Name: Adoptieve immunotherapie van iNKT-cellen in glucose-6-fosfaat-isomerase (G6PI)-Geïnduceerde RA-muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Leer adoptieve immunotherapie met iNKT-cellen voor reumatoïde artritis in een muismodel met een succesratio van meer dan 93%. Deze methode biedt inzicht in de pathogenese en klinische toepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Onze studie werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (NSFC) (81771755), Hogescholen en wetenschap en technologie van de universiteit belangrijk onderzoeksproject van de provincie Hebei (ZD2017009) en het Animal Lab of Medical Experiment Center, Hebei University. We zijn dankbaar voor hun steun.

Alle experimentele muizen (150 in totaal) waren gezonde mannelijke DBA/1 muizen, 6-8 weken oud (20,0 ± 1,5 g), gefokt in een specifieke pathogene vrije (SPF) omgeving. Er is geen speciale behandeling voor het modelleren. Het experiment werd verdeeld in een gezonde controlegroep (15 muizen), een modelcontrolegroep (15 muizen) en een celtherapiegroep (55 muizen). Deze studie werd goedgekeurd door de Animal Welfare and Ethical Committee van de Hebei University.
1. Bouw van het ziektemodel
<ol><li>Dupliceren van het RA-diermodel<ol>
<li>Weeg 1,75 mg hG6PI 325-339 en hG6PI 469-483 fragmenten en los ze op in 5,25 mL van 4 °C drievoudig gedestilleerd water.</li>
		<li>Los de hulpvanaat (CFA) van Freund op in een waterbad van 50 °C, trek 5,25 mL in een andere centrifugebuis van 10 mL en koel deze af voor gebruik.</li>
		<li>Doe het mengsel van hG6PI-oplossing en CFA-oplossing in een kunstmatige emulsificatie-eenheid met twee glazen spuiten aangesloten.</li>
		<li>Duw de spuit met een constante snelheid en frequentie van 10-20x per min om de gemengde peptideoplossing en CFA-oplossing volledig te emulgeren. Voer de operatie uit in een ijsbad en houd de emulsiedruppels 10 min in het water na de voltooiing van de emulsificatie zonder te verspreiden.</li>
		<li>Injecteer 150 μL emulgeerde hG6P's in de staartwortel van de muis onderhuids.</li>
		<li>Injecteer 200 mg Pertussis toxine intraperitoneally in de muis bij 0 h en 48 uur na de hG6PI injectie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Experimentele verificatie van het RA-model<ol>
<li>Meet de dikte van de poot van de muis met een Vernier remklauw (2x per dag).</li>
		<li>Observeer en markeer de mate van roodheid en zwelling van de voet. Gebruik de volgende scorecriteria: 1) tenen met een lichte zwelling; 2) dorsum pedis en voetpad met duidelijke rode zwelling; 3) enkel met rode zwelling.</li>
		<li>Euthanaseer de muizen onder diepe anesthesie door intraperitoneale injectie van 1% natriumpentobarbital (50 mg/kg lichaamsgewicht) 14 dagen na het modelleren en verwijder de poten HE vlekken.</li>
		<li>Bepaal de secretieniveaus van serum IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α en IFN-γ met behulp van een commerciële cytometrische kraalarray (CBA) test volgens het protocol van de fabrikant.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Het verkrijgen van iNKT cellen met adoptieve cellulaire therapie
<ol><li>Directionele inductie van iNKT-cellen<ol>
<li>Injecteer normale muizen intraperitoneally met α-GalCer (0,1 mg/kg lichaamsgewicht).</li>
	</ol></li>
	<li>Isolatie van iNKT-cellen<ol>
<li>Drie dagen na het modelleren, injecteren muizen intraperitoneally met 1% natrium pentobarbital (50 mg/kg lichaamsgewicht) voor verdoving. Voldoende verdoofde muizen tonen geen hind paw terugtrekking reactie op een teen knijpen.</li>
		<li>Isoleer de milt van een DBA/1 muis na intraperitoneally injecteren met α-GalCer. Bereid een enkele cel suspensie door het snijden en slijpen van de milt in een 200 mesh zeef.</li>
		<li>Was de celvering met PBS, centrifuge er bij 200 x g gedurende 5 min en gooi de supernatant weg. Herhaal.</li>
		<li>Resuspend de cellen met 1 mL van volbloed en weefsel verdunning oplossing. Voeg 3 mL muislymfocytenscheidingsmedium toe en centrifugeer de cellen vervolgens gedurende 20 min bij 300 x g bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Verzamel de laag melkwitte lymfocyten (d.w.z. de tweede laag van de bovenkant), was het 2x met PBS en tel met een geautomatiseerde celteller.</li>
	</ol></li>
	<li>Magnetische geactiveerde celsortering (MACS)positieve selectiestrategie voor zuivering van iNKT-cellen OPMERKING: Voor de voorbehandeling van CD1d tetramers werd 1 mg/mL α-Galcer verdund tot 200 μg/mL met 0,5% Tween-20 en 0,9% van NaCl, en 5 μL van de resulterende oplossing werd toegevoegd aan 100 μL van de CD1d tetrameroplossing. Het mengsel werd 12 uur bij kamertemperatuur uitgebroed en op 4 °C geplaatst voor gebruik. TCR β werd verdund 80x met gedeïoniseerd water. Alle andere antilichamen werden gebruikt als een voorraad oplossing.<ol>
<li>Schors 107 cellen met 100 μL van 4 °C PBS, voeg 10 μL α-GalCer-geladen CD1d Tetramer-PE toe en broed ze uit bij 4 °C gedurende 15 min in het donker.</li>
		<li>Was de cellen 2x met PBS en breg ze opnieuw op in 80 μL PBS.</li>
