Name: Enzymatische synthese van Epoxidized metabolieten van docosahexaeenzuur, Eicosapentaeenzuur en arachidonzuur zuren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-28T15:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 5 s
Description: Leer de enzymatische synthese van enantiopure epoxyvetzuren uit DHA, EPA en arachidonzuur met behulp van het cytochroom P450-enzym BM3. Deze methode biedt een snelle, kosteneffectieve oplossing voor onderzoek naar biologische mechanismen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt gefinancierd door R00 ES024806 (nationale instituten van gezondheid), DMS-1761320 (de nationale stichting van de wetenschap) en de fondsen van het opstarten van de Universiteit van de staat van Michigan. De auteurs willen Dr. jun Yang (Universiteit van Californië bij Davis) en Leonora Karchalla (de Universiteit van de staat van Michigan) voor hulp met optimalisering van de enzymatische reactie, en Dr. Tony Schilmiller (MSU massaspectrometrie en metabolomics faciliteit) bedanken voor hulp bij HRMS data acquisitie.

Let op: Raadpleeg alle relevante veiligheidsinformatiebladen (MSDS) voordat u de vermelde chemicaliën gebruikt.
1. expressie van wild-type BM3
<ol><li>Inoculeren pBS-BM3 transfected DH5α E. coli (een gulle donatie van Dr. F. Ann Walker) in 5 ml steriele lb bouillon met 0,5 mg AMPICILLIN toegevoegd in een 20 ml cultuur buis.</li>
	<li>Incubeer de cel cultuur in een shaker op 37 ˚ C voor 24 uur bij 200 rpm. Voeg de nachtelijke starter cultuur (5 mL) en 100 mg AMPICILLIN toe aan 1 L steriele LB Bouillon in een Fernbach of erlenmeyer kolf. Schud bij 37 ˚ C voor 6 u bij 200 rpm, dan bij 30 ˚ C voor 18 h bij 200 rpm.</li>
	<li>Verzamel en centrifugeer de cultuur van de cel bij 4 ˚ C voor 10 min bij 1.000 x g. Gooi de bovendrijvende en bewaar de cel pellet bij-78 ˚ C tot enzym zuivering. Opmerking: de bovendrijvende kan worden ofwel chemisch gesteriliseerd door de behandeling met bleekmiddel of gesteriliseerd met behulp van een autoclaaf en vervolgens goot de afvoer.</li>
</ol>2. zuivering van BM3.
<ol><li>
Cel Lysis
	<ol>
<li>Ontdooi de cel pellet op ijs en opnieuw op te schorten in 40 mL ijskoude (4 ˚ C) oplosbaar maken buffer (10 mM Tris, 0,01 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF;), 0,01 mM EDTA; pH 7,8). Let op: PMSF is giftig door contact.</li>
		<li>Terwijl op ijs, bewerk de cellen voor 1 min met een ultrasone homogeniseer (uitgangsvermogen instelling 10, duty 100%), gevolgd door een 1 min pauze op ijs om de cellen te lyse. Herhaal deze procedure 6 keer. Centrifugeer de cel lysate bij 4 ˚ C voor 30 min bij 11.000 x g aan pellet cel puin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Affiniteitchromatografie
	<ol>
<li>Bereid een sterke anionen uitwisselings Chromatografiekolom (Zie lijst van materialen; diameter: 2,8 cm x 6 cm, kolom volume: 37 ml) door het wassen met 5 kolom VOLUMES (CV) van buffer a (10 mm tris, pH 7,8) bij 4 ˚ C.</li>
		<li>Voeg de cel lysaten aan geëquilibreerd kolom en was de kolom met 3 CV van koude buffer A. elueer de BM3 door het wassen van de kolom met koude buffer B (10 mM Tris, 600 mM NaCl, 6 CV).</li>
		<li>Verzamel de roodbruine eluens Fractie. Als het eiwit niet onmiddellijk wordt gebruikt, meng het met een gelijk volume van glycerol en flits bevriezen met vloeibare stikstof. Bewaar de bevroren oplossing bij-78 ˚ C.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. epoxidatie van DHA door BM3
<ol><li>Bereid de reactie voor door 0,308 g (0,940 mmol) van DHA in 18,8 mL dimethylsulfoxide (DMSO) toe te voegen aan 2 L roer reactiebuffer (0,12 M kaliumfosfaat, 5 mM MgCl2, pH 7,4) samen met 20 nm van het ontdooide BM3 enzym. De enzym concentratie kan door de koolstofmonoxide/dithionite spectrale analysemethode19worden bepaald.</li>
	<li>Terwijl de oplossing is roeren, beginnen met de reactie door toevoeging van 1 equivalent van NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide fosfaat verlaagd, Tetra natriumzout, 0,808 g, 0,940 mmol) opgelost in reactiebuffer. Roer de reactie voor 30 min, terwijl borrelende lucht door de reactiemengsel met een lucht gevulde ballon aan een spuit en naald.</li>
	<li>Met behulp van een spectrofotometer (Zie tabel van materialen), controleer dan de absorptie van het reactiemengsel op 340 nm om te bepalen of NADPH is uitgeput. Als er geen resterende absorptie is die het verbruik van NADPH aangeeft, is de reactie compleet. Nota: typisch, is de reactie volledig na 30 min.</li>
