Name: Analyse van Iopfenoxinezuur analogen in kleine Indische Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera voor gebruik als een orale rabiësvaccinatie biologische marker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: Leer een LC-MS/MS-methode om iophenoxinezuur in Herpestes auropunctatus-serum te detecteren als biologische marker voor aasopname bij orale rabiësvaccinatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit onderzoek werd deels gesteund door het intramurale onderzoeksprogramma van het Amerikaanse ministerie van landbouw, dier en Plant Health Inspection Service, Wildlife Services, National rabies Management Program en IDT Biologika (Dessau-Rosslau, Duitsland).

Alle procedures werden goedgekeurd door het USDA National Wildlife Research Center van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité onder goedgekeurd onderzoeksprotocol QA-2597.
Opmerking: het volgende protocol beschrijft de analyseprocedure voor het opsporen van methyl-iophenoxinezuur in het Mongoose serum. Deze methode is de definitieve versie van een iteratief proces dat begon met analyse van ethyl-iopfenoxinezuur in Mongoose serum. Tijdens de initiële evaluatie van ethyl-iopfenoxinezuur werden kleine wijzigingen aangebracht in de methoden, wat resulteerde in het uiteindelijke protocol dat hieronder werd gepresenteerd. Representatieve resultaten omvatten die verkregen tijdens beide iteraties.
1. voorbereiding van oplossingen en normen
<ol><li>Koop me-IPA en et-IPA.</li>
	<li>Voor mobiele fase A, bereid 1 L van 0,1% (v/v) mierenzuur in water door 1 mL mierenzuur te combineren met 1 L ultrazuiver water (≥ 18 MΩ). Voor mobiele fase B, bereid 1 L van 0,1% (v/v) mierenzuur in acetonitril (ACN) door 1 mL mierenzuur te combineren met 1 L ACN.</li>
	<li>Bereid voor oplosmiddel 200 mL 0,5% (v/v) trifluorazijnzuur (TFA) in ACN door 1 mL TFA te combineren met 200 mL ACN.</li>
	<li>Bereid geconcentreerde IPA-stamoplossingen van mij-IPA en et-IPA in ACN in bij concentraties van ongeveer 1.000 μg/mL.<ol>
<li>Weeg ongeveer 10 mg van mij-IPA op een microbalans en noteer de massa tot ± 0,0001 mg. Breng de me-IPA kwantitatief over in een volumetrische kolf van 10 mL met 45 mL ACN. Sonicate 1 min om alle vaste stoffen op te lossen en breng vervolgens naar het volume met ACN.</li>
		<li>Breng ~ 8 mL van elk voorraad naar Amber 8 mL glazen flesjes met poly-tetrafluorethyleen (PTFE)-beklede doppen. Bewaren bij kamertemperatuur (RT). Breng de resterende voorraad over naar gevaarlijk afval.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Voor de 25x-7 me-IPA voorraad (tabel 1), bereid een voorraad van mij-IPA in ACN op ongeveer 200 μg/ml. Voorbeeld: Breng 1 mL van de me-IPA geconcentreerde kolf over van stap 1.4.2 naar een maatkolf van 5 mL met een glazen spuit van 1.000 μL. Verdun tot het volume met ACN. Breng de kolf over in een amberkleurige glazen Injectieflacon van 8 mL met een PTFE-gevoerde dop. Store bij RT.</li>
	<li>Bereid de zes extra 25x me-IPA-aandelen voor zoals beschreven in tabel 1. Combineer voor elke kolf de volumes die worden aangegeven met een herhaalde pipet in een amberkleurige glazen Injectieflacon van 8 ml met een PTFE-gevoerde dop. Bewaar elke kolf op RT.</li>
	<li>Voor de 25x surrogaat voorraad, bereidt u een vervangende voorraad van mij-IPA voor in ACN op ongeveer 10 μg/mL uit de geconcentreerde kolf die in stap 1.4.2 is bereid. Breng 0,100 mL van de geconcentreerde me-IPA-kolf over in een volumetrische kolf van 10 mL met een glazen spuit van 100 μL en Verdun vervolgens tot het volume met ACN.<ol>
<li>Breng ~ 8 mL over in een amberkleurige glazen Injectieflacon van 8 mL met een PTFE-gevoerde dop. Store bij RT. Breng de resterende voorraad over naar gevaarlijk afval.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bereid 4x voorraden met beide analyten in 2 mL schroef-top glazen autosampler flesjes zoals beschreven in tabel 2.<ol>
<li>Als u bijvoorbeeld de voorraad 4x-7 wilt voorbereiden op een Injectieflacon van 2 ml, voegt u 0,20 ml van de 25x-7 me-IPA kolf toe vanaf stap 1,5 met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml capaciteit. Voeg 0,20 ml van de 25x surrogaat et-IPA kolf toe vanaf stap 1,7 met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml capaciteit.</li>
		<li>Voeg 0,85 ml ACN toe met een herhaalde pipet met een tip van 1 ml capaciteit. Sluit de injectieflacon stevig aan en keer 5x om te mengen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bereid de standaard curve in 2 mL schroef-top autosampler flesjes zoals beschreven in tabel 3.<ol>
<li>Als u bijvoorbeeld standaard 7 (STD 7) wilt bereiden op een 2-ml injectieflacon, voegt u 0,20 ml van de 4x-7 kolf toe vanaf stap 1.8.2 met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml capaciteit. Voeg 0,60 ml ultrapuur di water toe met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 1 ml capaciteit. Sluit de injectieflacon stevig aan en keer 5x om te mengen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. monstervoorbereiding
Let op: personeel dat deze procedure uitvoert, moet de volledige serie rabiës pre-exposure profylaxe hebben ontvangen en een gedocumenteerde rabiës antilichaamtiter boven 0,5 IU hebben van een federale medische faciliteit voor gezondheid op het werk. Het personeel moet bij het uitvoeren van de extractie te allen tijde laboratoriumjassen en Oogbescherming dragen. Voorzichtig: Voer stappen 2.3 − 2.6 uit in een klasse II bioveiligheid Cabinet.
<ol><li>Bereid voor elk monster een micro centrifugebuis van 1,5 mL met 200 − 300 mg NaCl. Orden de buizen in een plastic rek van 80-positie. Gereserveerd voor gebruik in stap 2,6. Opmerking: voor grote aantallen monsters wordt een microscoop (of een ander klein meetapparaat) aanbevolen.</li>
