Gebruik een schaar om de levers in kleinere stukken te snijden. Breng de weefsels in een nieuwe container van verse PBS om de rest van het bloed uit het weefsel te verwijderen voordat u de weefselstukken in een 50-milliliter conische buis met vijf milliliter van volledige RPMI medium. Hak de gewassen levermonsters tot de stukken gemakkelijk door de punt van een pijp van vijf milliliter kunnen passen.Voeg voldoende medium aan de buis om een uiteindelijk volume van 30 milliliter te bereiken. Gebruik een pipet van vijf milliliter om de weefselfragmenten te tritureren, voordat u de oplossing door een zeef van 70 micrometer in een nieuwe buis van 50 milliliter filtert. Was de zeef meerdere malen met compleet medium.Pas het uiteindelijke volume aan op 50 milliliter met extra compleet medium. Draai de vering snel door centrifugeren tot maximaal 50 keer g voordat u de centrifuge stopt en de supernatant decanteert. Dan resuspend de pellet in 20 milliliter pbs voor het tellen.Voor intrasplenic injectie van de MTD2 hepatocyten, laad een een-milliliter spuit uitgerust met een 27-gauge naald per elk ontvanger dier met 220 microliters van hepatocyten per muis. Bevestig een gebrek aan respons op teenknijpen in een verdoofd, met koolstoftetrachloride behandeld dier. Begin net onder de wervelkolom spier, vervolgens, maak een een-centimeter incisie op de linkerflank parallel aan de dertiende rib van de dorsale extreme en gebruik botte-puntige tangen om de milt exterioriseren.Knip de milt met twee middelgrote titaniumclips tussen de miltslagader en ader en lever 200 microliter cellen in de inferieure pool van de milt. Knip de inferieure tak van de pedicle met één middelgrote clip en snijd de milt tussen de twee in eerste instantie geplaatste clips. Verwijder de inferieure pool van de milt die direct werd geïnjecteerd met tumorcellen en gebruik 3-0 polyglactine 910 onderbroken hechten om de binnenste spierlaag te sluiten.Gebruik vervolgens gesteriliseerde stalen wondclips om de buitenste huidlaag te sluiten en onderhuids vijf milligram per kilogram carprofen toe te dienen. Na isolatie van T-antigeentransgene muizen zoals aangetoond, kunnen zowel hepatocyten als tumorinfiltrerende cellen worden waargenomen. De cellen tonen meestal een bijna 100% levensvatbaarheid na verwerking.Na intrasplenische inenting in in het wild-type koolstoftetrachloride-behandelde dieren, de getransplanteerde hepatocyten met succes en betrouwbaar groeien orthopedische hepatocellulaire carcinoom tumoren die de tumor-specifieke simian virus 40 T antigeen uitdrukken. De voorbereiding van onze levensvatbare en zuivere populatie hepatocyten uit MTD2 massa en nauwkeurige toediening van de intrasplenic injectie zijn belangrijk voor het succes van de procedure. Hoewel ons team hepatocyte-inenting in ontvangende muizen heeft getest via intravasculaire en intraperitoneale injectie, waren deze andere methoden niet in staat om orthopedisch hepatocellulair carcinoom te induceren.Dit model biedt een uniek platform dat het onderzoek mogelijk maakt voor immuunbewaking en de tolerantie in de vroege en latere stadia van tumorprogressie. Wees voorzichtig bij het gebruik van de koolstoftetrachloride, want het is giftig.

an-oncogenic-hepatocyte-induced-orthotopic-mouse-model-hepatocellular

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Infectie van muizen met een adenovirus uiting van de belangrijkste humane autoantigeen cytochroom P450 2D6 (hCYP2D6) erkend door sera van patiënten die lijden aan type 2-auto-immune hepatitis resulteert in een blijvende vorm van auto-immuun-gemedieerde lever ziekte die wordt gekenmerkt door uitgestrekte hepatitis, fibrose en genereren van een CYP2D6 -specifieke immuunrespons.

De CYP2D6 Animal Model: Hoe kan ik auto-immune hepatitis induceren in Muizen

Menselijke tumorxenotransplantaten in immunodeficiënte muizen zijn waardevolle instrumenten om kanker biologie studeren. Specifieke protocollen voor subcutane en intrahepatische xenograften uit menselijke hepatocellulair carcinoom cellen of tumorfragmenten genereren worden beschreven. Leverregeneratie geïnduceerd door gedeeltelijke hepatectomie in ontvangende muizen wordt gepresenteerd als een strategie om intrahepatische engraftment vergemakkelijken.

Generatie van subcutane en Intrahepatic Human Hepatocellular carcinoom Xenografts in immunodeficiënte muizen

Verstoring van de galstroom resulteert in ernstige inflammatoire cholestatische leverbeschadiging met een karakteristieke tijdsafhankelijke sequentie van morfologische veranderingen. Hier presenteren we een protocol voor de chirurgische ligatie van de gemeenschappelijke galgang bij muizen die het mogelijk maakt om een sterke fibrotische respons te induceren na 21 tot 28 dagen.