	<li>Lest de reactiemengsel door langzaam toe te voegen 1 M oxaalzuur zuur, dropwise, totdat de pH van de oplossing bereikt 4.</li>
</ol>4. extractie van de toezichthouder
<ol><li>Extract de gebluste Bufferoplossing met 2 L van diethyl ether (watervrij, peroxide-vrij) 3 keer. Verzamel de ether laag (6 L) en droog met watervrij magnesiumsulfaat (MgSO4).</li>
	<li>Filtreer de MgSO4 van de oplossing en concentreer de gedroogde ether laag op een roterende verdamper om het ruwe informatica residu op te leveren.</li>
	<li>Zuiver het residu door Flash Kolomchromatografie (een 40 g silica cartridge is voldoende). Begin bij 10% ethylacetaat (EtOAc) in hexaan en helling tot 60% EtOAc in hexaan meer dan 22 min. Nota: drie belangrijke pieken worden verkregen en worden verzameld, eluting in de orde van 1. ongereageerd DHA; 2. mengsel van EDP-isomeren; en 3. di-epoxide (normale over-oxidatieproducten (Zie Figuur 1)).</li>
	<li>Combineer de fracties en concentreer ze op de roterende verdamper. Van dit voorbeeld, 0,074 g, (24%) van ongereageerde DHA, 0,151 g (47%) van de EDP-isomeren, en 0,076 g, (22%) van di-epoxide werden verkregen.</li>
</ol>5. verestering van de toezichthouder, scheiding van 16 (en), 17 (r)-en 19 (s), 20 (r)-EDP, en verzeping van esters
Let op: Trimethylsilyldiazomethane (TMS-Diazomethaan) is zeer giftig door zowel contact en inhalatie. Gebruik alleen in een rook kap met de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen.
<ol><li>Verdun de epoxiden (0,151 g, 0,435 mmol) in een kolf met ronde bodem of een kleine flacon met 2 mL watervrij methanol (MeOH) en 3 mL vrij tolueen; Voeg een roerstaaf toe, en voeg TMS-Diazomethaan (1,2 Molar equivalenten, of 0,26 mL van een oplossing van 2 M in hexaan) toe onder argon.</li>
	<li>Wacht 10 min en voeg extra TMS-Diazomethaan (0,050 mL) toe tot een bleke gele kleur blijft.</li>
	<li>Na 30 minuten, zorgvuldig concentreren het mengsel met behulp van de roterende verdamper en zuiveren het residu door Flash Kolomchromatografie. Elueer met 4% EtOAc in hexaan (met behulp van een 40 g silica gel kolom of patroon) voor 22 min. In dit voorbeeld, 19, 20-EDP methylester (0,116 g, 74%) en 16, 17-EDP methylester (0,029 g, 19%), werden verkregen als duidelijke oliën (totale opbrengst, 93%).</li>
	<li>Verzamel de fracties met de gezuiverde EDP methylester regioisomers. 19 (s), 20 (r)-EDP methylester elutes eerst, gevolgd door 16 (s), 17 (r)-EDP methylester.</li>
	<li>Indien er gemengde fracties blijven (met beide isomeren; kan worden beoordeeld door Thin-layer chromatografie (TLC) in 8:1 hexaan/EtOAc en gekleurd met kalium kaliumpermanganaat (KMnO4)), re-chromatografie ze met hetzelfde oplosmiddel systeem als voorheen.</li>
	<li>Concentreer de fracties met de individuele regioisomers. Nota: op dit punt, kunnen de identiteit en de zuiverheid door NMR (gebruikend CDCl3 als oplosmiddel worden beoordeeld; Zie de legenda voor Figuur 2).</li>
	<li>Om individuele EDP methylester regioisomers aan hun zure vormen om te zetten, Verdun de EDP Ester in THF: water (ongeveer 0,7 mL/0.1 mmol van Ester). Voeg 2 M waterige LiOH (3 molaren equivalenten) en roer 's nachts. Opmerking: volledigheid van de reactie kan worden beoordeeld door TLC, met behulp van 3:1 hexaan/EtOAc, kleuring met KMnO4; het product heeft een retentie factor van ~ 0,3.</li>
	<li>Doven de reactie langzaam met vorm zuur, totdat de pH van het mengsel bereikt 3-4. Voeg water en ethylacetaat (1-2 mL/0.100 mmol van Ester) en scheid de lagen. Haal de water laag met EtOAc (3 x 5 mL), was met verzadigde pekel (NaCl) oplossing, en droog de EtOAc laag over watervrij natriumsulfaat (na2so4).</li>
	<li>Concentreer de ethylacetaat oplossing gebruikend een roterende verdamper, voeg hexaan (10 mL) toe en concentreer me opnieuw. Herhaal dit tweemaal tot azeotropically verwijderen residuele vorm zuur. Zuiver het residu door de Kolomchromatografie van de flits, eluting met 10-30% EtOAc meer dan 15 min.</li>
	<li>Concentreer de gewenste fracties en droog in vacuüm om het gezuiverde zuur te veroorloven. Opmerking: in dit stadium, enantiomeric zuiverheid kan worden beoordeeld (door chirale HPLC, zie de legendes voor Figuur 3 - Figuur 4 voor kolom en voorwaarden). Chemische zuiverheid kan worden beoordeeld door C18 (achiral) HPLC (Zie tabel van materialen en referentie 14).</li>
</ol>