	<li>Label twee 1,5 mL micro centrifugebuizen voor elk monster: één als "A" en de andere als "B". Regel de buizen in een plastic rack met 80 posities.</li>
	<li>Plaats de volgende materialen en apparatuur die nodig zijn voor serum extractie in een klasse II bioveiligheid Cabinet: Micro centrifugebuizen (in racks) bereid in de stappen 2,1 en 2,2, een Vortex mixer, herhaalde pipet met 0,5 ml en 5 ml capaciteits tips, 100 − 1000 μL luchtverplaatsing Pipetteer met 1.000 μL tips, containers met ongeveer 100 mL, elk verdunningsmiddel en ultrapuur DI water, en een Biohazard afvalbak.</li>
	<li>Verwijder serummonsters van bevroren opslag en warm tot RT in de bioveiligheidskast. Vortex Meng elk serummonster vóór de bemonstering.</li>
	<li>Gebruik een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml, verdeel 0,050 ml Mongoose serum in de buis "a" en Voeg 0,050 ml 25x surrogaat kolf toe. Voeg vervolgens 0,950 ml verdunningsmiddel toe aan de buis "A" met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 5 ml capaciteit. Dop stevig en Vortex mix voor 10 − 15 s.</li>
	<li>Doseer de vooraf gewogen NaCl van stap 2,1 in de buis "A" en Vortex mix 3x voor 8 − 12 s. Veeg de buitenoppervlakken van het flacon rek met de buis "A" af met 70% (v/v) isopropanol. Opmerking: het rek van de monsters kan nu worden verwijderd uit de klasse II bioveiligheid Cabinet.</li>
	<li>Centrifuge buis "A" bij 12.000 x g gedurende 1 minuut om de waterige en ACN-fasen te scheiden. Pipetteer 0,80 mL van de bovenste ACN-fase naar de buis "B" met behulp van een pipet met een luchtverplaatsing van 100 − 1000 μL. Breng de resterende oplossing in buis "A" over naar gevaarlijk afval en gooi de lege buis weg in een biogevaarlijke afvalbak.</li>
	<li>Verwijder ACN en TFA van Tube "B" met een zachte stroom van N2 gas in een waterbad van 45 °c.</li>
	<li>Voeg 0,250 mL ACN toe aan Tube "B" met behulp van een herhaalde pipettor, Vortex mix voor 4 − 5 s, en centrifugeer vervolgens kort (2 − 4 s) bij 12.000 x g om de vloeistof in de bodem van de buis te verzamelen.</li>
	<li>Voeg 0,750 ml ultrapuur di water toe aan de buis "B" met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 5 ml, Vortex mix voor 4 − 5 s, en centrifugeer vervolgens 1 minuut bij 12.000 x g om het monster te verduidelijken.</li>
	<li>Breng 0,75 mL van de supernatant over naar een injectieflacon met autosampler met behulp van een pipet met een luchtverplaatsing van 1.000 μL. Gooi pipetpunten weg in de Biohazard Waste container.</li>
	<li>Cap autosampler flesjes veilig en analyseren door LC-MS/MS (sectie 4). Breng de resterende oplossing in buis "B" over naar gevaarlijk afval en gooi de lege buis weg naar een biogevaarlijke afvalbak. Verwijder alle biogevaarlijke afvalstoffen door autoclaven of verbranding.</li>
</ol>3. monsters van de kwaliteitscontrole
Let op: Volg de waarschuwingen die worden beschreven in paragraaf 2.
Opmerking: de volgende procedure beschrijft het minimum aantal kwaliteitscontrole (QC) monsters die nodig zijn voor een analyse. Replicaten op elk niveau worden aanbevolen als voldoende controle Mongoose serum beschikbaar is.
<ol><li>Maak vier 1,5 mL microcentrifugebuisjes met 200 − 300 mg NaCl. Regel de buizen in een plastic rack met 80 posities.</li>
	<li>Label twee 1,5 mL micro centrifugebuizen voor elk QC-monster: een als "A" en de andere als "B". Regel de buizen in een plastic rack met 80 posities.</li>
	<li>Herhaal stap 2,3.</li>
	<li>Verwijder Control Mongoose serum van bevroren opslag en warm tot rt in de bioveiligheid Cabinet. Vortex Meng het controleserum voorafgaand aan de bemonstering.</li>
	<li>Breng 0,050 ml Control Mongoose serum in de vier 1,5-ml "A"-buisjes met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml capaciteit.</li>
	<li>Versterk elk van de vier QC-monsters zoals gespecificeerd in tabel 4 met behulp van een herhaalde pipet met een tip van 0,5 ml capaciteit. Dop elk QC-monster veilig en Vortex mix voor 10 − 15 s.</li>
	<li>Voer de extractieprocedure uit zoals beschreven in stap 2.6 − 2.12.</li>
</ol>4. LC-MS/MS-analyse
<ol><li>Configureer de LC-MS/MS met alle parameters die worden beschreven in tabel 5. Schakel de LC-MS/MS in en laat de kolom oplopen tot 70 °C voordat de stroomsnelheid wordt ingesteld op 0,800 mL/min.</li>
	<li>Stel een reeks in de software voor gegevensverzameling in (tabel met materialen) om de standaard curve voor en na elke batch te injecteren, bestaande uit kwaliteitscontrole monsters en onbekende monsters.</li>
	<li>Injecteer alle normen en monsters en verkrijg MRM-ionen chromatogrammen met behulp van de in tabel 5vermelde parameters.</li>
	<li>Schakel na voltooiing van de sequentie de LC-MS/MS uit en gooi alle injectieflacons met autosampler weg als gevaarlijk afval.</li>
</ol>5. kwantificering
<ol><li>Gebruik de data-analyse software om een kalibratiecurve te genereren van relatieve responsen versus relatieve concentraties voor mij-IPA met behulp van et-IPA als de interne standaard. Bereken de relatieve responsen van de kwantor MRM transitie voor mij-IPA (556,6 → 428,7) gedeeld door de MRM overgang voor et-IPA (570,7 → 442,7). Bouw een kalibratiekromme van 7 niveaus met een tweede orde kwadratische functie die gewogen 1/x is en de oorsprong negeert.</li>
	<li>Bereken de serumconcentratie (Cserum) van mij-IPA met behulp van de volgende vergelijking: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/59373/59373eq1.jpg" style="opacity: 0.9;"> Wanneer c-instrument de concentratie is die wordt bepaald door het instrument van de ijkcurve in eenheden van μg/ml, is 1,25 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/59373/59373eq2.jpg" style="opacity: 0.9;"> </img>de verdunningsfactor, v-finale het uiteindelijke monstervolume (1,0 ml) en het serum volume in ml ( 0,050 mL nominaal).</li>
</ol>

