Name: Bewerkt Heterotopic achterpoten Osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet Allotransplantation onderzoek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Leer een chirurgisch rattenmodel voor vasculaire composietallotransplantatie om afstoting en vasculopathie te bestuderen. Deze methode versnelt operaties en vermindert ischemische tijd.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Bureau van de adjunct-minister van defensie voor gezondheidszaken via de conregressie gericht medisch onderzoekprogramma onder gunning nr. W81XWH-13-2-0057. Adviezen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteurs en zijn niet noodzakelijkerwijs onderschreven door het ministerie van defensie.

Alle chirurgische ingrepen werden uitgevoerd in overeenstemming met protocollen goedgekeurd door de Universiteit van Louisville de institutionele Dierenzorg en het gebruik Comite (DEC-goedgekeurd protocol 18198) en de nationale instituten of Health (NIH) gids voor de zorg en het gebruik van Proefdieren10. Vier maanden oud mannelijk bruin-Noorwegen (RT1. Eenn) en 4 maanden oude mannelijke Lewis (RT1. Al) ratten werden gebruikt als VCA donor en ontvangers, respectievelijk.
1. donor Allograft oogst
<ol><li>Kalmeren de donordier met behulp van verdampte Isofluraan toegepast door een kamer.</li>
	<li>Scheren de ent donor gebied (achterpoten), evenals de lies en de buik gebieden. Na dat, te behandelen met Ontharingscrème om de hoeveelheid fuzz achtergelaten door de Clippers te verminderen.</li>
	<li>Diep verdoven donordieren met behulp van intraperitoneale (IP) ketamine (60 mg/kg)/xylazine (15 mg/kg)/Acepromazine (2 mg/kg). Toediening van een initiële dosis van 0,2 mL/100 g lichaamsgewicht en extra doses van 0,2 mL per h. Voor het gemak, is het facultatief om deze stap vóór stap 2 uit te voeren.</li>
	<li>Continu toezicht houden op dieren, terwijl onder narcose voor de ademhaling, lichaamstemperatuur, en de diepte van de anesthesie, met behulp van de teen pinch intrekking reflex test.</li>
	<li>Beheer 30 U van heparine oplossing onderhuids (SC) in de Scruff gebied voorafgaand aan de operatie om stolling te voorkomen.</li>
	<li>Draag een masker, een hoofddeksel, een wegwerp isolatie jurk, en wegwerphandschoenen.</li>
	<li>Plaats de donordier liggende op een verwarmingskussen. Produceer een steriel chirurgisch gebied door voor te stellen, schrobbend, en draperend het chirurgische gebied met inbegrip van zowel buik als dorsale aspecten van het been. Don steriele handschoenen.</li>
	<li>Maak een 3 cm huid incisie in de lies holte met behulp van scalpel mes #15 en weerspiegelen de lies Fat pad lateraal gebruik van Iris schaar.</li>
	<li>Bloot de gemeenschappelijke femorale vaten en plaats een draad haak met een elastische band om de buikspieren te trekken.</li>
	<li>Met behulp van een ontleden Microscoop (40x), ontleden de pedicle proximaal van de opkomst van de gemeenschappelijke femorale vaartuigen onder de lies ligament en distally aan de samenvloeiing van popliteale schepen in het transplantaat.</li>
	<li>Met behulp van microclips en bipolaire juweliers ' Tang, binden en verdeel de grote arteriële en veneuze takken, zoals laterale circumflex femorale schepen, oppervlakkige caudale epigastrische schepen, de Vena slagader, en proximale caudale femorale schepen, te mobiliseren de belangrijkste femorale vaten. Toeschroeien een kleine takken met behulp van fijne bipolaire Tang.</li>
	<li>Maak een huid incisie van het centrum van de vorige huid gesneden langs de buikkant van de achterpoten, aan de enkel gebied, met behulp van Iris schaar.</li>
	<li>Snijd de gracilis spier, evenals de andere adductor spieren eronder, in een verticale manier bloot te leggen en binden de mediale proximale genicular schepen, diepe vertakking kleine vaartuigen, en de heupzenuw. Opmerking: Op dit punt, op een aparte chirurgische tafel, de andere chirurg moet intubate en verdoven (2,5%-3% Isofluraan) de ontvangende dier; Dit laat de chirurgen om de ontvangende chirurgische site voor te bereiden op tijd voor het enten plaatsing en het minimaliseren van de transplantatie ischemische tijd.</li>
	<li>Op de donordier, maken omtrek huid incisies op het niveau van de knie en enkel. Disarticuleren van de knie en enkel, verwijder vreemde spier-en weefsel, en maak een verticale huid incisie aan de dorsale kant van de achterpoten om de Graft vrij. Op dit punt, de Graft (samengesteld uit fibula en Tibia, bedekt met gerelateerde spieren en huid eiland gevoed door zijn perforators) is alleen verbonden door de pedicle.</li>
	<li>Plaats kleine klemmen zo proximaal mogelijk op de femorale slagader en ader, en snijd de pedicle zo proximaal mogelijk, in de buurt van de lies ligament.</li>
	<li>Om het transplantaat van het bloed te spoelen, injecteren heparinized Saline (30 U/mL) in de femorale slagader met behulp van een 27 G blozen botte bril. Opmerking: Verwijden de slagader voorafgaand aan de heparine flush zorgt voor een gemakkelijke toegang voor het inbrengen van de bril. Tijdens het spoelen, nauwlettend toezicht op de uitstroom van de femorale ader. Zodra heldere vloeistof verlaat de femorale ader, stop de flush.</li>
