Name: Tumorsphere afleiding en behandeling van primaire tumor cellen geïsoleerd van de muis Rhabdomyosarcomas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-13T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: Leer tumorbollen afleiden en behandelen van primaire muizen rhabdomyosarcoomcellen. Deze methode bootst de tumoromgeving na en biedt een betrouwbaar platform voor het screenen van therapeutische middelen in kankeronderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de Ellison Medical Foundation Grant AG-NS-0843-11, en de NIH pilot Grant binnen het NCI Cancer Center steun Grant P30CA030199 aan A.S.

<ol><li>Dagogo-Jack, I., Shaw, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+heterogeneity+and+resistance+to+cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumour heterogeneity and resistance to cancer therapies.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (2), 81-94 (2018).</li>
<li>Wicha, M. S., Liu, S., Dontu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+old+idea--a+paradigm+shift%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an old idea--a paradigm shift.</a> Cancer Research. 66 (4), 1883-1890 (2006).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+National+Academy+of+Science+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proceedings National Academy of Science of the United States of America. 100 (7), 3983-3988 (2003).</li>
<li>Oishi, N., Yamashita, T., Kaneko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+biology+of+liver+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular biology of liver cancer stem cells.</a> Liver Cancer. 3 (2), 71-84 (2014).</li>
<li>Crous, A. M., Abrahamse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+cancer+stem+cells+and+low-intensity+laser+irradiation%3A+a+potential+future+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Lung cancer stem cells and low-intensity laser irradiation: a potential future therapy.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4 (5), 129(2013).</li>
<li>Tomao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+molecular+profiles+of+ovarian+cancer%3A+an+update+on+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Investigating molecular profiles of ovarian cancer: an update on cancer stem cells.</a> Journal of Cancer. 5 (5), 301-310 (2014).</li>
<li>Zhan, H. X., Xu, J. W., Wu, D., Zhang, T. P., Hu, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+cancer+stem+cells%3A+new+insight+into+a+stubborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Pancreatic cancer stem cells: new insight into a stubborn disease.</a> Cancer Letters. 357 (2), 429-437 (2015).</li>
<li>Sharpe, B., Beresford, M., Bowen, R., Mitchard, J., Chalmers, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+prostate+cancer+stem+cells%3A+markers+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews+and+Reports%22%5BJournal%5D)">Searching for prostate cancer stem cells: markers and methods.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 9 (5), 721-730 (2013).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367 (6464), 645-648 (1994).</li>
<li>Lee, C. -H., Yu, C. -C., Wang, B. -Y., Chang, W. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorsphere+as+an+effective+in+vitro+platform+for+screening+anti-+cancer+stem+cell+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Tumorsphere as an effective in vitro platform for screening anti- cancer stem cell drugs.</a> Oncotarget. 7 (2), 1215-1226 (2015).</li>
<li>Sultan, I., Qaddoumi, I., Yaser, S., Rodriguez-Galindo, C., Ferrari, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparing+adult+and+pediatric+rhabdomyosarcoma+in+the+surveillance%2C+epidemiology+and+end+results+program%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparing adult and pediatric rhabdomyosarcoma in the surveillance, epidemiology and end results program.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (20), 3391-3397 (1973).</li>
<li>Blum, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+and+overlapping+sarcoma+subtypes+initiated+from+muscle+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Distinct and overlapping sarcoma subtypes initiated from muscle stem and progenitor cells.</a> Cell Reports. 5 (4), 933-940 (2013).</li>
<li>Rubin, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+an+unanticipated+relationship+between+undifferentiated+pleomorphic+sarcoma+and+embryonal+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence for an unanticipated relationship between undifferentiated pleomorphic sarcoma and embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 19 (2), 177-191 (2011).</li>
<li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+rhabdomyosarcomas+in+conditional+Pax3%3AFkhr+mice%3A+cooperativity%5BTitle%5D)+AND+%22of+Ink4a%2FARF+and+Trp53+loss+of+function.+Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Alveolar rhabdomyosarcomas in conditional Pax3:Fkhr mice: cooperativity.</a> of Ink4a/ARF and Trp53 loss of function. Genes & Development. 18 (21), 2614-2626 (2004).</li>
<li>Tremblay, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Hippo+transducer+YAP1+transforms+activated+satellite+cells+and+is+a+potent+effector+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Hippo transducer YAP1 transforms activated satellite cells and is a potent effector of embryonal rhabdomyosarcoma formation.</a> Cancer Cell. 26 (2), 273-287 (2014).</li>
<li>Hatley, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+rhabdomyosarcoma+originating+from+the+adipocyte+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">A mouse model of rhabdomyosarcoma originating from the adipocyte lineage.</a> Cancer Cell. 22 (4), 536-546 (2012).</li>
<li>Drummond, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Drives+Fusion-Negative+Rhabdomyosarcoma+Initiated+From+Non-myogenic+Endothelial+Progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Drives Fusion-Negative Rhabdomyosarcoma Initiated From Non-myogenic Endothelial Progenitors.</a> Cancer Cell. 33 (1), 108-124 (2018).</li>