<ol><li>Campbell, W. B., Gebremedhin, D., Pratt, P. F., Harder, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+epoxyeicosatrienoic+acids+as+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Identification of epoxyeicosatrienoic acids as endothelium-derived hyperpolarizing factors.</a> Circulation Research. 78, 415-423 (1996).</li>
<li>Ulu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+omega-3+epoxide+of+docosahexaenoic+acid+lowers+blood+pressure+in+angiotensin-II-dependent+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">An omega-3 epoxide of docosahexaenoic acid lowers blood pressure in angiotensin-II-dependent hypertension.</a> Journal of Cardiovascular Pharmacology. 64, 87-99 (2014).</li>
<li>Ye, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+p-450+epoxygenase+metabolites+of+docosahexaenoate+potently+dilate+coronary+arterioles+by+activating+large-conductance+calcium-activated+potassium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Cytochrome p-450 epoxygenase metabolites of docosahexaenoate potently dilate coronary arterioles by activating large-conductance calcium-activated potassium channels.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 303, 768-776 (2002).</li>
<li>Imig, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epoxyeicosatrienoic+acids%2C+hypertension%2C+and+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Epoxyeicosatrienoic acids, hypertension, and kidney injury.</a> Hypertension. 65, 476-682 (2015).</li>
<li>Capozzi, M. E., Hammer, S. S., McCollum, G. W., Penn, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epoxygenated+fatty+acids+inhibit+retinal+vascular+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Epoxygenated fatty acids inhibit retinal vascular inflammation.</a> Scientific Reports. 6, 39211(2016).</li>
<li>Zou, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereospecific+effects+of+epoxyeicosatrienoic+acids+on+renal+vascular+tone+and+K%28%2B%29-channel+activity%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Stereospecific effects of epoxyeicosatrienoic acids on renal vascular tone and K(+)-channel activity.</a> American Journal of Physiology. 270, F822-F832 (1996).</li>
<li>Lauterbach, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytochrome+P450-dependent+eicosapentaenoic+acid+metabolites+are+novel+BK+channel+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Cytochrome P450-dependent eicosapentaenoic acid metabolites are novel BK channel activators.</a> Hypertension. 39, 609-613 (2002).</li>
<li>Clarke, T. C., Black, T. I., Stussman, B. J., Barnes, P. M., Nahin, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aClarke%2C+TC+%22Trends+in+the+use+of+complementary+health+approaches+among+adults%3A+United+States%2C+2002%E2%80%932012%22">Trends in the use of complementary health approaches among adults: United States, 2002–2012</a>. , National Center for Health Statistics. Hyattsville, MD. (2015).</li>
<li>Mozaffarian, D., Wu, J. H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Omega-3+fatty+acids+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+College+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Omega-3 fatty acids and cardiovascular disease.</a> Journal of the American College of Cardiology. 58, 2047-2067 (2011).</li>
<li>Shearer, G., Harris, W., Pederson, T., Newman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+omega-3+oxylipins+in+human+plasma+in+response+to+treatment+with+omega-3+acid+ethyl+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Detection of omega-3 oxylipins in human plasma in response to treatment with omega-3 acid ethyl esters.</a> Journal of Lipid Research. 51, 2074-2081 (2010).</li>
<li>Ostermann, A. I., Schebb, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+omega-3+fatty+acid+supplementation+on+the+pattern+of+oxylipins%3A+a+short+review+about+the+modulation+of+hydroxy-%2C+dihydroxy-%2C+and+epoxy-fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Food+%26+Function%22%5BJournal%5D)">Effects of omega-3 fatty acid supplementation on the pattern of oxylipins: a short review about the modulation of hydroxy-, dihydroxy-, and epoxy-fatty acids.</a> Food & Function. 8, 2355-2367 (2017).</li>
<li>Khan, M. A., Wood, P. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKhan%2C+MA+%22Method+for+the+synthesis+of+DHA%22">Method for the synthesis of DHA</a>. , WO2012126088A1 (2012).</li>
<li>Nanba, Y., Shinohara, R., Morita, M., Kobayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereoselective+synthesis+of+17%2C18-epoxy+derivative+of+EPA+and+stereoisomers+of+isoleukotoxin+diol+by+ring-opening+of+TMS-substituted+epoxide+with+dimsyl+sodium%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+and+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Stereoselective synthesis of 17,18-epoxy derivative of EPA and stereoisomers of isoleukotoxin diol by ring-opening of TMS-substituted epoxide with dimsyl sodium.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 15, 8614-8626 (2017).</li>
<li>Cinelli, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+synthesis+and+chemical+inversion+provide+both+enantiomers+of+bioactive+epoxydocosapentaenoic+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Enzymatic synthesis and chemical inversion provide both enantiomers of bioactive epoxydocosapentaenoic acids.</a> Journal of Lipid Research. 59, 2237-2252 (2018).</li>
<li>Falck, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical%2C+enantiospecific+syntheses+of+14%2C15-EET+and+leukotoxin+B+%28vernolic+acid%29%5BTitle%5D)+AND+%22Tetrahedron+Letters%22%5BJournal%5D)">Practical, enantiospecific syntheses of 14,15-EET and leukotoxin B (vernolic acid).</a> Tetrahedron Letters. 41, 4131-4133 (2001).</li>
<li>Celik, A., Sperandio, D., Speight, R. E., Turner, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enantioselective+epoxidation+of+linolenic+acid+catalyzed+by+cytochrome+P450BM3+from+Bacillus+megaterium%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+and+Biomolecular+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Enantioselective epoxidation of linolenic acid catalyzed by cytochrome P450BM3 from Bacillus megaterium.</a> Organic and Biomolecular Chemistry. 3, 1688-2690 (2005).</li>
<li>Capdevila, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+highly+stereoselective+oxidation+of+polyunsaturated+fatty+acids+by+cytochrome+P450BM-3%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">The highly stereoselective oxidation of polyunsaturated fatty acids by cytochrome P450BM-3.</a> Journal of Biological Chemistry. 271, 22663-22671 (1996).</li>
<li>Lucas, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereoselective+epoxidation+of+the+last+double+bond+of+polyunsaturated+fatty+acids+by+human+cytochromes+P450%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Stereoselective epoxidation of the last double bond of polyunsaturated fatty acids by human cytochromes P450.</a> Journal of Lipid Research. 51, 1125-1133 (2010).</li>
<li>Guengerich, F. P., Martin, M. V., Sohl, C. D., Cheng, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cytochrome+P450+and+NADPH-cytochrome+P450+reductase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Measurement of cytochrome P450 and NADPH-cytochrome P450 reductase.</a> Nature Protocols. 4, 1245-1251 (2009).</li>
<li>Cayman Chemical, 19,20-EpDPA. , 
 <a target="_blank" href="https://www.caymanchem.com/product/10175">https://www.caymanchem.com/product/10175</a> (2019).</li>
<li>Graham-Lorence, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+active+site+substitution%2C+F87V%2C+converts+cytochrome+P450+BM-3+into+a+regio-+and+stereoselective+%2814S%2C+15R%29-arachidonic+acid+epoxygenase%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">An active site substitution, F87V, converts cytochrome P450 BM-3 into a regio- and stereoselective (14S, 15R)-arachidonic acid epoxygenase.</a> Journal of Biological Chemistry. 272, 1127-1135 (1996).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te onthullen.