	<li>Wikkel de geïsoleerde graft in warme zout-doorweekt gaas en het vervoer onmiddellijk naar de tafel van de ontvangende dier. Op dit moment moet de ontvangende chirurgische site al worden voorbereid op vasculaire anastomosis.</li>
	<li>Na het enten oogst, onmiddellijk euthanaseren de donor rat via pneumothorax.</li>
</ol>2. ontvanger transplantatie chirurgie
<ol><li>Na de sedatie inductie met behulp van verdampte Isofluraan toegepast via een kamer, diep verdoven het ontvangende dier via een ventilator-gecontroleerde endotracheale buis en 2,5%-3% Isofluraan. Opmerking: In dit stadium, de donor rat is nog steeds verdoofd.</li>
	<li>Continu monitoren van de hartslag, ademhalingstarief, lichaamstemperatuur, en de diepte van de anesthesie van de ontvangende dier, met behulp van de teen pinch intrekking reflex test.</li>
	<li>Met het oog op uitdroging en hypoglykemie te voorkomen, injecteren 2 mL van de oplossing van zogende beltoon en 2,5% dextrose onderhuids aan het begin en nog eens 2 mL aan het einde van de operatie.</li>
	<li>Scheren de liesstreek, dan behandelen met ontharings room om de hoeveelheid fuzz achtergelaten door de Clippers te verminderen.</li>
	<li>Draag een masker, een hoofddeksel, een wegwerp isolatie jurk, en steriele handschoenen.</li>
	<li>Plaats het dier liggende op een verwarmingskussen. Toepassing oogheelkundige zalf om te voorkomen dat cornea schaafwonden tijdens de anesthesie. Produceer een steriel chirurgisch gebied door voor te stellen, schrobbend, en draperend het chirurgische gebied.</li>
	<li>Maak een 3 cm huid incisie in de lies holte met behulp van scalpel mes #15 en weerspiegelen de lies Fat pad lateraal gebruik van Iris schaar.</li>
	<li>Bloot de gemeenschappelijke femorale vaten en plaats een draad haak met een elastische band om de buikspieren te trekken.</li>
	<li>Binden en verdelen Murphy takken.</li>
	<li>Met behulp van 10-0 nylon onderbroken hechtingen, anastomose donor schepen aan de ontvangende schepen via veneuze end-to-side techniek en arteriële end-to-end techniek. Geleidelijk los van de klemmen van de slagader en vervolgens de ader. Monitor de anastomose sites voor bloeden en voeg extra hechtingen indien nodig.</li>
	<li>Visueel beoordelen van de vasculaire anastomosis om effectieve enten reperfusie te verzekeren.</li>
	<li>Inzet van de graft in de lies zak en oriënteer het ondersteboven, met de enkel gezamenlijke superieur en kniegewricht inferieur.</li>
	<li>Met behulp van plooiende hechtingen, zet de Graft aan aangrenzende spieren. Sluit de huid via onderbroken horizontale matras huid absorbeerbare 4-0 hechtingen.</li>
	<li>Verwijder het ontvangende dier uit de anesthesie en spenen het uit de ventilator. Plaats het dier op een verwarmingskussen voor thermische ondersteuning. Opmerking: De algemene verrichtingstijd is tussen 3 tot 4 h, afhankelijk van de ervaring en de kennis van de chirurg met de chirurgische procedure.</li>
	<li>Beheren Meloxicam (1 mg/kg) onderhuids voor pijn onderdrukking en monitor tot het dier volledig is hersteld en mobiel.</li>
</ol>3. VCA ontvanger monitoring
<ol><li>Huis de ontvanger ratten afzonderlijk en bewaken ze dagelijks voor klinische tekenen van pijn, uitdroging, gewichtsverlies, en verminderde activiteit in aanvulling op chirurgische storing (voor de eerste 48-72 h) of afwijzing. Te beheren Meloxicam onderhuids (1 mg/kg) dagelijks voor de eerste 3 dagen voor pijn onderdrukking.</li>
	<li>Kies op basis van het eindpunt van het onderzoek een immunosuppressieve medicijn dat moet worden toegediend.</li>
</ol>4. histologie
<ol><li>Onder ingeademde Isofluraan anesthesie (2,5%-3%), het verkrijgen van de seriële huid en de onderliggende spier Biopten van de donor Graft op de gewenste tijdpunten. De huid moet worden geschrobd en gedrapeerd voorafgaand aan het verkrijgen van een biopsie, en een steriele veld en techniek moet worden uitgevoerd.</li>
	<li>Sluit de wond met een tot twee steken, met behulp van absorberende 4-0 hechtingen. Breng het dier naar zijn kooi en laat het terug te vorderen van de anesthesie.</li>
	<li>Bevestig de biopsie weefsels in afzonderlijke buizen in 10% formaline.</li>
	<li>Op de Terminal tijdpunt en onder ingeademde Isofluraan anesthesie (2,5%-3%), neem een grotere huid biopsie die overspant de donor/ontvanger grens. Zorgvuldig lokaliseren van het schip riem paar op de site van anastomoses; de juiste site zal zichtbaar zijn als gevolg van de hechtingen. Neem de gewenste vaartuig monsters van de slagader en/of ader. Bevestig alle monsters afzonderlijk in 10% formaline. Na inzameling van weefselsteekproeven, en terwijl het dier nog onder Isofluraan anesthesie is, onmiddellijk euthanaseren het dier via pneumothorax.</li>
	<li>Met behulp van een tissue processor (of andere voorkeur inbedding techniek), paraffine-embed elke biopsie in zijn eigen blok. Voor de huid monsters, oriënteren het weefsel, zodat alle epidermale en dermale lagen kan worden gezien in een enkel segment. Voor vaartuig monsters, oriënteren de schepen, zodat dwarsdoorsneden kunnen worden verkregen.</li>
	<li>Met behulp van een microtome, snijd 6 µm-dikke secties en breng ze op dia's voor hematoxyline en eosine (H & E) kleuring.</li>
	<li>Vlek voor H & E met behulp van een standaardprotocol.</li>
	<li>Verkrijg representatieve beelden van alle gewenste weefselmonsters met behulp van helderveld microscopie technieken.</li>
</ol>

