Name: Elektrofysiologische onderzoeken van Retinogeniculate en Corticogeniculate Synapse functie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: Leer elektrofysiologische methoden voor het onderzoeken van retinogeniculate en corticogeniculate synapsfunctie in acute hersensneden van de nucleus geniculatus lateralis. Deze techniek maakt gescheiden stimulatie van visuele en corticale inputs mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de German Research Foundation (DFG) binnen het collaborative Research Center (SFB) 1134 "functionele ensembles" (J.v.E. en X.C.) en de Research Grant EN948/1-2 (J.v.E.).

Alle experimenten werden goedgekeurd door het regerings toezichthoudend panel voor dierproeven van Rijnland-Palts.
1. oplossingen
<ol><li>Oplossing voor dissectie<ol>
<li>Om excitotoxicity te verminderen, bereiden van een oplossing op basis van choline te worden gebruikt tijdens de dissectie zoals hier gepresenteerd (in mM): 87 NaCl, 2,5 KCl, 37,5 choline chloride, 25 NaHCO3, 1,25 Nah2po4, 0,5 CACL2, 7 MgCl2, en 25 glucose. Bereid de oplossing voor dissectie minder dan 1 week voor het experiment.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Opname oplossing<ol>
<li>Bereid een kunstmatige cerebrale spinale vloeistof (ACSF) oplossing met (in mM): 125 NaCl, 25 NaHCO3, 1,25 Nah2PO4, 2,5 KCl, 2 CACL2, 1 MgCl2, en 25 glucose. Voeg 50 μM D-APV en 10 μM SR 95531 hydrobromide toe om N-methyl-D-aspartaat (NMDA) en GABAA -receptoren te blokkeren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Intracellulaire oplossing<ol>
<li>Bereid een intracellulaire oplossing met (in mM): 35 CS-gluconaat, 100 CsCl, 10 HEPES, 10 EGTA, en 0,1 D-600 (methoxyverapamil hydrochloride). Stel de pH in op 7,3 met CsOH. Filter, aliquot, en bewaar de stamoplossing bij-20 °C tot het gebruik.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. dissectie
<ol><li>Bereid twee segment kamers voor, waarvan één gevuld is met 100 mL van de dissectie oplossing en de andere met 100 mL opname oplossing. Plaats de twee bekers in een waterbad (37 °c) en bel de oplossingen met Manager gedurende ten minste 15 minuten voor de dissectie.</li>
	<li>Vul een plastic beker met 250 mL van de nabije ijskoude (maar niet bevroren) dissectie oplossing. Bel met Manager ten minste 15 minuten voor gebruik.</li>
	<li>Vul een plastic Petri schaal (100 mm x 20 mm), waarin de hersen sectie wordt uitgevoerd, met de koude dissectie oplossing. Plaats een stukje filtreerpapier in de deksel van de Petri schaal.</li>
	<li>Koel de dissectie kamer van de vibratome af.</li>
	<li>Anesthetiseer een muis met 2,5% isoflurane, bijvoorbeeld in de muis kooi. Zodra de muis reageert niet op een staart knijpen, onthooi de muis in de buurt van de cervicale Medulla en dompel het hoofd in de ijskoude dissectie oplossing in de basis van de Petri schaal.</li>
	<li>Snijd de huid van het hoofd van caudal naar nasaal en houd het lateraal met de vingers om de schedel bloot te leggen. Om de voor hersenen uit te nemen, snijd eerst de schedel samen met de posterieure-anterieure middenlijn en snijd vervolgens twee keer door de coronale hechting en lambdoïde hechtdraad (Figuur 1a).</li>
	<li>Verwijder de schedel tussen de coronale hechting en lambdoïde hecht zodanig dat de hersenen wordt blootgesteld. Snijd de olfactorische bol en scheid de voor hersenen van de middenhersenen met een fijn mes (Figuur 1b). Verwijder de hersenen van de schedel met een dunne spatel en plaats deze op het filtreerpapier in de deksel van de Petri schaal. Opmerking: de stappen 2,6 en 2,7 moeten zo snel mogelijk worden uitgevoerd om de celdood te verminderen.</li>
	<li>Om de integriteit van de sensorische en corticale ingangen van de dLGN in het hersen segment te behouden, scheidt u de twee hemisferen met een parasagitale snede met een hoek van 3 − 5 ° (figuur 1c,D). Droog de Mediolaterale vlakken van de twee hersenhelften door ze op het filtreerpapier te plaatsen en lijm ze vervolgens op de snij fase met een hoek van 10 − 25 ° van het horizontale vlak (Figuur 1e).</li>
	<li>Plaats het podium in het midden van de metalen buffer lade en giet de rest van de ijskoude dissectie oplossing voorzichtig in de buffer lade. Voer deze stap zorgvuldig uit omdat een sterke giet de geplakte hersenen kan verwijderen (Figuur 1f).</li>
	<li>Plaats de buffer lade in de ijskoude lade, die helpt bij het handhaven van de lage temperatuur tijdens het dissectie. Snijd 250 μm schijfjes met een scheermesje met een snelheid van 0,1 mm/s en een amplitude van 1 mm.</li>
	<li>Houd de plakjes in de vasthoud kamer gevuld met zuurstofrijk dissectie oplossing bij 34 °c gedurende ongeveer 30 minuten en laat vervolgens de plakjes herstellen in de opname oplossing bij 34 °c voor nog eens 30 minuten.</li>
	<li>Na het herstel, verwijder de plak kamer uit het waterbad en bewaar de schijfjes op kamertemperatuur (RT) totdat het in experimenten wordt gebruikt.</li>
</ol>3. elektrofysiologie
<ol><li>Trek pipetten met behulp van borosilicaatglas capillairen en een filament puller. Houd de weerstand van de opname pipetten bij 3 − 4 MΩ bij. Trek stimulerende pipetten aan met hetzelfde protocol, maar breek de punt iets na het trekken om de diameter te vergroten. Vul de opname pipetten met de intracellulaire oplossing en biocytine, en vul stimulerende pipetten met de opname oplossing.</li>
	<li>Plaats de plakjes in de opname kamer en parfumeer de plakjes continu met een zuurstofopname oplossing bij RT. Controleer alle segmenten en selecteer degene die een intact optisch kanaal weergeven.</li>
	<li>Visualiseer het segment en de cellen met een rechtopstaande Microscoop die is uitgerust met een infrarood differentieel interferentie contrast (IR-DIC) video microscopie. Opmerking: Relais neuronen onderscheiden zich van de onderlinge neuronen door hun grotere Soma-grootte en meer primaire dendrites (takken die uit het SOMA komen). Interneuronen tonen bipolaire morfologie met een kleiner Soma.</li>
