Name: Teelt van de mariene pelagische Tunicate Dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) voor experimentele studies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-09T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Leer een unieke kweekmethode voor de mariene zooplanktonsoort Dolioletta gegenbauri. Deze techniek houdt organismen en voedseldeeltjes gesuspendeerd in de waterkolom, vergelijkbaar met natuurlijke omstandigheden.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We zijn dankbaar voor de vele personen die in de loop der jaren opgebouwde kennis hebben bijgedragen aan dit project, waaronder G.-A. Paffenhöfer en D. Deibel die deze protocollen oorspronkelijk ontwikkelden. M. Köster en L. Lamboley hebben ook een aanzienlijke bijdrage geleverd aan de ontwikkeling van deze procedures.  N.B. López-Figueroa en Á.E. Rodríguez-Santiago genereerden de schattingen van de overvloed aan doliolid in tabel 1. Deze studie werd deels gesteund door de US National Science Foundation Awards OCE 082599, 1031263 tot MEF, collaboratieve projecten OCE 1459293 en OCE 14595010 naar MEF en DMG en, de National Oceanic and atmosferische Administration Award NA16SEC4810007 to DMG. We zijn dankbaar voor de hardwerkende en professionele bemanning van de R/V Savannah. Lee Ann deleo bereidde de figuren voor, Charles Y. Robertson Review het manuscript en James (Jimmy) Williams vervaardigde het plankton wiel