<ol><li>Nel, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mongoose+rabies+in+southern+Africa%3A+a+re-evaluation+based+on+molecular+epidemiology%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Research%22%5BJournal%5D)">Mongoose rabies in southern Africa: a re-evaluation based on molecular epidemiology.</a> Virus Research. 109 (2), 165-173 (2005).</li>
<li>Zieger, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phylogeography+of+rabies+in+Grenada%2C+West+Indies%2C+and+implications+for+control%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The phylogeography of rabies in Grenada, West Indies, and implications for control.</a> PLOS Neglected Tropical Diseases. 8 (10), e3251(2004).</li>
<li>Monroe, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabies+surveillance+in+the+United+States+during+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Veterinary+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Rabies surveillance in the United States during 2014.</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 248 (7), 777-788 (2015).</li>
<li>Slate, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+of+oral+rabies+vaccination+in+wild+carnivores+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Research%22%5BJournal%5D)">Status of oral rabies vaccination in wild carnivores in the United States.</a> Virus Research. 111, 68-76 (2005).</li>
<li>Blanton, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+of+small+Asian+mongoose+%28Herpestes+javanicus%29+against+rabies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Vaccination of small Asian mongoose (Herpestes javanicus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 42 (3), 663-666 (2006).</li>
<li>Vos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+vaccination+of+captive+small+Indian+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29+against+rabies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral vaccination of captive small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) against rabies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (4), 1033-1036 (2013).</li>
<li>Berentsen, A. R., Johnson, S. R., VerCauteren, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+ONRAB%C2%AE+bait+matrix+flavor+preference+by+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29+in+Puerto+Rico%3A+Implications+for+Oral+Rabies+Vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Caribbean+Journal+of+Science%22%5BJournal%5D)">Evaluation of ONRAB® bait matrix flavor preference by mongoose (Herpestes auropunctatus) in Puerto Rico: Implications for Oral Rabies Vaccination.</a> Caribbean Journal of Science. 48 (1), 52-58 (2014).</li>
<li>Ortmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+studies+with+the+oral+rabies+virus+vaccine+strain+SPBN+GASGAS+in+the+small+Indian+mongoose+%28Herpestes+auropunctatus%29%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Safety studies with the oral rabies virus vaccine strain SPBN GASGAS in the small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus).</a> BMC Veterinary Research. 14 (1), 90(2018).</li>
<li>Linhart, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+field+evaluation+of+baits+for+delivering+oral+rabies+vaccines+to+raccoons+%28Procyon+lotor%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">A field evaluation of baits for delivering oral rabies vaccines to raccoons (Procyon lotor).</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (2), 185-194 (1994).</li>
<li>Fry, T. L., Atwood, T., Dunbar, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+rhodamine+B+as+a+biomarker+for+raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Wildlife+Interactions%22%5BJournal%5D)">Evaluation of rhodamine B as a biomarker for raccoons.</a> Human Wildlife Interactions. 4 (2), 275-280 (2010).</li>
<li>Jones, C., Moller, H., Hamilton, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+potential+techniques+for+identifying+individual+stoats+%28Mustela+erminea%29+visiting+control+or+monitoring+stations%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">A review of potential techniques for identifying individual stoats (Mustela erminea) visiting control or monitoring stations.</a> New Zealand Journal of Zoology. 31 (3), 193-203 (2004).</li>
<li>de Leeuw, A. N. S., Smith, G. C., Woods, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+iophenoxic+acid+to+assess+bait+uptake+by+European+badgers%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Vertebrate+Pest+Management%22%5BJournal%5D)">Use of iophenoxic acid to assess bait uptake by European badgers.</a> Advances in Vertebrate Pest Management. 4, 243-254 (2006).</li>
<li>Southey, A. K., Sleeman, D. P., Gormley, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulfadimethoxine+and+rhodamine+B+as+oral+biomarkers+for+European+badgers+%28Meles+meles%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Sulfadimethoxine and rhodamine B as oral biomarkers for European badgers (Meles meles).</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (2), 378-384 (2002).</li>
<li>Massei, G., Jones, A., Platt, T., Cowan, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+Acid+as+a+Long-Term+Marker+for+Wild+Boar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic Acid as a Long-Term Marker for Wild Boar.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (3), 458-461 (2009).</li>
<li>Creekmore, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field+evaluation+of+baits+and+baiting+strategies+for+delivering+oral+vaccine+to+mongooses+in+Antigua%2C+West+Indies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Field evaluation of baits and baiting strategies for delivering oral vaccine to mongooses in Antigua, West Indies.</a> Journal of Wildlife Diseases. 30 (4), 497-505 (1994).</li>
<li>Creekmore, T. E., Rock, R. E., Hurley, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+baiting+system+for+delivery+of+an+oral+plague+vaccine+to+black-tailed+prairie+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">A baiting system for delivery of an oral plague vaccine to black-tailed prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 38 (1), 32-39 (2002).</li>
<li>Fernandez, J. R. R., Rocke, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Rhodamine+B+as+a+biomarker+for+oral+plague+vaccination+of+prairie+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Use of Rhodamine B as a biomarker for oral plague vaccination of prairie dogs.</a> Journal of Wildlife Diseases. 47 (3), 765-768 (2011).</li>
<li>Johnston, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+and+significance+of+tetracycline+stability+in+rabies+vaccine+baits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Evaluation and significance of tetracycline stability in rabies vaccine baits.</a> Journal of Wildlife Diseases. 41 (3), 549-558 (2005).</li>
<li>Algeo, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+rabies+vaccination+variation+in+tetracycline+biomarking+among+Ohio+Raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral rabies vaccination variation in tetracycline biomarking among Ohio Raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 49 (2), 332-337 (2013).</li>
<li>Crier, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 34 (4), 829-834 (1970).</li>