		<li>Voeg 20 μL anti-PE-MicroBeads toe en uitbroed ze bij 4 °C gedurende 20 min in het donker.</li>
		<li>Was ze 2x met PBS en breg de cellen opnieuw op met 500 μL PBS.</li>
		<li>Plaats de sorteerkolom in het magnetisch veld van de MACS sorteerder en spoel met 500 μL PBS.</li>
		<li>Voeg de celvering van stap 2.3.4 toe aan de sorteerkolom, verzamel de doorstroom en spoel 3x af met PBS-buffer.</li>
		<li>Verwijder het magnetisch veld en verzamel de cellen uit de sorteerkolom. Voeg op dit punt 1 mL PBS-buffer toe aan de sorteerkolom en duw de zuiger snel tegen een constante druk om de gelabelde cellen naar de verzamelbuis te drijven en gezuiverde iNKT-cellen te verkrijgen. Tel met een geautomatiseerde celteller.</li>
	</ol></li>
	<li>Identificatie van het iNKT-celfenotype<ol>
<li>Neem respectievelijk 1 x 106 cellen uit de stappen 2.2.5 en 2.3.7 en brep ze opnieuw in 50 μL PBS.</li>
		<li>Antilichaam incubatie: Voeg het antilichaam niet toe aan de negatieve controlebuis, voeg 0,5 μL α-GalCer-PE-CD1d Tetramer of 10 μL FITC-TCR β toe aan de enkele positieve controlebuis. Voeg 0,5 μL α-GalCer-PE-CD1d tetramer en 10 μL FITC-TCR β toe aan de monsterbuis. Incubeer ze bij 4 °C gedurende 30 min in het donker.</li>
		<li>Was de cellen in PBS en centrifugeer vervolgens op 200 x g gedurende 5 min.</li>
		<li>Gooi de supernatant weg, voeg 1 mL Foxp3 Foxation/Permeabilization werkoplossing toe en incubeer de cellen gedurende 45 min bij 4 °C in het donker.</li>
		<li>Voeg 1 mL 1x Permeabilization Buffer werkoplossing toe en centrifugeer de cellen bij kamertemperatuur gedurende 500 x g bij kamertemperatuur gedurende 5 min.</li>
		<li>Gooi de supernatant weg. Voeg 1 μL Alexa Fluor 647 muis Anti-PLZF en 1 μL PerCP-Cy 5.5 muis anti-T-bet (of 1 μL PerCP-Cy 5.5 muis anti-RORΥt) toe voor 30 min bij kamertemperatuur in het donker.</li>
		<li>Voeg toe aan 2 mL permeabilization Buffer werkoplossing voor reiniging.</li>
		<li>Gooi de supernatant weg, bretel de cellen in 500 μL PBS en meet de stroomcytometrie.</li>
	</ol></li>
	<li>Functionele identificatie van iNKT-cellen<ol>
<li>Neem 3 x 106 iNKT-cellen uit stap 2.3.7 en bredig ze opnieuw op in 12 putplaten met 1,5 mL RPMI-1640 onvolledig medium (d.w.z. zonder serum).</li>
		<li>Voeg phorbolester (PMA, 50 ng/mL) en ionomycine calcium (IO, 1 μg/mL) toe en plaats 24 uur in een CO2-incubator.</li>
		<li>Verzamel de celsupernatant en detecteer de afscheidingsniveaus van IL-2, IL-17A, TNF-α, IL-6, IL-4, IFN-γ en IL-10 met behulp van een commerciële CBA-test volgens het protocol van de fabrikant.</li>
	</ol></li>
	<li>Experimenteel onderzoek naar het migratietraject van iNKT-cellen bij RA-muizen<ol>
<li>Los DiR kleurstof (2,5 mg/mL) op in DMSO.</li>
		<li>Resuspend iNKT cellen in 6 put platen met RPMI-1640 onvolledig medium. De dichtheid is 1 × 106 cellen/mL.</li>
		<li>Voeg DiR (5 μg/mL) oplossing toe en incubeer gedurende 25 min in een CO 2-incubator.</li>
		<li>Was met PBS en breg de cellen opnieuw op (3 x 106/300 μL) om iNKT-cellen met DiR-label (DiR-iNKT) te verkrijgen.</li>
		<li>Injecteer 1% natriumpentobarbital (50 mg/kg lichaamsgewicht) intraperitoneally om de muizen te verdoven. Voldoende verdoofde muizen tonen geen achterpoot terugtrekking te teen knijpen. Breng veterinaire zalf aan op de muisogen om droogte te voorkomen terwijl u onder narcose bent.</li>
		<li>Injecteer DiR-iNKT-cellen 3 x 106 per muis gedurende 8 dagen in de staartader met het RA-model. Controleer de iNKT-cellen in muizen postinjectie gedurende 0 min, 10 min, 30 min, 60 min en dag 0 (na 3 uur), 1, 3, 6, 12, 26, 34, 38 en 42 dagen met behulp van een klein dier in vivo imaging systeem (IVIS). De gebruikte excitatiegolflengte was 748 nm, de emissiegolflengte was 780 nm en de belichtingstijd was automatisch.</li>
		<li>Plaats elke muis in een aparte kooi na elke observatie en handhaven strengrecumbency. Observeer tot herstel van anesthesie.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Evaluatie van adoptieve immunotherapie van RA-muizen met iNKT-cellen
<ol><li>iNKT celadoptieve immunotherapie voor RA-muizen<ol>
<li>Injecteer 3 x 106 cellen iNKT cellen per muis door de staartader. Selecteer willekeurig 15 muizen die 8 dagen eerder zijn gemodelleerd en verkrijg iNKT-cellen zonder Dat DiR labeling van stap 2.3.7 door de staartaderinfusie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Evalueer de werkzaamheid van adoptieve immunotherapie voor iNKT-cellen.<ol>
<li>Meet de dikte van de poot van de muis, kwantificeer de zwelling van het enkelgewricht en score systematisch na de infusie van iNKT-cellen zoals beschreven in de stappen 1.2.1–1.2.</li>
		<li>Let op de inflammatoire celinfiltratie en gewrichtsveranderingen van de muisgewrichten zoals beschreven in stap 1.2.3.</li>
		<li>Bepaal de afscheidingsniveaus van IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-α en IFN-γ zoals beschreven in stap 1.2.4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bepaal de frequentie van iNKT-cellen en -subsets.<ol>
<li>Isoleer de muisthymus en bereid een enkele cel suspensie voor.</li>