1. het voorbereiden van kweek faciliteiten voor het fokken van D. gegenbauri
Opmerking: alle benodigde materialen en apparatuur worden vermeld in de tabel met materialen.
<ol><li>Bereid 1 M natrium hydroxide (NaOH), 0,06 M kaliumpermanganaat (KMnO4) oplossing. Om deze oplossing voor te bereiden, Los 400 g NaOH op in 10 L gedeïoniseerd water. Voeg 100 g KMnO4 toe aan de NaOH-oplossing en meng goed.</li>
	<li>Bereid een 0,1 M natrium natriumbisulfiet (nahso3) oplossing door het oplossen van 100 g van nahso3 in 10 L gedeïoniseerd water en meng goed. Let op: deze reagentia zijn irriterende stoffen die ademhalingsproblemen kunnen veroorzaken bij inademing. Plaats in een goed geventileerde ruimte, zoals een rook afzuigkap. Vermijd huidcontact. Draag beschermende handschoenen, beschermende kleding, oogbescherming en Gelaatsbescherming bij het hanteren.</li>
	<li>Voor het oprichten en fokken van doliolid culturen in het laboratorium, schoon en steriliseren de kweek potten.<ol>
<li>Spoel 1,9 L en 3,8 L kweek potten minstens 3 keer met gedeïoniseerd water. Laat de schroefdoppen drogen, omdat de doppen niet in de volgende reinigingsstappen zijn opgenomen.</li>
		<li>Reinig en steriliseren 1,9-en 3,8 L glazen kweek potten door ze onder te dompelen in de NaOH/KMnO4 oplossing. Laat de potten 's nachts weken.</li>
		<li>Verwijder de potten uit de NaOH/kmno4 oplossing en dompel de potten onder in de natrium natriumbisulfiet (nahso3) oplossing. Laat de potten 's nachts weken.</li>
		<li>Verwijder de potten uit de NaHSO3 oplossing en Spoel grondig met gedeïoniseerd water. Laat de potten drogen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Plaats het plankton wiel (Figuur 2) in een temperatuurgeregelde ruimte (milieu kamer). Temperatuur tot 20 °C. Voor een meer gedetailleerde beschrijving van het Custom plankton wiel verwijzen wij u naar de aanvullende figuur 1.</li>
</ol>2. fytoplankton cultuur
<ol><li>Verkrijg algenculturen van het nationale centrum voor mariene algen en microbiota (NCMA) of andere bronnen om te worden gebruikt als voedsel voor D. gegenbauri. Mengsels van twee flagellaten soorten, waaronder Isochrysis Galbana (ccmp 1323), rhodomonas sp (CCMP 740), en een klein Diatoom, thalassiosira weissflogii (CCMP 1051) werden verkregen uit het NCMA en zijn gebruikt in eerdere laboratorium studies aan achterste doliolids met succes17.</li>
	<li>Bereid L1 en L1-si Growth media22 zoals aanbevolen door het NCMA.</li>
	<li>Volg de instructies van de leverancier om de nieuwe algenculturen te initiëren.</li>
	<li>Om de voorraadculturen te behouden, met behulp van strenge Axenische-cultuur technieken, zet u elke twee weken 0,5 mL oude senescing-cultuur over naar 25 mL verse groeimedia in steriele 55 mL glazen kweek buizen. Opmerking: het is niet mogelijk om levende algenculturen op te slaan zonder ze regelmatig over te dragen. Als culturen niet voor langere tijd worden gebruikt en het niet mogelijk is om culturen gedurende de duur van de niet-gebruiksperiode te handhaven, is het aan te bevelen deze gemeenschappelijke algenculturen opnieuw te verwerven uit hun oorspronkelijke bronnen (bijv. NCMA).</li>
	<li>Bereid grotere hoeveelheden fytoplankton voor het voeden van dolioliden in schone 500 mL kunststof weefselkweek kolven met 200 mL groeimedia.<ol>
<li>Inoculeren fytoplankton uit Axenische aandelen (4 mL) in 200 mL groeimedia (1:50 verdunning).</li>
		<li>Incuberen bij 20 °C met een 12:12 h licht: donkere cyclus onder koele witte licht verlichting van 65-85 μE/m2. Leg cultuur kolven plat om de verlichting te maximaliseren. De cultuur zachtjes dagelijks te zwenken.</li>
		<li>Bepaal de concentratie van cellen met behulp van een deeltjesteller of Microscoop om de groei van de culturen te bewaken. Opmerking: na 7-10 dagen na inoculatie bevat de flagellaten culturen ~ 105-106 cellen/ml en de diatoom cultuur zal ~ 104-105 cellen/ml bevatten. Deze concentraties zijn voldoende om de doliolid culturen te behouden.</li>
		<li>Start nieuwe voeder voorraden ten minste om de twee weken om voldoende algenbiomassa te leveren voor de ondersteuning van alle cultuur activiteiten.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. verzameling van wilde dolioliden en zeewater voor cultuur
Opmerking: in Figuur 3wordt een overzicht gegeven van de inzamelings-en teelt benaderingen. Een beschrijving van de gespecialiseerde collectie plankton net en COD-end is te vinden in Figuur 4.
<ol><li>Lokaliseer dolioliden door ze te detecteren met behulp van plankton netten of in situ Imaging Systems23. Opmerking: omdat dolioliden zelden aanwezig zijn in oppervlaktewateren en niet detecteerbaar zijn door Remote Sensing Technology, geleid door de vereiste kennis van voorwaarden die gunstig zijn voor dolioliden (Zie discussie), moet de aanwezigheid van dolioliden worden bepaald voorafgaand aan de bemonstering.</li>
	<li>Verzamel deeltjes rijk zeewater voorafgaand aan het verzamelen van levende dolioliden ter voorbereiding op het initiëren van een D. gegenbauri -cultuur.<ol>
<li>Implementeer Niskin-flessen gemonteerd op een CTD-rozet of gelijkwaardige apparatuur om water te verzamelen van de plaats waar dolioliden zich bevinden en van de diepte die de hoogste schattingen van chlorofyl bevat, een concentratie die wordt geschat door in-situ fluorometrie. Opmerking: chlorofyl een concentratie wordt gebruikt als indicator van deeltjes concentraties. Op de Zuid-Atlantische bocht (SAB) mid-continentaal plat, de ondergrond chlorofyl een maximum is meestal dicht bij de bodem, maar op andere locaties, het kan niet.</li>
	</ol></li>
	<li>Zodra doliolids zich bevinden, herstelt u onbeschadigde doliolid zoïden met behulp van het gespecialiseerde plankton net en COD-end. Voordat u het net implementeert, vult u het kabeljauw uiteinde met zeewater.<ol>
<li>Van een drifting schip, lager en verhoog het net door de waterkolom handhaven van een schuine Sleep hoek van ~ 15-25 ° en verticale implementatie en retrieval snelheid niet groter dan 15 m/min.</li>
	</ol></li>
	<li>Zodra het net aan boord is, breng en verdeel de inhoud van de kuil voorzichtig over in 3, 5 gallon (~ 20 L) plastic emmers met elk ~ 10 L oppervlakte zeewater dat van de site is verzameld. Opmerking: nieuwe plastic emmers moeten worden geconditioneerd door de toevoeging van zeewater dagen voordat Living doliolid Collection. Het doel is om de uitspoeling van chemicaliën uit kunststof te verminderen. Als zeewater niet beschikbaar is, gebruik dan gezuiverde (bijv. milli Q) of kraanwater vrij van giftige verontreinigingen om de emmers te conditionen.</li>
	<li>Isoleer doliolid zoïden van ander plankton.<ol>
<li>In kleine batches (~ 2 L) worden gemengde planktons van de netto Sleep inhoud (nu in plastic emmers van 20 liter) overgedragen naar een glazen beker van 2 liter.</li>
		<li>Met behulp van een glazen pipet met brede boring (8 mm id x 38 cm lengte), zorgvuldig sifon en overdracht actief zwemmen doliolid zoïden uit het bekerglas in schone glazen cultuur potten met deeltjes rijk zeewater verzameld met behulp van Niskin flessen van waar doliolids waren Gelegen.</li>
		<li>Laat de doliolid zoïden zachtjes onder het zeewater oppervlak los. Opmerking: Verzamel gonozoöïden, phorozooids die bijgevoegde gonozooids bevatten, en verpleegkundige stadia met bijgevoegde trofozooïden (Figuur 1).</li>
	</ol></li>
	<li>Na de toevoeging van doliolids, Voeg Rhodomonas SP. cultuur aan een uiteindelijke concentratie van ~ 5 x 103 – 104 cellen/ml (~ 50 ml van een cultuur met ~ 5 x 104 – 1 x 105 cellen/ml in een pot 3,8 L). Dit is om te bepalen of de dolioliden actief voeden. Wanneer doliolids opnemen rhodomonas SP., hun spijsverteringskanaal zal verschijnen rood in kleur. Verwijder zoïden die niet lijken te voeden.</li>
	<li>Om te voorkomen dat dolioliden worden gevangen in de lucht-water-interface, Vermijd de headspace in de kweek potten door de potten volledig te vullen met ongefilterd deeltjes rijk zeewater en een stukje plastic wikkel over de jar opening te plaatsen (89 mm breed).<ol>
<li>Vermijd het maken van luchtbellen die ook de dieren kunnen beschadigen. Schroef de dop voorzichtig op de pot en keer de pot voorzichtig om om te bepalen of er bubbels aanwezig zijn. Als er bubbels aanwezig zijn, verwijder ze dan.</li>
		<li>Nadat potten zijn gevuld, veeg het overtollige water van de buitenkant van de pot.</li>
	</ol></li>
	<li>Monteer elke pot op het plankton wiel (Figuur 2) door de pot te plaatsen op de verticale metalen staven bedekt met rubberen buizen en tussen een RVS slangklem.<ol>
<li>Zorg ervoor dat de achterkant van de pot is gedempt tegen de rubberen slang. Draai de slangklem rond de pot door de schroef aan te passen.</li>