<ol><li>Gilbert Fernandez, J. J., Febres-Cordero, R. G., Simpson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Untold+Story+of+the+First+Hand+Transplant%3A+Dedicated+to+the+Memory+of+one+of+the+Great+Minds+of+the+Ecuadorian+Medical+Community+and+the+World%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">The Untold Story of the First Hand Transplant: Dedicated to the Memory of one of the Great Minds of the Ecuadorian Medical Community and the World.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. , (2018).</li>
<li>Dubernard, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+hand+allograft%3A+report+on+first+6+months%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Human hand allograft: report on first 6 months.</a> Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).</li>
<li>Jones, J. W., Gruber, S. A., Barker, J. H., Breidenbach, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+hand+transplantation.+One-year+follow-up.+Louisville+Hand+Transplant+Team%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Successful hand transplantation. One-year follow-up. Louisville Hand Transplant Team.</a> The New England Journal of Medicine. 343 (7), 468-473 (2000).</li>
<li>Devauchelle, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+human+face+allograft%3A+early+report%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">First human face allograft: early report.</a> Lancet. 368 (9531), 203-209 (2006).</li>
<li>Broyles, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+abdominal+wall+reconstruction+using+an+innervated+abdominal+wall+vascularized+composite+tissue+allograft%3A+a+cadaveric+study+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Functional abdominal wall reconstruction using an innervated abdominal wall vascularized composite tissue allograft: a cadaveric study and review of the literature.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 31 (1), 39-44 (2015).</li>
<li>Kollar, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+in+reconstructive+microsurgery%3A+Reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innovations in reconstructive microsurgery: Reconstructive transplantation.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 800-806 (2018).</li>
<li>Kaufman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Graft+vasculopathy+in+clinical+hand+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Graft vasculopathy in clinical hand transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 12 (4), 1004-1016 (2012).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+Part+C%3A+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li>
<li>Kaufman, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+in+VCA%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+International%22%5BJournal%5D)">Immunobiology in VCA.</a> Transplantation International. 29 (6), 644-654 (2016).</li>
<li>Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Institute for Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%2C+8th+edition%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (2011).</li>
<li>Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+limb+allotransplantation+model+to+study+skin+rejection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat.</a> Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).</li>
<li>Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+hindlimb+allotransplantation+in+rats%3A+an+alternative+model+for+immunological+research+in+composite-tissue+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation.</a> Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Bij de ontwikkeling van dit model van VCA, werden verschillende belangrijke kwesties in overweging genomen. Ten eerste was het belangrijk om intact bot (Tibia en fibula), beenmerg, en de huid in het transplantaat op te nemen. Terwijl de klinische hand transplantaties van volwassen donoren geen significante hoeveelheden van actief hematopoietische merg overdragen, zijn studies van de rol van het beenmerg niche beter gespiegeld met behulp van een intact, vasculaire bot in plaats van een cut lange bot, wat resulteert in fib...