<li>Almazan-Moga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+Pathway+Inhibition+Hampers+Sphere+and+Holoclone+Formation+in+Rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Hedgehog Pathway Inhibition Hampers Sphere and Holoclone Formation in Rhabdomyosarcoma.</a> Stem Cells International. , (2017).</li>
<li>Walter, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD133+positive+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population+is+enriched+in+rhabdospheres%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD133 positive embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population is enriched in rhabdospheres.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Ciccarelli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+role+of+MEK%2FERK+pathway+in+sustaining+tumorigenicity+and+in+vitro+radioresistance+of+embryonal+rhabdomyosarcoma+stem-like+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Key role of MEK/ERK pathway in sustaining tumorigenicity and in vitro radioresistance of embryonal rhabdomyosarcoma stem-like cell population.</a> Molecular Cancer. 15, (2016).</li>
<li>Deel, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Transcriptional+Coactivator+TAZ+Is+a+Potent+Mediator+of+Alveolar+Rhabdomyosarcoma+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The Transcriptional Coactivator TAZ Is a Potent Mediator of Alveolar Rhabdomyosarcoma Tumorigenesis.</a> Clinical Cancer Research. 24 (11), 2616-2630 (2018).</li>
<li>Boscolo Sesillo, F., Fox, D., Sacco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+Stem+Cells+Give+Rise+to+Rhabdomyosarcomas+in+a+Severe+Mouse+Model+of+Duchenne+Muscular+Dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Muscle Stem Cells Give Rise to Rhabdomyosarcomas in a Severe Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy.</a> Cell Reports. 26 (3), 689-701 (2019).</li>
<li>Chamberlain, J. S., Metzger, J., Reyes, M., Townsend, D., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin-deficient+mdx+mice+display+a+reduced+life+span+and+are+susceptible+to+spontaneous+rhabdomyosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma.</a> The FASEB Journal. 21 (9), 2195-2204 (2007).</li>
<li>Kessel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+3D+Tumor+Spheroid+Screening+Method+for+Cancer+Drug+Discovery+Using+Celigo+Image+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Technology%22%5BJournal%5D)">High-Throughput 3D Tumor Spheroid Screening Method for Cancer Drug Discovery Using Celigo Image Cytometry.</a> SLAS Technology. 22 (4), 454-465 (2017).</li>
<li>Johnson, S., Chen, H., Lo, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Tumorsphere+Formation+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">In vitro Tumorsphere Formation Assays.</a> Bio-Protocol. 3 (3), (2013).</li>
<li>Zhu, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+tumorsphere+culture+system+for+the+efficient+and+low-cost+enrichment+of+cancer+stem+cells+with+natural+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional tumorsphere culture system for the efficient and low-cost enrichment of cancer stem cells with natural polymers.</a> Experimental and Therapeutic. 15 (1), 85-92 (2018).</li>
<li>Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downstream+molecular+pathways+of+FLT3+in+the+pathogenesis+of+acute+myeloid+leukemia%3A+biology+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Jornal+of+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Downstream molecular pathways of FLT3 in the pathogenesis of acute myeloid leukemia: biology and therapeutic implications.</a> Jornal of Hematology and Oncology. 4, (2011).</li>
<li>Laouar, Y., Welte, T., Fu, X. Y., Flavell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STAT3+is+required+for+Flt3L-dependent+dendritic+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation.</a> Immunity. 19 (6), 903-912 (2003).</li>
<li>Ogawa, M., Bergsagel, D. E., McCulloch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effects+of+melphalan+on+mouse+myeloma+%28adj.+PC-5%29+and+hemopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential effects of melphalan on mouse myeloma (adj. PC-5) and hemopoietic stem cells.</a> Cancer Research. 31 (12), 2116-2119 (1971).</li>
<li>Hamburger, A. W., Salmon, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bioassay+of+human+tumor+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Primary bioassay of human tumor stem cells.</a> Science. 197 (4302), 461-463 (1977).</li>
<li>Hamburger, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+tumor+clonogenic+assay+as+a+model+system+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Cell+Cloning%22%5BJournal%5D)">The human tumor clonogenic assay as a model system in cell biology.</a> The International Journal of Cell Cloning. 5 (2), 89-107 (1987).</li>
<li>Jimenez-Hernandez, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NRP1-positive+lung+cancer+cells+possess+tumor-initiating+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Oncology+Reports%22%5BJournal%5D)">NRP1-positive lung cancer cells possess tumor-initiating properties.</a> Oncology Reports. 39 (1), 349-357 (2018).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432 (7015), 396-401 (2004).</li>
<li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+%283D%29+models+in+cancer+research%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li>
<li>Salerno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sphere-forming+cell+subsets+with+cancer+stem+cell+properties+in+human+musculoskeletal+sarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Sphere-forming cell subsets with cancer stem cell properties in human musculoskeletal sarcomas.</a> International Journal of Oncology. 43 (1), 95-102 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Meerdere methoden zijn gebruikt voor isolatie en karakterisering van Tpc's van tumor heterogene celpopulaties: tumor clonogenic assays, FACS isolatie, en tumorsphere Formation assay. De tumor clonogene test werd voor het eerst beschreven in 1971, gebruikt voor stamcel studies, en pas later toegepast op de Kankerbiologie29,30. Deze methode is gebaseerd op de tumor stamcellen intrinsieke eigenschap om uit te breiden zonder beperkingen in zachte gels culturen<sup cl...