		<li>Scheid de lymfocyten met lymfocytenscheidingsvloeistof.</li>
		<li>Bepaal de iNKT-celfrequentie en subgroepfrequentie zoals beschreven in stap 2.4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Statistische analyse OPMERKING: Alle gegevens worden gepresenteerd als gemiddelde ± SD. Waarden van P < 0,05 werden als statistisch significant beschouwd.<ol>
<li>Gebruik eenfactoranalyse van variantie (ANOVA). Als de variantie is voldaan, gebruik dan de LSD-test voor verdere vergelijking.</li>
		<li>Als de variantie niet uniform is, gebruikt u de niet-parametrische test. Gebruik de Kruskal-Wallis H-test voor verdere vergelijking31.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+environment%2C+geo-epidemiology%2C+and+autoimmune+disease%3A+Rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity+Reviews%22%5BJournal%5D)">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).</li>
<li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis%3A+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li>
<li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queiróz Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectronics+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li>
<li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cells%3A+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li>
<li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950(2018).</li>
<li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+CD161%2BCD8%2B+T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li>
<li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li>
<li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li>
<li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li>
<li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li>
<li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-%CE%B3%2FIL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Microbiology+Immunology%22%5BJournal%5D)">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-γ/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li>
<li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+natural+killer+T+cells+by+%CE%B1-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Activation of natural killer T cells by α-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li>
<li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+invariant+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li>
<li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immune+Network%22%5BJournal%5D)">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li>
<li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+differentiation+of+ROR-%CE%B3t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The differentiation of ROR-γt expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018(2017).</li>
<li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis%3A+focuson+interferon-%CE%B3%5BTitle%5D)+AND+%22Interferon+Cytokine+Research%22%5BJournal%5D)">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-γ.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li>
<li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacoeconomics%22%5BJournal%5D)">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li>
<li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li>
<li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li>
<li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li>
<li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+%CE%B1-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PlosOne%22%5BJournal%5D)">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand α-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215(2012).</li>
<li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+%2F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Pathophysiology%22%5BJournal%5D)">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li>
<li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73(2017).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li>
<li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li>
<li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH%2C+a+sphingosine-truncated+analog+of+%CE%B1-galactosylceramide%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis%2C+Rheumatism%22%5BJournal%5D)">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of α-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li>
<li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+Rheumatic+Diseases%22%5BJournal%5D)">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li>
<li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA%2F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research%2C+Therapy%22%5BJournal%5D)">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li>
<li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li>
<li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+mechanism%28s%29+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biological%2C+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li>
<li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li>
</ol>