<li>Fisher, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+using+Rhodamine+B+as+a+marker+for+wildlife+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Society+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Review of using Rhodamine B as a marker for wildlife studies.</a> Wildlife Society Bulletin. 27 (2), 318-329 (1999).</li>
<li>Knowlton, F. K., Savarie, P. J., Wahlgren, C. E., Hayes, D. J. Physiological marks by coyotes ingesting baits containing iophenoxic acid, Mirex and Rhodamine B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnowlton%2C+FK+%22Vertebrate+Pest+Control+and+Management+Materials%22">Vertebrate Pest Control and Management Materials</a>. Shumake, S. A., Bullard, R. W. , American Society for Testing and Materials. Philadelphia. 5th Volume. STP 974 141-147 (1987).</li>
<li>Follmann, E. H., Savarie, P. J., Ritter, D. G., Baer, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+marking+of+arctic+foxes+with+iophenoxic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Plasma marking of arctic foxes with iophenoxic acid.</a> Journal of Wildlife Diseases. 23 (4), 709-712 (1987).</li>
<li>Saunders, G., Harris, S., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+quantitative+bait+marker+for+foxes%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a quantitative bait marker for foxes.</a> Wildlife Research. 20, 297-302 (1993).</li>
<li>Hadidian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceptance+of+simulated+oral+rabies+vaccine+baits+by+urban+raccoons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons.</a> Journal of Wildlife Diseases. 25 (1), 1-9 (1989).</li>
<li>Sweetapple, P. J., Nugent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+for+red+deer+%28Cervus+elaphus+scoticus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a serum marker for red deer (Cervus elaphus scoticus).</a> Wildlife Research. 25, 649-654 (1998).</li>
<li>Ogilvie, S. C., Eason, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+iophenoxic+acid+and+rhodamine+B+for+marking+feral+ferrets+%28Mustela+furo%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of iophenoxic acid and rhodamine B for marking feral ferrets (Mustela furo).</a> New Zealand Journal of Zoology. 25 (2), 105-108 (1998).</li>
<li>Eason, C. T., Batcheler, D., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+pharmacokinetics+of+iophenoxic+acid+in+cats+and+brushtail+possums%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative pharmacokinetics of iophenoxic acid in cats and brushtail possums.</a> Wildlife Research. 21, 377-380 (1994).</li>
<li>Fisher, P. M., Marks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+iophenoxic+acid+as+a+biomarker+for+swamp+wallabies+%28Wallabia+bicolor%29%5BTitle%5D)+AND+%22Wildlife+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of iophenoxic acid as a biomarker for swamp wallabies (Wallabia bicolor).</a> Wildlife Research. 24, 97-103 (1997).</li>
<li>Baer, G. M., Shaddock, J. H., Hayes, D. J., Savarie, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+serum+marker+in+carnivores%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a serum marker in carnivores.</a> Journal of Wildlife Management. 49 (1), 49-51 (1985).</li>
<li>Spurr, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iophenoxic+acid+as+a+systemic+blood+marker+for+assessment+of+bait+acceptance+by+stoats+%28Mustela+ermine%29+and+weasels+%28Mustela+nivalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">Iophenoxic acid as a systemic blood marker for assessment of bait acceptance by stoats (Mustela ermine) and weasels (Mustela nivalis).</a> New Zealand Journal of Zoology. 29 (2), 135-142 (2002).</li>
<li>Mudge, G. H., Strewler, G. J., Desbiens, N., Berndt, W. O., Wade, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excretion+and+distribution+of+iophenoxic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Excretion and distribution of iophenoxic acid.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 178 (1), 159-172 (1971).</li>
<li>Jones, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-performance+liquid+chromatographic+determination+of+iophenoxic+acid+in+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%3A+Biomedical+Sciences+and+Applications%22%5BJournal%5D)">High-performance liquid chromatographic determination of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 654 (2), 293-296 (1994).</li>
<li>Wiles, M. C., Campbell, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+chromatography-electrospray+ionization+mass+spectrometry+for+direct+identification+and+quantification+of+iophenoxic+acid+in+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry for direct identification and quantification of iophenoxic acid in serum.</a> Journal of Chromatography B. 832 (1), 144-157 (2006).</li>
<li>Ballesteros, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+by+LC%2FESI-MS+of+iophenoxic+acid+derivatives+and+evaluation+as+markers+of+oral+baits+to+deliver+pharmaceuticals+to+wildlife%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Analysis by LC/ESI-MS of iophenoxic acid derivatives and evaluation as markers of oral baits to deliver pharmaceuticals to wildlife.</a> Journal of Chromatography B. 878 (22), 1997-2002 (2010).</li>
<li>Purdey, D. C., Petcu, M., King, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+protocol+for+detecting+two+systemic+bait+markers+%28Rhodamine+B+and+iophenoxic+acid%29+in+small+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22New+Zealand+Journal+of+Zoology%22%5BJournal%5D)">A simplified protocol for detecting two systemic bait markers (Rhodamine B and iophenoxic acid) in small mammals.</a> New Zealand Journal of Zoology. 30 (3), 175-184 (2003).</li>
<li>Tobin, M. E., Koehler, A. E., Sugihara, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetracyclines+as+a+fluorescent+marker+in+bones+and+teeth+of+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Management%22%5BJournal%5D)">Tetracyclines as a fluorescent marker in bones and teeth of rodents.</a> Journal of Wildlife Management. 60 (1), 202-207 (1996).</li>
<li>Briscoe, J. A., Syring, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+emergency+airway+and+vascular+access+in+special+species%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Avian+and+Exotic+Pet+Medicine%22%5BJournal%5D)">Techniques for emergency airway and vascular access in special species.</a> Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 13 (3), 118-131 (2004).</li>
<li>Eason, C. T., Frampton, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasma+pharmacokinetics+of+iophenoxic+and+iopanoic+acids+in+goat%5BTitle%5D)+AND+%22Xenobiotica%22%5BJournal%5D)">The plasma pharmacokinetics of iophenoxic and iopanoic acids in goat.</a> Xenobiotica. 2 (2), 185-189 (1992).</li>
<li>Hilton, H. E., Dunn, A. M. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHilton%2C+HE+%22Mongooses%3A+their+natural+history%22">Mongooses: their natural history</a>. , Oliver and Boyd. Edinburgh and London. (1967).</li>
<li>Stevens, C. E., Hume, I. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStevens%2C+CE+%22Comparative+physiology+of+the+vertebrate+digestive+system.+Second+edition%22">Comparative physiology of the vertebrate digestive system. Second edition</a>. , Cambridge University Press. Cambridge. (1995).</li>
<li>National Rabies Management Program (NRMP). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Oral+rabies+vaccination+draft+operations+manual%22">Oral rabies vaccination draft operations manual</a>. , USDA APHIS Wildlife Services. (2009).</li>
</ol>

