Name: Onderzoeken van veranderingen in caecum microbiota na traumatisch hersenletsel bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 29 s
Description: Leer hoe je traumatisch hersenletsel induceert bij muizen en vervolgens de caecum microbiota analyseert met 16S rDNA sequencing. Deze methode onthult de interactie tussen hersenletsel en darmmicrobioom.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs hebben niets te onthullen.

Alle uitgevoerde procedures werden goedgekeurd door de experimentele dierenethiek Commissie van de Zhejiang University. Alle instrumenten en materialen die worden gebruikt in chirurgie zijn steriel. De TBI proceudre duurt ongeveer 20 minuten.
1. verzorging van dieren
<ol><li>Gebruik 5 tot 6 weken oude mannelijke C57BL/6J muizen (20-25 g gewicht) in dit experiment.</li>
	<li>Handhaaf muizen op een licht/donkere cyclus van 12 uur/12 uur en zorg ervoor dat ze voedsel en water ad libitum krijgen. Verstrek dezelfde hoeveelheden voedsel en water aan zowel de Sham-als de TBI-groep tijdens de studie.</li>
	<li>Doe alle inspanningen om het dier pijn en ongemak te minimaliseren.</li>
</ol>2. inductie van traumatisch hersenletsel
<ol><li>Injecteer ketamine (80-100 mg/kg)/Xylazine (10 mg/kg) IP voor anesthesie. Test de diepte van de anesthesie met behulp van een oogreflex of pijn reflex. Gebruik kunstmatige tranen of smeermiddel oogzalf om de ogen te houden van het drogen.</li>
	<li>Na anesthesie, zet de muis in de liggende positie. Gebruik een temperatuurgestuurde verwarmingspad om de temperatuur bij 37 °C te houden tijdens de operatie en gedurende 30 minuten na TBI.</li>
	<li>Scheer het haar van het incisie gebied.</li>
	<li>Desinfecteer de hoofdhuid met 70% ethanol met behulp van drie alternerende Scrubs en geef vervolgens de hoofdhuid op in een Sagittaal vlak.</li>
	<li>Gebruik de tang om de incisie aan beide zijden in te trekken en het periosteum iets te scheiden.</li>
	<li>Gebruik een marker om een cirkel (3 mm diameter) te tekenen op het rechter pariëtale gebied van de schedel, op 2 mm afstand van de middenlijn.</li>
	<li>Boor de schedel met een elektrische boor. Zorg ervoor dat deze stap zorgvuldig wordt uitgevoerd om de Dura te beschermen tegen beschadiging.</li>
	<li>Verwijder de botflap en stel een klein botvenster (3 mm in diameter) bloot.</li>
	<li>Plaats een kunststof letsel canule (inwendige diameter = 2,5 mm, lengte = 8 mm) over de craniotomie en cement de canule aan de schedel met behulp van een tandheelkundige acryl.</li>
	<li>Vul de canule met steriele 0,9% NaCl (normale zoutoplossing) met behulp van een spuit (5 mL) om er zeker van te zijn dat er geen bubbels in de canule zitten.</li>
	<li>Schakel de oscilloscoop en de versterker in en zorg ervoor dat de Hogedruk buis van het laterale vloeistof percussie letsel (LFPI)-apparaat vrij is van luchtbellen. Test het apparaat door ongeveer 10 pulsen te leveren totdat het een stabiel signaal geeft. Pas de hoek van de startpositie van de slinger aan om een puls-intensiteit van ongeveer 2,0 ATM te bereiken.</li>
	<li>Sluit de blessure canule aan op het LFPI-apparaat. Hersenletsel induceren door de trigger te trekken en de slinger los te laten. Vervolgens verkrijgt u een puls en zendt u deze door het volledige slangen systeem met gesloten vloeistoftoevoer naar de Dura.</li>
	<li>Bedien de muizen in de Sham-groep met dezelfde chirurgische ingreep. Voer de LFPI niet uit.</li>
</ol>3. behandeling na de operatie
<ol><li>Na het induceren van de hersenletsel, verwijder de plastic canule en hechting van de incisie. Tijdens chirurgie toedienen buprenorfine (2mg/kg) SQ of IP en daarna elke 6-12 h gedurende drie dagen.</li>
	<li>Leg de muis op een verwarmingskussen totdat het ambulant is. Stel de temperatuur van het verwarmingspaneel in op 37 °C om anestheticum reanimatie te versnellen.</li>
	<li>Zet de muis terug in de kooi en dien voedsel en water ad libitumtoe.</li>
</ol>4. laparotomie en monsterverzameling uit het caecum
<ol><li>Euthaniseer de muizen door CO2 gevolgd door cervicale dislocatie op de corresponderende tijdstippen. Opmerking: in dit experiment waren de gekozen tijdspunten 1 h, 6 h, 1 d, 3 d en 7 d post-traumatisch hersenletsel om de dynamische evolutie van gut microbiota te analyseren.</li>
