Name: Een darm/levermicrofysiologisch systeem voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-12-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Leer een microfysiologisch systeem met darm- en leverorganoids voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling van acetaminofen. Deze methode vervangt dierproeven en versnelt geneesmiddelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wij danken dr. Christie Guguen-Guillouzo, Dr. Philippe Gripon bij Unit 522 INSERM en dr. Christian Trepo bij Unit 271 INSERM voor het gebruik van het biologisch materiaal (Hepa RG cellen) en voor het beschikbaar stellen van vervolgens voor ons om het academisch onderzoek uit te voeren.

<ol><li>Zhang, D., Luo, G., Ding, X., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+experimental+models+of+drug+metabolism+and+disposition+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica+B%22%5BJournal%5D)">Preclinical experimental models of drug metabolism and disposition in drug discovery and development.</a> Acta Pharmaceutica Sinica B. 2 (6), 549-561 (2012).</li>
<li>Hynds, R. E., Giangreco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relevance+of+human+stem+cell-derived+organoid+models+for+epithelial+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">The relevance of human stem cell-derived organoid models for epithelial translational medicine.</a> Stem Cells. 31 (3), 417-422 (2013).</li>
<li>Sivaraman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Microscale+In+vitro+Physiological+Model+of+the+Liver%3A+Predictive+Screens+for+Drug+Metabolism+and+Enzyme+Induction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A Microscale In vitro Physiological Model of the Liver: Predictive Screens for Drug Metabolism and Enzyme Induction.</a> Current Drug Metabolism. 6 (6), 569-591 (2005).</li>
<li>Dehne, E. M., Hasenberg, T., Marx, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ascendance+of+microphysiological+systems+to+solve+the+drug+testing+dilemma%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Science+OA%22%5BJournal%5D)">The ascendance of microphysiological systems to solve the drug testing dilemma.</a> Future Science OA. 3 (2), 185(2017).</li>
<li>Oleaga, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-Organ+toxicity+demonstration+in+a+functional+human+in+vitro+system+composed+of+four+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Multi-Organ toxicity demonstration in a functional human in vitro system composed of four organs.</a> Scientific Reports. 6, 20030(2016).</li>
<li>Maschmeyer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+four-organ-chip+for+interconnected+long-term+co-culture+of+human+intestine%2C+liver%2C+skin+and+kidney+equivalents%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A four-organ-chip for interconnected long-term co-culture of human intestine, liver, skin and kidney equivalents.</a> Lab Chip. 15 (12), 2688-2699 (2015).</li>
<li>Esch, M. B., Mahler, G. J., Stokol, T., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body-on-a-chip+simulation+with+gastrointestinal+tract+and+liver+tissues+suggests+that+ingested+nanoparticles+have+the+potential+to+cause+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Body-on-a-chip simulation with gastrointestinal tract and liver tissues suggests that ingested nanoparticles have the potential to cause liver injury.</a> Lab Chip. 14 (16), 3081-3092 (2014).</li>
<li>Materne, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multi-organ+Chip+-+A+Microfluidic+Platform+for+Long-term+Multi-tissue+Coculture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture.</a> Journal of Visualized Experiments. , e52526(2015).</li>
<li>Esch, M. B., Ueno, H., Applegate, D. R., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular%2C+pumpless+body-on-a-chip+platform+for+the+co-culture+of+GI+tract+epithelium+and+3D+primary+liver+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Modular, pumpless body-on-a-chip platform for the co-culture of GI tract epithelium and 3D primary liver tissue.</a> Lab Chip. 16 (14), 2719-2729 (2016).</li>
<li>Sung, J. H., Kam, C., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+device+for+a+pharmacokinetic%E2%80%93pharmacodynamic+%28PK-PD%29+model+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">A microfluidic device for a pharmacokinetic–pharmacodynamic (PK-PD) model on a chip.</a> Lab on a Chip. 10 (4), 446-455 (2010).</li>
<li>Viravaidya, K., Sin, A., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Microscale+Cell+Culture+Analog+to+Probe+Naphthalene+Toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Development of a Microscale Cell Culture Analog to Probe Naphthalene Toxicity.</a> Biotechnology Progress. 20 (1), 316-323 (2004).</li>
<li>Sin, A., Chin, K. C., Jamil, M. F., Kostov, Y., Rao, G., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Design+and+Fabrication+of+Three-Chamber+Microscale+Cell+Culture+Analog+Devices+with+Integrated+Dissolved+Oxygen+Sensors%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">The Design and Fabrication of Three-Chamber Microscale Cell Culture Analog Devices with Integrated Dissolved Oxygen Sensors.</a> Biotechnology Progress. 20 (1), 338-345 (2004).</li>
<li>Tsamandouras, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+Gut+and+Liver+Microphysiological+Systems+for+Quantitative+In+vitro+Pharmacokinetic+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Integrated Gut and Liver Microphysiological Systems for Quantitative In vitro Pharmacokinetic Studies.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1499-1512 (2017).</li>