De auteurs verklaren geen financiering of belangenconflicten.

iNKT-cellen zijn speciale T-cellen die aangeboren en adaptieve immuniteit overbruggen en voornamelijk worden ontwikkeld uit CD4++/CD8+ thymocyten. iNKT-cellen hebben uiteenlopende immunoregulerende functies en werken samen met andere immuuncellen door direct contact en afscheiding van verschillende cytokines23, die dendritische cellen (DC's), macrofagen, neutrofielen, B-cellen, T-cellen en NK-celdifferentiatie en -ontwikkeling2<...

Reumatoïde artritis (RA) is een auto-immuunziekte gekenmerkt door chronische, progressieve invasiefheid met 0,5-1% incidentie1,2. De onderliggende pathogenese wordt toegeschreven aan de abnormale proliferatie van autoreactieve CD4+ en CD8+ T cellen, gemanifesteerd door een toename van het aandeel cd4+IFN-γ+ en CD4+IL-17A+ T cellen, en het verminderde aantal CD4+IL-4+ en CD4+CD25+FoxP3+ T cellen. Daarom wordt de afscheiding van ontstekingscytokinen verhoogd en vernietigt een overmatige ontstekingsreactie de inheemse balans en tolerantiefunctie van het immuunsysteem van het lichaam. Bovendien verergeren de helper T-lymfocyten (Th) 1 cellen die het gewricht binnendringen de ontstekingsreactie en gewrichtsschade. Daarom zijn de remming van overmatige ontstekingsrespons en herstel van immuuntolerantie en immuunbalans de sleutel tot de behandeling van RA3,4.
De iNKT cellen hebben zowel NK cel als T cel functies en kenmerken. De iNKT-cellen herbergen een aparte, invariant T-celreceptor (TCR) α-keten met beperkte TCR β-keten repertoires5 en herkennen het glycolipid antigeen gepresenteerd door het grote histocompatibiliteitscomplex (MHC) klasse I molecuul CD1d op het oppervlak van de antigeen-presenterende cellen. Mitsuo et al.6 ontdekte een groot aantal iNKT-cellen en functionele defecten bij veel auto-immuunziekten, waaronder RA. Aurore et al.7 toonden aan dat iNKT-cellen een positief effect hebben op het handhaven van auto-immuuntolerantie en dat wanneer het aantal en de functie van iNKT-cellen worden hersteld, de ziekte wordt verlicht. Bovendien, Miellot-Gafsou et al.8 bleek dat iNKT cellen niet alleen de ziekte ingetrokken, maar ook verhoogde de progressie van de ziekte. Deze tegenstrijdige resultaten suggereren dat iNKT-cellen heterogene T-cellen zijn en dat de functie van verschillende subgroepen kan worden omgekeerd. In een klinische studie van RA correleerde de frequentie van iNKT-cellen met de score van de ziekteactiviteit9. De resultaten bevestigden ook dat de frequentie van iNKT werd verlaagd bij RA-patiënten, het aantal CD4+IFN-γ+ T celsubsets steeg en de secretoire niveaus van ontstekingscytokines IFN-γ en TNF-α stegenmet 10,11. Bovendien onderzochten Sharif et al.12 diabetes type 1 (T1D) en ontdekten dat selectieve infusie van iNKT-cellen de expressie van de inflammatoire cytokine IL-4 uprestelde, immuuntolerantie handhaafde en de ontwikkeling van diabetes type 1 verhinderde. Daarom verhoogt adoptieve infusie van specifieke iNKT-cellen of gerichte activering van iNKT-cellen het niveau van iNKT-cellen bij RA-patiënten, wat een doorbraak kan zijn in ra-behandeling.
