Name: Oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Leer de opzet van patiënt-afgeleide xenograftmodellen en primaire cellijnen uit maagkankerweefsel met behulp van NSG-muizen. Deze methode verbetert preklinische evaluatie van antikankertherapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (81572392); het nationaal sleutel onderzoeks-en ontwikkelingsprogramma van China (2016YFC1201704); Tip-Top wetenschappelijke en technische innovatieve jeugd talenten van Guangdong Special Support Program (2016TQ03R614).
Wij bedanken Guangzhou Sagene Biotech co., Ltd. voor hulp bij de voorbereiding van de cijfers.

Deze menselijke studie werd goedgekeurd door de institutionele ethische Review Board van Sun Yat-sen University Cancer Center (SYSUCC, Guangzhou, China). De dierenstudie werd goedgekeurd door het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité van de Sun Yat-sen universiteit. Opmerking: alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de relevante wetten en institutionele richtlijnen, met inbegrip van de richtlijn voor bescherming van beroepsmatige blootstelling tegen door bloed overgedragen pathogenen.
1. monstervoorbereiding
<ol><li>Verkrijg maagkanker weefsels (P0 = passage 0) rechtstreeks uit de operatie. Het tumor preparaat moet groter zijn dan 0,5 cm3.</li>
	<li>Bereid 3-4 mL stockoplossing voor: bijvoorbeeld RPMI-1640 medium (1x) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS), 100 U/mL penicillaire en 0,1 mg/mL streptomycine.</li>
	<li>Plaats de verse tumor specimen in de Stock-oplossing bij 4 °C gedurende niet meer dan 4 uur.</li>
</ol>2. vaststelling van het PDX-model (Figuur 1)
<ol><li>Desinfecteer alle materialen met ultraviolet licht gedurende meer dan 30 minuten voordat deze in het dier laboratorium worden gebracht om een steriel chirurgische gebied te garanderen. Opmerking: de operatiekamer moet gedurende 30 minuten met ultraviolet licht worden gedesinfecteerd, voordat we het Bureau reinigen met dichloor isocyanurinezuur natrium zetpillen ontsmettingsmiddel. Dan Povidon-jodium wordt gebruikt om de huid te desinfecteren.</li>
	<li>Met behulp van Tang en schaar, zorgvuldig ontleden de tumorweefsels en trim ze in verschillende kleine stukjes (ongeveer 1 mm3 blokjes) onder steriele omstandigheden.</li>
	<li>Anesthetize vrouwelijke 5-tot 7-week-oude NOD-scid-IL2rg (NSG) muizen door blootstelling aan 1-1.5% Isofluraan met een anesthesie machine.<ol>
<li>Anesthetiseer de muis totdat het stopt met worstelen, maar handhaaft zelfs de ademhaling. Opmerking: de 50 mL buis is een eenvoudige apparatuur die vergelijkbaar is met een anesthesie machine functioneert. Het gebruik van veterinaire oogzalf om droogheid te voorkomen is onnodig vanwege de korte werkingstijd.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Maak een 1 cm incisie op beide rugflanken met behulp van een steriele schaar, en implantaat een tumor stuk in elke flank van de muis.<ol>
<li>Gebruik de steriele tang om het onderhuidse weefsel te verstoren om ervoor te zorgen dat het tumor stuk niet uitglijdt. Vervolgens, clip een stukje van het tumorweefsel, en plaats het in de diepe site.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sluit het implantaat gebied door subcutane hechting met chirurgische hecht naalden, en markeer de muis oren met gelabelde oormerken</li>
	<li>Steriliseren de wond met jodium.</li>
	<li>Plaats de muizen na de operatie zachtjes in een lege kooi met behoud van de borstbeen-recumbency. Aandacht besteden aan de toestand van de muizen; ze worden wakker en beginnen ongeveer 3-4 minuten later te lopen. Plaats muizen die een operatie ondergaan in een andere nieuwe kooi gescheiden van die niet onderworpen aan chirurgie.</li>
	<li>De grootte van de tumor beoordelen door palpatie van de implantatieplaats. Meet twee keer per week de tumoren met een Vernier remklauw.</li>
	<li>Zodra de tumor bereikt 10 mm in diameter, de toestand van het dier verslechtert, of de tumor zweren, euthanaseren de muis met een IRB goedgekeurde methode. Reimer planten geoogst verse tumor fragmenten in 2 nieuwe muizen voor het doorvoeren, of de specimens tijdelijk op te slaan in PBS op ijs voor de isolatie van primaire cellijnen.</li>
</ol>3. weefsel cryopreservatie
Opmerking: dit deel verwijst voornamelijk naar de methoden voor de Live tissue Kit Cryo Kit. De belangrijkste kits en apparatuur staan vermeld in de tabel met materialen.