Reconstructieve chirurgie voor de katastrofisch weefsel verlies van amputatie, blast verwondingen, maligniteiten, en aangeboren afwijkingen worden beperkt door de beschikbaarheid van weefsel van de patiënt en de extra morbiditeit veroorzaakt op de donor site. In sommige gevallen, zoals branden slachtoffers of quadrilateral geamputeerden, levensvatbaar weefsel voor de wederopbouw is niet beschikbaar bij de patiënt. In 1964 werd de eerste moderne hand transplantatie uitgevoerd in Ecuador. Hoewel dit een technisch succes was, immunosuppressie beschikbaar op het moment was onvoldoende om afwijzing te voorkomen, en het Graft werd verloren in minder dan 3 weken1. In 1998 en 1999, werden de eerste hand transplantaties in de moderne era van immunosuppressie uitgevoerd in Lyon, Frankrijk2 en Louisville, Kentucky, de v.s.3. Voor de eerste keer, reconstructieve chirurgen kunnen vervangen als met like. Face transplantatie werd voor het eerst uitgevoerd in 20054, en een aantal andere VCA enten zijn nu routinematig worden uitgevoerd, zoals buikwand5, baarmoeder, en urogenitale transplantaties6.
In tegenstelling tot vaste orgaantransplantatie, de meeste VCA-technieken te betrekken de aanwezigheid van de zeer antigenische donorhuid. Klinische ervaring heeft vastgesteld dat de acute afwijzing van de huid is relatief eenvoudig te controleren, maar kan bijdragen aan de chronische afwijzing van de onderliggende weefsels en vaten, die niet goed reageren op de behandeling7. De vasculaire dysfunctie geassocieerd met een alloimmune reactie is een meer onheilspellend obstakel voor het gebied van VCA7. Macrovasculopathies leiden tot doorbloeding tekorten, vertraagde genezing, en proinflammatoire aandoeningen. Beide Confluent agressieve grote vaartuigen vasculopathie en focale intima hyperplasie optreden in de hand transplantatie ontvangers7. Daarnaast, microvasculopathies waarschijnlijk bijdragen aan de VCA complicaties zo goed en kan zelfs leiden tot afwijzing gebeurtenissen. Terwijl zowel immune als niet-immune factoren waarschijnlijk een rol in de vasculopathie van hand transplantatie ontvangers spelen, zijn de specifieke mechanismen die distale schip dysfunctie in VCA bevorderen niet gekend, in het bijzonder in de context van low-grade, chronische verwerping. Deze onbeantwoorde vragen vereisen de ontwikkeling van een dier VCA model dat zal zorgen voor de seriële beoordeling van het transplantaat tijdens de klinische cursus van VCA afwijzing/onderhoud en vasculopathie. Zulk een model zal inzicht in de verwerping en vasculopathie in aanwezigheid van immunosuppressie, besmettelijke uitdaging, en/of andere postoperatieve traumatische verwonding8,9aanbieden.
Hier gepresenteerd is een allogene rat VCA heterotopic achterpoten osteomyocutaneous flap model. Gebaseerd op eerder gepubliceerde VCA modellen, deze procedure is technisch eenvoudig uit te voeren, reproduceerbaar in een groot aantal, en vertoont minimale morbiditeit en ongemak voor de ontvangende dier. Dit model is ontworpen om klinische en histopathologisch beoordelingen van VCA acceptatie versus afwijzing mogelijk te maken, en biedt een kans om onderliggende immuun-en niet-immuun mechanismen die betrokken zijn bij afwijzing te evalueren.