	<li>Plaats de stimulerende pipet op het segment voordat u de cel patchen met de opname pipet. Om retinogeniculate synapsen te onderzoeken, plaatst u de stimulerende pipet direct op het optische kanaal, waar de axon-vezels van retinale ganglioncellen worden gebundeld (Figuur 2a). Voor het analyseren van corticogeniculate synapsen, plaats de stimulerende elektrode op de Nucleus reticularis thalami, die is rostroventrally grenzend aan de dLGN (Figuur 2b).</li>
	<li>Zodra de opname pipet in de opname oplossing is ondergedompeld, moet u een 5 mV-spannings stap toepassen om de pipet weerstand te bewaken. Stel het vasthoud potentieel in op 0 mV en Annuleer de offset potentiaal zodat de houd stroom 0 pA is.</li>
	<li>Benader de cel met de opname pipet terwijl u positieve druk toepast. Wanneer de pipet in direct contact is met het celmembraan, laat u de positieve druk los en stelt u de vasthoud potentiaal in op-70 mV. Breng een lichte negatieve druk aan om de celmembraan aan de glazen pipet toe te voegen, zodat een dichting van gigaohm (weerstand > 1 GΩ) ontstaat. De pipet capaciteit compenseren en de cel openen door toepassing van negatieve drukpulsen.</li>
	<li>Om de synaptische functie te onderzoeken, 0,1 MS stroom pulsen (ca. 30 μA) toepassen via de stimulatie pipet. Als er geen synaptische responsen worden waargenomen, moeten de stimulerende pipetten mogelijk worden vervangen. Wees voorzichtig tijdens het plaatsen van de stimulerende pipetten op een andere positie, zodat de opgenomen cel niet verloren gaat. Opmerking: in het voorbeeld opnames getoond in Figuur 2, synaptische korte-termijn plasticiteit werd onderzocht door het stimuleren van het optische tractus of corticogeniculate vezels tweemaal met 30 MS Inter-stimulus intervallen. De gepaarde pulsratio (PPR) werd berekend door de amplitude van de tweede excitatory postsynaptisch Current (EPSC) te delen door die van de eerste EPSC (EPSC2/EPSC1). Elk stimulatie protocol werd 20 keer herhaald. De amplitude van de EPSC werd gemeten vanaf de gemiddelde stromingen van de 20 sweeps. Het tijdsinterval tussen elke herhaling was ten minste 5 s om te voorkomen dat op korte termijn plasticiteit geïnduceerd door de herhalingen.</li>
	<li>Bewaak de serieweerstand continu door een 5-mV spannings stap toe te passen. Gebruik alleen de cellen met de serieweerstand kleiner dan 20 MΩ voor analyse.</li>
</ol>4. biocytine labeling
<ol><li>Houd de configuratie van de hele cel gedurende ten minste 5 min om de diffusie van biocytine in de distale dendrites mogelijk te maken.</li>
	<li>Verwijder na het opnemen de pipet voorzichtig uit de cel zodat de Soma niet wordt vernietigd. Opmerking: als er meer dan één cel op één segment is vastgelegd, moeten hun soma's voldoende weg zijn van hun naburige cellen. Zorg ervoor dat de dendrites uit verschillende cellen niet interfereren met elkaar tijdens de beeldvorming.</li>
	<li>Bereid een 24-Well celkweek plaat voor. Vul elk goed met 300 μL van 4% Paraformaldehyde (PFA). Wees voorzichtig om niets te besmetten met PFA dat in contact zal komen met de segmenten die moeten worden opgenomen.</li>
	<li>Breng de segmenten van de opname kamer over naar de PFA-bevattende plaat met een rubberen pipet en bevestig de sneetjes 's nachts. Zorg ervoor dat de pipet altijd wordt verhinderd door PFA-besmetting. Let op: Draag altijd handschoenen en gebruik een chemische kap bij het manipuleren van PFA.</li>
	<li>Na het fixeren van sneetjes in PFA, vervangt u PFA door fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Bewaar de segmenten in PBS bij 4 °C voor toekomstige verwerking (minder dan 2 weken).</li>
	<li>Was de plakjes met verse PBS 3 keer (10 min elke wasbeurt).</li>
	<li>Blokkeer niet-specifieke binding sites door de segmenten in de blokkerende oplossing (0,2% niet-ionische oppervlakte-actieve stof en 5% boviene serumalbumine in PBS) voor 2 uur op RT op een rondschudapparaat te bebroed.</li>
	<li>Gooi de blokkerende oplossing weg. Inbroed de plakjes met streptavidin-Alexa 568 verdund in de blokkerende oplossing (1:1000) bij 4 °C 's nachts op een rondschudapparaat.</li>
	<li>Gooi de antilichaam oplossing weg en spoel de schijfjes 3 keer met PBS gedurende 10 min bij RT op een rondschudapparaat. Was de schijfjes met kraanwater voor de montage.</li>
	<li>Plaats de segmenten van de ene muis op de andere met een glazen schuif. Zorg ervoor dat de gekleurde cellen aanwezig zijn op het bovenste oppervlak van de segmenten. Absorbeer het water rond de plakjes met weefsels en laat de schijfjes ongeveer 15 minuten drogen.</li>
	<li>Breng twee druppels afdekmedium aan op elk segment. Monteer een dekglaasje op de glijbaan zonder luchtbellen te produceren.</li>
	<li>Bewaar de gelabelde segmenten na visualisatie met een confocale Microscoop op 4 °C.</li>
</ol>5. cellulaire beeldvorming en wederopbouw
<ol><li>Scan segmenten met een confocale Microscoop en gebruik de bijbehorende software voor analyse.</li>
	<li>De fluorescentie bij 561 nm prikkelen.</li>
	<li>Het beeld van de segmenten met 0,7 numerieke diafragma (NA), olie-onderdompeling doel.</li>
	<li>Pas de beoogde cel in het midden van de weergave aan en pas een vergroting van 2,5 keer toe.</li>
	<li>De Z-stack gegevenssets om te scannen van de hele neuron met de volgende parameters renderen: Format = 2.550 x 2.550 pixels, scanfrequentie = 400 Hz, Z-nummer = 40. voxel grootte was rond 0,1211 x 0,1211 x 1,8463 μm3.</li>
	<li>Semi-automatisch traceren van de neuronen met behulp van een neuronale reconstructie software (bijvoorbeeld, NeuronStudio). Een voorbeeld van een 3D-getraceerd Relais neuron wordt weergegeven in Figuur 3b.</li>
</ol>