<ol><li>Euthanaseren de muizen met een IRB-goedgekeurde methode wanneer de tumor groter is dan 10 mm in diameter.</li>
	<li>Met behulp van steriele Tang en schaar, Isoleer langzaam de tumor van de muizen.</li>
	<li>Was de tumorweefsels met DPBS in een 10 cm schaal. Ontleden en verwijderen van necrotische gebieden, vetweefsel, bloedstolsels en bindweefsel met een tang en een schaar.</li>
	<li>Snijd de tumorweefsels tot een maximale dikte van 1 mm met een mal.</li>
	<li>Was de sneetjes met DPBS in een 10 cm schaal. Opmerking: het vitrificatie proces omvat het gebruik van buizen met het label v1/v2/v3 in stappen 3.6-3.8. De belangrijkste ingrediënten zijn DMSO en sucrose.</li>
	<li>Breng de plakjes in buis v1 met een tang, en inbroed de buis bij 4 °C gedurende 4 min. rol en Inverteer de buis kort, en plaats deze bij 4 °C voor nog eens 4 min.</li>
	<li>Giet de V1-oplossing en plakjes in een 10 cm schaal. Breng de segmenten in tube v2 met een tang en inbroed de buis v2 bij 4 °C gedurende 4 min. rol en Inverteer de buis kort, en plaats deze bij 4 °C voor nog eens 4 min.</li>
	<li>Giet de v2-oplossing en plakjes in een schotel van 10 cm. Breng de plakjes in buis V3 met een tang, en inbroed de buis bij 4 °C gedurende 5 min. rol en Inverteer de buis kort, en plaats deze bij 4 °C gedurende ten minste 5 min. Zorg ervoor dat de segmenten alle naar de onderkant van de buis zinken.<ol>
<li>Als meerdere sneetjes blijven zweven, rol en Inverteer de buis kort, en plaats de buis op 4 °C totdat alle plakjes volledig zinken; Gooi indien nodig de zwevende segmenten weg.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Giet de V3-oplossing en plakjes in een schaal van 10 cm.</li>
	<li>Snijd de weefsel houders op de juiste lengte en plaats ze op steriel gaas. Breng de segmenten over naar de houders. Wikkel de houders met het gaas en plaats ze in vloeibare stikstof met behulp van een tang, gevolgd door incubatie gedurende 5 minuten.</li>
	<li>Label de cryogene flesjes met de weefsel informatie.</li>
	<li>Breng de houders met weefsel segmenten in cryogene flesjes, die zijn opgeslagen in vloeibare stikstof.</li>
</ol>4. isolatie van primaire cellen (Figuur 2)
<ol><li>Steriliseer de Tang en schaar met hogedruk stoom bij 121 °C gedurende 30 minuten.</li>
	<li>De monsters van maagkanker opnieuw in de vorm van geoogste specimens of verkregen PDX-weefsels. Leg de weefsels op het ijs en breng de weefsels vervolgens over in een steriele kweek schaal van 10 cm.</li>
	<li>Ontleden en verwijderen van necrotische gebieden, vetweefsel, bloedstolsels en bindweefsel met een tang en een schaar.</li>
	<li>Was de tumorweefsels eenmaal met DPBS met 100 U/mL penicillaire en 0,1 mg/mL streptomycine in een 10 cm schaal.</li>
	<li>Snijd het tumorweefsel in 1 mm3 stukken op het deksel van het Gerecht; de maximale dikte van elk stuk moet 1 mm zijn.</li>
	<li>Breng de weefsels over in een centrifugebuis van 50 mL met ongeveer 7 mL type 1 Collagenase-en trypsine-oplossing (1:14). Vortex het mengsel kort.</li>
	<li>Inbroed de buis in een waterbad bij 37 °C gedurende 30-40 min. Vortex het mengsel elke 5 min.</li>
	<li>Voeg een gelijk volume RPMI-1640 medium (1x) toe, aangevuld met 10% FBS aan de buis. Vortex het mengsel grondig.</li>
	<li>Breng het mengsel over in een nieuwe centrifugebuis van 50 mL door een langzame filtratie door een 40 μm filter. Opmerking: gebruik 40 μm filters om een hogere verhouding van kankercellen te garanderen. Indien nodig kunnen 100 μm filters worden gebruikt om meer soorten cellen te behouden, zoals immunologische cellen.</li>
	<li>Centrifugeer het filtraten op 113-163 x g voor 5-7 min bij RT. Verwijder voorzichtig het supernatant.</li>
	<li>Was de pellet met 5 mL PBS en verwijder voorzichtig het supernatant.</li>
	<li>Als de pellet rood is, bevat het veel erytrocyten. Breng de pellet voorzichtig met 500 μL rode bloedcel lysis buffer in. Voeg na een incubatie van 5 minuten 5 mL PBS toe en verwijder het supernatant voorzichtig.</li>
	<li>Respendeer de pellet met kweekmedium en breng het mengsel over naar een steriele 10 cm schaal.</li>
	<li>Vervang het medium elke 2-3 dagen door een serum met een medium.</li>
	<li>Passage de primaire cellen met trypsine/EDTA wanneer ze bereiken 50% samenvloeiing.</li>
</ol>