<table><tbody><tr><td>Acepromazine</td><td>Henry Schein</td><td>5700850</td><td></td></tr><tr><td>Adventitia Scissors</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>SAS15R8</td><td></td></tr><tr><td>Approximator Clamp (Double)</td><td>ASSI</td><td>ABB2V, ABB22V</td><td></td></tr><tr><td>Approximator Clamp (single)</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Clamp Applying Forceps</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>CAF4</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Scissors</td><td>ASSI</td><td>SDS18R8</td><td></td></tr><tr><td>Flushing blunt needle 27 G</td><td>SAI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparine Sodium</td><td>Sagent</td><td>25021-400-30</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson Veterinary</td><td>14043-704-06</td><td></td></tr><tr><td>Jewelers Bipolar</td><td>ASSI</td><td>103000BPS03</td><td></td></tr><tr><td>Jewelers forceps #3</td><td>FST</td><td>11231-30</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine HCl 100 mg/mL</td><td>Zoetis</td><td>043-304</td><td>DEA-licentie vereist</td></tr><tr><td>Lactated Ringer Solution</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-03</td><td></td></tr><tr><td>Lactated Ringer Solution + 5% Dextrose</td><td>Hospira</td><td>0409-7953-09</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Henry Schein</td><td>11695-6925-2</td><td></td></tr><tr><td>Micro forceps</td><td>ASSI&nbsp;</td><td>JFAL3</td><td></td></tr><tr><td>Micro needle holder</td><td>ASSI</td><td>B138</td><td></td></tr><tr><td>Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL</td><td>Astellas</td><td>0469-3016-01</td><td></td></tr><tr><td>Suture, 10-0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>W2790</td><td>of 10-0 Ethilon (2830)</td></tr><tr><td>Suture, 4-0 Coated Vicryl</td><td>Ethicon</td><td>J714D</td><td></td></tr><tr><td>Vessel Dilator Forceps</td><td>ASSI</td><td>D5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>VetOne</td><td>13985-612-50</td><td></td></tr></tbody></table>

bewerkt heterotopic achterpoten osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet allotransplantation onderzoek

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vasculaire composiet allotransplantation (VCA) is een relatief nieuw veld in de reconstructieve chirurgie. De klinische prestaties in menselijke VCA omvatten hand en gezichts transplantaties en, meer onlangs, buikmuur, baarmoeder, en urogenitale transplantaties. Functionele resultaten hebben de initiële verwachtingen overschreden, en de meeste ontvangers genieten van een betere kwaliteit van leven. Nochtans, aangezien de klinische ervaring accumuleert, moeten de chronische verwerping en de complicaties van immunosuppressie worden gericht. In veel gevallen waar enten hebben gefaald, de oorzakelijke pathologie is ischemische vasculopathie. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">De biologische mechanismen van de acute en chronische afwijzing geassocieerd met VCA, vooral ischemische vasculopathie, zijn belangrijke gebieden van onderzoek. Door het zeer geringe aantal VCA patiënten wordt de evaluatie van de voorgestelde mechanismen echter beter aangepakt in een experimenteel model. De veelvoudige groepen hebben dierlijke modellen gebruikt om enkele relevante onopgeloste vragen in VCA verwerping en vasculopathie aan te pakken. Verscheidene model ontwerpen die een verscheidenheid van soorten impliceren worden beschreven in de literatuur. Hier presenteren we een reproduceerbaar model van VCA heterotopic achterpoten osteomyocutaneous flap in de rat die kan worden gebruikt voor translationeel VCA onderzoek. Dit model zorgt voor de seriële evaluatie van het transplantaat, met inbegrip van biopten en verschillende Imaging modaliteiten, met behoud van een laag niveau van morbiditeit.