Kanker is een heterogene ziekte; Bovendien kan hetzelfde type tumor verschillende genetische mutaties bij verschillende patiënten presenteren, en binnen een patiënt bestaat een tumor uit meerdere populaties cellen1. Heterogeniteit vormt een uitdaging bij de identificatie van cellen die verantwoordelijk zijn voor het initiëren en propageren van kanker, maar hun karakterisering is essentieel voor de ontwikkeling van efficiënte behandelingen. De notie van tumor propageren cellen (TPC), een zeldzame populatie van cellen die bijdragen aan de ontwikkeling van de tumor, is eerder uitgebreid beoordeeld2. Ondanks het feit dat tpc's zijn gekenmerkt in meerdere soorten kanker, de identificatie van markers voor hun betrouwbare isolatie blijft een uitdaging voor verschillende tumortypes3,4,5,6 , 7 , 8 , 9. zo kan een methode die niet afhankelijk is van moleculaire markers, maar eerder van functionele eigenschappen van TPC (hoge zelf vernieuwing en de mogelijkheid om te groeien in omstandigheden met weinig gehechtheid), bekend als de tumorsphere Formation Assay, op grote schaal worden toegepast voor de identificatie van Tpc's van de meeste tumoren. Belangrijk is dat deze test ook kan worden gebruikt voor de uitbreiding van tpc's en dus rechtstreeks wordt toegepast op de screening van kankergeneesmiddelen en studies over kanker resistentie1,10.
Rhabdomyosarcoom (RMS) is een zeldzame vorm van wekedelensarcoom die het meest voorkomt bij jonge kinderen11. Althoug RMS kan histologisch worden geïdentificeerd door middel van de beoordeling van de expressie van myogene markers, de RMS-cel van oorsprong is niet eenzijdig gekarakteriseerd als gevolg van de meerdere tumor subtypen en een hoge heterogeniteit van de tumor-ontwikkelings stimuli. Inderdaad, recente studies hebben gegenereerd belangrijke wetenschappelijke discussie over de vraag of de RMS van myogene of niet-myogenic oorsprong is, wat suggereert dat RMS kan voortvloeien uit verschillende soorten cellen, afhankelijk van de context12,13, 14 , 15 , 16 , 17. talrijke studies over RMS-cellijnen zijn uitgevoerd met de tumorsphere Formation assay voor de identificatie van trajecten die betrokken zijn bij de ontwikkeling van tumoren en de karakterisering van markers in verband met zeer zelfvernieuwings populaties 18 , 19 , 20 , 21.
Ondanks de mogelijkheid van tumorsphere Formation om RMS-cellen van oorsprong te identificeren, is echter nog geen betrouwbare methode beschreven die kan worden toegepast op primaire RMS-cellen. In deze context heeft een recente studie van onze groep een geoptimaliseerde tumorsphere-formatie test gebruikt voor de identificatie van de RMS-cellen van oorsprong in een Duchenne-spierdystrofie (DMD) muismodel22. Meerdere pre-tumorigenic celtypen, geïsoleerd uit spierweefsels, worden getest op hun vermogen om te groeien in lage-gehechtheid voorwaarden, waardoor de identificatie van spier stamcellen als cellen van oorsprong voor RMS in dystrofische contexten. Hier beschreven is een reproduceerbaar en betrouwbaar protocol voor de tumorsphere Formation assay (Figuur 1), die met succes is gebruikt voor de identificatie van uiterst zeldzame celpopulaties die verantwoordelijk zijn voor de ontwikkeling van de muis RMS.