Cellulaire immunotherapie is momenteel van groot belang en is op grote schaal gebruikt in kankertherapie. INKT-cellen zijn echter zeldzame, heterogene immunoregulerende cellen (slechts 0,3% van het totale aantal PBMC's)13, wat potentiële klinische toepassingen beperkt. Deze cellen zijn voornamelijk verdeeld in drie subpopulaties: 1) iNKT1 cellen, die een hoge expressie van promyelocytische leukemie zink-vinger eiwit (PLZF) en T-box transcriptie factor (T-bet); 2) iNKT2-cellen met tussenexpressie van PLZF en GATA bindend eiwit 3 (GATA3); 3) iNKT17 cellen met een lage expressie van PLZF en retinoïde-gerelateerde weesnucleaire receptor (ROR)-γt die IFN-γ, IL-4 en IL-1714afscheiden. Geactiveerde iNKT-cellen scheiden Th1, Th2 en Th17-achtige cytokinen af, die de verschillende immunomodulatorische effecten van iNKT-cellenbepalen 15. De immunomodulatorische en immunotherapeutische effecten van specifieke activering van verschillende subpopulaties van iNKT-cellen zijn verschillend. Daarom kan de selectie van specifieke fenotypes van iNKT-cellen (voornamelijk iNKT2) met ontstekingsremmende functies om de immuunrespons van het lichaam te reguleren, de immuunonbalans en immuunaandoeningen in RA corrigeren.
De oprichting van een ideaal diermodel is van groot belang voor de behandeling en studie van RA pathogenese. Momenteel, de meest gebruikte en volwassen dierlijke modellen omvatten collageen-geïnduceerde artritis, adjuvante artritis, zymosan-geïnduceerde artritis, en polysaccharide-geïnduceerde artritis16–17. Er is echter geen model dat alle kenmerken van de menselijke RA volledig kan simuleren. Type II collageen-geïnduceerde artritis (CIA) is een klassiek artritis model. De CIA wordt veroorzaakt door immunisatie van muizen met type II collageen-specifieke monoklonale antilichamen, als gevolg van de afhankelijkheid van het lichaam van dit ziektemodel. Benurs et al. beschreven een model met een systemische immuunrespons op glucose-6-fosfaat-isomerase (G6PI), dat perifere symmetrische polyartritis induceert bij vatbare muizenstammen18,19. In dit model is de ontwikkeling van artritis afhankelijk van T-cellen, B-cellen en aangeboren immuniteit18,19,20. Horikoshi21 vond dat RA-modellen als gevolg van immunisatie van DBA/1 muizen met G6PI polypeptide fragmenten zijn meer vergelijkbaar met de menselijke RA in termen van CD4+ T cellen en cytokinen (dat wil zeggen, IL-6 en TNF-α) dan de CIA-modellen. Om het stimulerende effect op de TCR-herkenningssite te vergroten, werden de gemengde polypeptidefragmenten van G6PI (hGPI325-339 en hGPI469-483) gebruikt om DBA/1 muizen te immuniseren om het RA-muismodel te construeren. Het slagingspercentage van deze aanpak kan hoog zijn omdat hGPI325-339 en hGPI469-483 immunodominant zijn voor I-A q-restricted T-celreacties. Daarom kan dit model de overproliferatie van CD4+ T-cellen en iNKT-celdefecten bij RA-patiëntensimuleren 22. Het basisonderzoek naar RA immunopathologie legde de basis voor ons verder diepgaand onderzoek.