<ol><li>Guido, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development%2C+form%2C+and+function+of+the+mouse+visual+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Development, form, and function of the mouse visual thalamus.</a> Journal of Neurophysiology. 120, 211-225 (2018).</li>
<li>Guillery, R. W., Feig, S. L., Lozsadi, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paying+attention+to+the+thalamic+reticular+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Paying attention to the thalamic reticular nucleus.</a> Trends in Neurosciences. 21, 28-32 (1998).</li>
<li>Turner, J. P., Salt, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+sensory+and+corticothalamic+excitatory+inputs+to+rat+thalamocortical+neurones+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Characterization of sensory and corticothalamic excitatory inputs to rat thalamocortical neurones in vitro.</a> The Journal of Physiology. 510 (3), 829-843 (1998).</li>
<li>Lindstrom, S., Wrobel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+dependent+corticofugal+excitation+of+principal+cells+in+the+cat%27s+dorsal+lateral+geniculate+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Frequency dependent corticofugal excitation of principal cells in the cat's dorsal lateral geniculate nucleus.</a> Experimental Brain Research. 79, 313-318 (1990).</li>
<li>Granseth, B., Ahlstrand, E., Lindstrom, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired+pulse+facilitation+of+corticogeniculate+EPSCs+in+the+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+of+the+rat+investigated+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Paired pulse facilitation of corticogeniculate EPSCs in the dorsal lateral geniculate nucleus of the rat investigated in vitro.</a> The Journal of Physiology. 544, 477-486 (2002).</li>
<li>Hamos, J. E., Van Horn, S. C., Raczkowski, D., Uhlrich, D. J., Sherman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+connectivity+of+a+local+circuit+neurone+in+lateral+geniculate+nucleus+of+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Synaptic connectivity of a local circuit neurone in lateral geniculate nucleus of the cat.</a> Nature. 317, 618-621 (1985).</li>
<li>Kielland, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+patterns+govern+synapse-specific+AMPA+receptor+trafficking+between+deliverable+and+synaptic+pools%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity patterns govern synapse-specific AMPA receptor trafficking between deliverable and synaptic pools.</a> Neuron. 62, 84-101 (2009).</li>
<li>Chen, C., Regehr, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+remodeling+of+the+retinogeniculate+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Developmental remodeling of the retinogeniculate synapse.</a> Neuron. 28, 955-966 (2000).</li>
<li>Budisantoso, T., Matsui, K., Kamasawa, N., Fukazawa, Y., Shigemoto, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+underlying+signal+filtering+at+a+multisynapse+contact%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mechanisms underlying signal filtering at a multisynapse contact.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 32, 2357-2376 (2012).</li>
<li>Morgan, J. L., Berger, D. R., Wetzel, A. W., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fuzzy+Logic+of+Network+Connectivity+in+Mouse+Visual+Thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Fuzzy Logic of Network Connectivity in Mouse Visual Thalamus.</a> Cell. 165, 192-206 (2016).</li>
<li>Usrey, W. M., Reppas, J. B., Reid, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paired-spike+interactions+and+synaptic+efficacy+of+retinal+inputs+to+the+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Paired-spike interactions and synaptic efficacy of retinal inputs to the thalamus.</a> Nature. 395, 384-387 (1998).</li>
<li>Steriade, M., Jones, E. G., McCormick, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSteriade%2C+M+%22Thalamus%22">Thalamus</a>. , (1997).</li>
<li>Wang, W., Jones, H. E., Andolina, I. M., Salt, T. E., Sillito, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+alignment+of+feedback+effects+from+visual+cortex+to+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Functional alignment of feedback effects from visual cortex to thalamus.</a> Nature Neuroscience. 9, 1330-1336 (2006).</li>
<li>Zucker, R. S., Regehr, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Short-term synaptic plasticity.</a> Annual Review of Physiology. 64, 355-405 (2002).</li>
<li>Chen, C., Blitz, D. M., Regehr, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributions+of+receptor+desensitization+and+saturation+to+plasticity+at+the+retinogeniculate+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Contributions of receptor desensitization and saturation to plasticity at the retinogeniculate synapse.</a> Neuron. 33, 779-788 (2002).</li>
<li>Chen, X., Aslam, M., Gollisch, T., Allen, K., von Engelhardt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CKAMP44+modulates+integration+of+visual+inputs+in+the+lateral+geniculate+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">CKAMP44 modulates integration of visual inputs in the lateral geniculate nucleus.</a> Nature Communications. 9, 261(2018).</li>
<li>Krahe, T. E., El-Danaf, R. N., Dilger, E. K., Henderson, S. C., Guido, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologically+distinct+classes+of+relay+cells+exhibit+regional+preferences+in+the+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience+%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Morphologically distinct classes of relay cells exhibit regional preferences in the dorsal lateral geniculate nucleus of the mouse.</a> The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 31, 17437-17448 (2011).</li>