<table><tbody><tr><td>Accutase cell dissociation reagent</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>Detach adherent cells and dissociate tumorspheres</td></tr><tr><td>Celigo</td><td>Nexcelom</td><td>Celigo</td><td>Microwell plate based image cytometer for adherent and suspension cells</td></tr><tr><td>Collagenase, Type II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td>Weefselverteringsenzym</td></tr><tr><td>Dispase II, protease</td><td>Life Technologies</td><td>17105041</td><td>Weefselverteringsenzym</td></tr><tr><td>DMEM high glucose media</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Component van tumorcellen media</td></tr><tr><td>DMEM/F12 Media</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td>Component van tumosphere media</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>ThermoFisher</td><td>S312500</td><td>Component van FACS buffer</td></tr><tr><td>EGF recombinant mouse protein</td><td>Gibco</td><td>PMG8041</td><td>Component van tumosphere media</td></tr><tr><td>FACSAria II Flow Cytometry</td><td>BD Biosciences</td><td>650033</td><td>Fluorescent activated cell sorter</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Omega Scientific</td><td>FB-11</td><td>Component van tumorcellen media</td></tr><tr><td>Fluriso (Isofluornae) anestheticum</td><td>MWI Vet Supply</td><td>502017</td><td>Anesthetisch middel voor dieren</td></tr><tr><td>FxCycle Violet Stain</td><td>Life Technologies</td><td>F10347</td><td>Onderscheid tussen levende en dode cellen</td></tr><tr><td>Goat Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16210072</td><td>Component van FACS buffer</td></tr><tr><td>Ham's F10 Media</td><td>Life Technologies</td><td>11550043</td><td>Component van FACS buffer</td></tr><tr><td>Horse Serum</td><td>Life Technologies</td><td>16050114</td><td>Component van celisolatie media</td></tr><tr><td>Lipofectamine 3000 transfectie reagens</td><td>ThermoFisher</td><td>L3000015</td><td>Transfectie reagens</td></tr><tr><td>Matrigel membraanmatrix</td><td>Corning</td><td>CB40234</td><td>Biedt ondersteuning aan getransplanteerde cellen</td></tr><tr><td>N-2 Supplements (100X)</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Component van tumosphere media</td></tr><tr><td>Neomycin-Polymyxin B Sulfates-Bacitracin Zinc Ophthalmic Ointment</td><td>MWI Vet Supply</td><td>701008</td><td>Oogzalf</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Component van FACS buffer en gebruikt voor het wassen van cellen</td></tr><tr><td>pEGFP-C1</td><td>Addgene</td><td>6084-1</td><td>GFP plasmid</td></tr><tr><td>Penicillin - Streptomyocin</td><td>Life Technologies</td><td>15140163</td><td>Component van tumosphere en tumorcellen media</td></tr><tr><td>Recombinant Human &beta;FGF-basic</td><td>Peprotech</td><td>10018B</td><td>Component van tumosphere media</td></tr><tr><td>Recombinant mouse Flt-3 Ligand Protein</td><td>R&amp;D Systems</td><td>427-FL-005</td><td>Recombinant eiwit</td></tr><tr><td>Trypan blue</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>Onderscheid tussen levende en dode cellen</td></tr></tbody></table>

tumorsphere afleiding en behandeling van primaire tumor cellen geïsoleerd van de muis rhabdomyosarcomas

Tumorsphere Derivation and Treatment from Primary Tumor Cells Isolated from Mouse Rhabdomyosarcomas