<li>Graham, G. G., Davies, M. J., Day, R. O., Mohamudally, A., Scott, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+modern+pharmacology+of+paracetamol%3A+Therapeutic+actions%2C+mechanism+of+action%2C+metabolism%2C+toxicity+and+recent+pharmacological+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammopharmacology%22%5BJournal%5D)">The modern pharmacology of paracetamol: Therapeutic actions, mechanism of action, metabolism, toxicity and recent pharmacological findings.</a> Inflammopharmacology. 21 (3), 201-232 (2013).</li>
<li>Hodgman, M. J., Garrard, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Review+of+Acetaminophen+Poisoning%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Clinics%22%5BJournal%5D)">A Review of Acetaminophen Poisoning.</a> Critical Care Clinics. 28 (4), 499-516 (2012).</li>
<li>Maschmeyer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chip-based+human+liver-intestine+and+liver-skin+co-cultures+-+A+first+step+toward+systemic+repeated+dose+substance+testing+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Chip-based human liver-intestine and liver-skin co-cultures - A first step toward systemic repeated dose substance testing in vitro.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 95, 77-87 (2015).</li>
<li>Bessems, J. G. M., Vermeulen, N. P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracetamol+%28acetaminophen%29-induced+toxicity%3A+Molecular+and+biochemical+mechanisms%2C+analogues+and+protective+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Paracetamol (acetaminophen)-induced toxicity: Molecular and biochemical mechanisms, analogues and protective approaches.</a> Critical Reviews in Toxicology. 31 (1), 55-138 (2001).</li>
<li>Hirt, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+afterload+induces+pathological+cardiac+hypertrophy%3A+A+new+in+vitro+model%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Increased afterload induces pathological cardiac hypertrophy: A new in vitro model.</a> Basic Research in Cardiology. 107 (6), 307(2012).</li>
<li>Fink, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+stretch+of+engineered+heart+tissue+induces+hypertrophy+and+functional+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22The+FASEB+journal+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Chronic stretch of engineered heart tissue induces hypertrophy and functional improvement.</a> The FASEB journal official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 14 (5), 669-679 (2000).</li>
<li>Zhang, B., Peticone, C., Murthy, S. K., Radisic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standalone+perfusion+platform+for+drug+testing+and+target+validation+in+micro-vessel+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">A standalone perfusion platform for drug testing and target validation in micro-vessel networks.</a> Biomicrofluidics. 7 (4), 044125(2013).</li>
<li>Araújo, F., Sarmento, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+the+characterization+of+an+in+vitro+triple+co-culture+intestine+cell+model+for+permeability+studies%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Towards the characterization of an in vitro triple co-culture intestine cell model for permeability studies.</a> International Journal of Pharmaceutics. 458 (1), 128-134 (2013).</li>
<li>Cadena-Herrera, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+three+viable-cell+counting+methods%3A+Manual%2C+semi-automated%2C+and+automated%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Reports%22%5BJournal%5D)">Validation of three viable-cell counting methods: Manual, semi-automated, and automated.</a> Biotechnology Reports. 7, 9-16 (2015).</li>
<li>User Guide Millicell® ERS-2 Electrical Resistance System. Millipore. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.merckmillipore.com/BR/pt/life-sciencee-research/cell-culture-systems/cell-analysis/millicell-ers-2-voltohmmeter/FiSb.qB.LDgAAAFBdMhb3.r5">http://www.merckmillipore.com/BR/pt/life-sciencee-research/cell-culture-systems/cell-analysis/millicell-ers-2-voltohmmeter/FiSb.qB.LDgAAAFBdMhb3.r5</a> 6-10 (2016).</li>
<li>Gripon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+a+human+hepatoma+cell+line+by+hepatitis+B+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Infection of a human hepatoma cell line by hepatitis B virus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (24), 15655-15660 (2002).</li>
<li>Guillouzo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+hepatoma+HepaRG+cells%3A+A+highly+differentiated+model+for+studies+of+liver+metabolism+and+toxicity+of+xenobiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">The human hepatoma HepaRG cells: A highly differentiated model for studies of liver metabolism and toxicity of xenobiotics.</a> Chemico-Biological Interactions. 168 (1), 66-73 (2007).</li>
<li>Wagner, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+multi-organ-chip+for+long-term+cultivation+and+substance+testing+proven+by+3D+human+liver+and+skin+tissue+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+on+a+Chip%22%5BJournal%5D)">A dynamic multi-organ-chip for long-term cultivation and substance testing proven by 3D human liver and skin tissue co-culture.</a> Lab on a Chip. 13 (18), 3538-3547 (2013).</li>
<li>Forrest, J. A. H., Clements, J. A., Prescott, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Pharmacokinetics+of+Paracetamol%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Clinical Pharmacokinetics of Paracetamol.</a> Clinical Pharmacokinetics. 7 (2), 93-107 (1982).</li>
<li>Dollery, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDollery%2C+C+%22Therapeutic+Drugs%22">Therapeutic Drugs</a>. , Churchill Livingstone. London. (1999).</li>