		<li>Controleer of de pot niet beweegt zodra deze stevig op zijn plaats is bevestigd. Laat de potten draaien bij 0,3 rpm om de doliolids in suspensie te houden. Let op: het is belangrijk om de pot niet te strak te spannen om te voorkomen dat de pot kraken.</li>
	</ol></li>
	<li>Op het schip, houd de kweekvaten op het plankton wiel bij 20 °C in Dim licht tot ze kunnen worden overgebracht naar de laboratoriumcultuur faciliteit.</li>
	<li>Bij terugkeer naar het laboratorium, overdracht van de potten met doliolids in de voorbereide cultuur faciliteit. Monteer de potten op het plankton wiel (zie stap 3,8) en laat de potten doorgaan met roteren bij 0,3 rpm. Opmerking: alle fokken van dolioliden in deze studie werd uitgevoerd bij 20 °C.</li>
</ol>4. onderhouden van D. gegenbauri culturen
<ol><li>Van het schip naar het lab, laat de dieren te acclimeren in de oorspronkelijke potten aan de laboratoriumomstandigheden voor 3 dagen.<ol>
<li>Tijdens de acclimatie periode gebruikt u een glazen pipet met brede boring om gedurende 3 dagen 10% van het water met ongefilterd deeltjes rijk zeewater van de verzamelplaats te wisselen.</li>
		<li>Houd verschillende gerust in de pot, maar verwijder alle andere zoöplankton, grote fecale pellets en grote geaggregeerde deeltjes die het filterapparaat van de doliolid kunnen verstoppen (mucus net). Als de cultuur bestaat uit vroege verpleegkundigen, houden een grote gonozooid (≥ 6 mm) in de pot. Opmerking: het is niet belangrijk welke copepod-soorten zijn opgenomen in de cultuur, maar in dit experiment werd gebruik gemaakt van de meest voorkomende soorten die aanwezig waren van waar de dolioliden werden gevangen.</li>
	</ol></li>
	<li>Na de acclimatie periode, Transfer doliolid zoïden en gerust van de oorspronkelijke jar naar een schone kweek pot met 80% glasvezel filter (GF/F) gefilterd zeewater en 20% van het zeewater uit de oorspronkelijke pot. Bereid gefilterd zeewater door het filteren van zeewater door een GF/F met een nominale poriegrootte van 0,7 μm filtreerpapier.</li>
	<li>Behoud van de nieuwe cultuur door het uitwisselen van 10% van het water met GF/F gefilterd zeewater elke 3 dagen en door het verwijderen van aggregaten en fecale pellets. Wekelijks, breng dieren over naar een nieuwe pot zoals beschreven in stap 4,2.</li>
	<li>Voer dolioliden door het handhaven van fytoplankton concentraties in de kweek potten tussen 40-95 μg C/L. NB: deze concentraties imiteren omgevingscondities waarvan bekend is dat ze de bloei voorwaarden voor D. gegenbauri17ondersteunen. Het mengsel van algensoorten varieert afhankelijk van de levensfase en het aantal zoïden in elke pot. In de vroege levensstadia, voeg 1:1 mengsel (door koolstofgehalte) van de cryptomonad algen (Isochrysis Galbana en rhodomonas SP.) alleen. Grotere prooi soorten kunnen gemakkelijk verstoppen het Voer apparaat van kleine verpleegkundigen en het ontwikkelen van trophozooids. Voeg de diatomeeën Thalassiosira weissflogii toe aan het algen mengsel, ook bij een gelijk koolstofgehalte, bij het voeden van grotere verpleegkundigen, phorozooids en gonozooids.<ol>
<li>Bewaak de algen concentraties voor en na het voeden om de beslissing te begeleiden hoe vaak en hoeveel algen aan de culturen toe te voegen. Gebruik een deeltjesteller om algen concentraties te bepalen, omdat algen concentraties in de kweek potten relatief verdund zijn.</li>
	</ol></li>
	<li>Verwijder voldoende zoïden om de algen concentraties van 40 – 95 μgc/L te behouden, zodat de overgebleven dolioliden voldoende voedsel hebben om te groeien. Opmerking: de meest moeilijke levensfase om succesvol te blijven onder laboratoriumomstandigheden is de ontwikkelende larven en oozooid (vroege verpleegster). Tijdens deze fase van de cultuur, houden een grote gonozooid (≥ 6 mm) naast verschillende gerust in de pot met het ontwikkelen van larven en oozooids (~ 20 per 3,8 L jar).</li>
	<li>Breng ten minste 4 verpleegkundigen naar een nieuwe kweek pot zodra een minimum van 8 trophozooids zichtbaar is op de cadophore van de verpleegkundige (Figuur 1b). Opmerking: Trophozooids zal elke 1 – 2 dagen bij 20 °C in aantal verdubbelen. Trophozooids zijn groot genoeg om zichtbaar te zijn voor het blote oog.<ol>
<li>Verwijder twee van de verpleegkundigen zodra verpleegkundigen 20 trofozooids ontwikkelen.</li>
		<li>Verwijder één verpleegkundige wanneer de verpleegkundigen > 30 trophozooids op hun cadophores ontwikkelen. Laat de overblijvende verpleegkundige phorozooids ontwikkelen op zijn cadophore.</li>
		<li>Verwijder de verpleegkundige zodra de verpleegkundige 30 phorozooids afgeeft.</li>
	</ol></li>
	<li>Verminder het aantal dieren in de pot zodra de phorozooids 3 mm groot zijn.<ol>
<li>Verwijder alle maar vier phorozooids wanneer de phorozooids groter worden (> 5 mm) en hebben gonozooid clusters ontwikkeld.</li>
		<li>Verminder de cultuur tot twee phorozooids wanneer het aantal gonozooids clusters toenemen in grootte en beginnen te voeden.</li>
		<li>Verwijder de phorozooids zodra de phorozooids vrijkomen tot 30 gonozooids.</li>
	</ol></li>
	<li>Verminder het aantal gonozooids van 30 zoïden tot 2 per pot. Laat bevruchte eieren in de pot vrijkomen.<ol>
<li>Verwijder een gonozooid verlaten van een enkele gonozooid in de pot zodra de oozooids ontwikkelen. Opmerking: afgedankte verpleegkundigen, phorozooids en gonozooids kunnen worden gebruikt om extra culturen te zaaien en verdere experimenten uit te voeren.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Banse, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zooplankton+%E2%80%93+Pivotal+role+in+the+control+of+ocean+production%5BTitle%5D)+AND+%22Ices+Journal+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production.</a> Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).</li>
<li>Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zooplankton+fecal+pellet+flux+in+the+abyssal+northeast+Pacific%3A+A+15+year+time-series+study%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northeast Pacific: A 15 year time-series study.</a> Limnology and Oceanography. 58 (3), 881-892 (2013).</li>
<li>Bode, A., Álvarez-Ossorio, M. T., Miranda, A., Ruiz-Villarreal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shifts+between+gelatinous+and+crustacean+plankton+in+a+coastal+upwelling+region%5BTitle%5D)+AND+%22Ices+Journal+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">Shifts between gelatinous and crustacean plankton in a coastal upwelling region.</a> Ices Journal of Marine Science. 70 (5), 934-942 (2013).</li>
<li>Kiorboe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zooplankton+body+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Zooplankton body composition.</a> Limnology and Oceanography. 58 (5), 1843-1850 (2013).</li>
<li>Holland, L. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunicates%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Tunicates.</a> Current Biology. 26 (4), R146-R152 (2016).</li>
<li>Walters, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet+and+trophic+interactions+of+a+circumglobally+significant+gelatinous+marine+zooplankter%2C+Dolioletta+gegenbauri+%28Uljanin%2C+1884%29%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Ecology%22%5BJournal%5D)">Diet and trophic interactions of a circumglobally significant gelatinous marine zooplankter, Dolioletta gegenbauri (Uljanin, 1884).</a> Molecular Ecology. , Special Issue: Species Interactions, Ecological Networks and Community Dynamics (2018).</li>
<li>Piette, J., Lemaire, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thaliaceans%2C+the+neglected+pelagic+relatives+of+ascidians%3A+a+developmental+and+evolutionay+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Review+of+Biology%22%5BJournal%5D)">Thaliaceans, the neglected pelagic relatives of ascidians: a developmental and evolutionay enigma.</a> Quarterly Review of Biology. 90 (2), 117-145 (2015).</li>
<li>Acuña, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pelagic+tunicates%3A+Why+gelatinous%3F%5BTitle%5D)+AND+%22American+Naturalist%22%5BJournal%5D)">Pelagic tunicates: Why gelatinous?</a> American Naturalist. 158 (1), 100-107 (2001).</li>
<li>Alldredge, A. L., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pelagic+tunicates+%E2%80%93+unique+herivores+in+the+marine+plankton%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%22%5BJournal%5D)">Pelagic tunicates – unique herivores in the marine plankton.</a> Bioscience. 32 (8), 655-663 (1982).</li>
<li>Wada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolutionary+history+of+free-swimming+and+sessile+lifestyles+in+urochordates+as+deduced+from+18S+rDNA+molecular+phylogeny%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Evolutionary history of free-swimming and sessile lifestyles in urochordates as deduced from 18S rDNA molecular phylogeny.</a> Molecular Biology and Evolution. 15 (9), 1189-1194 (1998).</li>