	<li>Verwijder het haar van het oppervlak van de buik. Desinfecteer de buik met 70% ethanol.</li>
	<li>Plaats een steriel gordijn over de muis. Maak een incisie van de onderste buik middenlijn, net boven de voor huid in de mannelijke muizen.</li>
	<li>Nadat de darmen zijn blootgesteld, lokaliseren van de blindedarm en zachtjes gescheiden van andere intestinale tracten. Vermijd het grijpen van de blindedarm met getande of scherpe Tang. Gebruik atraumatische Tang, zoals Adson Tang met serraties.</li>
	<li>Snijd het caecum met een scherpe schaar.</li>
	<li>Extraheer de caecum-inhoud handmatig op steriel verband en bewaar de inhoud in 1,5 mL micro centrifugebuizen.</li>
	<li>Bewaar de caecum inhoud bij-80 °C tot de microbiome analyse.</li>
</ol>5. DNA-extractie en 16S-rDNA-sequencing en data-analyse
<ol><li>
Isolatie van DNA uit ontlasting Opmerking: voor dit experiment is een in de handel verkrijgbare DNA-isolatiekit (tabel met materialen) gebruikt.<ol>
<li>Gebruik een scalpel om 300 mg uitwerpselen in een 2 ml micro centrifugebuis te Schraap en plaats de buis op ijs.</li>
		<li>Voeg 1 mL van de remmen buffer toe aan elk monster. Vortex continu gedurende 1 min of totdat het uitwerpselen monster grondig wordt gehomogeniseerd.</li>
		<li>Centrifugeer het monster met de maximale snelheid gedurende 1 minuut om de feces deeltjes te pellet.</li>
		<li>Pipetteer 2 μL proteïnase K in een nieuwe micro centrifugebuis van 2 ml. Pipet teren 600 μL van de supernatant uit stap 5.1.3 in de micro centrifugebuis van 2 ml die proteïnase K bevat. Voeg vervolgens 600 μL buffer 1 en Vortex toe voor 15 sec.</li>
		<li>Incuberen het monster gedurende 10 min bij 70 °C.</li>
		<li>Voeg 600 μL 100% ethanol toe aan het lysaat (1:1 ratio) en meng door vortexing. Centrifugeer bij de maximumsnelheid kort om druppels van de binnenkant van het buis deksel te verwijderen.</li>
		<li>Breng 600 μL lysaat aan op de spin kolom. Centrifugeer bij de maximumsnelheid gedurende 1 minuut. Gooi de doorstroom weg. Herhaal deze stap nog een keer. Vervolgens de kolom overbrengen naar een nieuwe 2 mL collectie buis.</li>
		<li>Open de draai kolom en voeg 500 μL buffer 2 toe. Centrifugeer bij de maximumsnelheid gedurende 1 min. Verwijder de kolom en plaats deze in een nieuwe 2 mL opvang buis.</li>
		<li>Voeg 500 μL buffer 3 toe aan de kolom. Centrifugeer bij de maximumsnelheid gedurende 3 min. Gooi de doorstroom weg. Herhaal het Centrifugeer proces eenmaal om er zeker van te zijn dat de buffer 3 volledig is geellueerd.</li>
		<li>Plaats de spin kolom in een nieuw buisje van 2 mL en Pipetteer 200 μL buffer 4 rechtstreeks op het membraan. Inbroed gedurende 1 minuut bij kamertemperatuur (RT) en centrifugeer vervolgens op de maximumsnelheid gedurende 1 minuut om het DNA te Elderen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
16S-rDNA-sequencing en data-analyse
	<ol>
<li>Gebruik 20-30 ng van DNA om amplicons te genereren.</li>
		<li>Gebruik in de handel verkrijgbare primers ontworpen voor de relatief geconcongeerde regio's grenzend aan de V3 en v4 hypervariable regio's van bacteriën 16S rDNA. De voorwaartse primers met de sequentie "CCTACGGRRBGCASCAGKVRVGAAT" en omgekeerde primers met de sequentie "GGACTACNVGGGTWTCTAATCC" werden gebruikt in de huidige studie.</li>
		<li>Maak de PCR-reacties mengsel door toevoeging van 2,5 μL buffer 1,2 μL dNTPs, 1 μL van elke primer, 0,5 μL van de DNA-polymerase en 20 ng van het template-DNA in een buisje. Gebruik ddH2O om het reactiesysteem aan te passen tot 25 μL.</li>
		<li>Stel de PCR-reactieparameters als volgt in: Voer de pre-denaturatie bij 94 °C gedurende 3 minuten. Voer denaturatie uit bij 94 °C gedurende 5 s, anneal bij 57 °C voor 90 s, Verleng bij 72 °C gedurende 10 sec. en herhaal deze 24x.</li>
		<li>Voer PE250/300 gekoppelde-end-sequencing uit volgens de instructies van de fabrikant en gebruik het QIIME-gegevensanalyse pakket voor 16S rRNA-gegevensanalyse. Opmerking: in dit experiment, de DNA-sequencing en data-analyse werden voornamelijk gedaan door een professionele sequencing bedrijf.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Cheng, P., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCheng%2C+P+%22Trends+in+traumatic+brain+injury+mortality+in+China%2C+2006-2013%3A+A+population-based+longitudinal+study%22">Trends in traumatic brain injury mortality in China, 2006-2013: A population-based longitudinal study</a>. 14, e1002332(2017).</li>