We presenteren hier een operationeel eenvoudige en kosteneffectieve methode voor de voorbereiding van de twee meest voorkomende epoxy metabolieten van DHA-19, 20 en 16, 17-EDP. Deze epoxy vetzuren kunnen worden bereid in zeer enantiopure (als hun S, R-isomeren) vorm met behulp van wild-type BM3 enzym. Hieronder vindt u een aantal kritieke punten die kunnen worden gebruikt voor het oplossen van problemen, en de uitbreiding van onze methode tot de voorbereiding van enantiopure epoxy metabolieten van AA en EPA....

Als belangstelling voor de rol die meervoudig onverzadigde vetzuren (met name omega-3 en omega-6 meervoudig onverzadigde vetzuren) spelen in de menselijke biologie is gegroeid in de afgelopen jaren, hebben onderzoekers kennis genomen van het brede scala van aantrekkelijke voordelen die hun metabolieten Vertonen. In het bijzonder, epoxy vetzuur metabolieten geproduceerd door de cytochroom P450 klasse van enzymen zijn een groot punt van focus. Bijvoorbeeld, spelen vele PUFA epoxiden, met inbegrip van epoxyeicosatrienoic zuren (eet's), epoxydocosapentaenoic zuren (toezichthouder) en epoxyeicosatetraenoic zuren (EEQs), een kritieke rol in regelgeving van bloeddruk en ontsteking1,2 , 3 , 4 , 5. interessant is dat de specifieke enantiomeren en regioisomers van AA en EPA epoxiden is bekend dat verschillende effecten hebben op vasoconstrictie6,7. Terwijl de fysiologische effecten van de enantiomeren en regioisomers van Eet's en EEQs zijn gedocumenteerd, is er weinig bekend over het effect van de analoge epoxydocosapentaenoic zuren (toezichthouder) gevormd uit DHA. Wijdverbreid gebruik van visolie8, die rijk is aan zowel EPA en DHA, heeft ook geroerd belangstelling voor de toezichthouder9. De voordelen van deze supplementen zijn vermoedelijk deels te wijten aan de downstream-DHA metabolieten (16, 17-EDP en 19, 20-EDP is de meest voorkomende), omdat in vivo niveaus van de toezichthouder coördineren zeer goed met de hoeveelheid DHA in de voeding10, 11.
Het bestuderen van de mechanismen en doelstellingen van deze epoxy vetzuren door metabolomics, chemische biologie, en andere methoden heeft bewezen uitdagend, deels omdat ze bestaan als mengsels van regio-en stereo-isomeren, en een methode voor het verkrijgen van zuivere hoeveelheden van de enantiomeren en regioisomers is vereist. Conventionele middelen voor het chemisch synthetiseren van deze verbindingen zijn ondoeltreffend gebleken. Het gebruik van peroxyzuren zoals META-Chloorperoxybenzoëzuur zuur voor epoxidatie heeft vele nadelen, in het bijzonder het gebrek aan epoxidatie selectiviteit, die dure en nauwgezette reiniging van individuele regioisomers en enantiomeren noodzakelijk maakt. Totale synthese van DHA en EPA metabolieten is mogelijk, maar ook lijdt aan nadelen die het onpraktisch maken voor grootschalige synthese, zoals hoge kosten en lage opbrengsten12,13. De efficiënte algemene productie kan met enzymatische synthese worden bereikt, aangezien de enzymatische reacties regio-en Stereoselectieve14zijn. Studies tonen aan dat enzymatische epoxidatie van AA en EPA (met BM3) is zowel regioselective en enantioselectieve15,16,17,18, maar deze procedure is niet getest met DHA, of op een grote Schaal. Het algemene doel van onze methode was om deze chemoenzymatic epoxidatie te schalen en te optimaliseren om snel significante hoeveelheden zuivere epoxy vetzuren als hun individuele enantiomeren te produceren. Met behulp van de hier gepresenteerde methode, onderzoekers hebben toegang tot een eenvoudige en kosteneffectieve strategie voor de synthese van de toezichthouder en andere PUFA epoxy metabolieten.