<li>von Engelhardt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CKAMP44%3A+a+brain-specific+protein+attenuating+short-term+synaptic+plasticity+in+the+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CKAMP44: a brain-specific protein attenuating short-term synaptic plasticity in the dentate gyrus.</a> Science. 327, 1518-1522 (2010).</li>
<li>Khodosevich, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coexpressed+auxiliary+subunits+exhibit+distinct+modulatory+profiles+on+AMPA+receptor+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Coexpressed auxiliary subunits exhibit distinct modulatory profiles on AMPA receptor function.</a> Neuron. 83, 601-615 (2014).</li>
<li>Farrow, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auxiliary+subunits+of+the+CKAMP+family+differentially+modulate+AMPA+receptor+properties%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Auxiliary subunits of the CKAMP family differentially modulate AMPA receptor properties.</a> eLife. 4, e09693(2015).</li>
<li>Rafols, J. A., Valverde, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+dorsal+lateral+geniculate+nucleus+in+the+mouse.+A+Golgi+and+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The structure of the dorsal lateral geniculate nucleus in the mouse. A Golgi and electron microscopic study.</a> The Journal of Comparative Neurology. 150, 303-332 (1973).</li>
<li>Hauser, J. L., Liu, X., Litvina, E. Y., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+synaptic+currents+increase+relay+neuron+firing+at+the+developing+retinogeniculate+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Prolonged synaptic currents increase relay neuron firing at the developing retinogeniculate synapse.</a> Journal of Neurophysiology. 112, 1714-1728 (2014).</li>
<li>Hooks, B. M., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+spontaneous+and+visual+activity+in+remodeling+of+the+retinogeniculate+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for spontaneous and visual activity in remodeling of the retinogeniculate synapse.</a> Neuron. 52, 281-291 (2006).</li>
<li>Liu, X., Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+roles+for+AMPA+and+NMDA+receptors+in+transmission+at+the+immature+retinogeniculate+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Different roles for AMPA and NMDA receptors in transmission at the immature retinogeniculate synapse.</a> Journal of Neurophysiology. 99, 629-643 (2008).</li>
<li>Govindaiah, G., Cox, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabotropic+glutamate+receptors+differentially+regulate+GABAergic+inhibition+in+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Metabotropic glutamate receptors differentially regulate GABAergic inhibition in thalamus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 26, 13443-13453 (2006).</li>
<li>Fogerson, P. M., Huguenard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tapping+the+Brakes%3A+Cellular+and+Synaptic+Mechanisms+that+Regulate+Thalamic+Oscillations%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Tapping the Brakes: Cellular and Synaptic Mechanisms that Regulate Thalamic Oscillations.</a> Neuron. 92, 687-704 (2016).</li>
<li>Jacobsen, R. B., Ulrich, D., Huguenard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA%28B%29+and+NMDA+receptors+contribute+to+spindle-like+oscillations+in+rat+thalamus+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">GABA(B) and NMDA receptors contribute to spindle-like oscillations in rat thalamus in vitro.</a> Journal of Neurophysiology. 86, 1365-1375 (2001).</li>
<li>Kulik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+localization+of+GABA%28B%29+receptors+relative+to+synaptic+sites+in+the+rat+cerebellum+and+ventrobasal+thalamus%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Distinct localization of GABA(B) receptors relative to synaptic sites in the rat cerebellum and ventrobasal thalamus.</a> The European Journal of Neuroscience. 15, 291-307 (2002).</li>
<li>Gutierrez, C., Cox, C. L., Rinzel, J., Sherman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+low-threshold+spike+activation+in+relay+neurons+of+the+cat+lateral+geniculate+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Dynamics of low-threshold spike activation in relay neurons of the cat lateral geniculate nucleus.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21, 1022-1032 (2001).</li>
<li>Armstrong, C. M., Gilly, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Access+resistance+and+space+clamp+problems+associated+with+whole-cell+patch+clamping%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Access resistance and space clamp problems associated with whole-cell patch clamping.</a> Methods in Enzymology. 207, 100-122 (1992).</li>
<li>White, J. A., Sekar, N. S., Kay, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Errors+in+persistent+inward+currents+generated+by+space-clamp+errors%3A+a+modeling+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Errors in persistent inward currents generated by space-clamp errors: a modeling study.</a> Journal of Neurophysiology. 73, 2369-2377 (1995).</li>
<li>Clay, J. R., Shlesinger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+effects+of+cesium+ions+on+potassium+channel+currents+in+biological+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Analysis of the effects of cesium ions on potassium channel currents in biological membranes.</a> Journal of Theoretical Biology. 107, 189-201 (1984).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