<li>Maas, A. I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+integrated+approaches+to+improve+prevention%2C+clinical+care%2C+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: integrated approaches to improve prevention, clinical care, and research.</a> The Lancet Neurology. 16, 987-1048 (2017).</li>
<li>Gaddam, S. S., Buell, T., Robertson, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+manifestations+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Handbook+of+Clinical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Systemic manifestations of traumatic brain injury.</a> Handbook of Clinical Neurology. 127, 205-218 (2015).</li>
<li>Kabadi, S. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid-percussion-induced+traumatic+brain+injury+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Fluid-percussion-induced traumatic brain injury model in rats.</a> Nature Protocols. 5, 1552-1563 (2010).</li>
<li>Fung, T. C., Olson, C. A., Hsiao, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+microbiota%2C+immune+and+nervous+systems+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Interactions between the microbiota, immune and nervous systems in health and disease.</a> Nature Neuroscience. 20, 145-155 (2017).</li>
<li>Collins, S. M., Surette, M., Bercik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+the+intestinal+microbiota+and+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">The interplay between the intestinal microbiota and the brain.</a> Nature Reviews Microbiology. 10, 735-742 (2012).</li>
<li>Cryan, J. F., Dinan, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mind-altering+microorganisms%3A+the+impact+of+the+gut+microbiota+on+brain+and+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mind-altering microorganisms: the impact of the gut microbiota on brain and behaviour.</a> Nature Reviews Neuroscience. 13, 701-712 (2012).</li>
<li>Nicholson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+Traumatic+Brain+Injury+Alters+the+Gastrointestinal+Microbiome+in+a+Time-Dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Moderate Traumatic Brain Injury Alters the Gastrointestinal Microbiome in a Time-Dependent.</a> Shock. , (2018).</li>
<li>Houlden, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+injury+induces+specific+changes+in+the+caecal+microbiota+of+mice+via+altered+autonomic+activity+and+mucoprotein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%2C+Behavior%2C+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Brain injury induces specific changes in the caecal microbiota of mice via altered autonomic activity and mucoprotein production.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 57, 10-20 (2016).</li>
<li>Treangen, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+Brain+Injury+in+Mice+Induces+Acute+Bacterial+Dysbiosis+Within+the+Fecal+Microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Traumatic Brain Injury in Mice Induces Acute Bacterial Dysbiosis Within the Fecal Microbiome.</a> Frontiers in Immunology. 9, 2757(2018).</li>
<li>Alder, J., Fujioka, W., Lifshitz, J., Crockett, D. P., Thakker-Varia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion%3A+model+of+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion: model of traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2011).</li>
<li>Thompson, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral+fluid+percussion+brain+injury%3A+a+15-year+review+and+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Lateral fluid percussion brain injury: a 15-year review and evaluation.</a> Journal of Neurotrauma. 22, 42-75 (2005).</li>
<li>Pang, W., Vogensen, F. K., Nielsen, D. S., Hansen, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Faecal+and+caecal+microbiota+profiles+of+mice+do+not+cluster+in+the+same+way%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Faecal and caecal microbiota profiles of mice do not cluster in the same way.</a> Laboratory Animals. 46, 231-236 (2012).</li>
</ol>