Bile-duct Ligatie in Muizen: Inductie van Inflammatoire leverschade en Fibrosis door Obstructive Cholestase

De metastatische verspreiding van kanker de belangrijkste oorzaak van kankersterfte. Wij bieden een uitgebreide beschrijving van ons overleven chirurgie methodologie voor de oprichting van een "patiënt-achtige" orthotoop syngeen muis modelsysteem voor het bestuderen van de mechanismen van metastase in vaste orgel tumoren.

Een &quot;Patiënt-Like&quot; Orthotope Syngene Mouse Model van Hepatocellular carcinoom metastase

Dit protocol biedt een betrouwbare methode om gehumaniseerde muizen te vestigen met zowel menselijk immuunsysteem als levercellen. Dubbele gereconstitueerde immunodeficiënte muizen bereikt via intrasplenische injectie van humane hepatocyten en CD34+ hematopoietische stamcellen zijn vatbaar voor humaan immunodeficiëntie virus-1 infectie en even leverschade zoals waargenomen in HIV-geïnfecteerde patiënten.

Oprichting van de dubbele gehumaniseerde TK-nog muis model voor HIV-geassocieerde lever pathogenese

Dit protocol presenteert een 3D biomimetisch model met bijbehorend fibrotisch stromaal compartiment. Bereid met fysiologisch relevante hydrogels in verhoudingen die de biofysische eigenschappen van de stromale extracellulaire matrix nabootsen, een actieve bemiddelaar van cellulaire interacties, tumorgroei en uitzaaiingen.

Een biomimetisch model voor leverkanker om tumor-stroma-interacties te bestuderen in een 3D-omgeving met afstembare bio-fysische eigenschappen

Portale ader injectie van colorectale kanker (CRC) organoïden genereert stroma-rijke levermetastase. Dit muismodel van CRC-levermetastase vertegenwoordigt een nuttig hulpmiddel om tumor-stroma-interacties te bestuderen en nieuwe stroma-gerichte therapieën te ontwikkelen, zoals adeno-geassocieerde virus-gemedieerde gentherapieën.

Portale ader injectie van colorectale kanker organoïden om de levermetastase stroma te bestuderen

Hier presenteren we een protocol om orthotopische hepatocellulaire carcinoom xenografts met en zonder ligatie van de leverslagader te creëren en niet-invasieve positronemissietomografie (PET) beeldvorming van tumorhypoxie uit te voeren met behulp van [18 F] Fluoromisonidazol ([18 F] FMISO) en [18 F] Fluorodeoxyglucose ([18F] FDG).

Niet-invasieve PET/MR-beeldvorming in een orthotopisch muismodel van hepatocellulair carcinoom

Organoïden die worden gegenereerd uit tumoren van patiënten worden orthotopisch in de lever van de muis geïnjecteerd. De resectie van niet-tumorachtig leverweefsel leidt tot een regeneratieve omgeving in het leverweefsel waar de tumor zich bevindt.

Een van patiënten afgeleide organoïde xenotransplantaatmodel voor hepatocellulaire kanker om de impact van leverregeneratie op tumorgroei te onderzoeken

Het muismodel van gedeeltelijke 2/3 (66%) hepatectomie is goed beschreven in de literatuur, maar meer uitgebreide hepatectomieën die het klein-voor-grootte-syndroom na levertransplantatie nabootsen, zijn zelden gebruikt. We beschrijven een uitgebreide hepatectomieprocedure van 78% in een muismodel die resulteert in ongeveer 50% postoperatieve letaliteit bij gezonde muizen.

Uitgebreide hepatectomie van 78% in een chirurgisch muismodel

Dit protocol biedt een uitgebreide beeldvormingspijplijn om de morfologie van leverstellate cellen in intact leverweefsel te visualiseren en te modelleren. Deze benadering combineert fluorescerende labeling van fibroblasten met behulp van muisgenetica, in situ leverperfusie-gebaseerde weefselvoorbereiding en een aangepaste iDISCO-weefselreinigingsmethode om optische transparantie te bereiken.

Mapping van de morfologie van hepatische stellate cellen in muismodellen van leverfibrose

Leer een orthotopisch muismodel van hepatocellulair carcinoom ontwikkelen met leverfibrose en intrasplenische injectie. Dit model bootst klinische kenmerken van menselijke leverkanker na en ondersteunt onderzoek naar tumor-geïnduceerde immunotolerantie.

Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose (Video) | JoVE Journal

Een oncogene hepatocyte-geïnduceerde Orthotopic muis model van hepatocellulaire kanker ontstaan in de setting van leverontsteking en fibrose

Meer video's verkennen