Auteurs AV en zo zijn fulltime medewerkers van een oraal rabiës vaccin Bait fabrikant.

De LC-MS/MS-methode die voor de studies werd ontwikkeld, gebruikte de selectiviteit van meervoudige reactie monitoring om me-IPA en et-IPA in het Mongoose serum nauwkeurig te kwantificeren. De selectiviteit van MS/MS-detectie was ook toegestaan voor een eenvoudig clean-up-protocol dat uitsluitend gebaseerd was op acetonitril om eiwitten uit serum te precipiteren voorafgaand aan de analyse.
Iopfenoxische zuren zijn oplosbaar in ACN, maar zijn vrijwel onoplosbaar in water. Om water uit de ACN-ex...

Rabies virus (RABV) is een negatief gevoel enkel strandde Lyssavirus, en circuleert tussen diverse wild reservoir soorten binnen de bestellingen Carnivora en Chiroptera. Meerdere soorten mangoesten zijn reservoirs van RABV, en de kleine Indische mangoest (Herpestes auropunctatus) is het enige stuwmeer in Puerto Rico en andere Caribische eilanden in het westelijk halfrond1,2,3 . De controle van RABV circulatie in wild reservoirs wordt meestal bewerkstelligd door een strategie van orale rabiësvaccinatie (ORV). In de Verenigde Staten (VS) wordt deze beheeractiviteit gecoördineerd door het USDA/APHIS-en Wildlife Services National rabies Management Program (NRMP)4. Momenteel bestaat er geen Wildlife ORV programma in Puerto Rico. Onderzoek naar rabiës vaccins en verschillende Bait types voor mangoest is uitgevoerd met veelbelovende resultaten die suggereren dat een orv-programma voor mangoest mogelijk is5,6,7,8.
Het monitoren van de impact van ORV berust op het inschatten van de opname van aas door DOELDIERSOORTEN, wat meestal gepaard gaat met het evalueren van een verandering in RV antilichamen seroprevalentie. Echter, deze strategie kan uitdagend zijn in gebieden met een actieve Wildlife orv Programma's of in gebieden waar RV is enzoötische boviene en achtergrondniveaus van rabv neutraliserende antilichamen (rvna) aanwezig zijn in het reservoir soorten. In dergelijke situaties kan een biomarker die is opgenomen in het aas of de externe Bait matrix nuttig zijn.
Verschillende biologische markers zijn gebruikt voor het monitoren van de opname van aas bij tal van soorten, waaronder wasberen (Procyon lotor)9,10, stoats (Mustela Hermelijn)11,12, Europese Badgers ( Meles meles) 13, wilde zwijnen (Sus scrofa)14, kleine Indische mangoest15 en prairie honden (cynomysludovicianus)16,17, onder anderen. In de VS bevatten operationele orv-lokaas vaak een 1% tetracycline biomarker in de Bait matrix om aas-opname18,19te bewaken. Nadelen van het gebruik van tetracycline omvatten echter een toenemende bezorgdheid over de verspreiding van antibiotica in het milieu en dat de detectie van tetracycline typisch invasief is, waarbij tandextractie of vernietiging van het dier nodig is om bot te verkrijgen voorbeelden20. Rhodamine B is geëvalueerd als een marker in een verscheidenheid van weefsels en kan worden gedetecteerd met behulp van ultraviolet (UV) licht en fluorescentie in haar en snorharen10,21.
Iophenoxinezuur (IPA) is een wit kristallijn poeder dat is gebruikt om de consumptie van aas in coyotes te evalueren(Canis latrans)22, Arctic Fox (Vulpes lagopus)23, Red Fox (Vulpes vulpes)24, wasberen 9 , 25, everzwijn14, edelhert (Cervus elaphus scoticus)26, Europese Badgers12 en fretten (M. furo)27, onder verschillende andere zoogdiersoorten. Retentietijden van IPA varieert per soort van minder dan twee weken in sommige buideldieren28,29, tot ten minste 26 weken in hoefdieren26 en meer dan 52 weken in huis honden (Canis lupus familiaris)30. Retentietijden kunnen ook dosis-afhankelijke31zijn. Iophenoxinezuur bindt sterk aan serumalbumine en werd historisch ontdekt door het meten van bloed jodium niveaus32. Deze indirecte aanpak werd vervangen door krachtige vloeistofchromatografie (HPLC)-methoden om de iophenoxinezuur concentraties direct te meten met UV-detectie33, en uiteindelijk met vloeibare chromatografie en massaspectrometrie (lcm's) 34,35. Voor deze studie werd een zeer gevoelige en selectieve vloeistofchromatografie met tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS)-methode ontwikkeld die meerdere reactie monitoring (MRM) gebruikt om twee analogen van iopfenoxinezuur te kwantificeren. Ons doel was om deze LC-MS/MS-methode te gebruiken om het markerings vermogen van 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-triiodobenzyl) propanoïne zuur (methyl-IPA of me-IPA) en 2-(3-hydroxy-2, 4, 6-triiodobenzyl) butaanzuur (ethyl-IPA of et-IPA) en bij levering in een ORV aas naar Captive mangoest.
Mangoest waren levend gevangen in kooi vallen met in de handel verkrijgbare gerookte worstjes en visolie. Mangoest werden ondergebracht in individuele 60 cm x 60 cm x 40 cm roestvrijstalen kooien en gevoed met een dagelijks rantsoen van ~ 50 g commercieel droog kattenvoer, tweemaal per week aangevuld met een in de handel verkrijgbare kippen dij. Water was beschikbaar ad libitum. We leverden twee derivaten van IPA, ethyl-IPA en methyl-IPA, aan gevangen mangoest in placebo ORV Baits. Alle aas bestond uit een 28 mm x 20 mm x 9 mm folie blisterverpakking met een uitwendige coating (hierna "Bait matrix") met poedervormige kip ei en gelatine (tabel van materialen). Baits bevatte 0,7 mL water of IPA-derivaat en woog ongeveer 3 g, waarvan ~ 2 g de externe Bait matrix was.
We boden 16 Captive mangoest et-IPA in drie concentraties aan: 0,14% (2,8 mg et-IPA in ~ 2 g Bait matrix; 3 mannetjes [m], 3 vrouwtjes [f]), 0,4% (2,8 mg et-IPA in 0,7 mL blisterverpakking volume; 3m, 3F), en 1,0% (7,0 mg ethyl-IPA in 0,7 mL blisterverpakking volume; 2m , 2F). De totale dosis van 2,8 mg komt overeen met een doserings percentage van 5 mg/kg27,36 en is gebaseerd op een gemiddeld mongans gewicht van 560 g in Puerto Rico. We selecteerden 1% als de hoogste concentratie als onderzoek suggereert dat de smaak afaversie van sommige biomarkers kan voorkomen bij concentraties > 1% bij sommige soorten37. We boden de dosis van 1% alleen aan in de blisterverpakking, omdat flocculatie verhinderde dat de opgeloste stof in het oplosmiddel voldoende werd opgenomen om gelijkmatig in de Bait matrix te worden verwerkt. Eén controlegroep (2m, 1f) kreeg aas gevuld met steriel water en geen IPA. We boden loten aan mangoest in de ochtend (~ 8 a.m.) tijdens of voorafgaand aan het voeden van hun dagelijkse onderhoud rantsoen. Aas resten werden verwijderd na ongeveer 24 uur. We verzamelde bloedmonsters voorafgaand aan de behandeling, een dag na de behandeling en vervolgens wekelijks tot 8 weken na de behandeling. We verdoofd mangoest door inademing van Isofluraan gas en verzameld tot 1,0 ml volbloed door venipunctie van de craniale Vena Cava zoals beschreven voor fretten38. We hebben volbloed monsters gecentrifugeerd, sera overgebracht naar cryoflacons en ze opgeslagen bij-80 °C tot de analyse. Niet alle dieren werden bemonsterd gedurende alle perioden om de effecten van herhaalde bloed trekkingen op de gezondheid van de dieren te minimaliseren. Controledieren werden bemonsterd op dag 0, daarna wekelijks gedurende maximaal 8 weken na de behandeling.
We leverden me-IPA in drie concentraties: 0,035% (0,7 mg), 0,07% (1,4 mg) en 0,14% (2,8 mg), allemaal opgenomen in de Bait matrix, met 2 mannetjes en 2 vrouwtjes per behandelgroep. Twee mannetjes en twee vrouwtjes kregen aas gevuld met steriel water en geen IPA. Aas bieden tijden en Mongoose anesthesie worden hierboven beschreven. We verzamelde bloedmonsters voorafgaand aan de behandeling op dag 1, en vervolgens wekelijks tot 4 weken na de behandeling.
We testten de serumconcentratie gegevens voor normaliteit en geschatte gemiddelden voor serum IPA-concentraties van verschillende behandelingsgroepen. We gebruikten een lineair gemengd model om de gemiddelde serum-et-IPA-concentraties te vergelijken die over individuen werden samengevoegd. Bait type (matrix/blisterverpakking) was een vast effect naast de experimentele dag, terwijl dierlijke ID een willekeurig effect was. Alle procedures werden uitgevoerd met behulp van gemeenschappelijke statistische software (tabel met materialen) en significantie werd geëvalueerd bij α = 0,05.