<li>Food and Drug Administration Guidance for Industry: Bioanalytical method validation. U.S. Department of Health and Human Services. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.labcompliance.de/documents/FDA/FDA-Others/Laboratory/f-507-bioanalytical-4252fnl.pdf">http://www.labcompliance.de/documents/FDA/FDA-Others/Laboratory/f-507-bioanalytical-4252fnl.pdf</a> (2013).</li>
<li>Shah, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioanalytical+method+validation-a+revisit+with+a+decade+of+progress%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+research%22%5BJournal%5D)">Bioanalytical method validation-a revisit with a decade of progress.</a> Pharmaceutical research. 17 (12), 1551-1557 (2000).</li>
<li>Marin, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shp2+negatively+regulates+growth+in+cardiomyocytes+by+controlling+focal+adhesion+kinase%2Fsrc+and+mTOR+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Shp2 negatively regulates growth in cardiomyocytes by controlling focal adhesion kinase/src and mTOR pathways.</a> Circulation Research. 103 (8), 813-824 (2008).</li>
<li>Linkert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metadata+matters%3A+Access+to+image+data+in+the+real+world%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Metadata matters: Access to image data in the real world.</a> Journal of Cell Biology. 189 (5), 777-782 (2010).</li>
<li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OECD+TG+491+-+Short+Time+Exposure+In+vitro+Test+Method+for+Identifying+i%29+Chemicals+Inducing+Serious+Eye+Damage+and+ii%29+Chemicals+Not+Requiring+Classification+for+Eye+Irritation+or+Serious+Eye+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22OECD%22%5BJournal%5D)">OECD TG 491 - Short Time Exposure In vitro Test Method for Identifying i) Chemicals Inducing Serious Eye Damage and ii) Chemicals Not Requiring Classification for Eye Irritation or Serious Eye Damage.</a> OECD. 14, OECD guidelines for the testing of chemicals (2018).</li>
<li>Fernandes, M. B., Gonçalves, J. E., Tavares, L. C., Storpirtis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2+cells+permeability+evaluation+of+nifuroxazide+derivatives+with+potential+activity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+%28MRSA%29%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Development+and+Industrial+Pharmacy%22%5BJournal%5D)">Caco-2 cells permeability evaluation of nifuroxazide derivatives with potential activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA).</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 41 (7), 1066-1072 (2015).</li>
<li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OECD+TG+492+-+Reconstructed+human+Cornea-like+Epithelium+%28RhCE%29+test+method+for+identifying+chemicals+not+requiring+classification+and+labelling+for+eye+irritation+or+serious+eye+damage%5BTitle%5D)+AND+%22OECD%22%5BJournal%5D)">OECD TG 492 - Reconstructed human Cornea-like Epithelium (RhCE) test method for identifying chemicals not requiring classification and labelling for eye irritation or serious eye damage.</a> OECD. 35, OECD guidelines for the testing of chemicals (2018).</li>
<li>OECD, O. E. C. D. OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OECD+TG+431+-+In+vitro+skin+corrosion%3A+reconstructed+human+epidermis+%28RHE%29+test+method%5BTitle%5D)+AND+%22OECD%22%5BJournal%5D)">OECD TG 431 - In vitro skin corrosion: reconstructed human epidermis (RHE) test method.</a> OECD. 8, OECD guidelines for the testing of chemicals (2016).</li>
<li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OECD+TG+439+-+In+vitro+Skin+Irritation%3A+Reconstructed+Human+Epidermis+Test+Method%5BTitle%5D)+AND+%22OECD%22%5BJournal%5D)">OECD TG 439 - In vitro Skin Irritation: Reconstructed Human Epidermis Test Method.</a> OECD. 21, OECD guidelines for the testing of chemicals (2015).</li>
<li>Marin, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acetaminophen+absorption+and+metabolism+in+an+intestine%2Fliver+microphysiological+system%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Acetaminophen absorption and metabolism in an intestine/liver microphysiological system.</a> Chemico-Biological Interactions. 299, 59-76 (2019).</li>
<li>Maass, C., Stokes, C. L., Griffith, L. G., Cirit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-functional+scaling+methodology+for+translational+pharmacokinetic+and+pharmacodynamic+applications+using+integrated+microphysiological+systems+%28MPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology+%28United+Kingdom%29%22%5BJournal%5D)">Multi-functional scaling methodology for translational pharmacokinetic and pharmacodynamic applications using integrated microphysiological systems (MPS).</a> Integrative Biology (United Kingdom). 9 (4), 290-302 (2017).</li>
<li>Sung, J. H., Wang, Y., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+using+mathematical+modeling+approaches+to+design+and+interpret+multi-organ+microphysiological+systems+%28MPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22APL+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Strategies for using mathematical modeling approaches to design and interpret multi-organ microphysiological systems (MPS).</a> APL Bioengineering. 3 (2), 021501(2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De nauwkeurige en betrouwbare beoordeling van de farmacologische eigenschappen van onderzoekende nieuwe geneesmiddelen is van cruciaal belang voor het verminderen van het risico in de volgende ontwikkelingsstappen. De MPS is een relatief nieuwe technologie, die gericht is op het verbeteren van de voorspellende kracht en het verminderen van de kosten en tijd besteed aan preklinische tests. Onze groep is op weg in de beoordeling van farmacokinetische en toxicologische eigenschappen meestal nodig voor lood optimalisatie. We...