<li>Zeng, L. Y., Jacobs, M. W., Swalla, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coloniality+has+evolved+once+in+stolidobranch+ascidians%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+and+Comparative+Biology%22%5BJournal%5D)">Coloniality has evolved once in stolidobranch ascidians.</a> Integrative and Comparative Biology. 46 (3), 255-268 (2006).</li>
<li>Delsuc, F., Brinkmann, H., Chourrout, D., Philippe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tunicates+and+not+cephalochordates+are+the+closest+living+relatives+of+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates.</a> Nature. 439 (7079), 965-968 (2006).</li>
<li>Garstang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphology+of+the+Tunicata%2C+and+its+bearing+on+the+phylogeny+of+the+chordata%5BTitle%5D)+AND+%22Quarterly+Journal+of+Microscopical+Science%22%5BJournal%5D)">The morphology of the Tunicata, and its bearing on the phylogeny of the chordata.</a> Quarterly Journal of Microscopical Science. 72 (285), 51-187 (1929).</li>
<li>Govindarajan, A. F., Bucklin, A., Madin, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+phylogeny+of+the+Thaliacea%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">A molecular phylogeny of the Thaliacea.</a> Journal of Plankton Research. 33 (6), 843-853 (2011).</li>
<li>Godeaux, D., Bone, Q., Braconnot, J. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGodeaux%2C+D+%22The+Biology+of+Pelagic+Tunicates%22">The Biology of Pelagic Tunicates</a>. Bone, Q. , Oxford University Press. 1-24 (1998).</li>
<li>Deibel, D., Lowen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+life+cycles+and+life-history+adaptations+of+pelagic+tunicates+to+environmental+conditions%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ices+Journal+of+Marine+Science%22%5BJournal%5D)">A review of the life cycles and life-history adaptations of pelagic tunicates to environmental conditions).</a> Ices Journal of Marine Science. 69 (3), 358369(2012).</li>
<li>Paffenhöfer, G., Köster, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+one+to+many%3A+on+the+life+cycle+of+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">From one to many: on the life cycle of Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 33 (7), 1139-1145 (2011).</li>
<li>Paffenhöfer, G. A., Gibson, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+generation+time+and+asexual+fecundity+of+doliolids+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Determination of generation time and asexual fecundity of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 21 (6), 1183-1189 (1999).</li>
<li>Conley, K. R., Lombard, F., Sutherland, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammoth+grazers+on+the+ocean%27s+minuteness%3A+a+review+of+selective+feeding+using+mucous+meshes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+B-Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Mammoth grazers on the ocean's minuteness: a review of selective feeding using mucous meshes.</a> Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 285 (1878), (2018).</li>
<li>Bouquet, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+optimization+for+the+emergent+zooplanktonic+model+organism+Oikopleura+dioica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Culture optimization for the emergent zooplanktonic model organism Oikopleura dioica.</a> Journal of Plankton Research. 31 (4), 359370(2009).</li>
<li>Denoeud, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+Animal+Genome+Architecture+Unmasked+by+Rapid+Evolution+of+a+Pelagic+Tunicate%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Plasticity of Animal Genome Architecture Unmasked by Rapid Evolution of a Pelagic Tunicate.</a> Science. 330 (6009), 1381-1385 (2010).</li>
<li>Harrison, P. J., Waters, R. E., Taylor, F. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+broad-spectrum+artificial+seawater+medium+for+coastal+and+open+ocean+phytoplankton%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Phycology%22%5BJournal%5D)">A broad-spectrum artificial seawater medium for coastal and open ocean phytoplankton.</a> Journal of Phycology. 16 (1), 2835(1980).</li>
<li>Ohman, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zooglider%3A+An+autonomous+vehicle+for+optical+and+acoustic+sensing+of+zooplankton%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography-Methods%22%5BJournal%5D)">Zooglider: An autonomous vehicle for optical and acoustic sensing of zooplankton.</a> Limnology and Oceanography-Methods. 17 (1), 69-86 (2019).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+observations+of+a+doliolid+bloom+in+a+warm+water+filament+using+a+video+plankton+recorder%3A+Bloom+development%2C+fate%2C+and+effect+on+biogeochemical+cycles+and+planktonic+food+webs%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography%22%5BJournal%5D)">In situ observations of a doliolid bloom in a warm water filament using a video plankton recorder: Bloom development, fate, and effect on biogeochemical cycles and planktonic food webs.</a> Limnology and Oceanography. 60 (5), 1763-1780 (2015).</li>
<li>Deibel, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDeibel%2C+D+%22The+biology+of+pelagic+tunicates%22">The biology of pelagic tunicates</a>. Bone, Q. , Oxford University Press. 171-186 (1998).</li>
<li>Gibson, D. M., Paffenhöfer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+and+growth+rates+of+the+doliolid%2C+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Feeding and growth rates of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 22 (8), 1485-1500 (2000).</li>
<li>Haskell, A., Hofmann, E., Paffenhöfer, G., Verity, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+effects+of+doliolids+on+the+plankton+community+structure+of+the+southeastern+US+continental+shelf%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Modeling the effects of doliolids on the plankton community structure of the southeastern US continental shelf.</a> Journal of Plankton Research. 21 (9), 1725-1752 (1999).</li>
<li>Gibson, D. M., Paffenhöffer, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asexual+reproduction+of+the+doliolid%2C+Dolioletta+gegenbauri+Uljanin+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Asexual reproduction of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 24 (7), 703-712 (2002).</li>
<li>Frischer, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+of+qPCR+for+quantitative+gut+content+estimation+in+the+circumglobally+abundant+pelagic+tunicate+Dolioletta+gegenbauri+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Webs%22%5BJournal%5D)">Reliability of qPCR for quantitative gut content estimation in the circumglobally abundant pelagic tunicate Dolioletta gegenbauri (Tunicata, Thaliacea).</a> Food Webs. 1, 7(2014).</li>
<li>Köster, M., Paffenhöfer, G., Baker, C., Williams, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+consumption+of+doliolids+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">Oxygen consumption of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 32 (2), 171-180 (2010).</li>
<li>Paffenhöfer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hypothesis+on+the+fate+of+blooms+of+doliolids+%28Tunicata%2C+Thaliacea%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plankton+Research%22%5BJournal%5D)">A hypothesis on the fate of blooms of doliolids (Tunicata, Thaliacea).</a> Journal of Plankton Research. 35 (4), 919-924 (2013).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sapphirinid+copepods+as+predators+of+doliolids%3A+Their+role+in+doliolid+mortality+and+sinking+flux%5BTitle%5D)+AND+%22Limnology+and+Oceanography%22%5BJournal%5D)">Sapphirinid copepods as predators of doliolids: Their role in doliolid mortality and sinking flux.</a> Limnology and Oceanography. 58 (6), 1972-1984 (2013).</li>
<li>Martí-Solans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oikopleura+dioica+Culturing+Made+Easy%3A+A+Low-Cost+Facility+for+an+Emerging+Animal+Model+in+EvoDevo%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Oikopleura dioica Culturing Made Easy: A Low-Cost Facility for an Emerging Animal Model in EvoDevo.</a> Genesis. 53 (1), 183-193 (2015).</li>
<li>Nishida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+appendicularian+Oikopleura+dioica%3A+Culture%2C+genome%2C+and+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Development+Growth+%26+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Development of the appendicularian Oikopleura dioica: Culture, genome, and cell lineages.</a> Development Growth & Differentiation. 50, S239-S256 (2008).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te verklaren.