<table><tbody><tr><td>Acetonitrile, Optima grade</td><td>Fisher</td><td>A996</td><td></td></tr><tr><td>Analytical balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS204</td><td></td></tr><tr><td>C18 column, 2.1 x 50 mm, 2.5-&micro;m deeltjesgrootte</td><td>Waters Corp.</td><td>186003085</td><td></td></tr><tr><td>ESI-bron</td><td>Agilent&nbsp;</td><td>G1958-65138</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl-iofenoxic acid, 97 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N/A</td><td>Lot MKBP5399V</td></tr><tr><td>Formic acid, LC/MS grade</td><td>Fisher</td><td>A117</td><td></td></tr><tr><td>LCMS software</td><td>Agilent</td><td>MassHunter Data Acquisition and Quantitative Analysis</td><td></td></tr><tr><td>Methyl-iofenoxic acid, 97 % (w/w)</td><td>PR EuroChem Ltd.</td><td>N/A</td><td>Lot PR0709514717</td></tr><tr><td>Microanalytische weegschaal</td><td>Mettler Toledo</td><td>XP6U</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5415C</td><td></td></tr><tr><td>MS/MS</td><td>Agilent</td><td>G6470A</td><td></td></tr><tr><td>N-Evap</td><td>Organomation</td><td>115</td><td></td></tr><tr><td>Oral Rabies Vaccine Baits</td><td>IDT Biologika, Dessau Rossleau, Germany</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Propyl-iofenoxic acid, 99 % (w/w)</td><td>PR EuroChem Ltd.</td><td>N/A</td><td>Lot PR100612108RR</td></tr><tr><td>Repeat pipettor</td><td>Eppendorf</td><td>M4</td><td></td></tr><tr><td>Schroefdopklozen voor autosampler, met PTFE-voering</td><td>Agilent</td><td>5190-7024</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride, Certified ACS grade</td><td>Fisher</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>Statistisch Softwarepakket</td><td>SAS Institute, Cary, North Carolina, USA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Trifluorazijnzuur, 99 %</td><td>Alfa Aesar</td><td>L06374</td><td></td></tr><tr><td>UPLC</td><td>Agilent</td><td>1290 Series</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Mixer</td><td>Glas-Col</td><td>099A PV6</td><td></td></tr><tr><td>0.2-mL pipettortips</td><td>Eppendorf</td><td>30089.413</td><td></td></tr><tr><td>0.5-mL pipettortips</td><td>Eppendorf</td><td>30089.421</td><td></td></tr><tr><td>1.5-mL microcentrifugebuisjes</td><td>Fisher</td><td>14-666-325</td><td></td></tr><tr><td>Pipettiptips met 1250-&micro;L capaciteit</td><td>GeneMate</td><td>P-1233-1250</td><td></td></tr><tr><td>1-mL pipettortips</td><td>Eppendorf</td><td>30089.43</td><td></td></tr><tr><td>2-mL amberkleurige schroefdopklozen voor autosampler</td><td>Agilent</td><td>5182-0716</td><td></td></tr><tr><td>5-mL pipettortips</td><td>Eppendorf</td><td>30089.456</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugebuisjeshouder met 80 posities</td><td>Fisher</td><td>05-541-2</td><td></td></tr><tr><td>8-mL amberkleurige flesjes met PTFE-afgesloten doppen</td><td>Wheaton</td><td>224754</td><td></td></tr><tr><td>70 % (v/v) isopropanol</td><td>Fisher</td><td>A459</td><td></td></tr><tr><td>100-1000 &micro;L luchtverdringende pipet</td><td>Eppendorf</td><td>ES-100</td><td></td></tr></tbody></table>