Rhabdomyosarcoom (RMS) is het meest voorkomende wekedelensarcoom bij kinderen. Hoewel aanzienlijke inspanningen de identificatie van gemeenschappelijke mutaties in verband met RMS mogelijk hebben gemaakt en discriminatie van verschillende RMS-subtypen hebben toegestaan, bestaan er nog steeds grote uitdagingen voor de ontwikkeling van nieuwe behandelingen om de prognose verder te verbeteren. Hoewel geïdentificeerd door de uitdrukking van myogenic markers, er is nog steeds belangrijke controverse over de vraag of RMS myogenic of niet-myogenic oorsprong heeft, als de cel van oorsprong nog steeds slecht wordt begrepen. In de huidige studie wordt een betrouwbare methode geboden voor de tumorsphere assay voor muis RMS. De assay is gebaseerd op functionele eigenschappen van tumorcellen en maakt het mogelijk de identificatie van zeldzame populaties in de tumor met tumorigene functies. Ook beschreven zijn procedures voor het testen van recombinante eiwitten, het integreren van transfectie protocollen met de tumorsphere Assay, en het evalueren van kandidaatgenen die betrokken zijn bij tumor ontwikkeling en groei. Verder beschreven is een procedure voor allotransplantaat transplantatie van tumorferen in ontvangende muizen te valideren tumorigene functie in vivo. Over het algemeen maakt de beschreven methode betrouwbare identificatie en het testen van zeldzame RMS tumorigene populaties die kunnen worden toegepast op de RMS die in verschillende contexten. Tot slot, het protocol kan worden gebruikt als een platform voor drug screening en toekomstige ontwikkeling van Therapeutics.

Tumorspheres detectie Celisolatie werd geoptimaliseerd om de maximale heterogeniteit van de celpopulaties aanwezig in het tumorweefsel te verkrijgen. Ten eerste, omdat geïsoleerde weefsels morfologisch ongelijksoortige gebieden presenteerde, om de kans op het isoleren van uniforme zeldzame celpopulaties te vergroten, werd bemonstering uitgevoerd vanuit meerdere delen van de tumor (Figuur 1a, eerste paneel aan de linkerkant). Ten tweede wer...

Dit protocol beschrijft een reproduceerbare methode voor isolatie van muizen rhabdomyosarcoom primaire cellen, tumorsphere vorming en behandeling, en transplantaat transplantatie vanaf tumorspheres culturen.

Tumorsphere afleiding en behandeling van primaire tumor cellen geïsoleerd van de muis Rhabdomyosarcomas

Rhabdomyosarcoma (RMS) is the most common soft tissue sarcoma in children. Although significant efforts have enabled the identification of common ...

Rhabdomyosarcoom is een zeldzame vorm van weke delen sarcomen histologisch gekenmerkt door weefselmorfologie en de expressie van myogene markers. Echter, gezien het bestaan van verschillende subtypes van deze tumoren en de heterogeniteit van de stimuli die bijdraagt aan de vorming ervan, is de identificatie van de cel van oorsprong zeer uitdagend geweest. Hier beschrijven we reproduceerbare en betrouwbare methoden voor de identificatie van de cel van oorsprong van rhabdomyosarcomen vanaf vers oogst tumorweefsels van muizen en deze test is de tumorsfeer vorming test.De belangrijkste voordelen van tumorsfeer vorming test is dat het afhankelijk is van cellulaire eigenschappen waarvan bekend is dat aanwezig zijn in tumor-oorsprong cellen en het kan ook worden gebruikt voor uitbreiding en verrijking van de specifieke celpopulatie. Bovendien bootst de sferoïde structuur de tumoromgeving na, zodat ze kunnen worden gebruikt als drugscreeningstudies. Deze methode heeft het potentieel om te worden toegepast op anderen type tumoren, omdat het niet vereist voorkennis van moleculaire markers, maar het kan optimalisatie van de cultuur voorwaarden vereisen.Tumorsfeer kan enige tijd duren om te vo

tumorsphere-derivation-treatment-from-primary-tumor-cells-isolated

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetica

Dit protocol beschrijft de isolatie, verrijking en het onderhoud van medulloblastoom tumor stamcellen uit mutante muizen met ectopische Sonic Hedgehog pathway activiteit.

Isolatie, Verrijking, en onderhoud van Medulloblastoom Stem Cells

Een methode wordt beschreven voor de menselijke retinoblastoom tumoren verspreiden in muizen. Tumorcellen worden rechtstreeks geïnjecteerd in de ogen van het immuunsysteem van deficiënte muizen. Secundaire tumoren zijn met succes gebruik van beide cellen direct geoogst van menselijke tumoren en beschaafde tumorspheres.