Het vermogen tot cultuur doliolids is in de afgelopen decennia vastgesteld en is gebruikt om onderzoek op verschillende gebieden te ondersteunen. Experimentele studies in onze laboratoria hebben de publicatie ondersteund van ten minste 15 wetenschappelijke studies gericht op de voeding en groei18,26, reproductie18,28, dieet6, 29, fysiologie<sup c...

Zooplankton is voor de grootste dierlijke biomassa in de Oceaan, zijn belangrijke componenten in mariene voedsel webben, en spelen belangrijke rollen in de oceaan biogeochemische cycli1,2. Zooplankton, hoewel het bestaat uit een enorme diversiteit aan organismen, kan worden onderscheiden in twee categorieën: gelatineuze en niet-gelatineuze met weinig tussenliggende taxa3,4. In vergelijking met het niet-gelatineuze zoöplankton zijn gelatineuze zoöplankton bijzonder moeilijk te bestuderen vanwege hun complexe levens geschiedenissen5, en hun delicate weefsels zijn gemakkelijk beschadigd tijdens het vangen en hanteren. Gelatineuze zoöplankton soorten zijn daarom notoir moeilijk te kweken in het laboratorium en over het algemeen minder bestudeerd in vergelijking met niet-gelatineuze soorten6.
Onder gelatineuze zoöplankton groepen, een overvloedig en van ecologisch belang in de wereld Oceaan zijn de thalieeën. Thalieeën zijn een klasse van pelagische tunicaten, waaronder de bevelen Salpida, Pyrosomida en Doliolida7. Doliolida, gezamenlijk aangeduid als dolioliden, zijn kleine tonvormige vrij-zwemmen pelagische organismen die hoge Abundances kunnen bereiken in productieve neritische gebieden van subtropische oceanen. Dolioliden behoren tot de meest overvloedige van alle zoöplankton groepen4,8. Als suspensie feeders verzamelen dolioliden voedseldeeltjes uit de waterkolom door filter stromen te maken en ze op slijm Nets9te vangen. Taxonomisch zijn dolioliden ingedeeld in de stam Urochordata10. Voorouderlijke naar de chordates, en in aanvulling op hun ecologische betekenis als belangrijke componenten van mariene pelagische systemen, zijn de Thalieeën van belang voor het begrijpen van de oorsprong van de koloniale levensgeschiedenis10,11 en de evolutie van de chordates5,7,10,12,13,14.
De levensgeschiedenis van doliolids is complex en draagt bij aan de moeilijkheden bij het kweken en ondersteunen van hen door hun levenscyclus. In Godeaux et al.15vindt u een overzicht van de levenscyclus en anatomie van de doliolid. De doliolid levenscyclus, waarbij een verplichte afwisseling tussen seksuele en ongeslachtelijke levensgeschiedenis stadia, wordt weergegeven in Figuur 1. Eieren en sperma worden geproduceerd door de hermafrodiet gonozooids, de enige eenzame fase van de levenscyclus. Gonozooids geven sperma vrij aan de waterkolom en eieren zijn intern bevruchte en vrijkomen om zich te ontwikkelen tot larven. Larven en metamorfose in oozooids die 1-2 mm kunnen bereiken. veronderstelde gunstige milieuomstandigheden en voeding, oozooids worden vroege verpleegkundigen binnen 1-2 dagen bij 20 °C en initiëren de koloniale stadia van de levenscyclus. Oozooids produceren knoppen op hun ventrale stolon. Deze knoppen verlaten de stolonen en migreren naar de dorsale cadophore waar ze zich in drie gekoppelde rijen bevinden. De centrale dubbele rijen worden phorozooids en de buitenste twee dubbele rijen worden trophozooids. Deze laatste bieden voedsel aan zowel de verpleegkundige als de phorozooids16,17. De trophozooids leveren de verpleegkundige met voeding terwijl ze alle inwendige organen verliest. Naarmate de overvloed aan trophozooids toeneemt, kan de grootte van de verpleegkundige 15 mm in het laboratorium bereiken. Naarmate de phorozooids groeien, nemen ze steeds meer plankton prooi en bereiken ze ~ 1,5 mm in grootte voordat ze als individuen worden vrijgelaten17. Een enkele verpleegkundige kan > 100 phorozooids vrijgeven tijdens de levensduur18. Nadat de phorozooids uit de cadophore zijn vrijgelaten, blijven ze groeien en zijn ze de tweede koloniale fase van de levenscyclus. Zodra ze ~ 5 mm in grootte bereiken, ontwikkelt elke phorozooid een cluster van gonozooids op hun ventrale peduncle. Deze gonozooids kunnen deeltjes opnemen wanneer ze ~ 1 mm lang bereiken. Nadat de gonozooids hebben bereikt ~ 2 aan 3 mm in grootte ze worden vrijgelaten uit de phorozooid en uitgegroeid tot de enige eenzame fase van de levenscyclus. Zodra ze bereiken ~ 6 mm in grootte, gonozooids worden seksueel volwassen17. Gonozooids kunnen een lengte van 9 mm of meer bereiken. Gonozooids zijn hermaphroditic, sperma wordt met tussenpozen vrijgegeven terwijl de bevruchting van de eieren intern16,17plaatsvindt. Wanneer de gonozooid ≥ 6 mm groot is, brengt het tot 6 bevruchte eieren uit. Succesvolle kweek vereist ondersteuning van de specifieke behoeften van elk van deze unieke levensgeschiedenis stadia.
Vanwege de ecologische en evolutionaire betekenis van Thalieeën, waaronder doliolids, is er behoefte aan de teelt methodieken om het begrip van de unieke biologie, fysiologie, ecologie en evolutionaire geschiedenis van dit organisme te begrijpen19 . Doliolids hebben een aanzienlijke belofte als experimentele model organismen in de ontwikkelingsbiologie en functionele genomics omdat ze transparant zijn en waarschijnlijk hebben genomen genomen20,21. Het ontbreken van betrouwbare teeltmethoden belemmert echter hun nut als laboratorium modellen. Hoewel een handvol laboratoria resultaten hebben gepubliceerd op basis van gekweekte dolioliden, naar onze kennis teelt benaderingen en gedetailleerde protocollen zijn niet eerder gepubliceerd. Op basis van jarenlange ervaring, en trial and error teelt pogingen, het doel van deze studie was om ervaringen te beoordelen en te delen protocollen voor de verzameling en de teelt van doliolids, met name de soort Dolioletta gegenbauri.