De auteurs danken Baohong Wang oprecht voor haar technische begeleiding.

Hier gepresenteerd is een eenvoudig en efficiënt protocol om veranderingen in cecal microbiota na TBI bij muizen te bepalen. Inductie van hersenletsel en het verzamelen van caecum-inhoud monsters zijn kritische delen van het protocol.
Ondanks onderzoekers hebben bestudeerd de veranderingen van gut microbiota na TBI, de hersenen letsel gebruikt in deze studies waren CCI-8 en gewicht drop/impact-geïnduceerde modellen9. Echter, het CCI model replice...

Traumatisch hersenletsel (TBI) is een wereldwijd volksgezondheidsprobleem en de belangrijkste doodsoorzaak en handicap bij jongvolwassenen1,2. TBI veroorzaakt jaarlijks vele sterfgevallen, en overlevenden ervaren een verscheidenheid aan lichamelijke, psychiatrische, emotionele en cognitieve handicaps. Daarom is TBI een zware last voor de familie en de maatschappelijke middelen van de patiënt. TBI omvat zowel het primaire hersenletsel dat optreedt op het moment van trauma en eventuele secundaire hersenletsels die uren tot maanden na het eerste letsel ontwikkelen. Secundaire hersenletsel wordt gemedieerd door verschillende biochemische Cascades, die niet alleen schadelijk zijn voor de hersenen, maar ook aanzienlijke negatieve effecten hebben op verschillende orgaansystemen, waaronder het gastro-intestinale systeem3.
Op dit moment zijn er drie modellen om TBI te induceren in dier experimenten: vloeistof percussie letsel, controle corticale impact (CCI), en gewicht drop versnelling. Laterale vloeistof percussie letsel (LFPI) is het meest gebruikte model om diffuus hersenletsel (DAI)4vast te stellen. Het apparaat produceert hersenletsel door een craniectomie door een korte vloeistofdruk puls toe te passen op de intact Dura. Deze puls wordt gecreëerd door de staking van de slinger. LFPI is een reproduceerbare en bestuurbare modelleringsmethode voor TBI-onderzoek.
De microbiome wordt gedefinieerd als de collectieve genomen van alle micro-organismen die zich in het menselijk lichaam bevinden. Intestinale microben in het bijzonder spelen niet alleen een belangrijke rol in de intestinale homeostase en functie, maar ook het reguleren van vele aspecten van gastheer fysiologie en het functioneren van andere organen5. In de afgelopen jaren, er is steeds meer bewijs dat geeft aan dat gut microbiota reguleren van de ontwikkeling van de hersenen en functie via hersenen-gut assen6. Verstoring van de darm microbiota is gekoppeld aan verschillende hersenfunctie aandoeningen zoals de ziekte van Parkinson, stemmingsstoornissen, en autisme7. Onlangs, preklinische studies hebben ook gemeld dat acute hersenletsel veranderingen in gut microbiota kan induceren8,9.
Een studie van Treangen et al.10 vond significante dalingen in drie microbiële soorten en verhogingen in twee microbiële soorten na CCI-geïnduceerde TBI. Dit bewijs geeft aan dat de modulatie van gut microbiota een therapeutische methode in TBI Management kan zijn. Echter, de mechanismen onderliggende hersenen letsel-geïnduceerde gut microbiota veranderingen blijven onbekend. Om deze reden is een relatief eenvoudig en efficiënt model van het bestuderen van de veranderingen in gut microbiota na TBI vereist. Daarom presenteert de huidige studie een protocol om veranderingen in gut microbiota na TBI bij muizen te onderzoeken.