Oprichting en Voortplanting van Human Retinoblastoom Tumoren in het immuunsysteem van deficiënte muizen

Deze video protocol toont de isolatie en de uitbreiding van stamcellen als cellen van chirurgisch gereseceerd menselijke glioblastoom mutliforme (GBM) tumor weefsel met behulp van de neurosphere assay kweekmethode.

Isolatie en uitbreiding van de Mens glioblastoma multiforme tumorcellen Met behulp van de Neurosphere Assay

De aanwezigheid van kanker stamcellen (CSC) in bot sarcomen Onlangs is gekoppeld aan de pathogenese. In dit artikel presenteren we de isolatie van CSCs van primaire celculturen verkregen uit humane biopten van conventionele osteosarcoom (OS) met de mogelijkheid van CSCs groeien onder hechtende omstandigheden.

Oprichting van Cancer Stem Cell Cultures van Human Conventionele Osteosarcoom

Het volgende protocol is gericht op de oprichting van een primaire cultuur van patiënt-afgeleide weke delen Sarcoom (STS). Dit model kan ons helpen om beter inzicht in de moleculaire achtergrond en farmacologisch profiel van deze zeldzame maligniteiten en kon vertegenwoordigen een startpunt voor verder onderzoek ter verbetering van het beheer van de St.

Oprichting van een primaire cultuur van patiënt-afgeleide weke delen Sarcoom

We beschrijven een gedetailleerd protocol voor de isolatie van tumor-initiërende cellen van humaan Sarcoom patiënt-afgeleide xenotransplantaten door fluorescentie-geactiveerde celsortering, waarbij gebruik wordt gemaakt van humaan leukocyten antigeen-1 (HLA-1) als een negatieve marker, en voor de verdere validering en karakterisering van deze HLA-1-negatieve tumor initiërende cellen.

Isolatie en karakterisering van tumor initiërende cellen uit Sarcoom patiënt-afgeleide xenografts

Het doel van deze methodologie is om kankercellen (CSC) te identificeren in kankercellijnen en primaire menselijke tumormonsters met het bolvormende protocol, op een robuuste manier, met behulp van functionele testen en fenotypische karakterisering met stroomcytometrie en westerse Vlek.

Het verkrijgen van kanker stamcelbollen van gynaecologische en borstkankertumoren

In dit protocol beschrijven we een muismodel van onvolledige chirurgische resectie van weke delen sarcoom voor het testen van (neo)adjuvante therapieën.

Een muismodel van onvolledig gereseceerde weke delen Sarcoom voor het testen van (Neo)adjuvante therapieën

Hier wordt een protocol gepresenteerd om gecontroleerde hyperthermie te gebruiken, gegenereerd door magnetische resonantiegeleide hoge intensiteit gerichte echografie, om medicijnafgifte te activeren van temperatuurgevoelige liposomen in een rhabdomyosarcoommuismodel.

Magnetische resonantie-geleide hoge intensiteit gerichte echografie gegenereerde hyperthermie: een haalbare behandelingsmethode in een Murine Rhabdomyosarcoom-model

Het huidige protocol beschrijft het genereren van 3D-tumorcultuurmodellen van primaire kankercellen en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen met behulp van cel-levensvatbaarheidstests en microscopische onderzoeken.

Het vaststellen van 3-dimensionale sferoïden uit van de patiënt afgeleide tumormonsters en het evalueren van hun gevoeligheid voor geneesmiddelen

De ontwikkeling van orthotope pediatrische hersentumormodellen vereist nauwgezette precisie, waarbij een stereotactisch apparaat wordt gebruikt om kankercellen nauwkeurig te implanteren. De hier gepresenteerde methodologie schetst de stappen die betrokken zijn bij het voorbereiden van hersentumorcellen, het uitvoeren van intracraniële injecties en het implementeren van een postoperatief monitoringsysteem om implantatie van hersentumoren te beoordelen.

Opstelling van orthotope patiënt-afgeleide xenotransplantaatmodellen voor hersentumoren met behulp van een stereotactisch apparaat

Leer tumorbollen afleiden en behandelen van primaire muizen rhabdomyosarcoomcellen. Deze methode bootst de tumoromgeving na en biedt een betrouwbaar platform voor het screenen van therapeutische middelen in kankeronderzoek.

Tumorsphere afleiding en behandeling van primaire tumor cellen geïsoleerd van de muis Rhabdomyosarcomas

Meer video's verkennen