analyse van iopfenoxinezuur analogen in kleine indische mongoose (herpestes auropunctatus) sera voor gebruik als een orale rabiësvaccinatie biologische marker

Analysis of Iophenoxic Acid Analogues in Small Indian Mongoose (Herpestes Auropunctatus) Sera for Use as an Oral Rabies Vaccination Biological Marker

De kleine Indische mangoest (Herpestes auropunctatus) is een reservoir van rabiësvirus (rabv) in Puerto Rico en omvat meer dan 70% van dieren rabiës gevallen gerapporteerd per jaar. De controle van RABV circulatie in wild reservoirs wordt meestal bewerkstelligd door een strategie van orale rabiësvaccinatie (ORV). Momenteel bestaat er geen Wildlife ORV programma in Puerto Rico. Onderzoek naar orale rabiës vaccins en verschillende Bait types voor mangoest is uitgevoerd met veelbelovende resultaten. Het monitoren van het succes van ORV berust op het inschatten van de opname van aas door DOELDIERSOORTEN, wat meestal gepaard gaat met het evalueren van een verandering in RABV neutraliserende antilichamen (RVNA) na vaccinatie. Deze strategie kan moeilijk te interpreteren zijn in gebieden met een actief Wildlife orv-programma of in gebieden waar rabv enzoötische boviene is en achtergrondniveaus van rvna aanwezig zijn in reservoir soorten. In dergelijke situaties kan een biomarker die met het vaccin of de Bait matrix is verwerkt, nuttig zijn. We boden 16 gevangen mangoest placebo orv lokaas aan die ethyl-iopfenoxinezuur (et-IPA) bevatten in concentraties van 0,4% en 1% in het aas en 0,14% in de externe Bait matrix. We boden ook 12 gevangen mangoest orv lokaas aan die methyl-iopfenoxinezuur (me-IPA) bevatten in concentraties van 0,035%, 0,07% en 0,14% in de externe Bait matrix. We hebben een serummonster verzameld voorafgaand aan het aas en vervolgens wekelijks voor maximaal acht weken na het aanbieden. We hebben Iopfenoxische zuren uit sera geëxtraheerd in acetonitril en gekwantificeerd met behulp van vloeibare chromatografie/massaspectrometrie. We analyseerden sera voor et-IPA of me-IPA door vloeistofchromatografie-massaspectrometrie. We vonden adequate Markeer baarheid voor ten minste acht en vier weken voor et-en me-IPA, respectievelijk. Beide IPA-derivaten kunnen geschikt zijn voor veld evaluatie van de opname van ORV Bait in mangoest. Vanwege de levensduur van de marker in Mongoose sera, moet er voor gezorgd worden dat de resultaten niet worden verhaald door hetzelfde IPA-derivaat te gebruiken tijdens opeenvolgende evaluaties.

Representatieve ionen chromatogrammen uit een me-IPA-analyse worden weergegeven in Figuur 1. Het Control Mongoose serum (Figuur 1a) illustreert de retentietijd van et-IPA (surrogaat analyt) en de afwezigheid van mij-IPA op de aangegeven retentietijd. De kwaliteitscontrole sample (Figuur 1b) illustreert de baseline scheiding van me-IPA van et-IPA, evenals de kwantor en kwalificatie overgangen voor mij...

We boden gevangen mangoest placebo orale rabiës vaccin lokaas met ethyl of methyl iophenoxinezuur als biomarker en geverifieerde Bait opname met behulp van een nieuwe vloeistofchromatografie met tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS) methode.

Analyse van Iopfenoxinezuur analogen in kleine Indische Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera voor gebruik als een orale rabiësvaccinatie biologische marker

The small Indian mongoose (Herpestes auropunctatus) is a reservoir of rabies virus (RABV) in Puerto Rico and comprises over 70% of animal rabies cases ...