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td><td>BD</td><td>563490</td><td>America</td></tr><tr><td>Anti-PE MicroBeads</td><td>Miltenyi</td><td>130-048-801</td><td>Duitsland</td></tr><tr><td>Columns</td><td>Miltenyi</td><td>MS</td><td>Duitsland</td></tr><tr><td>Cryogenic Centrifuge</td><td>Beckman</td><td>Allegra&reg; X-15R</td><td>America</td></tr><tr><td>DiR</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D12731</td><td>America</td></tr><tr><td>Embedding Center</td><td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td><td>BMJ-1</td><td>China</td></tr><tr><td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &beta; Chain</td><td>BD</td><td>553170</td><td>America</td></tr><tr><td>Flow cytometer</td><td>BD</td><td>Accuri C6</td><td>America</td></tr><tr><td>Freund's complete adjuvant</td><td>Sigma</td><td>F5881</td><td>America</td></tr><tr><td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td><td>Karebay Biochem</td><td>18062202</td><td>China</td></tr><tr><td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td><td>Karebay Biochem</td><td>18062203</td><td>China</td></tr><tr><td>In Vivo Imaging System</td><td>PerkinElmer</td><td>caliper IVIS lumina II</td><td>America</td></tr><tr><td>Ionomycin Calcium</td><td>Cayman</td><td>10004974</td><td>America</td></tr><tr><td>KRN7000</td><td>AdipoGen</td><td>AG-CN2-0013</td><td>America</td></tr><tr><td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td><td>MBL</td><td>TS-MCD-1</td><td>Japan</td></tr><tr><td>Mouse percoll</td><td>Solarbio</td><td>P8620</td><td>China</td></tr><tr><td>Optical Microscope</td><td>Olympus</td><td>Olympus-II</td><td>Japan</td></tr><tr><td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&upsih;t</td><td>BD</td><td>562683</td><td>America</td></tr><tr><td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td><td>BD</td><td>561316</td><td>America</td></tr><tr><td>Pertussis toxin</td><td>Sigma</td><td>P7208</td><td>America</td></tr><tr><td>phorbol esters</td><td>Cayman</td><td>10008014</td><td>America</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td><td>BD</td><td>555899</td><td>America</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Biological Industries</td><td>01-100-1ACS</td><td>Israël</td></tr><tr><td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td><td>BD</td><td>560485</td><td>America</td></tr><tr><td>Ultramicrotome</td><td>Leica</td><td>Leica EM UC6</td><td>Duitsland</td></tr></tbody></table>

adoptieve immunotherapie van inkt-cellen in glucose-6-fosfaat-isomerase (g6pi)-geïnduceerde ra-muizen