<ol><li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2018%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22Ca-a+Cancer+Journal+for+Clinicians%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).</li>
<li>Sugano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+of+gastric+cancer+in+Asia%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Practive+%26+Research+in+Clinical+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Screening of gastric cancer in Asia.</a> Best Practive & Research in Clinical Gastroenterology. 29 (6), 895-905 (2015).</li>
<li>Nikfarjam, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demographic+survey+of+four+thousand+patients+with+10+common+cancers+in+North+Eastern+Iran+over+the+past+three+decades%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Pacific+Journal+of+Cancer+Prevention%22%5BJournal%5D)">Demographic survey of four thousand patients with 10 common cancers in North Eastern Iran over the past three decades.</a> Asian Pacific Journal of Cancer Prevention. 15 (23), 10193-10198 (2014).</li>
<li>Coccolini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+gastric+cancer%3A+What+we+know+and+what+we+still+have+to+learn%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Advanced gastric cancer: What we know and what we still have to learn.</a> World Journal of Gastroenterology. 22 (3), 1139-1159 (2016).</li>
<li>Goetze, O. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+treatment+in+locally+advanced+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Updates+in+Surgery%22%5BJournal%5D)">Multimodal treatment in locally advanced gastric cancer.</a> Updates in Surgery. 70 (2), 173-179 (2018).</li>
<li>Graziosi, L., Marino, E., Donini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+Treatment+of+Locally+Advanced+Gastric+Cancer%3A+Will+the+West+Meet+the+East%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Multimodal Treatment of Locally Advanced Gastric Cancer: Will the West Meet the East?</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (3), 918(2019).</li>
<li>Choi, Y. Y., Noh, S. H., Cheong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+Gastric+Cancer+Treatment%3A+From+the+Golden+Age+of+Surgery+to+an+Era+of+Precision+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Evolution of Gastric Cancer Treatment: From the Golden Age of Surgery to an Era of Precision Medicine.</a> Yonsei Medical Journal. 56 (5), 1177-1185 (2015).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TCGA+divides+gastric+cancer+into+four+molecular+subtypes%3A+implications+for+individualized+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">TCGA divides gastric cancer into four molecular subtypes: implications for individualized therapeutics.</a> Chinese Journal of Cancer Research. 33 (10), 469-470 (2014).</li>
<li>Tirino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+New+in+Gastric+Cancer%3A+The+Therapeutic+Implications+of+Molecular+Classifications+and+Future+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">What's New in Gastric Cancer: The Therapeutic Implications of Molecular Classifications and Future Perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).</li>
<li>Roschke, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Karyotypic+complexity+of+the+NCI-60+drug-screening+panel%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Karyotypic complexity of the NCI-60 drug-screening panel.</a> Cancer Research. 63 (24), 8634-8647 (2003).</li>
<li>Wilding, J. L., Bodmer, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+cell+lines+for+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer cell lines for drug discovery and development.</a> Cancer Research. 74 (9), 2377-2384 (2014).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Research. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li>
<li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+mouse+models%3A+A+high+fidelity+tool+for+individualized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Letters%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft mouse models: A high fidelity tool for individualized medicine.</a> Oncology Letters. 17 (1), 3-10 (2019).</li>
<li>Lai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+and+perspectives+of+patient-derived+xenograft+models+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+OF+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">Current status and perspectives of patient-derived xenograft models in cancer research.</a> Journal OF Hematology & Oncology. 10 (1), 106(2017).</li>
<li>Kawaguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li>
<li>Cassidy, J. W., Caldas, C., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+Tumor+Heterogeneity+in+Patient-Derived+Tumor+Xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Maintaining Tumor Heterogeneity in Patient-Derived Tumor Xenografts.</a> Cancer Research. 75 (15), 2963-2968 (2015).</li>
<li>Liu, X., Meltzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+Cancer+in+the+Era+of+Precision+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Gastroenterology+and+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gastric Cancer in the Era of Precision Medicine.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (3), 348-358 (2017).</li>
<li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShultz%2C+LD+%22Human+cancer+growth+and+therapy+in+immunodeficient+mouse+models%22">Human cancer growth and therapy in immunodeficient mouse models</a>. (7), Cold Spring Harbor. 694-708 (2014).</li>
<li>McDermott, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+cord+blood+engraftment+between+immunocompromised+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Comparison of human cord blood engraftment between immunocompromised mouse strains.</a> Blood. 116 (2), 193-200 (2010).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD%2FSCID%2Fgamma+%28c%29+%28null%29+mouse%3A+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">NOD/SCID/gamma (c) (null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Wege, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-transplantation+of+human+hematopoietic+stem+cells+and+human+breast+cancer+cells+in+NSG+mice%3A+a+novel+approach+to+generate+tumor+cell+specific+human+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Co-transplantation of human hematopoietic stem cells and human breast cancer cells in NSG mice: a novel approach to generate tumor cell specific human antibodies.</a> MAbs. 6 (4), 968-977 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Maagkanker is een agressieve ziekte met beperkte therapeutische opties; zo zijn modellen van maagkanker een kritieke bron geworden om functionele onderzoeken mogelijk te maken met directe vertaling naar de kliniek4,8,17. Hier, we hebben beschreven de methoden en het Protocol van de oprichting van maagkanker PDX modellen en primaire cellijnen. Belangrijk is dat zowel de morfologische als de biologische eigenschappen van maagkanke...