Als gevolg van genomische en proteomische verschillen, dier modellen hebben beperkte voorspellende waarde voor verschillende menselijke resultaten. Bovendien zijn ze tijdrovend, duur en ethisch twijfelachtig1. MPS is een relatief nieuwe technologie die gericht is op het verbeteren van de voorspellende kracht en het verminderen van de kosten en tijd besteed aan pre-klinische tests. Het zijn microfluidische apparaten die organoïden (kunstmatige mimetiek functionele eenheden van organen) cultiveren onder mediastroom die organoïde-organoïde communicatie bevordert. Organoïden gemaakt van menselijke cellen verhogen de relevantie van de vertaling2,3,4. MPS zal naar verwachting beter presteren dan de dierproeven omdat ze genetisch menselijk zijn en het samenspel tussen weefsels samenvatten. Wanneer het volledig functioneel is, zal de MPS zinvollere resultaten opleveren, met hogere snelheid en lagere kosten en risico's4. Veel groepen ontwikkelen MPS voor verschillende doeleinden, met name ziektemodellen om de werkzaamheid van geneesmiddelen te testen.
Blootstellingsniveau is een van de meest kritieke parameters voor de evaluatie van de werkzaamheid en toxiciteit van geneesmiddelen5,6,7,8,9,10,11,12. MPS maakt organoïde integratie die systemische blootstelling emuleert en zal naar verwachting beter presteren dan de traditionele 2D menselijke weefsel cultuur. Deze technologie kan de voorspelling van samengestelde darmabsorptie en levermetabolisme4aanzienlijk verbeteren.
Een MPS integratie van menselijk gelijkwaardig model van darm en lever is een goed uitgangspunt, gezien de centrale rol van deze twee organen in de biologische beschikbaarheid van geneesmiddelen en systemische blootstelling13,14,15. APAP is een aantrekkelijk medicijn voor het bestuderen van een MPS zonder nierequivalent omdat de metabolisatie voornamelijk wordt gedaan door de lever16,17.
De 2-OC is een tweekamermicrofluïdisch apparaat dat geschikt is voor de cultuur van twee verschillende menselijke equivalente weefsels/organoïden met elkaar verbonden door microkanalen16. Om een in vitro human orale/intraveneuze toediening van een geneesmiddel na te bootsen en de effecten van de kruisspraak tussen de darm- en leverequivalenten op APAP-farmacokinetiek te beoordelen, naast de organoïden functionaliteit en levensvatbaarheid, drie verschillende MPS assemblages werden uitgevoerd: (1) een "Darm 2-OC MPS" bestaat uit een darm equivalent gebaseerd op een cultuur insert met een Caco-2 + HT-29 cellen cocultuur, geïntegreerd in de 2-OC apparaat; (2) een "Liver 2-OC MPS" bestaande uit leversferoïden van HepaRG + HHSteC (Human Hepatic Stellate Cells) geïntegreerd in het 2-OC apparaat; en (3) een "Darm/Lever 2-OC MPS" bestaande uit het darmequivalent in het ene apparaatcompartiment dat communiceert met het leverequivalent in het andere door de mediastroom door de microfluïde kanalen.
Alle tests werden uitgevoerd onder statische (geen stroom) en dynamische (met stroom) omstandigheden als gevolg van de impact van de mechanische stimuli (compressie, stretching, en schuintrekken) op de levensvatbaarheid van de cel en functionaliteiten18,19,20. Het onderhavige artikel beschrijft het protocol voor APAP orale/intraveneuze toedieningsmultiulatie en de respectievelijke absorptie/stofwisseling en toxicologische analyses in de 2-OC MPS met menselijke darm- en leverequivalentenmodellen.