<table><tbody><tr><td>DNA isolation kit&nbsp;</td><td>QIAGEN</td><td>51604</td><td>Voor snelle zuivering van genomisch DNA uit ontlastingsmonsters</td></tr><tr><td>Gene analysis service</td><td>GENEWIZ</td><td></td><td>Gene analyse service</td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Shanghai SAFE Biotech Co.</td><td>TR-200</td><td>verwarmingskussen</td></tr><tr><td>Injector</td><td>The First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University</td><td></td><td>injector</td></tr><tr><td>LFPI device</td><td>Virginia Commonwealth University</td><td>FP302</td><td>LFPI-apparaat</td></tr><tr><td>Micro cranial drill</td><td>RWD Life Science</td><td>78061</td><td>Micro craniale boor</td></tr><tr><td>Povidone Iodine</td><td>The First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University</td><td></td><td>Povidone jodium</td></tr></tbody></table>

onderzoeken van veranderingen in caecum microbiota na traumatisch hersenletsel bij muizen

Investigating Alterations in Caecum Microbiota After Traumatic Brain Injury in Mice

Steeds meer bewijsmateriaal toont aan dat de microbiota-gut-Brain as een belangrijke rol speelt in de pathogenese van hersenziekten. Verschillende studies tonen ook aan dat traumatische hersenletsel veranderingen in de darm microbiota veroorzaken. Echter, mechanismen die aan de bidirectionele regulering van de hersenen-gut as blijven onbekend. Op dit moment, enkele modellen bestaan voor het bestuderen van de veranderingen in gut microbiota na traumatisch hersenletsel. Daarom, de gepresenteerde studie combineert protocollen voor het induceren van traumatisch hersenletsel met behulp van een laterale vloeistof percussie-apparaat en analyse van caecum monsters na letsel voor het onderzoeken van veranderingen in de darm-microbiome. Wijzigingen van de darm microbiota samenstelling na traumatisch hersenletsel worden bepaald met behulp van 16S-rDNA-sequencing. Dit protocol biedt een effectieve methode voor het bestuderen van de relaties tussen enterische micro-organismen en traumatisch hersenletsel.

De oprichting van TBI wordt weergegeven in Figuur 1. Na anesthesie en desinfectie, de hoofdhuid werd ingesneden sagittally (Figuur 1a). Een craniotomie (3 mm in diameter) werd in de schedel op de rechter pariëtale cortex getreesd met een elektrische boor, de Dura werd intact gehouden (Figuur 1b, C). Een plastic letsel canule werd geplaatst over het botvenster en gecementeerd aan de s...

Hier gepresenteerd is een protocol voor het opwekken van diffuse traumatisch hersenletsel met behulp van een laterale vloeistof percussie-apparaat gevolgd door de verzameling van het caecum inhoud voor gut microbiome analyse.

Onderzoeken van veranderingen in caecum microbiota na traumatisch hersenletsel bij muizen

Increasing evidence shows that the microbiota-gut-brain axis plays an important role in the pathogenesis of brain diseases. Several studies also ...