<table><tbody><tr><td>Algal culture tubes (55 mL sterile disposable glass culture tubes)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor algencultures</td></tr><tr><td>Autoclaaf</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het steriliseren van apparatuur en zeewater voor algencultures</td></tr><tr><td>Bekers (2 L glazen)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het sorteren van verdunde plankton net tow inhoud</td></tr><tr><td>Emmer (5 gallon, ~20L)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het verdunnen van de inhoud van planton net tow - moet voor het eerste gebruik worden geconditioneerd met zeewater</td></tr><tr><td>Carboys (20 L)&nbsp;</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het bewaren van zeewater</td></tr><tr><td>Doliolid glas kweekpot (1,9 L glazen pot met smalle hals en dop)</td><td>Qorpak</td><td>GLC-01882</td><td>Container voor kweek</td></tr><tr><td>Doliolid glas kweekpot (3,8 L glazen pot met smalle hals en dop)</td><td>Qorpak</td><td>GLC-01858</td><td>Container voor kweek</td></tr><tr><td>Milieukamer (temperatuur gecontroleerde omgevingskamer)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Om plankton wiel en kweekonderhoud te accommoderen</td></tr><tr><td>Filtratie apparaat voor 47 mm filters</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het filteren van zeewater voor culturen</td></tr><tr><td>Glas microvezel filters, 47 mm</td><td>Whatman</td><td>1825-047</td><td>Voor het filteren van zeewater voor culturen</td></tr><tr><td>Glas pipette (borosilicaat glas pipette (glasbuis), OD 10mm, ID 8 mm, wanddikte 1mm)</td><td>Science Company</td><td>NC-10894</td><td>Op maat gesneden en randen gepolijst</td></tr><tr><td>Slangklemmen, roestvrij staal, #104 (178 mm)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Om kweekpotten aan de plankton wiel vast te houden</td></tr><tr><td>Isochrysis galbana stam CCMP1323</td><td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td><td>stam CCMP1323</td><td>Voor het voeren van doliolid culturen</td></tr><tr><td>L1 Media Kit, 50 L</td><td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td><td>MKL150L</td><td>Voor het kweken van algen</td></tr><tr><td>Lamp (Fluorescent tafellamp met een verstelbare arm)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor het verlichten van doliolids in de potten en bekers</td></tr><tr><td>Verlichte temperatuur gecontroleerde incubator</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor algencultures</td></tr><tr><td>Micropipetten en steriele tips (0-20 &micro;l, 20-200 &micro;l, 200-1000&nbsp;&micro;l)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor algencultures</td></tr><tr><td>Plankton Net (202 &micro;m 0,5 m, 5:1 lengte) met cod end ring en &nbsp;4 L aquarium cod-end</td><td>Sea-Gear Corporation</td><td>90-50x5-200-4A/BB</td><td>Voor het verzamelen van levende doliolids (zie Figuur 4)</td></tr><tr><td>Plankton Wiel</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Op maat gebouwd (zie Figuur 2)</td></tr><tr><td>Plasticfolie</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Om de binnenkant van de deksel van doliolid kweekpotten te bedekken</td></tr><tr><td>Kaliumpermanganaat</td><td>Fisher Scientific</td><td>P279-500</td><td>Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk</td></tr><tr><td>Rhodomonas&nbsp;sp. stam CCMP740</td><td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td><td>stam CCMP740</td><td>Voor het voeren van doliolid culturen</td></tr><tr><td>Rubberslang</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Voor het vasthouden van kweekpotten aan de plankton wiel (kan gemaakt worden van tygon slang)</td></tr><tr><td>Natriumbisulfiet</td><td>Fisher Scientific</td><td>S654-500</td><td>Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk</td></tr><tr><td>Natriumhydroxide</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP359-212</td><td>Reagens voor het reinigen van potten en glaswerk</td></tr><tr><td>Steriele serologische pipetten (1 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor algencultures</td></tr><tr><td>Thalassiosira weissflogii stam CCMP1051</td><td>National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA)</td><td>stam CCMP1051</td><td>Voor het voeren van doliolid culturen</td></tr><tr><td>Weefselkweek flesjes (250 mL)</td><td>Any</td><td>NA</td><td>Voor algencultures</td></tr></tbody></table>