<table><tbody><tr><td>1x DPBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190235</td><td>Geen calcium, geen magnesium</td></tr><tr><td>2-OC</td><td>TissUse GmbH</td><td></td><td>Two-organ chip</td></tr><tr><td>384-well Spheroid Microplate</td><td>Corning</td><td>3830</td><td>Zwart/helder, ronde bodem, ultra-lage hechting</td></tr><tr><td>4% Paraformaldehyde</td><td></td><td></td><td>Gebruik voor celfixatie</td></tr><tr><td>Acetaminophen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7085</td><td>Gebruik voor MPS-assays</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Tedia</td><td></td><td>Gebruikt voor HPLC</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>confocale experiment</td></tr><tr><td>Ammonium acetate</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Gebruikt voor HPLC</td></tr><tr><td>Caco-2 cellen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>86010202</td><td></td></tr><tr><td>Cacodylate buffer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Celcultuurkolven</td><td>Sarstedt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Confocale fluorescentiemicroscoop</td><td>Leica</td><td>DMI6000</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>CM1950</td><td></td></tr><tr><td>DMEM hoge glucose</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12800017</td><td>Voeg supplementen toe: 10% foetaal bovien serum, 100 eenheden per ml penicilline, 100 µg/mL streptomycine en 1% niet-essentiële aminozuren</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4540</td><td>Voeg 2% toe aan HepaRG-medium</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Synth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foetaal bovien serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12657029</td><td></td></tr><tr><td>Freezing medium OCT</td><td>Tissue-Tek</td><td></td><td>Tissue-Tek&reg; O.C.T.&trade; Compound is een formulering van wateroplosbare glycolen en harsen, die een handige monstermatrix biedt voor cryostat secties bij temperaturen van -10&deg;C en lager.</td></tr><tr><td>Hematoxyline &amp; Eosine</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HepaRG cellen</td><td>Biopredic International</td><td>HPR101</td><td>Ongedifferentieerde cellen</td></tr><tr><td>HHSTeC</td><td>ScienCell Research Laboratories</td><td>5300</td><td>Cellen en alle kweeksupplementen</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td></td><td></td><td>HCA-experimenten</td></tr><tr><td>HT-29 cellen</td><td>Sigma Aldrich</td><td>85061109</td><td></td></tr><tr><td>Humaan insuline</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>12585014</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortison</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Merck</td><td>278475</td><td></td></tr><tr><td>Karnovsky&rsquo;s fixatiemiddel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A2916801</td><td></td></tr><tr><td>Luna C18 guard column SS</td><td>Phenomenex</td><td></td><td>Gebruikt voor HPLC</td></tr><tr><td>Microscoop</td><td>Leica</td><td>DMi4000</td><td></td></tr><tr><td>Microtoom</td><td>Leica</td><td>RM2245</td><td></td></tr><tr><td>Millicell 0.4 µm poriegrootte inserts</td><td>Merck</td><td>PIHP01250</td><td></td></tr><tr><td>Millicell ERS-2 meter</td><td>Merck</td><td>MERS00002</td><td>Gebruikt voor TEER-meting</td></tr><tr><td>MitoTracker Deep Red</td><td></td><td></td><td>HCA-experimenten</td></tr><tr><td>MTT</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>M6494</td><td></td></tr><tr><td>MX3000P systeem</td><td>Agilent Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neubauer kamer</td><td></td><td></td><td>Cellen tellen</td></tr><tr><td>Operetta High Content Imaging System</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Gebruikt voor HCA</td></tr><tr><td>P450-Glo CYP3A4 Assay met Luciferin-IPA</td><td>Promega</td><td>Cat.# V9001</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15070063</td><td>Celcultuur</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>Histologie</td></tr><tr><td>Primers</td><td></td><td></td><td>RT-qPCR</td></tr><tr><td>PVDF-membraan</td><td>BioRad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PVDF-slangfilter</td><td></td><td></td><td>0.22 µm poriegrootte</td></tr><tr><td>Omgekeerde-fase Luna C18-kolom</td><td>Phenomenex</td><td></td><td>Gebruikt voor HPLC</td></tr><tr><td>Schudder (IKA VXR Basic Vibrax)</td><td>IKA Works GmbH &amp; Co</td><td>2819000</td><td>Gebruikt voor spheroids om MTT-assay te verbeteren</td></tr><tr><td>Stellate Cell Media (STeC CM)</td><td>ScienCell</td><td>5301</td><td>Voeg STeC CM-supplementen toe</td></tr><tr><td>SuperScriptIITM Reverse Transcriptase</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green PCR Master Mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRizol TM-reagens</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>Trizol is een monofasische oplossing van fenol en guanidineisothiocyanaat.</td></tr><tr><td>Trypsine/EDTA-oplossing</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Ultra-lage hechtingsplaten</td><td>Corning</td><td>CLS3471-24EA</td><td>6 wellen</td></tr><tr><td>Vectashield plus DAPI montage media</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Witte matte 96-well Microplate</td><td>PerkinHelmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Breed-opening tips</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Williams E</td><td>Pan Biotech</td><td>P04-29510</td><td>Voeg supplementen toe: 10% foetaal bovien serum, 2 mM L-glutamine, 100 eenheden per ml penicilline, 100 µg/mL streptomycine en 5 µg/mL humaan insuline</td></tr></tbody></table>