Gelijktijdigheid en de lijnen interacties tussen de hersenen en de darm microbiota blijft onbekend. Gebruik deze techniek, veranderingen in de darmmicrobiota na traumatisch hersenletsel bij muizen kunnen worden onderzocht. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het relatief eenvoudig en efficiënt is.Het aantonen van de procedure zal Wendong You zijn, een afgestudeerde student van mijn laboratorium. Voor traumatische hersenletsel inductie, bevestigen een gebrek aan reactie op teen knijpen in een verdoofde muis, en van toepassing zalf op de ogen van het dier. Ontsmet de blootgestelde hoofdhuidhuid na het scheren met 70%-ethanol voordat de hoofdhuid in een sagittale vlak wordt ingesneden.Met behulp van tangen trekt u de incisie aan beide zijden in en scheidt u het periosteum iets. Gebruik een marker om een cirkel met een diameter van drie millimeter te tekenen op het rechter pariëtale gebied van de schedel op twee millimeter afstand van de middellijn. Gebruik een elektrische boor om zorgvuldig de schedel binnen te dringen zonder de dura te beschadigen.Verwijder de botflap om een drie millimeter botvenster bloot te leggen en plaats een plastic letsel canule over de craniotomie. Na het cementeren van de canule aan de schedel met gebits acryl, gebruik een vijf-milliliter spuit om de canule te vullen met steriele 0,9% normale zoutoplossing, waarbij u ervoor zorgt dat bellen worden vermeden. Zet de oscilloscoop en versterker aan.Bevestig dat de hogedrukbuis van het zijdelingse vloeistofpercussieletsel apparaat vrij is van luchtbellen, en leveren ongeveer 10 testpulsen, totdat het apparaat een stabiel signaal geeft. Pas de hoek van de slinger startpositie aan om een pulsintensiteit van ongeveer twee standaard atmosfeer te bereiken en sluit de letselkanule aan op het laterale vloeistof percussie letsel apparaat. Haal de trekker over om de slinger los te laten, waardoor het hersenletsel wordt veroorzaakt.Verkrijg en breng vervolgens een puls naar de dura door het hele gesloten, met vloeistof gevulde buizensysteem. Na hersenletsel inductie, verwijder de canule en hecht de incisie. Plaats vervolgens de muis op een verwarmingskussen met controle totdat het ambulante is, voordat u het dier terug naar zijn huiskooi met ad libitum toegang tot voedsel en water.Op de aangegeven experimentele tijdstippen, bloot de darmen volgens standaard protocollen en gebruik atraumatische tangen om de caecum voorzichtig te scheiden van de andere darmkanaal. Wanneer het weefsel zich is gelokaliseerd, snijd u de caecum met een scherpe schaar en haal de caecuminhoud handmatig op een steriele dressing. Breng de inhoud vervolgens over naar een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter, voor min 80 graden Celsius opslag tot microbioomanalyse.16S recombinant DNA sequencing toont een verminderde diversiteit in caecum microbiota bij muizen drie dagen na traumatisch hersenletsel, met de meest voorkomende taxa binnen de caecum inhoud van de sham en traumatische hersenletsel groepen weergegeven in de figuur. Verder, niet-metrische, multidimensionale schaling onthult veranderingen in de samenstelling van de caecum microbiota na traumatisch hersenletsel. Vergeet niet om dura intact te houden bij het boren van de schedel, en om voorzichtig te zijn bij het lokaliseren en scheiden van de caecum van andere darmkanaals.Na deze procedure kunnen hematoxylin en eosine kleuring en analyse worden uitgevoerd om de histologische verandering en ontstekingsreactie in darmkanaals na traumatisch hersenletsel te onderzoeken.

investigating-alterations-caecum-microbiota-after-traumatic-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een veelzijdige benadering van het onderzoek naar functionele veranderingen in de hippocampus circuits wordt uitgelegd. Elektrofysiologische technieken worden beschreven, samen met de schade-protocol, gedrags-testen en regionale dissectie methode. De combinatie van deze technieken kunnen worden toegepast op soortgelijke wijze andere hersengebieden en wetenschappelijke vragen.

Onderzoeken op Wijzigingen van de hippocampus Circuit Functie Na mild traumatisch hersenletsel

The video demonstrates a method to generate a mouse model of traumatic brain injury (TBI) using a lateral fluid percussion device (LFPI). Upon anesthetizing the mouse, the brain is exposed by creating a window on the skull. A saline-filled cannula is attached to the window and is then connected to the LFPI. The pendulum of the device is released to create a pressure pulse that inflicts a traumatic brain injury.

Generating a Mouse Model of Traumatic Brain Injury Using a Lateral Fluid Percussion Device

Source: Macheda, T., et. al. Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the procedure to induce a closed-head injury in a mouse model using a stereotaxic frame. The controlled impact replicates mild traumatic brain injury, allowing researchers to study neurological effects and recovery by measuring post-injury reflexes and behavior.