Maagkanker is de vijfde meest voorkomende kanker wereldwijd en de derde belangrijkste oorzaak van kanker dood. In 2018 werden wereldwijd meer dan 1.000.000 nieuwe gevallen van maagkanker gediagnosticeerd en werden naar schatting 783.000 mensen gedood door deze ziekte1. De incidentie en sterfte van maagkanker blijft zeer hoog in Noordoost-Aziatische landen2,3. Ondanks aanzienlijke vooruitgang op het gebied van kanker therapeuten, blijft de prognose van patiënten met gevorderde maagkanker slecht, met een overlevingspercentage van vijf jaar van ongeveer 25%4,5,6, 7,. Er is dus dringend behoefte aan de ontwikkeling van nieuwe therapeutische strategieën voor maagkanker
De behandeling van maagkanker is een uitdaging vanwege de hoge heterogeniteit8,9. Zo is de vraag hoe de uitdagingen van tumor heterogeniteit aan te pakken om precisie geneeskunde te realiseren centraal in kankeronderzoek. In vitro en in vivo modellen spelen cruciale rollen in het verhelderend zijn van de heterogene mechanismen en biologie van maagkanker. Echter, hoewel er tal van maagkanker cellijnen en vele conventionele transgene muismodellen voor preklinisch onderzoek, de nadelen van deze modellen beperken hun toepassingen10. Omdat de kenmerken van deze modellen zijn veranderd in de cultuur, ze niet langer model tumor heterogeniteit, en hun reacties zijn niet in staat om reacties te voorspellen bij de mens11. Deze kwesties beperken de mogelijkheid van het identificeren van subgroepen van kankerpatiënten die zullen reageren op gerichte drugs. De korte-termijn cultuur van primaire tumoren biedt een relatief snelle en gepersonaliseerde manier om te onderzoeken antikanker farmacologische eigenschappen, die waarschijnlijk het kenmerk van gepersonaliseerde kankerbehandeling zal zijn.
Patiënt-afgeleide xenotransplantaten (pdxs) hebben de voorkeur als een alternatief preklinisch model voor drug Response profilering12. Daarnaast bieden PDX-modellen een krachtig hulpmiddel voor het bestuderen van de initiatie en progressie van kanker13,14. PDX-modellen behouden het histologische uiterlijk van kankercellen, behouden de intratumoral heterogeniteit en weerspiegelen beter de relevante menselijke componenten van de tumor micro omgeving15,16. De beperking van de veelgebruikte PDX-modellen is echter het lage slagingspercentage voor het vaststellen en serieel propageren van menselijke solide tumoren. In deze studie worden fatsoenlijk succesvolle methoden voor het opzetten van PDX-modellen en primaire cellijnen beschreven.