teelt van de mariene pelagische tunicate dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) voor experimentele studies

Cultivation of the Marine Pelagic Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) for Experimental Studies

Gelatineuze zooplanktons spelen een cruciale rol in de oceaan ecosystemen. Het is echter over het algemeen moeilijk om hun fysiologie, groei, feconiteit en trofische interacties te onderzoeken, voornamelijk als gevolg van methodologische uitdagingen, waaronder het vermogen om ze te cultuur. Dit geldt met name voor de doliolid, Dolioletta gegenbauri. D. gegenbauri komt vaak voor in productieve subtropische, continentale schapsystemen wereldwijd, vaak bij bloei concentraties die een grote fractie van de dagelijkse primaire productie kunnen consumeren. In deze studie beschrijven we de teelt benaderingen voor het verzamelen, fokken en onderhouden van D. gegenbauri met het oog op het uitvoeren van laboratorium studies. D. gegenbauri en andere doliolid soorten kunnen levend worden gevangen met behulp van schuin getrokken conische 202 μm mesh plankton netten van een drifting schip. Culturen worden het meest betrouwbaar vastgesteld wanneer de watertemperaturen lager zijn dan 21 °C en worden gestart vanuit onrijpe gonozooids, rijpende phorozooids en grote verpleegkundigen. Culturen kunnen worden gehandhaafd in afgeronde kweekvaten op een langzaam draaiend plankton wiel en gedurende vele generaties worden gesteund op een dieet van gekweekte algen in natuurlijk zeewater. Naast de mogelijkheid om laboratorium culturen van D. gegenbaurivast te stellen, tonen we aan dat de opvang toestand, algen concentratie, temperatuur en blootstelling aan natuurlijk geconditioneerd zeewater essentieel zijn voor de cultuur oprichting, groei, overleving en reproductie van D. gegenbauri.

Volgens de beschreven procedures voor het verzamelen en kweek van de doliolid, D. gegenbauri geschetst in Figuur 3, is het mogelijk om een cultuur van D. gegenbauri in zijn complexe levensgeschiedenis te behouden (Figuur 1) en het voor vele generaties ondersteunen. Hoewel de teelt van D. gegenbauri hier wordt beschreven, moeten deze procedures ook relevant zijn voor de teelt van andere doliolid soorten.
Het ...

Dolioliden, met inbegrip van de soort Dolioletta gegenbauri, zijn kleine gelatineuze mariene zoöplankton van ecologische betekenis gevonden op productieve Subcontinentale plank systemen wereldwijd. De moeilijkheid van het kweken van deze delicate organismen beperkt hun onderzoek. In deze studie beschrijven we de teelt benaderingen voor het verzamelen, fokken en onderhouden van de doliolid Dolioletta gegenbauri.

Teelt van de mariene pelagische Tunicate Dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) voor experimentele studies

Gelatinous zooplanktons play a crucial role in ocean ecosystems. However, it is generally difficult to investigate their physiology, growth, fecundity, ...