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Reumatoïde artritis (RA) is een complexe chronische inflammatoire auto-immuunziekte. De pathogenese van de ziekte is gerelateerd aan invariant natuurlijke killer T (iNKT) cellen. Patiënten met actieve RA presenteren minder iNKT-cellen, een defecte celfunctie en overmatige polarisatie van Th1. In deze studie werd een RA-diermodel opgezet met behulp van een mengsel van hGPI325-339 en hGPI469-483 peptiden. De iNKT-cellen werden verkregen door in vivo inductie en in vitro zuivering, gevolgd door infusie in RA-muizen voor adoptieve immunotherapie. Uit het in vivo imaging systeem (IVIS) bleek dat iNKT-cellen voornamelijk in de milt en lever werden verdeeld. Op dag 12 na de celtherapie vertraagde de progressie van de ziekte aanzienlijk, werden de klinische symptomen verlicht, nam de overvloed aan iNKT-cellen in de thymus toe, nam het aandeel iNKT1 in de thymus af en daalde het niveau van TNF-α, IFN-γ en IL-6 in het serum afnam. Adoptieve immunotherapie van iNKT-cellen herstelde het evenwicht van immuuncellen en corrigeerde de overmatige ontsteking van het lichaam.

De artritis index score en poot dikte verhoogd na het modelleren. Vergeleken met de controlegroep, begonnen de tenen van de RA-modelgroep rode zwelling te vertonen op 6 dagen na het modelleren, met geleidelijke verergering. Na 14 dagen piekte de rode zwelling in het enkelgewricht, gevolgd door geleidelijke verlichting. De dikte van de poot veranderde eveneens (P < 0,05) (Figuur 1).
De inflammatoire celinfiltratie nam aanzienlijk toe na het modelleren. De ...

Dit protocol maakt gebruik van G6PI gemengde peptiden om reumatoïde artritis modellen die dichter bij die van de menselijke reumatoïde artritis in CD4+ T cellen en cytokines construeren. Hoge zuiverheid invariant natuurlijke killer T cellen (voornamelijk iNKT2) met specifieke fenotypes en functies werden verkregen door in vivo inductie en in vitro zuivering voor adoptieve immunotherapie.

Adoptieve immunotherapie van iNKT-cellen in glucose-6-fosfaat-isomerase (G6PI)-Geïnduceerde RA-muizen

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Ons protocol beschrijft een methode om een RA-model te bouwen. Het slagingspercentage is meer dan 93 procent en de pathogenese is afhankelijk van T-cellen, B-cellen en aangeboren immuniteit, waardoor onderzoekers de pathogenese van RA beter kunnen bestuderen vanuit een mondiaal immuunperspectief. Vervolgens gebruiken we INKT-cellen met immunomodulerende effecten voor hun behandeling.INKT cellen hebben een goed effect op de behandeling door in vivo introductie die basisgegevens ondersteuning bieden voor de klinische toepassing van INKT cellen en echt explodeert de klinische toepassingswaarde van INKT cellen. Het grootste voordeel van deze technologie is dat het eenvoudig te bedienen en gemakkelijk te kopiëren is. Het aantonen van de procedure zal Chen Shengde, Gao Xiang, en Zhang Jingnan, afgestudeerde student van mijn laboratorium.Om te beginnen weegt u 1,75 milligram van zowel HGPI325 tot 339 en HGPI469 tot 483 fragmenten en los ze op in 5,25 milliliter van 4 graden Celsius triple gedestilleerd water. Los Complete Freund's Adjuvant op in een 50 graden Celsius waterbad. Trek 5,25 milliliter in nog eens 10 milliliter centrifugebuis en koel het af voor gebruik.Zet het mengsel van HG6

adoptive-immunotherapy-inkt-cells-glucose-6-phosphate-isomerase-g6pi

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Vertraagde type overgevoeligheid (DTH) is een ontstekingsreactie gemedieerd door CCR7-effector-geheugen T (TEM) lymfocyten. Hier laten we zien hoe de antigeen-specifieke TEM-cellen te activeren, te induceren adoptie-DTH bij Lewis ratten en toezicht op de ontstekingsreactie.

Inductie en Monitoring van Adoptieve vertraagd-type overgevoeligheid bij ratten

Genereren van T-lymfocyten van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS) cellen geeft een alternatieve aanpak van het gebruik van embryonale stamcellen voor T-cel-gebaseerde immunotherapie. De werkwijze blijkt dat door een...

Geregisseerd Differentiatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen naar T lymfocyten

This video illustrates a method for isolating invariant natural killer T cells, also known as iNKT cells. The procedure begins with injecting a synthetic glycolipid into a mouse to stimulate the activation and proliferation of iNKT cells in the spleen. Subsequently, single-cell suspensions are prepared from the spleen and incubated with iNKT-cell-recognizing complexes labeled with fluorophores, followed by magnetic bead-based separation, to isolate the iNKT cells.