<table><tbody><tr><td>40 &mu;m Cell Strainer</td><td>Biologix, Shandong, China</td><td>15-1040</td><td></td></tr><tr><td>Biologische microscoop</td><td>OLYMPUS, Tokyo, Japan</td><td>OLYMPUS CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Eppendorf, Mittelsachsen, Duitsland</td><td>5427R</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Incubator</td><td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td><td>HERACELL 150i</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Basalmedia Technology, Shanghai, China</td><td>L40601</td><td></td></tr><tr><td>Elektro-thermostatische waterkast</td><td>Yiheng, Shanghai, China</td><td>DK-8AXX</td><td></td></tr><tr><td>Fetaal bovien serum</td><td>Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada</td><td>86150040</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Baxter, China</td><td>CN2L9100</td><td></td></tr><tr><td>Cryo-kit voor levend weefsel</td><td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td><td>LT2601</td><td></td></tr><tr><td>Ontdooi-kit voor levend weefsel</td><td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td><td>LT2602</td><td></td></tr><tr><td>NSG</td><td>Biocytogen, Beijing, China</td><td>B-CM-002-4-5W</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline & streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Rode bloedcel lysis buffer</td><td>Solarbio, Beijing, China</td><td>R1010</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 medium</td><td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td><td>8118367</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische heennaalden met draad</td><td>LingQiao, Ningbo, China</td><td>3/8 boog 4&times;10</td><td></td></tr><tr><td>Vormen en hulpmessen voor weefselverwerking</td><td>Celliver Biotechnology, Shanghai, China</td><td>LT2603</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td><td>2003779</td><td></td></tr><tr><td>Type 1 collageenase</td><td>Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA</td><td>17100017</td><td></td></tr></tbody></table>

oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Het gebruik van preklinische modellen om ons begrip van de tumor biologie te leren en de werkzaamheid van therapeutische middelen te onderzoeken is de sleutel tot kankeronderzoek. Hoewel er veel gevestigde maagkanker cellijnen en vele conventionele transgene muismodellen voor preklinisch onderzoek, de nadelen van deze in vitro en in vivo modellen beperken hun toepassingen. Omdat de kenmerken van deze modellen zijn veranderd in de cultuur, ze niet langer model tumor heterogeniteit, en hun reacties zijn niet in staat om reacties te voorspellen bij de mens. Zo worden alternatieve modellen ontwikkeld die een betere tumor heterogeniteit vormen. Patiënt-afgeleide xenotransplantaatmodellen is (PDX) modellen behouden de histologische verschijning van kankercellen, behouden intratumoreel heterogeniteit, en beter weerspiegelen de relevante menselijke componenten van de tumor micro omgeving. Het duurt echter meestal 4-8 maanden om een PDX-model te ontwikkelen, dat langer is dan het verwachte voortbestaan van veel maag patiënten. Om deze reden, het opzetten van primaire kanker cellijnen kan een effectieve complementaire methode voor drug Response studies. Het huidige protocol beschrijft methoden voor het vaststellen van PDX-modellen en primaire kankercellijnen van chirurgische maagkanker monsters. Deze methoden bieden een nuttig instrument voor de ontwikkeling van geneesmiddelen en Kankerbiologie onderzoek.

