Ex vivo-methode voor het beoordelen van het voortplantingsstelsel van muizen spontane beweeglijkheid en een op MATLAB gebaseerd baarmoeder bewegings Volgalgoritme voor gegevensanalyse

Ons protocol is belangrijk omdat het de eerste kwantitatieve ex vivo methode biedt voor het beoordelen van de spontane beweeglijkheid van een intacte baarmoeder. Deze nieuwe aanpak biedt een eenvoudig en goedkoper alternatief voor het testen van het ontspannenpotentieel van natuurlijk voorkomende remedies in synthetische verbindingen. Een groot voordeel van deze techniek is dat alle intra-uteriene cellulaire interacties intact blijven tijdens het experiment.

Over contractiliteit van de baarmoeder wordt geassocieerd met dysmenorroe, waarvoor baarmoederverslappers nuttig kunnen zijn voor de behandeling. Deze methode biedt een eenvoudige manier om nieuwe relaxants te testen. Na bevestiging van de estrous cyclus fase, plaats de muis in de supine positie, en verspreid de ledematen om de buikbekken regio bloot.

Maak de buik nat met 70% ethanol en gebruik tangen om de huid zorgvuldig op te tillen die superieur is aan de clitoris. Maak kleine dwarse insnijdingen op de laterale aspecten van de onderste buikstreek tot aan de bovenste ledematen om het buikvlies bloot te stellen. Snijd zorgvuldig door het buikvlies om het maag-darmkanaal bloot te stellen zonder de baarmoederhoorns te beschadigen en gebruik tangen om de fascia en vetweefsel dat het maag-darmkanaal bedekt te verwijderen.

Verwijder de twaalfvingerige darm, jejunum, ileum, cecum, en de opgaande en dwarse dikke darm. Zoek de urineblaas om de vagina te lokaliseren die direct onder de urineblaas wordt gevonden. Zoek de schaamsympyse bij de samenvloeiing van de schaambeenderen, caudal aan de blaas, en gebruik schaar om zorgvuldig een incisie aan de zijkanten van de schaambeen symphysis door het interpubic fibrocartilaginous weefsel te maken om toegang te krijgen en een route voor vaginale extractie te verstrekken.

Snijd door het perineum gelegen tussen de anus en het onderste deel van de vulva, en gebruik tangen om de vagina op te heffen om een langzame excisie van het rectum mogelijk te maken. Identificeer de twee baarmoederhoorns die in een vork rostrally aan de vagina bifurcate en zoek een ingewikkelde oviduct en eierstok aan het eind van elke hoorn. Het correct identificeren van de baarmoederhoorns is van cruciaal belang voor de procedure om ervoor te zorgen dat de weefsels niet beschadigd zijn.

Gebruik kleine ontleedschaar om alle ligamenten die verbinding maken met en ondersteuning van de hoorns, eileiders en eierstokken in de buikholte te verwijderen, en verwijder de vagina, baarmoeder, oviducts en eierstokken. Breng het gehele geïsoleerde voortplantingskanaal over in een petrischaaltje van 10 millimeter met 10 milliliter PBS van Dulbecco. Gebruik tangen en chirurgische schaar om eventuele bind- en vetweefsel rond de baarmoederhoorns en vagina te verwijderen, evenals eventuele bont in het schaamstreekgebied dat de beeldkwaliteit zou kunnen belemmeren.

Verwijder het brede ligament om de beweeglijkheid van de baarmoederhoorns mogelijk te maken en was het weefsel twee keer met verse Dulbecco's PBS per wasbeurt voordat het het geïsoleerde voortplantingskanaal overdraagt in een 35 millimeter petrischaal met drie milliliter zuurstofhoudende Krebs-oplossing. Voor spontane beweeglijkheidsbeeldvorming plaatst u de petrischaal op een zwart oppervlak bij kamertemperatuur en laat u 15 tot 30 minuten voor spontane samentrekkingen beginnen. Wanneer beweging kan worden waargenomen, registreert u de spontane baarmoedermotiliteit gedurende 10 minuten van een axiaal vlak met behulp van elk type digitale video-apparatuur.

Breng vervolgens de bereiding over in een petrischaal met zuurstofhoudende Krebs-buffer aangevuld met de testverbinding en neem de spontane baarmoedermotiliteit op dezelfde manier op gedurende nog eens 10 minuten vast. Aan het einde van de opnameperiode, was het gehele voortplantingskanaal in 10 milliliter van Dulbecco's PBS in een 100 millimeter petrischaal, en breng het monster in een nieuwe petrischaal van vers zuurstofige Krebs buffer om de omkeerbaarheid van de behandeling te beoordelen. Neem de spontane baarmoedermotiliteit voor ongeveer 10 minuten op dezelfde manier, als voor de laatste twee opnames.

Breng vervolgens het preparaat over op nog eens 35 millimeter petrischaal gevuld met zuurstofrijke Krebs-buffer aangevuld met het voertuig voor de testverbinding om ervoor te zorgen dat er geen mechanisch geïnduceerde veranderingen zijn in de spontane baarmoedermotiliteit. De voortplantingsstreek voorbereiding vertoonde een hoge beweeglijkheid in de panelen A en C bij afwezigheid van epinephrinum. Maar dit fenotype is slapend in paneel B met de aanwezigheid van een micro muller epinephrinum.

Hier wordt een voorbeeldgegevensanalyse van epinephrinumtoediening en spontaan herstel van de beweeglijkheid getoond, die illustreert hoe de effecten van het hormoon op de spontane beweeglijkheid van het voortplantingskanaal kunnen worden gekwantificeerd uit de opnames van het weefsel dat voor, tijdens en na de behandeling van de testverbinding is genomen. Het is belangrijk om te voorkomen dat de baarmoederhoorns worden gecomprimeerd of overbelast, anders wordt er geen spontane contractiliteit waargenomen. Onze methode kan ook worden gebruikt voor het testen van verbindingen die de contractiliteit van de baarmoeder kunnen verhogen.

Deze procedure kan worden toegepast op zwangere muis uteri in de eerdere stadia van de zwangerschap. Dit experiment heeft het potentieel om te worden opgewaardeerd tot een zes put plaat formaat voor doorvoer drug screening.