Een in vivo oestrogeen deficiëntie muis model voor het screenen van exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze

Laboratoriummodellen waarbij oestrogeen deficiënte muizen presenteren een aderverkalking pons gegevens ontbreken. Deze procedure is vooral nuttig voor screening exogene oestrogeen behandelingen van cardiovasculaire disfunctie na de menopauze. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat ovariectomie zonder dubbele dorsolaterale incisie een eenvoudigere, minder tijdrovende methode is die ernstige buikholteverkleeding en ontsteking voorkomt.

Het aantonen van de procedure zal Yue-Zhang Yin, een afgestudeerde student van mijn laboratorium. Om een bilaterale ovariectomie uit te voeren bij APOE knock-out muizen, bevestig dan eerst een gebrek aan reactie op de pedaalreflex en plaats het dier in de gevoelige positie op een verwarmingskussen. Breng zalf aan op de ogen van het dier en bedek het dier met een chirurgisch laken.

Maak een incisie van één centimeter naar de middellijn, en een centimeter laterale aan de costal ribben, en gebruik tangen om het onderhuidse weefsel botweg te ontleden. Met behulp van ontleden bril, identificeren van de witte vetweefsel in de buikholte. Met behulp van micro schaar en micro tangen, maak een 0,5-tot een centimeter incisie door de fascia, totdat de buikholte is bereikt, en gebruik maken van de micro tangen om zachtjes intrekken van het witte vetweefsel.

Een roze, moerbeivormige eierstok, verpakt in vetweefsel, moet worden waargenomen in de buikholte. Gebruik een monofilament hechting om het proximale vat van 0,5 tot één centimeter en de baarmoederhoorn te binden en gebruik de microschaar om de eierstok te oogsten. Breng het resterende weefsel terug naar de buikholte en gebruik individuele monofilamenthechtingen om de spier- en huidlagen afzonderlijk te sluiten.

Oogst vervolgens de eierstok aan de contralaterale kant van het dier, zoals zojuist is aangetoond, en laat de muis herstellen op een verwarmingskussen met monitoring, tot volledige recumbency. Een keer per week, van de week voor tot 12 weken na de operatie, meet het lichaamsgewicht van elke schijnvertoning en proefdier op een balans. Voor plasma totale cholesterol en triglyceride meting, in week 12, bereid de ventrale borst gebied met 70% ethanol, en steek een 25-gauge naald in de rechter ventrikel.

Zuig langzaam aan, totdat een milliliter bloed in de spuit stroomt en het monster in een 1,5 milliliter opvangbuis met tien microliter edta van 0,5 mol. Keer de buis meerdere malen grondig om om de EDTA in het bloed te mengen en plaats de buis onmiddellijk op ijs. Binnen 30 minuten na het verzamelen, centrifugeren het monster gedurende 20 minuten op 400 keer G en vier graden Celsius.

Verzamel voorzichtig het plasma supernatant voor opslag bij min 80 graden Celsius. Om de aorta te isoleren, bevestigt u in week 12 een naald van 25 meter aan een spuit van 50 milliliter gevuld met PBS en steek de naald in de linkerventrikel van het proefdier. Snijd het rechter atrium om hoge druk van de perfusie te voorkomen en doorsneed het hartweefsel met een 05 tot 08 milliliter PBS per minuut stroomsnelheid.

Absorbeer de perfusievloeistof met laboratoriumweefsels en gebruik een schaar en tang om de ribben en longen te verwijderen. Open de buikholte om de inwendige organen te verwijderen, voor een beter zicht op de aorta. Grijp het hart met micro-tangen om scheiding van de aorta dorsaal, van de wervelkolom, tot de iliacale splitsing mogelijk te maken.

Bevestig vervolgens het hart en de aorta gedurende 48 uur in 4%paraformaldehyde, voordat u het weefselmonster in zoutoplossing op kamertemperatuur of bij twee tot acht graden Celsius gedurende een paar uur opslaat. Na twaalf weken van een hoog cholesterolgehalte dieet, ovariectomized muizen tonen een opmerkelijke toename van plasma totale cholesterol en triglyceride concentraties. Ovariectomized muizen, per mondeling toegediend met 17-beta oestradiol, of PPD via hazelnoot spread, vertonen aanzienlijk lagere plasma totale cholesterolconcentraties dan sham-operated muizen.

Plasma triglyceride niveaus dalen in ovariectomized muizen, per mondeling toegediend met 17-beta oestradiol, maar niet met PPD. Terwijl een tendens naar een verhoogd lichaamsgewicht wordt waargenomen bij ovariectomized muizen, in vergelijking met sham-operated muizen, worden over het algemeen geen significante veranderingen in lichaamsgewicht waargenomen, tussen de vier groepen dieren. De maximale plaque van de opgaande aorta wordt verhoogd bij ovariectomized muizen, in vergelijking met alle andere groepen, in combinatie met een algehele afname van de hartfunctie, waargenomen bij deze dieren.

Verder wordt het gemiddelde percentage aortalaesiegebied, ten opzichte van het gehele aortagebied, aanzienlijk verhoogd bij ovariectomized muizen. Zoals verwacht, wordt de aanwezigheid van deze laesies verminderd met 17-bèta oestradiol, of PPD-behandeling. Het belangrijkste risico voor de ovariectomie operatie is ureterale ligatie, wat resulteert in een hoge mortaliteit.

Vergeet ook niet om diep te snijden in de buurt van de nierslagader takken, om aortaschade te voorkomen.