We beschrijven een verbeterd protocol op basis van een eerder gepubliceerde methode3, die het mogelijk maakt voor het onderzoek naar de hoge waarschijnlijkheid van het vrijgeven van retinogeniculate synapsen en een lage waarschijnlijkheid van het vrijkomen van corticogeniculate synapsen uit hetzelfde segment. Dit is van groot belang, omdat deze twee ingangen met elkaar omgaan om de visuele signaaloverdracht te moduleren: retinogeniculate-ingangen zijn de belangrijkste excitatory-aandrijving van Re...

Relais neuronen van de laterale geniculate Nucleus integreren en sturen visuele informatie naar de visuele cortex. Deze neuronen ontvangen excitatory input van ganglioncellen via retinogeniculate synapsen, die zorgen voor de belangrijkste excitatory drive voor relay neuronen. Bovendien ontvangen Relais neuronen excitatory ingangen van corticale neuronen via corticogeniculate synapsen. Bovendien ontvangen Relais neuronen remmende ingangen van lokale interneuronen en GABAergic neuronen van de Nucleus reticularis thalami1. De Nucleus reticularis thalami is aanwezig als een schild tussen de thalamus en de cortex zodanig dat vezels projecteren van cortex naar thalamus en in de tegenovergestelde richting moet gaan door de Nucleus reticularis thalami2.
Retinogeniculate ingangen en corticogeniculate ingangen vertonen verschillende synaptische eigenschappen3,4,5,6,7,8. Retinogeniculate ingangen vormen grote terminals met meerdere release sites9,10. In tegenstelling, weergeven corticogeniculate ingangen kleine terminals met single release sites7. Bovendien, retinogeniculate synapsen effectief stimuleren actie potentialen van Relais neuronen ondanks het vormen slechts 5 − 10% van alle synapsen op Relais neuronen3,8,11. Het corticogeniculate synapsen dient daarentegen als modulator van retinogeniculate transmissies door het membraanpotentiaal van Relais neuronen12,13te beheersen.
Deze twee belangrijkste excitatory ingangen voor relay neuronen zijn ook functioneel verschillend. Een belangrijke verschil is de kortdurende depressie van retinogeniculate synapsen en de korte termijn vergemakkelijking van corticogeniculate synapsen3,5,8. Korte-termijn plasticiteit verwijst naar een fenomeen waarin de synaptische sterkte verandert wanneer de synaps herhaaldelijk actief is binnen een tijdsperiode van enkele milliseconden tot enkele seconden. Synaptic release waarschijnlijkheid is een belangrijke factor onderliggende plasticiteit op korte termijn. Synapsen, met een lage kans op initiële vrijgave, weergave van de korte termijn als gevolg van de opbouw van CA2 + in de presynapse en bijgevolg een toename van de kans op vrijgave wordt waargenomen bij herhaalde activiteit. In tegenstelling, synapsen met hoge release kans meestal weergegeven op korte termijn depressie als gevolg van de uitputting van Ready-releasable blaasjes14. Bovendien, desensibilisatie van postsynaptische receptoren draagt bij aan de korte-termijn plasticiteit in sommige hoge-release waarschijnlijkheid synapsen8,15. Hoge afgifte waarschijnlijkheid en desensibilisatie van α-Amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic zuur (AMPA) receptoren dragen bij aan de prominente kortdurende depressie van retinogeniculate synapsen. Daarentegen is de waarschijnlijkheid van lage afgifte ten grondslag aan de korte termijn versoepeling van de synapsen van het corticogeniculate.
Bij muizen komt het optische kanaal in de dorsale laterale geniculate Nucleus (dLGN) van de caudolaterale plaats, terwijl corticogeniculate vezels de dLGN rostroventraal binnenkomen. De afstand tussen de twee ingangen maakt het mogelijk voor het onderzoek van de individuele eigenschappen van twee zeer verschillende excitatory ingangen die op dezelfde cel. Hier bouwen we voort op en verbeteren we een eerder beschreven dissectie methode waarbij retinogeniculate en corticogeniculate vezels in acute hersen plakjes3bewaard blijven. We beschrijven dan het elektrofysiologisch onderzoek van Relais neuronen en stimulatie van retinogeniculate en corticogeniculate vezels met extracellulaire stimulatie elektroden. Tot slot bieden we een protocol voor het vullen van Relais neuronen met biocytine en daaropvolgende anatomische analyse.

<table><tbody><tr><td>Versterker&nbsp;</td><td>HEKA Elektronik</td><td>EPC 10 USB Double patch clamp versterker</td><td></td></tr><tr><td>Biocytine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B4261-250MG</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>EMSURE</td><td>1.02382.1000</td><td></td></tr><tr><td>choline chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1879-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Confocal Laser Scanning Microscoop</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS SP5</td><td></td></tr><tr><td>CsCl</td><td>EMSURE</td><td>1.02038.0100</td><td></td></tr><tr><td>Cs-gluconaat</td><td>Zelf-bereid</td><td></td><td>Aangezien er geen commercieel Cs-gluconaat was, hebben we het zelf bereid&nbsp;</td></tr><tr><td>D-600&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5644-50MG</td><td>methoxyverapamil hydrochloride</td></tr><tr><td>D-APV&nbsp;</td><td>Biotrend&nbsp;</td><td>BN0085-100</td><td>NMDA-receptor antagonist</td></tr><tr><td>Digitale camera voor microscoop</td><td>Olympus</td><td>XM10</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>SERVA</td><td>11290.02</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbvie</td><td>2594.00.00</td><td>isofluraan</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49159-1KG</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>ROTH</td><td>9105.2</td><td></td></tr><tr><td>High Current Stimulus Isolator</td><td>World Precision Instruments</td><td>A385</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>EMSURE</td><td>1.04936.1000</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>EMSURE</td><td>1.05833.0250</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulatoren</td><td>Luigs &amp; Neumann</td><td>SM7</td><td></td></tr><tr><td>Miroscope</td><td>Olympus</td><td>BX51</td><td></td></tr><tr><td>montage medium&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>P36930</td><td>Prolong Gold Invitrogen</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>ROTH</td><td>3957.1</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>EMSURE</td><td>1.06346.1000</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>EMSURE</td><td>1.06329.1000</td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td>Hilgenberg</td><td>1807502</td><td></td></tr><tr><td>Puller</td><td>Sutter&nbsp;</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>scheermesje&nbsp;</td><td>Personna&nbsp;</td><td>60-0138</td><td></td></tr><tr><td>Semi-automatische Vibratome</td><td>Leica&nbsp; Biosystems</td><td>VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>SR 95531 hydrobromide&nbsp;</td><td>Biotrend&nbsp;</td><td>AOB5680-10</td><td>GABAA-receptor antagonist&nbsp;</td></tr></tbody></table>

elektrofysiologische onderzoeken van retinogeniculate en corticogeniculate synapse functie