een darm/levermicrofysiologisch systeem voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling

An Intestine/Liver Microphysiological System for Drug Pharmacokinetic and Toxicological Assessment

De onlangs geïntroduceerde microfysiologische systemen (MPS) cultiveren menselijke organoïden zullen naar verwachting beter presteren dan dieren in de preklinische tests fase van het geneesmiddel ontwikkelen proces, omdat ze genetisch menselijk en recapituleren het samenspel tussen weefsels. In deze studie werden de menselijke darmbarrière (geëmuleerd door een co-cultuur van Caco-2- en HT-29-cellen) en het leverequivalent (geëmuleerd door sferoïden gemaakt van gedifferentieerde HepaRG-cellen en menselijke lever stellatische cellen) geïntegreerd in een twee-orgaanchip (2-OC) microfluïde apparaat om wat paracetamol (APAP) farmacokinetische (PK) en toxische eigenschappen te beoordelen. De MPS had drie samenstellingen: Darm slechts 2-OC, Lever slechts 2-OC, en Darm/Lever 2-OC met de zelfde media die beide organoïden doordringen. Voor PK-beoordelingen hebben we de APAP in de media gesedisd op vooraf ingestelde tijdpunten na toediening over de darmbarrière (het emuleren van de orale route) of in de media (het emuleren van de intraveneuze route), op respectievelijk 12 μM en 2 μM. De mediamonsters werden geanalyseerd door reversed-phase hogedruk vloeistofchromatografie (HPLC). Organoïden werden geanalyseerd voor genexpressie, voor TEER-waarden, voor eiwitexpressie en -activiteit, en vervolgens verzameld, vastgesteld en onderworpen aan een reeks morfologische evaluaties. De MTT-techniek presteerde goed bij het beoordelen van de levensvatbaarheid van de organoïden, maar de hoge gehalteanalyses (HCA) konden zeer vroege toxische voorvallen detecteren in reactie op apap-behandeling. We hebben geverifieerd dat de mediastroom de APAP-absorptie niet significant beïnvloedt, terwijl de leverequivalente functionaliteit aanzienlijk verbetert. De APAP menselijke darmabsorptie en leverstofwisseling kan worden geëmuleerd in de MPS. Het verband tussen MPS-gegevens en in silico-modellering heeft een groot potentieel om de voorspelbaarheid van de in vitro-methoden te verbeteren en een betere nauwkeurigheid te bieden dan diermodellen in farmacokinetische en toxicologische studies.

Om de PK APAP-tests uit te voeren in de 2-OC MPS, is de eerste stap het vervaardigen van de menselijke darm- en leverequivalenten (organoïden). Ze zijn geïntegreerd in de 2-OC microfluïde apparaat (Figuur 1A) 24 uur voor het starten van de PK APAP test. De volgende dag wordt het medium gewijzigd en wordt het model blootgesteld aan APAP. Figuur 1 illustreert de darm- en leverequivalenten die in het 2-OC-apparaat(figuur 1B) en de APAP...

We stelden een microfysiologisch systeem (MPS) met darm- en leverorganoïden bloot aan paracetamol (APAP). Dit artikel beschrijft de methoden voor organoïde productie en APAP farmacokinetische en toxicologische eigendomsbeoordelingen in de MPS. Het beschrijft ook de weefselfunctionaliteitsanalyses die nodig zijn om de resultaten te valideren.

Een darm/levermicrofysiologisch systeem voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling

The recently introduced microphysiological systems (MPS) cultivating human organoids are expected to perform better than animals in the preclinical tests ...