Hier, tumorweefsels uit een operatie werden bewaard in stockoplossing tot de volgende stap. Binnen 4 uur, tumorweefsels werden in kleine stukjes gesneden en geïmplanteerd in de rugflanken van NSG muizen die waren verdoven met behulp van isoflurane-geweekte katoen. Tumoren groter dan 1 cm3 kunnen worden geperfectioneerd voor implantatie in nieuwe muizen (Figuur 1) of zorgvuldig worden gesneden en bewaard in vloeibare stikstof na het protocol. In deze studie, de eerste generatie tum...

Het huidige protocol beschrijft methoden voor de vaststelling van de patiënt afgeleide xenotransplantaatmodellen is (PDX) modellen en primaire kanker cellijnen van chirurgische maagkanker monsters. De methoden bieden een nuttig instrument voor de ontwikkeling van geneesmiddelen en Kankerbiologie onderzoek.

Oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Patiënt-afgeleide Xenograft Modellen en primaire cellijnen worden steeds een integraal onderdeel van de ontwikkeling van geneesmiddelen en de initiatie en progressie van tumorbiologie onderzoek. Patiënt-afgeleide Xenograft Modellen behouden de histologische verschijning van kankercellen, behouden intratumorale heterogeniteit, en beter weerspiegelen de relevante menselijke componenten van de tumor micro-omgeving. Zijn modellen zijn voor nauwkeurigere voorstellingen van menselijke kanker dan traditionele kankercellijnen en hebben het potentieel om de preklinische evaluatie van nieuwe therapieën tegen kanker te verbeteren.Bovendien kunnen deze modellen nuttig zijn bij het vergelijken van moleculaire kenmerken of tumorhandtekeningen tussen verschillende subgroepen van kankerpatiënten. NSG muizen worden aanbevolen als immunodeficiënt muismodel. Vanwege de ernstige immunodeficiëntie van de muizen moet steriliteit in alle experimenten worden gehandhaafd.Gebruik onder steriele omstandigheden tangen en scharen om de tumorweefsels zorgvuldig te ontleden en in verschillende kleine stukjes te trimmen. Na het verdoven van de muis, gebruik steriele schaar om een een centimeter incisie te maken o

establishment-gastric-cancer-patient-derived-xenograft-models-primary

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

We beschrijven een methode voor stabiele kenmerken van de patiënt afgeleide xenotransplantaten (PDXs) met lentivirale deeltjes uiten van groen fluorescerend eiwit en luciferase reporters. Deze werkwijze maakt het volgen van de groei van PDXs op de primaire locatie, alsmede detectie spontane en experimentele metastasen gebruik in vivo beeldvorming.

Etikettering van borstkanker-Patient afgeleid Xenograften met Traceable Verslaggevers voor tumorgroei en metastase Studies

Hier beschrijven we een protocol voor de vaststelling en het kweken van mens - en muis-afgeleide 3-dimensionale (3D) maag organoids, en de methode voor de overdracht van 3D organoids naar een 2-dimensionale enkelgelaagde. Het gebruik van de maag epitheliale enkelgelaagde als een roman kras-wond assay voor regeneratie studies wordt ook beschreven.

Muis en mens-afkomstige primaire maag epitheliale enkelgelaagde cultuur voor de studie van regeneratie

Dit protocol beschrijft de generatie van door patiënten afgeleide orthotopic xenotransplantaatmodellen is-modellen door intra-vesisch bijbrengen van hoogwaardige urotheelcelcarcinoom cellen of intra-rectale injectie van colorectale kankercellen in niet-zwaarlijvige diabetische/ernstige gecombineerde immunodeficiëntie (NOD/SCID) muizen voor primaire tumorgroei en spontane metastasen onder invloed van lymfeklier stromale cellen, die de progressie van humane gemetastaseerde ziekten nabootst.