De rat VCA heterotopic achterpoten osteomyocutaneous flap model zorgt voor lange termijn Allograft overleving onder immunosuppressie. Het model is betrouwbaar, reproduceerbaar en eenvoudig uit te voeren. De flap is goed verborgen in de liesstreek en vormt een minimale morbiditeit en ongemak voor het dier. De huid presentatie is een klinische manifestatie van de overleving en de afwijzing van de Allograft (Figuur 1). Het flap ontwerp zorgt voor een bruto klinisch toezicht en creëert een kans ...

Vasculaire composiet Allograft biedt levensveranderende voordelen aan transplantatie ontvangers, maar de biologische oorzaken van enten afwijzing en vasculopathie blijven slecht begrepen. De knaagdier chirurgische model hier gepresenteerd biedt een reproduceerbaar, klinisch relevant model van transplantatie, waardoor onderzoekers om afwijzing gebeurtenissen en potentiële therapeutische strategieën te evalueren om hun optreden te voorkomen.

Bewerkt Heterotopic achterpoten Osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet Allotransplantation onderzoek

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

Het kleine aantal gevasculariseerde composietalotransplantaties die klinisch worden uitgevoerd, vereist een betrouwbaar, reproduceerbaar diermodel om de onderliggende oorzaken van graftafstoting te bestuderen. Klinisch relevante weefsels zoals huid, spieren en bot zijn allemaal aanwezig in het model. Bovendien, de niet-functionele aard van ons model zorgen voor een snellere operatie, minder ischemische tijd voor de flap, en lagere morbiditeit in vergelijking met orthotopische modellen van VCA.Bij ontvangers van handtransplantaties kan vasculopathie van donorvaten leiden tot een volledige sluiting van de vaten en ischemische schade aan de geënte hand. Dit model is een hulpmiddel voor het bestuderen van de ontwikkeling van deze vasculopathische gebeurtenissen. Voordat u dit chirurgische model probeert, moet de primaire chirurg vertrouwd zijn met en bedreven zijn in macrovasculaire chirurgische technieken.Dit is een ingewikkelde en lange procedure. De visuele demonstratie zal helpen andere laboratoria dienovereenkomstig voor te bereiden, en begrijpen van de stappen van de operatie. Om te beginnen, eerst oogst de achterste ledemaat van een donor rat door het maken van een huid incisie in de lies concavity, bloot de femorale vaten.Maak een ventrale huid incisie, die zal helpen bij de dissectie van de pedicle. Na disarticulatie van de knie en de enkel, maak rughuidsneden, transect de pedicle om de graft te bevrijden, en vervoer het graft onmiddellijk naar de ontvanger chirurgische tafel, waar de chirurgische site van de ontvanger dier is voorbereid op voorhand om de graft ischemische tijd te minimaliseren. Op het ontvangende dier, bloot stellen en ontleden van de dijbeenvaten als voorheen, en vervolgens anastomose de graft, ader end-to-side, slagader end-to-end.Zet het transplantaat in de inguinale zak en oriënteer het ondersteboven. Tot slot, hecht de huid. Om te beginnen met de procedure, scheren een verdoofde donor rat, en gebruik dan ontharingscrème.Injecteer 30 eenheden heparine onderhuids in het scruff gebied. Plaats het dier supine op een verwarmingskussen en produceren een steriel chirurgisch veld door het voorbereiden, schrobben en draperen van de chirurgische gebied, met inbegrip van de dorsale aspect van het been. Gebruik scalpelblad nummer 15 om een huidincisie van 3 centimeter te maken in de liesconaviteit van de donorrat.Gebruik iris schaar om lateraal weerspiegelen de inguinale vet pad. Met behulp van stompe dissectie met een wattenstaafje, bloot de gemeenschappelijke dijbeenvaten, en plaats vervolgens een draadhaak met een elastische band om de buikspieren in te trekken. Onder een dissecerende microscoop met maximaal 40x vergroting, gebruik maken van micro-schaar, nummer drie rechte juwelier tangen, en nummer vijf 45-graden-schuine tangen om de pedicle proximally dissect van de opkomst van de gemeenschappelijke femorale vaten onder de inguinale ligament, en distally aan de samenvloeiing van popliteale schepen in de ent.Met behulp van micro-clips en bipolaire juweliers forceert, ligate en verdeel de grote arteriële en veneuze takken om de belangrijkste dijbeenvaten te mobiliseren. Gebruik fijne bipolaire tangen om eventuele kleine takken te cauteriseren. Gebruik iris schaar om een huid incisie te maken van het centrum van de vorige huid gesneden langs de ventrale kant van de achterpoot naar de enkel gebied.Snijd de gracilis spier en de andere adductor spieren eronder op een verticale manier