30 juli 2019
Het doel van dit protocol is om in kleine en grote dieren veilige obductie-technieken aan te tonen voor het verkrijgen van bevredigende weefselmonsters voor rabiës testen.
Weefselverzameling voor rabiës testen heeft zowel duidelijke als onaangekeurde gevaren. De technicus moet de veiligste beschikbare methoden gebruiken en de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen dragen. Deze protocollen bieden veilige obductietechnieken zonder gebruik te maken van elektrisch gereedschap of zagen, waardoor de productie van aerosolen wordt geminimaliseerd.
Het grote dierprotocol kan ook in het veld worden uitgevoerd. Het gebruik van de grote methode voor het terughalen van diermonsters in het veld elimineert de uitdaging om een dierkop van meer dan 45 kilogram naar het laboratorium te vervoeren. De grote diermethode is vergelijkbaar met het Europese protocol voor het terughalen van spongiforme encefalopathiemonsters en kan worden gebruikt voor elk onderzoek met behulp van de hersenstam en het cerebellum.
Om het cerebellum en de hersenstam op te halen door de ventrale methode, plaats je het monster ventrale zijde omhoog met de neus die distally naar de achterkant van de bioveiligheidskast wordt geleid. Met een orthopedische hamer in de dominante hand en een raadslid beitel in de andere hand, plaats de beitel in een hoek van 45 graden met het hoekpunt naar de beitel in de V-vormige opening tussen de rechterkant van de tijdelijke en occipitale botten. Sla de bovenkant van de beitel met de hamer tot de twee botten scheiden.
En maak een snee naast het basisfenoïde bot. Scheid de tijdelijke en occipitale botten aan de linkerkant van het monster zoals net aangetoond. En gebruik de beitel om het V-gebied van de schedel naar beneden te buigen om het hele rhombencephalon gebied van de hersenen bloot te leggen.
Gebruik vervolgens een schaar en tang om de hersenstam en cerebellum eruit te scheppen en eventuele resterende weefselstukken uit de schedel te verwijderen als dat nodig is. Als het monster niet toestaat ventrale retrieval positie van het monster dorsaal, met de neus gericht distally naar de achterkant van de biosafety kast. En gebruik een tumortenacula om de linker temporele spier te grijpen met de tanden van de tenacula.
Knijp in het handvat om de tanden rond het weefsel te vergrendelen en gebruik een scherp snijmes om de tijdelijke spier tot op het bot te snijden. Draai het monster 180 graden met de tenacula en het mes en herhaal de incisie op de tegenovergestelde temporele spier om de schedel bloot te leggen. Breng het hoofd terug naar zijn oorspronkelijke oriëntatie en plaats de beitel in een hoek van 45 graden met het hoekpunt naar de beitel op het midden van de schedel op het kruispunt van de pariëtale en intraparietale botten.
En sla de bovenkant van de beitel met de hamer tot een horizontale opening is gemaakt op de bovenste helft van de schedel op het pariëtale bot. Draai het monster 180 graden en maak een opening aan de andere kant van de schedel zoals net aangetoond. Plaats het hoofd indien nodig om het punt van de beitel in het einde van de eerste snede in een hoek van 90 graden in de horizontale opening te plaatsen en sla de beitel tot de opening het occipitaalbot bereikt.
Rol het monster om een opening te maken op het tegenovergestelde occipitale bot op dezelfde manier. De openingen in de schedel moeten lijken op een ondersteboven U.Insert de tanden van de tenacula in de schedel aan de onderkant van de u en trek het bot naar achteren om het caudale uiteinde van de cerebrum en het cerebellum bloot te leggen. Gebruik dan een schaar als een schep om het hele cerebellum uit de holte te wrikken.
En gebruik weefsel tangen om de hersenstam uit de foramen te plagen. Voor grote dierlijke cerebellum en hersenstam ophalen, plaats het monster, zodat het dorsale deel van de schedel in contact is met het obductieoppervlak. Met het caudale deel van de schedel en foramen magnum tegenover de voorkant van de bioveiligheidskast.
Pak de hersenstam met tangen. Steek een gemodificeerd stilettomes zoveel mogelijk in het foramen magnum tussen het ruggenmerg en de dwarslaesie en schuur rond het ruggenmerg om het cerebellum en de hersenstam te scheiden van de dwarslaesie. Trek vervolgens de steel uit de foramen met tangen.
Wanneer het mes is ingebracht door de foramen magnum, voorzichtig hoek het mes te volgen langs de schedel zo veel mogelijk en steek een metalen spatel of mes met een lang genoeg handvat te bereiken onder de hersenen in de ruimte tussen het neurale weefsel en de spinale hersenvliezen. Sonde rond het cerebellum om ervoor te zorgen dat verbindingen met de spinale hersenvliezen zijn doorgesneden. Wanneer de hersenvliezen volledig zijn doorgesneden vooraf de spatel rostrally en dorsaal te scheppen van de cerebellum.
Schep vervolgens het cerebellum met de spatel eruit. Alle terrestrische monsters die tussen 31 januari 2019 en 28 februari 2019 met schedels werden ingediend, hadden informatie over de aanwezigheid van een nek en de methode van obductie verzameld. Gedurende die tijd, 170 hoofden werden necropsied met 18 soorten vertegenwoordigd.
52% werd behoorlijk onthoofd. De overige had ten minste één wervel, waaronder drie hele lichaamsmonsters. De ventrale methode werd gebruikt een 75%van de tijd.
Daarvan waren de nekken aanwezig op 49. Er werden drie grote dieren ingediend en in twee gevallen werd het grote dierenprotocol gebruikt. Een eekhoorn werd ingediend met een verbrijzelde schedel en gewoon wegsnijden van de huid blootgesteld het hersenweefsel, zodat geen van de aangetoonde methoden werden gebruikt.
De weefsels die worden gebruikt om microscopiegdia's te maken en of uit moleculaire methoden worden geëxtraheerd bij de verwerking van meerdere dieren voorkomen kruisbesmetting met behulp van nieuwe handschoenen instrumenten en een schoon werkgebied. Wees voorzichtig bij het uitvoeren van deze protocollen als de monsters kunnen worden besmet met rabiës virus of andere zoönotische ziekten. Houd er rekening mee dat er ook scherpe voorwerpen in de specimens aanwezig kunnen zijn.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Deze studie bespreekt necropsie-technieken voor het veilig verzamelen van weefselmonsters van zowel kleine als grote dieren om rabiesonderzoek te faciliteren. De nadruk ligt op het minimaliseren van de risico's die verbonden zijn aan de productie van aerosolen tijdens het necropsieproces.
Veilige en gestandaardiseerde necropsie-technieken voor rabies-surveillance zijn cruciaal voor biofarmaceutische R&D-teams die werken aan modellen voor zoönosen en de ontdekking van translationele biomarkers. Het minimaliseren van aerosolvorming en kruiscontaminatie tijdens de weefselafname heeft een directe invloed op de betrouwbaarheid van downstream moleculaire en histopathologische analyses. Deze protocollen ondersteunen een robuuste monsterintegriteit en operationele veiligheid, waardoor betrouwbare data kunnen worden gegenereerd voor onderzoeksportefeuilles naar infectieziekten.
Deze necropsieprotocollen vormen de interface tussen ontdekkingsbiologie en preklinisch onderzoek naar infectieziekten en ondersteunen workflows van hypothesetoetsing tot validatie van translationele modellen.