Electrophysiological Investigations of Retinogeniculate and Corticogeniculate Synapse Function

De laterale geniculate Nucleus is het eerste relaisstation voor de visuele informatie. Relais neuronen van deze thalame Nucleus integreren input van retinale ganglioncellen en projecteren deze op de visuele cortex. Bovendien ontvangen Relais neuronen top-down excitatie van de cortex. De twee belangrijkste excitatory ingangen naar de relay neuronen verschillen in verschillende aspecten. Elk relais neuron ontvangt input van slechts een paar retinogeniculate synapsen, die grote terminals met veel release sites. Dit wordt weerspiegeld door de relatief sterke excitatie, de Relais neuronen ontvangen, van retinale ganglioncellen. Corticogeniculate synapsen, in tegenstelling, zijn eenvoudiger met weinig release sites en zwakkere synaptische sterkte. De twee synapsen verschillen ook in hun synaptische korte-termijn plasticiteit. Retinogeniculate synapsen hebben een hoge afgifte waarschijnlijkheid en vertonen bijgevolg een kortdurende depressie. In tegenstelling tot, corticogeniculate synapsen hebben een lage afgifte kans. Corticogeniculate vezels passeren de reculaire thalamische kernen voordat ze de laterale geniculate Nucleus binnengaan. De verschillende locaties van de reculaire thalamische kern (rostrally van de laterale geniculate Nucleus) en het optische kanaal (ventro-lateraal van de laterale geniculate Nucleus) maken het stimuleren van corticogeniculate of retinogeniculeren synapsen afzonderlijk mogelijk met extracellulaire stimulatie elektroden. Dit maakt de laterale geniculate Nucleus een ideaal hersengebied waar twee excitatory synapsen met zeer verschillende eigenschappen die zich op hetzelfde celtype bevinden, gelijktijdig kunnen worden bestudeerd. Hier beschrijven we een methode om de opname van Relais neuronen te onderzoeken en om gedetailleerde analyses uit te voeren van het retinogeniculate en het corticogeniculate SYNAPS functie in acute hersen sneden. Het artikel bevat een stap-voor-stap protocol voor het genereren van acute hersen sneden van de laterale geniculate Nucleus en stappen voor het opnemen van activiteit van Relais neuronen door het optisch tractus en corticogeniculate vezels afzonderlijk te stimuleren.

De segment voorbereiding van dLGN met de retinogeniculate en de corticogeniculate trajecten wordt getoond onder een 4x doelstelling (Figuur 2). Axonen van retinale ganglioncellen bundelen elkaar in het optische kanaal (Figuur 2). De stimulerende pipet werd geplaatst op het optische kanaal voor het opwekken van retinogeniculate Synapse-gemedieerde stroom (Figuur 2a) en op Nucleus reticularis thalami v...

Hier presenteren we protocollen voor de bereiding van acute hersen schijfjes met de laterale geniculate Nucleus en het elektrofysiologisch onderzoek van retinogeniculate en corticogeniculate synapsen functie. Dit protocol biedt een efficiënte manier om te bestuderen van de synapsen met de hoge-release en lage-release kans in dezelfde acute hersenen segmenten.

Elektrofysiologische onderzoeken van Retinogeniculate en Corticogeniculate Synapse functie

The lateral geniculate nucleus is the first relay station for the visual information. Relay neurons of this thalamic nucleus integrate input from retinal ...