<table><tbody><tr><td>Ammonium Bicarbonate</td><td>Sigma</td><td>9830</td><td>NA</td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>GoldBio</td><td>A30125</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anhydrous magnesium sulfate</td><td>Fisher Scientific</td><td>M65-3</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anhydrous methanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>322515</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anhydrous sodium sulfate</td><td>Fisher Scientific</td><td>S421-500</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anhydrous toluene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>244511</td><td>NA</td></tr><tr><td>Arachidonic Acid (AA)</td><td>Nu-Chek Prep</td><td>U-71A</td><td>Luchtgevoelig.&nbsp;</td></tr><tr><td>Diethyl Ether</td><td>Sigma</td><td>296082</td><td>NA</td></tr><tr><td>DMSO (molecular biology grade)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td>NA</td></tr><tr><td>Docosahexaenoic Acid (DHA)</td><td>Nu-Chek Prep</td><td>U-84A</td><td>Luchtgevoelig.&nbsp;</td></tr><tr><td>EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid)</td><td>Invitrogen</td><td>15576028</td><td>NA</td></tr><tr><td>Eicosapentaenoic Acid (EPA)</td><td>Nu-Chek Prep</td><td>&nbsp;U-99A</td><td>Luchtgevoelig.&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethyl acetate</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>34858</td><td>NA</td></tr><tr><td>Flash column cartridges 25, 40, 4, 12 g sizes</td><td>Fisher Scientific</td><td>145170203, 145154064, 5170200</td><td>Alternatief kan conventionele kolomchromatografie worden gebruikt</td></tr><tr><td>Formic acid (HPLC Grade)</td><td>J.T. Baker</td><td>0128-01</td><td>NA</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G7757</td><td>NA</td></tr><tr><td>Hexanes</td><td>VWR</td><td>BDH24575</td><td>NA</td></tr><tr><td>LB Broth</td><td>Sigma</td><td>L3022</td><td>NA</td></tr><tr><td>Lithium hydroxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>442410</td><td>NA</td></tr><tr><td>Magnesium chloride</td><td>Fisher Scientific</td><td>2444-01</td><td>NA</td></tr><tr><td>Methanol (HPLC grade)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860-41-R</td><td>NA</td></tr><tr><td>NADPH Tetrasodium Salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>481973</td><td>Luchtgevoelig.&nbsp;</td></tr><tr><td>Oxalic acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>194131</td><td>NA</td></tr><tr><td>pBS-BM3 transfected DH5&alpha; E. coli</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>PMSF (phenylmethanesulfonyl fluoride)</td><td>Sigma</td><td>P7626</td><td>Toxisch!</td></tr><tr><td>Potassium Permanganate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223468</td><td>Voor TLC-kleuring.&nbsp;</td></tr><tr><td>Potassium phosphate dibasic</td><td>Sigma</td><td>795496</td><td>NA</td></tr><tr><td>Potassium phosphate monobasic</td><td>Sigma</td><td>795488</td><td>NA</td></tr><tr><td>Q Sepharose Fast Flow resin (GE Healthcare life sciences)</td><td>Fisher Scientific</td><td>17-0515-01</td><td>Voor anionenuitwisselingszuivering van enzymen</td></tr><tr><td>Sodium Chloride</td><td>Sigma</td><td>71376</td><td>NA</td></tr><tr><td>Tetrahydrofuran, anhydrous</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>186562</td><td>NA</td></tr><tr><td>TMS-Diazomethane (2.0 M in hexanes)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>362832</td><td>Zeer giftig.&nbsp;</td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>GoldBio</td><td>T-400</td><td>NA</td></tr><tr><td>Ook noodzakelijk:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Automatisch flash-zuiveringssysteem (we gebruikten een Buchi Reveleris X2)&nbsp;</td><td>Buchi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C18 HPLC-kolom (Zorbax Eclipse XDB-C18)</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge met een capaciteit van 10.000 x g</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chirale HPLC-kolom (Lux cellulose-3), 250 x 4,6 mm, 5 &micro;M, 1000 &Aring;)</td><td>Phenomenex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Algemene chemische benodigdheden: een 2 L scheidingsnelheid, bekers en Erlenmeyerkolven met een capaciteit van 1000-2000 L, 20 mL flacons, HPLC-flacons, kleine ronde kolven met bodem en roerstaafjes.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC (we gebruiken een Shimadzu Prominence LC-20AT analytische pomp en SPD-20A UV-vis detector</td><td>Shimadzu</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop 2000 Spectrophotometer&nbsp;</td><td>Thermo-Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMR</td><td>NMR: Agilent DD2-spectrometer (500 MHz)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rotorevap</td><td>Buchi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonische ontmantelaar of ultrasone homogenisator</td><td>Cole-Parmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

enzymatische synthese van epoxidized metabolieten van docosahexaeenzuur, eicosapentaeenzuur en arachidonzuur zuren

Enzymatic Synthesis of Epoxidized Metabolites of Docosahexaenoic, Eicosapentaenoic, and Arachidonic Acids

De epoxidized metabolieten van verschillende meervoudig onverzadigde vetzuren (Pufa's), genoemd epoxy vetzuren, hebben een breed scala van rollen in de menselijke fysiologie. Deze metabolieten worden endogene geproduceerd door de cytochroom P450 klasse van enzymen. Vanwege hun uiteenlopende en krachtige biologische effecten, is er veel belang bij het bestuderen van deze metabolieten. Het bepalen van de unieke rollen van deze metabolieten in het lichaam is een moeilijke taak, aangezien de epoxy vetzuren eerst in significante hoeveelheden en met hoge zuiverheid moeten worden verkregen. Het verkrijgen van verbindingen uit natuurlijke bronnen is vaak arbeidsintensief, en oplosbare epoxide hydrolasen (sEH) snel hydroliseer de metabolieten. Aan de andere kant, het verkrijgen van deze metabolieten via chemische reacties is zeer inefficiënt, als gevolg van de moeilijkheid van het verkrijgen van pure regioisomers en enantiomeren, lage opbrengsten, en uitgebreide (en dure) zuivering. Hier presenteren we een efficiënte enzymatische synthese van 19 (s), 20 (r)-en 16 (s), 17 (r)-epoxydocosapentaenoic zuren (toezichthouder) van DHA via epoxidatie met BM3, een bacteriële CYP450 enzym geïsoleerd oorspronkelijk uit Bacillus megaterium (dat is gemakkelijk uitgedrukt in Escherichia coli). Karakterisering en bepaling van de zuiverheid wordt uitgevoerd met nucleaire magnetische resonantie spectroscopie (NMR), high-performance vloeistofchromatografie (HPLC), en massaspectrometrie (MS). Deze procedure illustreert de voordelen van enzymatische synthese van PUFA epoxy metabolieten, en is van toepassing op de epoxidatie van andere vetzuren, met inbegrip van arachidonzuur zuur (AA) en Eicosapentaeenzuur acid (EPA) voor de productie van de analoge epoxyeicosatrienoic zuren (Eet's) en epoxyeicosatetraenoic zuren (EEQs), respectievelijk.