bloot te stellen en te binden de mediale proximale geniculaire schepen, diep vertakkende kleine bloedvaten, en de heupzenuw. Op dit punt, op een aparte chirurgische tafel, moet de andere chirurg intuberen en verdoven de ontvanger dier om de ontvanger chirurgische site voor te bereiden op tijd voor graft plaatsing, en het minimaliseren van de graft ischemische tijd. Maak omtrek huid incisies op het niveau van de knie en enkel, disariculeren de knie en enkel, en verwijder vreemde spieren en weefsel.Maak een verticale huidincisie aan de rugzijde van de achterpoot om het transplantaat, samengesteld uit kuitbeen en scheenbeen, te bevrijden en nu alleen verbonden door de pedicle. Plaats kleine klemmen zo proximally mogelijk op de dijbeenslagader en ader en snijd de pedicle zo dicht mogelijk bij de liesligbondment. Gebruik een 27-gauge flushing botte canule te injecteren gehepariniseerde zoutoplossing in de dijbeenslagader om het transplantaat van bloed spoelen.Wikkel het geïsoleerde transplantaat in warm zoutwatergedrenkt gaas en transport het onmiddellijk naar de tafel met het ontvangende dier, met de chirurgische plaats al voorbereid op vasculaire anastomose. Intuberen van de ontvanger rat, en diep verdoven met 2,5 tot 3% verdampt isoflurane, in evenwicht met een liter per minuut zuurstof. Plaats het dier supine op een verwarmingskussen, en schrobben en draperen de chirurgische site.Terwijl de eerste chirurg werkt aan het bevrijden van de graft van het donordier, gebruik scalpelblad nummer 15 om een drie-centimeter huidincisie in de liesconveniteit van de verdoofde ontvanger rat te maken. Gebruik iris schaar om lateraal weerspiegelen de inguinale vet pad. Na het blootstellen van de gemeenschappelijke dijbeenvaten op dezelfde manier als bij het donordier, plaats een draadhaak met een elastische band om de buikspieren in te trekken.Dan ligate en verdeel Murphy takken. Met behulp van 10-0 nylon onderbroken hechtingen, anastomose donorvaten. Aan ontvangers schepen via veneuze end-to-side techniek.Voer vervolgens arteriële anastomose uit via end-to-end techniek. Na het geleidelijk loslaten van de klemmen, controleer de anastomotische sites voor bloeden en voeg extra hechtingen toe indien nodig. Om een effectieve engeroperfusie te garanderen, beoordeelt u visueel de vasculaire anastomose.Dan inset de graft in de inguinale zak, en oriënteren ondersteboven, met de enkel gewricht superieur, en de knie gewricht inferieur. Gebruik tucking hechtingen om het transplantaat te beveiligen aan aangrenzende spieren. Tot slot, sluit de huid via onderbroken horizontale matras huidabsorberende 4-0 hechtingen, en ga verder met postoperatieve zorg zoals beschreven in het manuscript.De rat VCA heterotopische hindlimb osteomyocutane flap model zorgt voor lange termijn allograft overleven onder immunosuppressie. De flap is goed verborgen in de liesstreek en vormt minimale morbiditeit en ongemak voor het dier. Toen de immunosuppressiebehandeling werd gestopt, werd het transplantaat afgewezen.Doppler beelden van de allograft tonen een verschuiving van minimale bloedoverdaad onmiddellijk na-VCA, naar volledige revascularisatie van de flap op dag 64. Huidbiopsie van een syngenetische allograft op dag 45 toont een normale morfologie van de huidcomponenten, terwijl er atrofie en mononucleaire celinfiltratie is in een allogene allograft in afstoting op dag 75 die dagelijks wordt behandeld met een lagere dosis van een immunosuppressivum. Spierbiopsie van een syngeneïsche allograft op dag 45 toont een normale morfologie, terwijl spieratrofie en mononucleaire celinfiltratie zichtbaar zijn in een allogene allograft in afstoting op dag 98, dagelijks behandeld met een lagere dosis van een immunosuppressivum.Femorale slagader biopsie van een syngeneic allograft op dag 45 toont een normale morfologie van de slagader, in tegenstelling tot femorale slagader van een allogene allograft in afwijzing op dag 98, dagelijks behandeld met een lagere dosis van een immunosuppressivum. Dit model biedt een hulpmiddel om de effecten van acute afstoting, chronische afstoting en omgevingsfactoren zoals infectie en chirurgische beledigingen op de ontwikkeling van vasculopathie te testen. Immunosuppressieve geneesmiddelen zijn nodig voor de overleving van het transplantaat op lange termijn.Deze geneesmiddelen zijn chemisch gevaarlijk, en moeten worden behandeld met de nodige voorzichtigheid en de juiste personeelsbeschermingsmiddelen.

modified-heterotopic-hindlimb-osteomyocutaneous-flap-model-rat-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden...