Hier presenteren we de protocollen voor de voorbereiding van acute hersenplakjes die de laterale geniale kern en elektrofysiologisch onderzoek van retinalegeniculate en corticale geniculate synapsfunctie bevatten. Retinale ganglion cel axonen voer de laterale geniale kern ver weg van de corticale ingangen. Dit maakt de afzonderlijke stimulaties van retinalegeniculate en corticale geniale synapsen mogelijk, die zeer verschillende functionele eigenschappen hebben.Om deze procedure te beginnen, bereiden twee slice kamers, een gevuld met 100 milliliter van de ontleding oplossing en de andere met 100 milliliter opname-oplossing. Plaats de twee bekers in een waterbad op 37 graden Celsius, en bel de oplossingen met carbogen voor ten minste 15 minuten voor de dissectie. Vul vervolgens een plastic bekerglas met 250 milliliter bijna-ijskoude dissectie oplossing, en bel het met carbogen voor ten minste 15 minuten voor gebruik.Vul vervolgens een plastic petrischaaltje met de koude ontledingsoplossing voor hersendissectie. Plaats een stuk filterpapier in het deksel van de petrischaal en vul het met een kleine hoeveelheid ontledingsoplossing. Vervolgens afkoelen van de dissectie kamer van de vibratome.Snijd de huid van het hoofd van staart tot neus, en houd het geopend met de vingers om de schedel bloot te stellen. Om de voorhersenen te verkrijgen, eerst snijd de schedel langs de achterste / voorste middellijn. Snijd dan nog twee keer door de coronale hechting en lambdoïde hechting.Verwijder de schedel tussen de coronale hechting en lambdoïde hechting om de cerebrum bloot te leggen. Snijd de reukbol door en scheid de voorhersenen van de midbrain met een fijn mes. Verwijder de hersenen van de schedel met een dunne spatel, en plaats het op een filterpapier in het deksel van de petrischaal.Om de integriteit van de zintuiglijke en corticale ingangen aan de dorsale laterale geniale kern in de hersenen slice te behouden, scheid de twee hemisferen met een parasagittale snede onder een hoek van drie tot vijf graden. Droog daarna de mediale laterale vlakken van de twee hemisferen door ze op een filterpapier te plaatsen. Lijm ze vervolgens op het snijstadium met een hoek van 10 tot 25 graden van het horizontale vlak.Plaats het podium in het midden van de metalen bufferlade en giet de rest van de ijskoude ontledingsoplossing voorzichtig in de bufferlade. Voer deze stap zorgvuldig uit, omdat te hard gieten de geplakte hersenen zou kunnen verwijderen. Bewaar vervolgens de bufferlade in de met ijs gevulde lade om de lage temperatuur tijdens dissectie te behouden.Sectie 250-micrometer plakjes met een scheermesje met een snelheid van 0,1 millimeter per seconde en een amplitude van een millimeter. Breng de plakjes ongeveer 30 minuten over naar de houdkamer gevuld met zuurstofrijke dissectieoplossing bij 34 graden Celsius en laat de plakjes vervolgens nog 30 minuten herstellen in de opnameoplossing bij 34 graden Celsius. Na herstel, verwijder de slice-holding kamer uit het water bad, en houd de plakjes op kamertemperatuur totdat gebruikt in experimenten.Trek in deze procedure de opnamepipetten met borosilicaatglas haarvaten en een filamenttrekker. Trek vervolgens de stimulerende pipetten met behulp van hetzelfde protocol, maar breek de tip iets na het trekken om de diameter te verhogen. Vul vervolgens de opnamepipetten met intracellulaire oplossing en biocytine, en vul de stimulerende pipetten met opnameoplossing.Plaats vervolgens de plakjes in de opnamekamer en doorsnijd ze continu met zuurstofhoudende opnameoplossing bij kamertemperatuur. Visualiseer de plakjes met een rechtopstaande microscoop uitgerust met IR-DIC videomicroscopie. Controleer alle segmenten en selecteer de segmenten die intacte optische traktaten weergeven.Plaats de stimulatie pipet op de slice voordat patchen van de cel met een opname pipet. Om het netvliesgenieke synapsen te onderzoeken, plaatst u de stimulerende pipet direct op het optische kanaal waar de axonvezels van retinale ganglioncellen worden gebundeld. Om de corticale synapsen te analyseren, plaatst u de stimulerende elektrode op de nucleus reticularis thalami, die rostroventrally naast de dorsale laterale genulende kern is.Zodra de opnamepipet is ondergedompeld in de opnameoplossing, breng een stap van vijf millivolt aan om de pipetweerstand te controleren. Stel het bedrijfpotentieel in op nul millivolt en annuleer het compensatiepotentieel zodat de holdingstroom nul picoampere is. Benader de cel met een opnamepipet terwijl u positieve druk uitoefent.Wanneer de pipet in direct contact staat met het celmembraan, laat u de positieve druk los en stelt u het houdpotentieel op min 70 millivolt. Breng vervolgens een lichte negatieve druk aan om het celmembraan zodanig aan de glazen pipet te kunnen bevestigen dat er een gigaohm-afdichting ontstaat. Compenseer de pipettecapaciteit en open de cel door negatieve drukpulsen toe te passen.Om de synaptische functie te onderzoeken, breng 0,1 milliseconde stroompulsen aan via de stimulatiepipet. Houd de serieweerstand continu in de gaten door een stap van vijf millivolt toe te passen. De serieweerstand kan worden geschat door vijf millivolt te delen door de piekveerlitude van de opgeroepen stroom.Gebruik alleen de cellen met een serieweerstand kleiner dan 20 megaohms voor analyse. Voor biocytine etikettering, onderhouden van de hele cel configuratie voor ten minste vijf minuten om de verspreiding van biocytine in de distale dendrites mogelijk te maken. Verwijder na het opnemen de pipet voorzichtig uit de cel, zodat de soma niet wordt vernietigd.Maak een 24-well celkweekplaat. Vul elk goed met 300 microliters van 4%PFA. Zorg ervoor dat u niets besmet met PFA die in contact zal komen met de te registreren plakjes.Breng de plakjes van de opnamekamer naar de PFA-bevattende plaat met een rubberen pipet en bevestig ze 's nachts. De volgende dag, vervang de PFA met PBS. Houd de plakjes in PBS op vier graden Celsius voor toekomstige verwerking.Om de cellen te bevlekken, was de plakjes drie keer met verse PBS. Blokkeer niet-specifieke bindingsplaatsen door de segmenten in de blokkeringsoplossing gedurende twee uur bij kamertemperatuur op een orbitale shaker uit te broeden. Gooi vervolgens de blokkerende oplossing weg en ontcubeer de plakjes met streptavidin Alexa 568 die 's nachts bij vier graden Celsius in de blokkering wordt verdund op een orbitale shaker.Gooi de volgende dag de antilichaamoplossing weg en was de plakjes drie keer met PBS gedurende 10 minuten elk bij kamertemperatuur op een orbitale shaker. Was vervolgens de plakjes met kraanwater voor de montage. Plaats de plakjes van één muis op één glazen schuif.Zorg ervoor dat de gekleurde cellen aanwezig zijn op het bovenste oppervlak van de plakjes. Absorbeer het water rond de plakjes met weefsels, en laat de plakjes te drogen voor ongeveer 15 minuten. Breng vervolgens twee druppels montagemedium op elk segment aan en monteer een afdeksel op de glijbaan zonder luchtbellen te produceren.Bewaar de gelabelde plakjes op vier graden Celsius na het bekijken van hen met een confocale microscoop. Deze IR-DIC beeld toont de soma van een dorsale laterale geniculate nucleus relais neuron met een punt van de patch pipet. Biocytine vlekken stelt ons in staat om een beeld van de opgenomen neuron te krijgen.Verschillend van interneuronen, die bipolaire morfologie hebben, hebben de relaisneuronen multipolaire dendritische arbors die meer dan drie primaire dendrieten bevatten. Driedimensionale reconstructie van een biocytine-gelabeld relais neuron werd vervolgens gegenereerd, die een radiaal symmetrische dendritische architectuur toont. Bewaar de retinale geniale ingangen en de corticalegeniculate-ingangen in dezelfde hersensegmenten zijn het belangrijkst in dit protocol.Na deze procedure kunnen we bijvoorbeeld ook de remmer-ingangen van de nucleus reticularis thalami op dorsale laterale geniale nucleusneuronen onderzoeken. Vergeet niet om handschoenen te dragen bij de vaststelling van de hersenen plakjes met PFA, als PFA is gevaarlijk.