De flitser kolom chromatogram (uitgevoerd met behulp van een geautomatiseerde flits zuivering systeem zoals hieronder beschreven) verkregen na zuivering van het ruwe mengsel van enzymatische epoxidatie is weergegeven in Figuur 1. Na verestering en scheiding van regioisomers, zuivere 16 (s), 17 (r)-EDP en 19 (s), 20 (r)-EDP methylesters werden verkregen. Typisch, zijn zij aanwezig in een benaderende 1:4 aan 1:5 verhouding, m...

Wij presenteren een methode nuttig voor grootschalige enzymatische synthese en zuivering van specifieke enantiomeren en regioisomers van epoxiden van arachidonzuur zuur (AA), docosahexaeenzuur zuur (DHA), en Eicosapentaeenzuur zuur (EPA) met het gebruik van een bacteriële cytochroom P450 enzym (BM3).

Enzymatische synthese van Epoxidized metabolieten van docosahexaeenzuur, Eicosapentaeenzuur en arachidonzuur zuren

The epoxidized metabolites of various polyunsaturated fatty acids (PUFAs), termed epoxy fatty acids, have a wide range of roles in human physiology. These ...

Dus ons protocol stelt ons in staat om enantiopure epoxy vetzuren voor te bereiden, en deze methode zou kunnen helpen om onderzoek te doen naar de mechanismen waarmee deze metabolieten in het lichaam werken. Historisch gezien zijn zuivere epoxyvetzuren zeer moeilijk te verkrijgen. Ons protocol is eenvoudig, snel, kosteneffectief en stelt ons in staat om grote hoeveelheden van deze metabolieten voor te bereiden.Ja, we hebben een protocol voor DHA ontwikkeld, maar het werkt ook erg goed voor EPA en spinragisch zuur. Werk snel, omdat sommige van de reagentia luchtgevoelig zijn, met name DHA en NADPH, en zorg ervoor dat u alles van tevoren koppelt, zodat de installatie eenvoudig is. Wees je ook bewust van de gevaren.Ons protocol maakt gebruik van technieken in zowel enzymologie als organische chemie. Visualisatie is van cruciaal belang om lezers en kijkers te helpen die niet bekend zijn met de gespecialiseerde technieken op deze gebieden. Gebruik om een steriele lus of pipet te inenten die is ondergedompeld in de glycerolvoorraad pBS-BM3-transfected DH5-alpha E.coli in vijf milliliter steriele LB-bouillon aangevuld met 0,5 milligram ampicilline.Broed de celcultuur in een shaker bij 37 graden Celsius gedurende 24 uur bij 200 rpm. Voeg vervolgens de startercultuur van vijf milliliter en 100 milligram ampicilline toe aan een liter steriele LB-bouillon in een Erlenmeyer-kolf. Schud bij 37 graden Celsius gedurende zes uur bij 200 rpm, dan bij 30 graden Celsius gedurende 18 uur bij 200 rpm.Daarna verzamelt u de celkweek in centrifugebuizen en centrifugeert u de celkweek gedurende 10 minuten bij 1.000 g. Giet de supernatant in een andere fles. Ontsmetting met bleekwater of met behulp van de autoclave, en bewaar de cel pellet op min 78 graden Celsius tot enzymzuivering.Om cellyse uit te voeren, ontdooi eerst de celpellet op ijs en wordt deze opnieuw opgetrokken in 40 milliliter ijskoude oplosbuffer met Tris, PMSF en EDTA. Terwijl op ijs, sonicate de cellen voor een minuut met een ultrasone homogenisator, met een output power setting van 10 en plicht van 100, gevolgd door een pauze van een minuut op ijs om de cellen lyse. Herhaal deze procedure zes keer.Centrifugeer het cellysaat op vier graden Celsius gedurende 30 minuten op 11.000 g om het celpuin te pelleteren. Om affiniteit chromatografie uit te voeren, in een koude kamer of koelkast met een schuifdeur, op vier graden Celsius, eerst een sterke anion uitwisseling chromatografie kolom door het wassen van de hars met vijf kolom volumes van buffer A van 10-millimolar Tris op pH 7.8. Voeg vervolgens de supernatant van de cellysaten toe aan de geëquilibreerde kolom en was de kolom met drie kolomvolumes koude buffer A.Dan, ontwijk de BM3 door de kolom te wassen met zes kolomvolumes koude buffer B van 10-millimolar Tris en 600 millimolar natriumchloride.Verzamel de roodbruine eluentfractie. Als het eiwit niet onmiddellijk wordt gebruikt, meng het met een gelijk volume van glycerol, en flash-freeze met vloeibare stikstof. Bewaar de bevroren oplossing op min 78 graden Celsius.Om epoxidatie van DHA uit te voeren, bepaalt u eerst de concentratie van het ontdooide BM3-enzym, volgens de koolmonoxide dithionite spectrale testmethode. Voeg vervolgens in een beker met twee liter reactiebuffer op een magnetische roerplaat 0,94 millimol DHA toe die wordt verdund in 18,8 milliliter DMSO en het BM3-enzym verdund tot 20 nanomolar. Terwijl de oplossing is roeren, beginnen met de epoxidatie reactie door het toevoegen van 8,7 milliliter van de reactie buffer met 0,94 millimolen NADPH.Roer de reactie gedurende 30 minuten terwijl borrelende lucht in het reactiemengsel met een luchtgevulde ballon bevestigd aan een spuit en naald geplakt aan de binnenkant van het bekerglas. Daarna, het opstellen van een microliter van de reactie mengsel, en zet het in een NanoDrop spectrofotometer om de absorptie op 340 nanometer te meten. Gebruik water als de lege.Als er geen resterende absorptie is, wat aangeeft dat NADPH is verbruikt, is de reactie voltooid. Blus het reactiemengsel door langzaam een-molair oxaalzuur dropwise toe te voegen, totdat de pH van de oplossing