Microfysiologische systemen hebben de mogelijkheid om farmacokinetische en de toxicologische reactie van het menselijk lichaam te emuleren op specifieke behandelingen van belangen. Microfysiologische systemen hebben het potentieel om dierproeven te vervangen, omdat het gebruik ervan de voorspellende kracht van in vitro-methoden kan verbeteren en de kosten en tijd van farmacokinetische en toxicologische studies kan verminderen. 24 uur voor de toediening van de teststof, splits een 800 microliter aliquot van William ES medium tussen de grotere en kleinere compartimenten van de twee orgelchip, en het basolaterale en apicale medium van elk darmbarrière-equivalent in de voorbereide 24 putplaten aanzuigen.Met behulp van steriele tangen, integreer een insert per twee orgel chip circuit in het grotere compartiment en voeg 200 microliters van DMEMS aan de apicale kant. Met behulp van brede boringen integreert u 20 leverequivalenten per circuit in het kleinere compartiment van de twee orgelchip en sluit u het systeem aan op de controle-eenheid. Sluit vervolgens de besturingseenheid aan op een luchttoevoer onder druk en zet de druk op ongeveer plus of min 300 staven en een pompfrequentie van 0,3 Hertz.De volgende dag verdun de voorraad paracetamol oplossing tot een 12 micromolar concentratie. Om het medium in het systeem te vervangen, de basolaterale en apicale media van de darmbarrière-equivalent in de twee orgelchip aan te trekken en 500 microliters van vers geschikt kweekmedium toe te voegen aan het grote compartiment aan de organoïde basolaterale zijde en 300 microliter aan het kleine compartiment. Na controle op bellen, emuleren orale toediening met de toevoeging van 200 microliter van een 12 micromolar paracetamol oplossing aan de apicale kant van de darmcultuur inserts en sluit het microfysiologische systeem aan de controle-eenheid.Verzamel het totale volume van zowel de darmapicale als de basolaterale zijkanten, evenals van het kleine compartiment in drievoud op de aangegeven tijdstippen. Wanneer alle monsters zijn verzameld, stelt u alle relevante parameters voor de HPLC-analyse zoals aangegeven in de tabel in en filtert u de mobiele fase door een membraanfilter van 0,4 micron onder vacuüm. Vervolgens filteren de monsters door middel van een 0,22 micron porie grootte PVDF spuitfilter en bewaar de monsters in een flacon voordat u begint met de HPLC UV-meting.Om de levensvatbaarheid van de organoïde te beoordelen, breng je alle 20 sferoïden van elke repliceren naar individuele putten van een 96 putplaat en breng je de celcultuur inserts over naar individuele putten van een 24 putplaat. Was de weefselequivalenten drie keer met verse DPBS per wasbeurt en voeg 300 microliter van een één milligram per milliliter MTT-oplossing toe aan elke experimentele put. Na een incubatie van drie uur in de celkweek incubator, vervang de MTT-oplossing door 200 microliters isopropanol per put voor een nachtelijke incubatie bij vier graden Celsius om de MTT-formazan uit de darm- en leverequivalenten te halen.De volgende ochtend, breng 200 microliter van elke supernatant naar de juiste put in de 96 put plaat en lees de formazan op een plaatlezer op 570 nanometer om de berekening van de relatieve capaciteit van de cellen om MTT te verminderen met behulp van de gemiddelde optische dichtheid van elk tijdpunt in vergelijking met de negatieve controle. Voor cytochemische en histologische analyse van de monsters, eerst vast te stellen de darm en lever equivalenten in 4%paraformaldehyde in 0,1 molaire PBS gedurende 25 minuten bij kamertemperatuur. Aan het einde van de incubatie, was de organoïden vijf keer in PBS gedurende 10 minuten per wasbeurt, voordat u de darm- en leverequivalenten kleurt met tetramethylrhodamine isothiocyanaat phalloidin Alexa Fluor 647 phalloidin gedurende een uur bij kamertemperatuur.Breng de monsters aan het einde van de incubatie naar het vriesmedium gedurende enkele minuten voordat de weefsels in vloeibare stikstof worden ingevroren. Gebruik vervolgens een cryostat om 10 tot 12 micron dikke leversferoïde cryo-secties te verwerven en de weefselsecties in montagemedium met DAPI te monteren voor beeldvorming door confocale fluorescentiemicroscopie. Voor mitochondriale en nucleaire kleuring, volledig dek de monsters met mitochondriale kleuring oplossing voor een 15 tot 45 minuten incubatie bij 37 graden Celsius in een bevochtigde atmosfeer met 5% kooldioxide.Vervang aan het einde van de incubatie de kleuroplossing voorzichtig gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur door 2 tot 4%paraformaldehyde in PBS. Na het bevestigen, spoel de cellen voorzichtig twee keer met verse PBS gedurende vijf minuten per wasbeurt alvorens de monsters te labelen met nucleïnezuur kleuring werkoplossing gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Aan het einde van de incubatie, was de monsters met drie, vijf minuten wast in PBS beschermd tegen licht, en gebruik de nucleïnezuur vlek om kwantificering van het aantal mitochondriale vlek uitdrukken cellen op een fluorescerende microscoop met de juiste filtersets te vergemakkelijken.De integratie van de menselijke darmbarrière en een leverequivalent in een microfluïdisch apparaat met twee organenchips maakt een beoordeling mogelijk van de farmacokinetische en toxicologische eigenschappen van behandelingen van belang. Na de behandeling kunnen de mediamonsters door HPLC worden geanalyseerd. De organoïden kunnen worden geanalyseerd voor hun genexpressie, trans-epitheel elektrische weerstand waarden, en eiwitexpressie en activiteit, evenals voor hun morfologische kenmerken.MTT-analyse kan worden uitgevoerd om de levensvatbaarheid van organoïden te beoordelen en om zeer vroege toxische voorvallen te detecteren in reactie op paracetamolbehandeling. De mediastroom heeft geen significante invloed op de absorptie van paracetamol, terwijl het de functionaliteit van de leverequivalent aanzienlijk verbetert, wat aangeeft dat de absorptie van menselijke darmcetamol en het hepatische metabolisme kunnen worden geëmuleerd in dit microfysiologische systeem. Microfysiologische systemen hebben het potentieel om diermodellen te vervangen in de ontwikkeling en ontdekking van geneesmiddelen, omdat ze de menselijke fysiologie beter nabootsen en kunnen worden gebruikt om de ontwikkeling van geneesmiddelen in een hogere snelheid en lagere kosten voor risico en complexiteit te bevorderen.