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Er wordt beschreven dat een methode wordt beschreven om organoïden te maken met behulp van patiënt-afgeleide xenografts (PDX) voor in vitro screening, wat resulteert in overeenkomende paren in vivo/in vitro modellen. PDX-tumoren werden mechanisch of enzymatisch in kleine stukjes geoogst/verwerkt, gevolgd door de Clevers'-methode om tumororganoïden te kweken die werden gepasseerd, cryopreserved en gekarakteriseerd tegen de oorspronkelijke PDX.

Het creëren van gematchte in vivo/in vitro patiënt-afgeleide modelparen van PDX en PDX-afgeleide organoïden voor kankerfarmacologisch onderzoek

Metastase van het centrale zenuwstelsel PDX-modellen vertegenwoordigen de fenotypische en moleculaire kenmerken van menselijke metastase, waardoor ze uitstekende modellen zijn voor preklinische studies. Hier wordt beschreven hoe PDX-modellen en de inentingsroutes kunnen worden vastgesteld die het beste kunnen worden gebruikt voor preklinische studies.

De oprichting en het gebruik van patiënt-afgeleide xenograftmodellen van metastasen van het centrale zenuwstelsel

Het huidige protocol stelt een patiënt-afgeleid xenograft (PDX) model van anaplastisch schildkliercarcinoom (ATC) en hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) vast en karakteriseert het, aangezien PDX-modellen snel de standaard worden op het gebied van translationele oncologie.

Vaststelling en karakterisering van patiënt-afgeleide xenograftmodellen van anaplastisch schildkliercarcinoom en hoofd-hals plaveiselcelcarcinoom

Dit protocol beschrijft de orthotope implantatie van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen. Het model recapituleert gevorderde uitgezaaide ziekte van colorectale kanker en maakt de evaluatie van nieuwe therapeutische geneesmiddelen mogelijk in een klinisch relevant scenario van long- en levermetastasen.

Orthotope implantatie van patiënt-afgeleide kankercellen bij muizen recapituleert gevorderde colorectale kanker

Organoïden die afkomstig zijn van maagpatiënten worden steeds vaker gebruikt in onderzoek, maar formele protocollen voor het genereren van menselijke maagorganoïden uit eencellige digesten met gestandaardiseerde zaaidichtheid ontbreken. Dit protocol presenteert een gedetailleerde methode voor het betrouwbaar maken van maagorganoïden uit biopsieweefsel dat is verkregen tijdens de bovenste endoscopie.

Vaststelling en karakterisering van van patiënten afgeleide maagorganoïden uit biopsieën van goedaardig maaglichaam en antraal epitheel

Het volgende protocol is gericht op de oprichting van een primaire cultuur van patiënt-afgeleide weke delen Sarcoom (STS). Dit model kan ons helpen om beter inzicht in de moleculaire achtergrond en farmacologisch profiel van deze zeldzame maligniteiten en kon vertegenwoordigen een startpunt voor verder onderzoek ter verbetering van het beheer van de St.

Oprichting van een primaire cultuur van patiënt-afgeleide weke delen Sarcoom

Patiënten-afgeleide xenotransplantaatmodellen is (PDX) modellen meer robuust even melanoom moleculaire en biologische kenmerken en zijn meer voorspellend van therapie respons in vergelijking met traditionele kunststof weefselcultuur gebaseerde assays. Hier beschrijven we ons standaard Besturingsprotocol voor de oprichting van nieuwe PDX-modellen en de karakterisatie/experimenten van bestaande PDX-modellen.

Een melanoom patiënt-afgeleide xenograft model

Leer de opzet van patiënt-afgeleide xenograftmodellen en primaire cellijnen uit maagkankerweefsel met behulp van NSG-muizen. Deze methode verbetert preklinische evaluatie van antikankertherapieën.

Oprichting van maagkanker patiënten afgeleide xenograft modellen en primaire cellijnen

Meer video's verkennen