ongeveer vier bereikt. Haal nu de gedoofde bufferoplossing eruit met twee liter watervrije, peroxidevrije diethylether.Gebruik een separatory trechter om de lagen te schudden en te scheiden, en verzamel de ether in een Erlenmeyer-kolf. Herhaal twee extra keren en voeg ongeveer 50 gram watervrij magnesiumsulfaat toe om de ether te drogen. Giet op een vacuümfiltertrechter de gedroogde ether om het magnesiumsulfaat te filteren en breng de gefilterde etherlaag over naar een ronde bodemkolf van de roterende verdamper.Pas de rotatiesnelheid aan op medium en start het vacuüm om de vloeistof te concentreren om ruwe EDP-residu op te leveren. Laad het residu in een silicacartridge van 40 gram om flashkolomchromatografie uit te voeren met behulp van een geautomatiseerde flashreinigingsmachine. Begin bij 10% ethylacetaat in hexaan en opvoer tot 60% ethylacetaat in hexaan gedurende 22 minuten.De breuken worden automatisch verzameld in buizen. Combineer vervolgens de fracties van elke piek in een ronde-bodemkolf, zet op de roterende verdamper en start de verdamping. Drie fracties worden verkregen, DHA, EDP isomeren, en diepoxide.Om de verkregen 0,151 gram epoxide in een ronde bodemkolf of kleine flacon te esterificeren, voeg dan twee milliliter watervrije methanol en drie milliliter watervrije tolueen toe en voeg een roerreep toe. Sluit de kolf met een ballon gevuld met argon door een rubberen septum en een naald, en voeg 0,26 milliliter twee-molaire TMS-diazomethaan door een spuit tijdens het roeren. Wacht 10 minuten en voeg nog eens 05 milliliter TMS-diazomethaan toe tot er een lichtgele kleur verschijnt.Concentreer het mengsel na 30 minuten voorzichtig met de roterende verdamper en gebruik een silicagelkolomcarlumr van 40 gram op de flitschromatografiemachine om het residu te zuiveren. Elute met een isocratische concentratie van 4% ethylacetaat in hexaan gedurende 22 minuten. Verzamel eerst de fracties met de gezuiverde 19S, 20R-EDP methylester eluates, gevolgd door 16S, 17R-EDP methylester.Beoordeel nu de breuken door dunne-laagchromatografie in een acht-op-een hexaan-tot-ethyl-acetaat mengsel. Vlek met kaliumpermanganaat om te controleren op gemengde breuken met beide isomeren. Concentreer de breuken die overeenkomen met elke piek op een roterende verdamper en wed vervolgens op een balans om de hoeveelheid verkregen EDP-esters te bepalen.Als gemengde fracties blijven, opnieuw chromatograaf ze met hetzelfde oplosmiddel systeem als eerder gebruikt. Concentreer elke fractie met de individuele regioisomer op een roterende verdamper. Om individuele EDP methylester regioisomeren om te zetten in hun zure vormen, verdun de EDP-ester in een klein flesje met ongeveer 0,7 milliliter THF per 0,1 millimol ester, samen met 0,175 milliliter water.Koel de flacon tot nul graden Celsius in een ijsbad, voeg drie equivalenten van lithiumhydroxide oplossing, en roer op een roerplaat onder argon 's nachts tijdens de opwarming tot kamertemperatuur. In de ochtend, blus de reactie door langzaam toe te voegen mierenzuur, totdat de pH van het mengsel bereikt drie tot vier. Voeg vervolgens water en twee milliliter ethylacetaat toe om de lagen te scheiden.Haal de waterlaag met 10 milliliter ethylacetaat drie keer, was met 20 milliliter verzadigde pekeloplossing en voeg enkele grammen waterwater natriumsulfaat toe in de oplossing om de ethylacetaatlaag te drogen. Concentreer de ethylacetaatoplossing met behulp van de roterende verdamper, voeg 10 milliliter hexaan toe en concentreer zich opnieuw. Herhaal twee maal om het resterende mierenzuur azeotropisch te verwijderen.Zuiver het residu door flash kolom chromatografie, eluting met 10 tot 30% ethylacetaat gedurende 15 minuten. Concentreer de gewenste fracties in de roterende verdamper en droog in vacuo om het gezuiverde zuur te betalen. De flash kolom chromatogram verkregen bij zuivering van het ruwe mengsel uit enzymatische epoxidatie wordt hier weergegeven.Drie belangrijke pieken werden verkregen, eluting in de volgorde van, eerste, niet-gereageerdE DHA, tweede, mengsel van EDP isomeren, en, ten derde, diepoxide, die normale over-oxidatie producten. Na esterificatie en scheiding van de regioisomeren geven de proton NMR spectra aan dat 16S, 17R-EDP en 19S, 20R-EDP methylesters werden verkregen. Chiral HPLC bevestigde de enantiomeree zuiverheid van de zure vormen van de EDP's.Zorg ervoor dat u uw bouillon steriel te houden tijdens het hanteren en inenten om besmetting te voorkomen. De epoxidatie kan worden gebruikt voor andere vetzuren. Dus probeerden we het ook met arachidonic en eicosapentaenoic zuren, en we verkregen goede opbrengsten van die enantiopure epoxides, dus 14, 15-EET en 17, 18-EEQ.Dus een protocol dat onderzoekers toegang geeft tot epoxyvetzuren kan helpen bij onderzoek naar de biologische functies van deze verbindingen, wat kan leiden tot het gebruik ervan als medicijn leidt. De gevaarlijke chemische stoffen zijn PMSF, die gevaarlijk is door contact, en TMS-diazomethaan, dat is zeer giftig door contact en inademing. Dus de laatste moet worden gebruikt in een rookkap en met de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen.