Induction of Mild Traumatic Brain Injury in a Mouse Model

Source: Braeckman, K., et. al. Advanced Diffusion Imaging in The Hippocampus of Rats with Mild Traumatic Brain Injury. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates the use of diffusion-weighted imaging to assess microstructural changes in a rat hippocampus following mild traumatic brain injury (mTBI), highlighting axonal injury through precise MRI scanning and diffusion analysis.

Diffusion-Weighted Imaging of the Rat Hippocampus with Mild Traumatic Brain Injury

Acuut hersenletsel is een ernstige verwonding die geen adequate behandeling tot op heden. Multifoton microscopie maakt het bestuderen van lengterichting van het proces van acuut hersenletsel ontwikkeling en indringende therapeutische strategieën bij knaagdieren. Twee modellen van acuut hersentrauma bestudeerd met in vivo twee-foton beeldvorming van de hersenen worden gedemonstreerd in dit protocol.

Acute Brain Trauma in Muizen gevolgd door Longitudinale Twee-foton Imaging

Traumatische hersenverwondingen (THV) blijven een ernstig gezondheidsprobleem. Met behulp van het gecontroleerde corticale impactchirurgie-model kan onderzoek worden gedaan naar de effecten van THV en mogelijke behandelmethoden.

Gecontroleerde Corticale Impact Model voor traumatisch hersenletsel

Het algemene doel van deze procedure is het verkrijgen van kwantitatieve microstructurele informatie van de Hippocampus in een rat met milde traumatische hersenletsel. Dit wordt gedaan met behulp van een geavanceerde diffusie-gewogen magnetische resonantie imaging protocol en regio-of-interest gebaseerde analyse van parametrische diffusie kaarten.

Geavanceerde diffusie beeldvorming in de hippocampus van ratten met mild traumatisch hersenletsel

Hier presenteren we een protocol om het door antibiotica geïnduceerde pseudo-kiemvrije dextraansulfaat-natrium-geïnduceerde colitis-muismodel op te stellen om de rol van darmmicrobiota bij het reguleren van de positieve effecten van Bacillus cereus op colitis te onderzoeken.

Onderzoek naar de verlichtende effecten van toediening van Bacillus cereus op colitis door middel van darmmicrobiotamodulatie

Van de darm afgeleide microbiële metabolieten hebben veelzijdige effecten die leiden tot complex gedrag bij dieren. We streven ernaar om een stapsgewijze methode te bieden om de effecten van van de darm afgeleide microbiële metabolieten in de hersenen af te bakenen via intracerebroventriculaire toediening via een gidscanule.

Intracerebroventriculaire toediening van van de darm afgeleide microbiële metabolieten in vrij bewegende muizen

Het protocol beschrijft licht traumatisch hersenletsel in een muismodel. In het bijzonder wordt een stapsgewijs protocol om een milde middellijn gesloten hoofdletsel en de karakterisering van het diermodel te induceren volledig uitgelegd.

Elektromagnetisch gecontroleerd gesloten-hoofd model van mild traumatisch hersenletsel bij muizen

Dit protocol presenteert een gemodificeerd muismodel van repetitief mild traumatisch hersenletsel (rmTBI) geïnduceerd via een closed-head injury (CHI)-methode. De aanpak omvat een verdund schedelvenster en vloeibare percussie om de ontsteking die vaak wordt veroorzaakt door blootstelling aan hersenvliezen te verminderen, samen met verbeterde reproduceerbaarheid en nauwkeurigheid bij het modelleren van rmTBI bij knaagdieren.

Gemodificeerd muismodel van repetitief mild traumatisch hersenletsel met een verdund schedelvenster en vloeibare percussie

Leer hoe je traumatisch hersenletsel induceert bij muizen en vervolgens de caecum microbiota analyseert met 16S rDNA sequencing. Deze methode onthult de interactie tussen hersenletsel en darmmicrobioom.

Onderzoeken van veranderingen in caecum microbiota na traumatisch hersenletsel bij muizen

Meer video's verkennen