We schetsten een procedure om iophenoxïnezuur in mongoose serum op te sporen en te kwantificeren. De resultaten suggereren dat iophenoxïnezuur kan worden gebruikt als een biologische marker om de bèta-opname bij de soort te controleren. Het belangrijkste voordeel van deze methode is dat het mogelijk maakt voor de kwantificering van iophenoxïnezuur analogen op delen per miljard niveaus, met behulp van een eenvoudig uit te voeren eiwit neerslag techniek.Voor mobiele fase A, combineer een milliliter mierenzuur met een liter ultra zuiver water. Voor mobiele fase B, combineer een milliliter mierenzuur met een liter acetonitril. Voor het verdunningsmiddel, combineer een milliliter trifluoroacetisch zuur met 200 milliliter acetonitril.Vervolgens weegt u ongeveer 10 milligram methyl-IPA op microbalans en registreert u de massa tot plus of min 0001 milligram. Breng de methyyl-IPA kwantitatief over naar een volumetrische kolf van 10 milliliter klasse A, met behulp van vier tot vijf milliliter acetonitril. Sonicate voor een minuut om alle vaste stoffen op te lossen en vervolgens te brengen tot het volume met acetonitril.Breng ongeveer acht milliliter van elke voorraad over op acht milliliter

analysis-iophenoxic-acid-analogues-small-indian-mongoose-herpestes

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

This video demonstrates immunohistochemistry staining for rabies virus antigen detection in infected mouse brain tissue. The process includes deparaffinization and alcohol treatment, followed by proteolytic treatment to enhance antigen accessibility. Immunohistochemistry staining reveals red precipitates, confirming the presence of rabies antigens in the tissue section.

An Immunohistochemistry Staining for the Detection of Rabies Virus Antigens

De directe Rapid immunohistochemische test (DRIT) biedt een Wereldorganisatie voor diergezondheid en Wereldgezondheidsorganisatie (OIE/WHO) erkend alternatief voor de direct fluorescent antilichaam (DFA) test voor de diagnose van rabiës. Deze test maakt het mogelijk voor veld-gebaseerde toepassingen die kunnen worden uitgevoerd in ongeveer 1 h na hersen vertoningen met behulp van Lichtmicroscopie.

Verbeterde bewaking van rabiës met behulp van een directe snelle immunohistochemische test

Een pan-Lyssavirus geneste omgekeerde transcriptie polymerase chain reactie is ontwikkeld om specifiek te detecteren alle bekende lyssaviruses. Validatie met behulp van rabiës hersenen monsters van verschillende diersoorten bleek dat deze methode een gevoeligheid en specificiteit gelijkwaardig is aan de gouden standaard fluorescerende antilichaam test en kan worden gebruikt voor routine hondsdolheid diagnose heeft.

Evaluatie van een universele geneste omgekeerde transcriptie polymerase chain reactie voor de opsporing van Lyssaviruses

Het doel van dit protocol is om in kleine en grote dieren veilige obductie-technieken aan te tonen voor het verkrijgen van bevredigende weefselmonsters voor rabiës testen.

Rabiës necropsy technieken in grote en kleine dieren

Hier beschrijven we een indirecte ELISA sandwich immunocapture om de immunogene glycoproproteïnegehalte in rabiësvaccins te bepalen. Deze test maakt gebruik van een neutraliserende Monoclonal Antibody (mAb-D1) herkennen glycoproproproteïne trimers. Het is een alternatief voor de in vivo NIH-test om de consistentie van de potentie van het vaccin tijdens de productie te volgen.

In Vitro ELISA-test om de potentie van rabiësvaccin te evalueren

We presenteren een compleet protocol voor postmortem diagnose van dierlijke hondsdolheid onder veldomstandigheden met behulp van een snelle immunochromatografische diagnostische test (RIDT), van hersenbiopsie bemonstering tot uiteindelijke interpretatie. We beschrijven ook verdere toepassingen met behulp van het apparaat voor moleculaire analyse en virale genotypering.

Field Postmortem Rabies Rapid Immunochromagrafische Diagnostische Test voor Resource-Limited Settings met verdere moleculaire toepassingen

Dit protocol presenteert een qRT-PCR-gebaseerde benadering voor het bepalen van het rabiësvirus nucleoproteïne (N) genkopienummer binnen verschillende anatomische structuren van runderhersenen met behulp van in vitro transcriptie.

Kwantificering van rabiësvirus in verschillende runderhersenstructuren

Deze methode beschrijft de inkapseling van het rabiësantigeen in biologisch afbreekbare polymere microdeeltjes met structurele en materiaaleigenschappen die pulsatiele afgifte na een vooraf bepaalde vertraging mogelijk maken. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) beoordeling van het antigeen dat uit de deeltjeskern wordt gehaald, bevestigt de aanwezigheid van intact trimerisch rabiësvirus glycoproteïne door deeltjesfabricage.

Fabricage van pulsatiele polymere microdeeltjes die rabiësantigeen inkapselen

Hier presenteren we een snelle en kosteneffectieve workflow voor het karakteriseren van genomen van het rabiësvirus (RABV) met behulp van nanoporietechnologie. De workflow is bedoeld om genomics-geïnformeerde surveillance op lokaal niveau te ondersteunen, door informatie te verstrekken over circulerende RABV-lijnen en hun plaatsing binnen regionale fylogenieën om rabiësbestrijdingsmaatregelen te begeleiden.

Sequencing van het hele genoom voor snelle karakterisering van het rabiësvirus met behulp van nanoporietechnologie

Het doel van dit manuscript is om het gebruik van de rabiës indirecte fluorescerende antilichaamtest voor de detectie van rabiës-specifieke IgG- en IgM-antilichamen te onderzoeken.

Detectie van rabiës IgG- en IgM-antilichamen met behulp van de Rabiës Indirect Fluorescerende Antilichaamtest

Dit protocol demonstreert de pan-lyssavirus LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactie (RT-PCR)-assay van weefselverzameling tot resultaatinterpretatie, inclusief updates van primersequenties en formuleringen om de testprestaties voor sommige niet-rabiës, lyssavirussen en lagomorfen te verbeteren. We demonstreren ook de testopstelling voor een LN34 multiplexed (LN34M) formaat met één put.

Postmortale diagnose van hondsdolheid bij dieren door de bijgewerkte, gemultiplexte LN34 real-time reverse transcriptie-polymerasekettingreactietest

Leer een LC-MS/MS-methode om iophenoxinezuur in Herpestes auropunctatus-serum te detecteren als biologische marker voor aasopname bij orale rabiësvaccinatie.

Analyse van Iopfenoxinezuur analogen in kleine Indische Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera voor gebruik als een orale rabiësvaccinatie biologische marker (Video) | JoVE Journal

Analyse van Iopfenoxinezuur analogen in kleine Indische Mongoose (Herpestes auropunctatus) sera voor gebruik als een orale rabiësvaccinatie biologische marker

Meer video's verkennen