enzymatic-synthesis-epoxidized-metabolites-docosahexaenoic

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Dit protocol zal de extractie en analyse van vrije en geësterde bioactieve vetzuren uit cellen demonstreren. Vetzuren worden nauwkeurig gekwantificeerd met behulp van stabiele isotoopverdunning, chirale vloeistofchromatografie, electronenvangst-atmosferische chemische ionisatie-meervoudige reactiebewaking massaspectrometrie (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

Cellulaire vetextractie voor gerichte stabiele isotopen Verdunning vloeistofchromatografie-massaspectrometrie Analyse

We beschrijven een protocol voor het licht-gekatalyseerde vorming van waterstofperoxide - een cofactor voor oxidatieve transformaties.

Light-driven Enzymatische Decarboxylatie

Chirale amino alcoholen zijn veelzijdige moleculen voor gebruik als steigers in de organische synthese. Vanaf L-lysine, synthetiseren we amino alcoholen door een reactie van de enzymatische trapsgewijs combineren diastereoselective C-H oxidatie gekatalyseerd door dioxygenase gevolgd door splitsing van het carbonzuur deel van het overeenkomstige aminozuur van de hydroxyl door een decarboxylase.

Enzymatische Cascade reacties voor de synthese van chirale Amino alcoholen van L-lysine

In dit protocol beschrijven we de synthese van PODS, een phenyoxadiazolyl methyl-sulfon gebaseerde reagens voor de site-selectieve bevestiging van cargos aan de thiolen van biomoleculen, met name antilichamen. Daarnaast beschrijven we de synthese en de karakterisering van een Peul-bevattende bifunctionele complexvormer en zijn geconjugeerde aan een model antilichaam.

Synthese en Bioconjugation van Thiol-reactieve reagentia voor de oprichting van Site-selectief bewerkt Immunoconjugates

Dit werk beschrijft een robuuste en ongecompliceerde methode om de endocannabinoïde 2-arachidonoylglycerol (2-AG) in C. elegansop te sporen en te kwantificeren. Een analytische HDO standaard ons voorbereid en gebruikt voor de kwantificering van 2-AG door isotopen verdunning en vloeistofchromatografie-elektro spray ionisatie-tandem massaspectrometrie (LC-ESI-MS/MS).

Synthese van een Deuterated norm voor de kwantificering van 2-arachidonoylglycerol in Caenorhabditis elegans

Hier presenteren we een goedkope kwantitatieve methode die gebruik maakt van deuteriumoxide en gaschromatografie massaspectrometrie (GCMS) voor de analyse van totaal vetzuur de novo lipogenese in bruin vetweefsel in vivo.

Kwantitatieve bepaling van de novo vetzuursynthese in bruin vetweefsel met behulp van deuteriumoxide

Cross-geconjugeerde kruisvormige fluoroforen gebaseerd op 1,4-distyryl-2 ,5-bis (arylethynyl) benzeen en benzobisoxazool kernen kunnen worden gebruikt om kwalitatief identificeren diverse Lewis zuur en Lewis basisch analyten. Deze methode is gebaseerd op de verschillen in uitstoot kleuren van de cruciforms die worden waargenomen bij analyt toevoeging. Structureel nauw verwante soorten te onderscheiden van elkaar.

Kwalitatieve Identificatie van carbonzuren, boronzuren en aminen gebruiken Cruciform Fluoroforen

Synthese, activering, en karakterisering van opzettelijk ontworpen metaal-organische raamwerk materialen is een uitdaging, vooral als bouwstenen onverenigbaar zijn of ongewenste polymorfe zijn thermodynamisch bevoordeeld ten opzichte van de gewenste vormen. We beschrijven hoe toepassingen van oplosmiddelhoudende bijgestaan ​​linker uitwisseling, poeder röntgendiffractie in haarvaten en activering via superkritische CO 2 drogen, kan een aantal van deze uitdagingen aan te pakken.

Synthese en karakterisering van gefunctionaliseerde metaal-organische roosters

De synthese van nanodeeltjes van mononatriumtitanaat via een oppervlakteactieve stof bemiddelde sol-gel wordt beschreven, samen met de bereiding van het corresponderende met peroxide gemodificeerde materiaal. Ook wordt een ionenuitwisselingsreactie met Au(III) gepresenteerd.

Synthese en Reaction Chemistry of nanosize Monosodium Titanate

Een protocol voor de synthese en karakterisering van colloïden bekleed met supramoleculaire delen wordt beschreven. Deze supramoleculaire colloïden ondergaan zelf-assemblage bij de activering van de waterstofbruggen tussen de aan het oppervlak verankerde moleculen door UV-licht.

Synthese en karakterisering van Supramoleculaire colloïden

Leer de enzymatische synthese van enantiopure epoxyvetzuren uit DHA, EPA en arachidonzuur met behulp van het cytochroom P450-enzym BM3. Deze methode biedt een snelle, kosteneffectieve oplossing voor onderzoek naar biologische mechanismen.

Enzymatische synthese van Epoxidized metabolieten van docosahexaeenzuur, Eicosapentaeenzuur en arachidonzuur zuren

Meer video's verkennen