electrophysiological-investigations-retinogeniculate

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Hier beschrijven we een protocol voor de bereiding van agar-embedded netvlies plakken die geschikt zijn voor elektrofysiologie en Ca2 + beeldvorming. Deze methode laat toe om te studeren lint-type synapsen in het netvlies microcircuits met behulp van directe patch-clamp opnames van enkele presynaptische zenuwuiteinden.

Patch-clamp capaciteitsmetingen en Ca 2 + Imaging bij Single zenuwuiteinden in het netvlies Slices

The video describes the electrophysiological recording of retinogeniculate and corticogeniculate synapses in mouse brain slices. The slices containing the dorsal lateral geniculate nucleus (dLGN) are placed in a recording chamber. A stimulating pipette is positioned on either the optic tract to stimulate retinal ganglion cells (RGCs) and investigate retinogeniculate synapses or the nucleus reticularis thalami to stimulate cortical neurons and investigate corticogeniculate synapses. Upon...

An Electrophysiological Study of Retinogeniculate and Corticogeniculate Synapses in Mouse Brain Slices

This video demonstrates the procedure for studying synaptic efficiency in the lateral entorhinal cortex (LEC) by optogenetically stimulating medial prefrontal cortex (mPFC) axons and recording the responses of pyramidal neurons in the LEC. This method combines patch-clamp recordings with synaptic activation by light stimulation to study synaptic plasticity.

Optogenetic Stimulation and Electrophysiological Recording of Synaptic Events in Rat Brain Slices

Deze video artikel illustreert de set-up, de procedures te cellichamen patchen en hoe u dynamische clamp opnames implementeren van ganglioncellen in zijn geheel-mount muis retinae. Deze techniek maakt het onderzoek de exacte rol prikkelende en remmende synaptische inputs, en hun relatieve omvang en timing neuronale spiking.

Uitvoering Dynamic Klem met Synaptic en kunstmatige geleidingen Mouse in retinale ganglioncellen

Immunohistochemie protocollen worden gebruikt voor de lokalisatie van een specifiek eiwit in het netvlies te bestuderen. Calcium beeldvormende technieken worden gebruikt om calcium dynamiek in retinale ganglioncellen en hun axonen te bestuderen.

Immunohistochemische en Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

Patch-clamp opnames en gelijktijdige intracellulaire biocytinevulling van synaptisch gekoppelde neuronen in acute herfsneden maken een gecorreleerde analyse van hun structurele en functionele eigenschappen mogelijk. Het doel van dit protocol is om de essentiële technische stappen van elektrofysiologisch opnemen van neuronale microcircuits en hun daaropvolgende morfologische analyse te beschrijven.

Elektrofysiologische en morfologische analyse van neuronale Microschake in Acute Brain Slices Met behulp Paired Patch-Clamp Recordings

Dit protocol beschrijft gelijktijdige meting van elektroretinogram en visueel geëvokte potentialen bij geanesthetiseerde ratten.

Gelijktijdig opnemen van Electroretinografie en Visual evoked potentials in verdoofde ratten

We ontwikkelden een horizontale slice voorbereiding van de zoogdierretina volwassene met het vlak van snijden parallel aan het netvliesoppervlak. Dendritische gebied van nonradially georiënteerde retinale neuronen werden niet afgekapt, waardoor de studie van de signaalverwerking met patch-klem en beeldvormende technieken.

Voorbereiding van de Horizontale Schijfjes van Adult Mouse Retina voor elektrofysiologisch onderzoek

In dit artikel bespreken we drie hersenen preparaten die worden gebruikt voor het opnemen van de klem van het flard van hele cel om te studeren het retinotectal circuit van Xenopus laevis kikkervisjes. Elk preparaat, met zijn eigen specifieke voordelen, draagt bij aan de experimentele werkwillig van de Xenopus tadpole als een model om te studeren van neurale functie.

Preparaten en protocollen voor de hele cel Patch klem opname van Xenopus laevis Tectal neuronen

Hier presenteren we een protocol dat virale transductie van discrete hersengebieden beschrijft met optogenetische constructies om synapsspecifieke elektrofysiologische karakterisering in acute hersenplakken van knaagdieren mogelijk te maken.

Ex Vivo | Optogenetische ondervraging van synaptische transmissie en plasticiteit op lange afstand van mediale prefrontale cortex naar laterale entorhinale cortex

Hier presenteren we twee protocollen voor de registratie van micro-elektrocorticografie met hoge dichtheid (μEcoG) bij ratten en muizen, inclusief chirurgische, implantatie- en registratiemethoden. μECoG-opnames worden uitgevoerd in combinatie met laminaire polytrode-opname in de auditieve cortex van de rat of met optogenetische manipulatie van neurale activiteit in de somatosensorische cortex van de muis.

Multischaalonderzoek van corticale verwerking door integratie van laminaire polytrodes en optogenetica met micro-elektrocorticografie bij knaagdieren

Leer elektrofysiologische methoden voor het onderzoeken van retinogeniculate en corticogeniculate synapsfunctie in acute hersensneden van de nucleus geniculatus lateralis. Deze techniek maakt gescheiden stimulatie van visuele en corticale inputs mogelijk.

Elektrofysiologische onderzoeken van Retinogeniculate en Corticogeniculate Synapse functie

Meer video's verkennen