Isolating Invariant Natural Killer T Cells from a Mouse Model

This video showcases a cell-based therapy for autoimmune arthritis in mice. iPSC-derived T regulatory cells expressing ovalbumin-specific receptors are injected with methylated bovine serum albumin (mBSA) emulsified in an adjuvant. Murine antigen-presenting cells (APCs) process and present the mBSA to T cells, prompting T cell activation and migration to the knee joint's synovial membrane. Subsequent injections involve mBSA alone in the left knee and a combination of mBSA and ovalbumin in the...

A Cell-Based Therapy for Autoimmune Arthritis in a Murine Model

This video demonstrates an imaging-based method to visualize transplanted luciferase-expressing beta cells into a non-obese diabetic immunodeficient mouse. The introduction of splenocytes from a diabetic mouse leads to progressive beta cell destruction, visually confirmed by declining luminescence after substrate introduction.

Imaging Transgenic Beta-Cells in an Immunodeficient Mouse Challenged with Diabetic Splenocytes

Wij een reproduceerbare werkwijze voor type 1 diabetes (T1D) bij de muis binnen twee weken adoptieve overdracht van eilandjescellen antigeen-specifieke primaire CD4 + T-cellen.

Versnelde Type 1 diabetes inductie in muizen door adoptieve overdracht van diabetogenische CD4 + T cellen

We presenteren hier een methode om functionele antigeen (Ag)-specifieke regulatoire T-cellen (Tregs) te ontwikkelen uit geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's) voor immunotherapie van auto-immuun artritis in een muismodel.

Ontwikkeling van stamcel-afgeleide Antigeen-specifieke regulatoire T-cellen tegen auto-immuniteit

Hier presenteren we een protocol voor de voorbereiding en het stereotaxic beheer van allogene menselijke lymfocyten in immunodeficiëntie muizen uitvoering orthotopic menselijke primaire hersentumoren. Deze studie biedt een bewijs-van-concept voor zowel de haalbaarheid en antitumorale werkzaamheid van cellulaire immuuntherapie intrabrain-geleverd.

Stereotactische adoptief overdracht van cytotoxische immuuncellen in lymfkliertest modellen van Orthotopic mens Glioblastoma Multiforme Xenografts

De niet-menselijke primaat (NHP) is een ideaal model voor het bestuderen van menselijke retinale cellulaire therapieën vanwege de anatomische en genetische overeenkomsten. Dit manuscript beschrijft een methode voor submaculaire transplantatie van retinale pigmentepitheelcellen in het NHP-oog en strategieën om intraoperatieve complicaties geassocieerd met maculaire manipulatie te voorkomen.

Retinale pigmentepitheeltransplantatie in een niet-humaan primaatmodel voor degeneratieve retinale ziekten

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en minimaal invasieve methode voor het transplanteren en afbeelden van NIT-1-cellen in niet-obese diabetische (NOD) -ernstige gecombineerde immunodeficiënte muizen die worden uitgedaagd met splenocyten gezuiverd van spontaan diabetische NOD-muizen.

Bioluminescente monitoring van transplantaatoverleving in een adoptief transfermodel van auto-immuundiabetes bij muizen

Hier rapporteren we een protocol dat een muismodel voor reumatoïde artritis (RA) tot stand brengt door adoptieve overdracht van CD4+ T-cellen van SKG-muizen, wat een snel en betrouwbaar experimenteel hulpmiddel biedt voor het onderzoeken van de immunologische mechanismen, pathologische progressie en ontwikkeling van nieuwe behandelingen voor RA.

Een adoptief overdrachtsmodel van reumatoïde artritis bij muizen

Leer adoptieve immunotherapie met iNKT-cellen voor reumatoïde artritis in een muismodel met een succesratio van meer dan 93%. Deze methode biedt inzicht in de pathogenese en klinische toepassingen.

Adoptieve immunotherapie van iNKT-cellen in glucose-6-fosfaat-isomerase (G6PI)-Geïnduceerde RA-muizen

Meer video's verkennen