Beschikbaarheid van culturable model organismen is fundamenteel geweest voor de vooruitgang op vele gebieden van studie. Dit protocol, voor zover wij weten, is de enige aanpak beschikbaar voor het kweken van Dolioliden. Betrouwbare Doliolid cultuurtechnologie biedt een uniek experimenteel model om organismen te bestuderen die belangrijk zijn voor enkele van de meest productieve regio's van de oceaan en die de vroegste evolutionaire voorouders van gewervelde dieren vertegenwoordigen.Deze techniek is uniek omdat het houdt de algen voedsel deeltjes en de organismen opgehangen in het water kolom zonder contact met de wanden van de container als ze ervaren in de natuur. Deze kweekmethode kan worden toegepast op het kweken van andere kleine gelatineachtige en schaaldieren of planktonsoorten. Omdat Dolioliden een complexe levenscyclus hebben, is het begrijpen en herkennen van de behoeften van elke levensfase van cruciaal belang.Het leren van de levenscyclus en hoe te herkennen en ermee om te gaan vergt veel oefening. In onze ervaring, de enige manier om deze culturing techniek te leren is om het te zien en te doen. Verschillende andere deelnemers aan het project, waaronder Erin Arneson, N

cultivation-marine-pelagic-tunicate-dolioletta-gegenbauri-uljanin

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

De methode beschrijft de procedure waarmee de Hawaiiaanse bobtail...

Kolonisatie van Euprymna scolopes Squid door Vibrio fischeri</em

Hier presenteren we protocollen die met succes zijn gebruikt voor dolphin spermacellen collectie, cryopreservatie en heterologe IVF-prestaties met boviene eicellen.

Bottlenose dolfijn (Tursiops truncatus) Spermatozoa: collectie, cryopreservatie en heterologe In Vitro bevruchting

In dit artikel tonen we de oprichting van klonen culturen soorten eencellige conjugating algen verzameld uit een natuurlijke veld site.

Oprichting van een klonale cultuur van eencellige Conjugating algen

De rankpootkreeften improvisus Balanus (Amphibalanus) is een model voor het bestuderen van osmoregulatie en antifouling. Echter levert natuurlijke seizoensgebonden kuitschieten een onvoorspelbare aanbod van cyprid larven. Hier, wordt een protocol voor het hele jaar door kweken van B. improvisus beschreven, met inbegrip van de productie van larven. Het gebruik van gekweekte zeepokken gen expressie studies wordt geïllustreerd.

De rankpootkreeften Balanus improvisus als een Marine Model - kweken en genexpressie

Stuurman bewaken gedrag speelt een belangrijke rol bij de voortplanting van intertidal roeipootkreeften van het geslacht Tigriopus. Methoden voor het bestuderen van dit probleem zijn echter niet goed beschreven geweest. Hier beschrijven we methoden voor: 1) individuele cultuur van maagdelijke Tigriopus dieren, en 2) kwantitatieve analyse van hun stuurman bewaken gedrag.

Individuele kweken van Tigriopus copepoden en kwantitatieve analyse van hun stuurman bewaken gedrag

Oikopleura dioica is een tunicate model organisme op verschillende gebieden van de biologie. We beschrijven bemonsteringsmethoden, soortenidentificatie, kweekopstelling en kweekprotocollen voor de dieren en algenvoer. We belichten belangrijke factoren die hebben bijgedragen aan de versterking van het cultuursysteem en het bespreken van de mogelijke problemen en oplossingen.

Gestroomlijnde bemonstering en teelt van de Pelagische Kosmopolitische Larvacean, Oikopleura dioica

Het artikel presenteert methoden voor larvale cultuur van de gastropode Crepidula fornicata in een klein-volume laboratoriumschaal systeem en in een ambient-zeewater mesokosmos systeem dat in het veld kan worden ingezet.

Laboratorium- en veldcultuur van larven van de pantoffellimpet, Crepidula fornicata

-Visserij-geïnduceerde veranderingen om uitgebuit schaaldier visserij, zoals de Amerikaanse kreeft visserij, kan mogelijk invloed hebben op hun reproductieve dynamiek, wat leidt tot een vermindering van de paring succes. Het doel van deze studie was om een ​​niet-invasieve methode voor het vaststellen van de paring succes van vrouwelijke kreeften die fysiologisch of functioneel volwassen kunnen ontwikkelen.

Een niet-invasieve methode voor<em&gt; In situ</em&gt; Bepaling van het Koppelen van Succes in vrouwelijke Amerikaanse Kreeften (<em&gt; Homarus americanus</em&gt;)

Dit bioassay maakt gebruik van een model roofvissen aan de aanwezigheid van het voeden-afschrikmiddel metabolieten van organische extracten van de weefsels van mariene organismen in de natuurlijke concentraties met behulp van een qua voedingswaarde vergelijkbaar voedsel matrix beoordelen.

Een vis van borstvoeding Laboratory Bioassay de Antipredatory activiteit van secundaire metabolieten te beoordelen vanuit de weefsels van mariene organismen

Speciale zorg met behulp van "schone technieken" is vereist om watermonsters correct te verzamelen en te verwerken voor sporenmetaalstudies in aquatische omgevingen. Er wordt een protocol gepresenteerd voor bemonstering, verwerking en analytische procedures met als doel betrouwbare gegevens voor milieubewaking en resultaten met hoge gevoeligheid voor gedetailleerde sporenmetaalstudies te verkrijgen.

Clean monsterneming en analyse van de rivier en estuariene Waters voor Trace Metal Studies

Leer een unieke kweekmethode voor de mariene zooplanktonsoort Dolioletta gegenbauri. Deze techniek houdt organismen en voedseldeeltjes gesuspendeerd in de waterkolom, vergelijkbaar met natuurlijke omstandigheden.

Teelt van de mariene pelagische Tunicate Dolioletta gegenbauri (uljanin 1884) voor experimentele studies

Meer video's verkennen