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Vrije weefsel overdracht wordt op grote schaal gebruikt in de reconstructieve chirurgie om vorm en functie te herstellen na oncologische resectie en trauma. Voorconditionering dit weefsel vóór de operatie kan uitkomst te verbeteren. Dit artikel beschrijft...

In situ Transversale rectusabdominis myocutane Flap: een rat model van myocutane ischemiereperfusieletsel

Gevasculariseerde Composite Allotransplantations (VCA) hebben een klinische realiteit. Echter, brede klinische toepassing van VCA beperkt door chronische multi-drug immunosuppressie. De auteurs presenteren een betrouwbare en reproduceerbare grote diermodel om immunomodulerende strategieën die kunnen minimaliseren of potentieel elimineren de noodzaak van immunosuppressie in VCA vertalen.

Een Gemodificeerde Heterotope Varkens Hind Limb Transplant Model for Translational Gevasculariseerd Composite allotransplantatie (VCA) Onderzoek

Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).

Orthotope Hind Limb Transplantation in de muis

Momenteel is de enige vorm van gevacuoliseerd samengestelde allotransplantation afhankelijk van lange-termijn-immuunsuppressie, moeilijk te ondersteunen voor niet-leven-kritieke indicaties. We presenteren een nieuwe varkens tibiale VCA model dat kan worden gebruikt voor het bestuderen van bot VCA en voorbeelden van het gebruik van chirurgische angiogenese om bot levensvatbaarheid zonder de behoefte van langdurig immuun-modulatie.

Chirurgische angiogenese in varkens tibiale Allotransplantation: een nieuwe groot dier bot gevacuoliseerd composiet Allotransplantation Model

Dit artikel beschrijft de stappen die nodig zijn om een fasciocutaan epigastrisch vrij flap op te tillen en deze over te brengen naar de nek bij de rat.

Een model van Free Tissue Transfer: The Rat Epigastrische Gratis Flap

Dit protocol presenteert een robuust, reproduceerbaar model van vascularized composiet allotransplant (VCA) gericht op gelijktijdige studie van immunologie en functioneel herstel. De tijd geïnvesteerd in zorgvuldige techniek in een rechter mid-dij achterpoot orthotopische transplantatie met de hand genaaid vasculaire anastomoses en neurale coaptatie levert de mogelijkheid om functioneel herstel te bestuderen.

Het nemen van de volgende stap: een neurale coaptatie orthotopische achterste ledemaat transplantatie model om functioneel herstel in Rat maximaliseren

Dit artikel presenteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatieprotocol bij ratten en de mogelijke uitkomsten ervan in de follow-up op middellange termijn.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Het huidige protocol beschrijft het porcine fascio-cutane flap model en het potentiële gebruik ervan in gevasculariseerd samengesteld weefselonderzoek.

Een betrouwbaar porcine fascio-cutaan flapmodel voor gevasculariseerde composiet allografts bio-engineering studies

We presenteren een reproduceerbaar muismodel van heterotopische vascularisatie allotransplantatie van achterpoot tot hals. Dit supermicrochirurgisch protocol, waarbij 0,3-0,5 mm vatenanastomosen worden gebruikt, integreert nylonfilamentgeleiding en veneuze manchetten. Het biedt een betrouwbaar platform voor translationele studies naar tolerantie, ischemie-reperfusieschade en immunologische mechanismen bij vasculariseerde samengestelde allotransplantatie.

Heterotopische achterpoot-naar-nek transplantatie bij de muis: een supermicrochirurgisch model van vasculariseerde composietallotransplantatie

Leer een chirurgisch rattenmodel voor vasculaire composietallotransplantatie om afstoting en vasculopathie te bestuderen. Deze methode versnelt operaties en vermindert ischemische tijd.

Bewerkt Heterotopic achterpoten Osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet Allotransplantation onderzoek (Video) | JoVE Journal

Bewerkt Heterotopic achterpoten Osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet Allotransplantation onderzoek

Meer video's verkennen