an-intestineliver-microphysiological-system-for-drug-pharmacokinetic

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

Hier beschrijven we een techniek om de mesenteriale lymfevat te canuleren bij ratten, wat de kwantificering van lipiden- en geneesmiddeltransport via het lymfestelsel mogelijk maakt na intestinale toediening. De techniek kan worden aangepast om mesenteriale lymfeconcentraties en/of transport van vocht, immuuncellen, peptiden, eiwitten en lipofiele moleculen te beoordelen.

De Mesenteriale Lymfe Duct gecanuleerde Rat Model: Toepassing op de beoordeling van Intestinal Lymfatische Drug Transport

Hier presenteren we een protocol om primaire cellen, weefselmodellen en punchbiopten gedurende maximaal 28 dagen te cocultiveren in een microfluïdische multi-orgaan chip. Humane dermale microvasculaire endotheelcellen, leveraggregaten en huidbiopten werden met succes gecombineerd in een gemeenschappelijke mediacirculatie.

De Multi-orgel Chip - Een Microfluïdische platform voor lange termijn Multi-weefsel Coculture

Metabole competentie van in vitro systemen is een belangrijke voorwaarde voor de biotransformatie en dispositie van drugs en toxische stoffen. In dit protocol beschrijven we de toepassing van referentie- metabole probes fase I metabolisme in celkweken beoordelen.

Massaspectrometrie en luminogene gebaseerde benaderingen voor karakteriseren Fase I Metabolic competentie van<em&gt; In Vitro</em&gt; Cell Cultures

De toegang van voedingsstoffen, microbiota metabolieten en medicijnen voor het verkeer wordt geregeld door de darm-bloed-barrière (GBB). Beschrijven we een directe methode voor het meten van de GBB permeabiliteit in vivo, die, in tegenstelling tot veelgebruikte indirecte methoden, wordt vrijwel niet beïnvloed door de functies van lever en nieren.

Een In Vivo -methode voor het uitrekenen van de Gut-bloed barrière en lever metabolisme van Microbiota producten

Deze procedure werd vastgesteld om te worden gebruikt voor de ontwikkeling van geavanceerde 3D-leverculturen in vitro, die een meer fysiologisch relevante beoordeling kunnen bieden van de genotoxische gevaren die gepaard gaan met blootstelling aan nanomaterialen gedurende zowel acute als langdurige, herhaalde dosisschema's.

Geavanceerde 3D-levermodellen voor in vitro genotoxiciteitstests na langdurige blootstelling aan nanomaterialen

Geneesmiddel-geïnduceerde leverbeschadiging (DILI) is een belangrijke oorzaak van falen van geneesmiddelen. Er is een protocol ontwikkeld om de DILI-aansprakelijkheid van een verbinding nauwkeurig te voorspellen met behulp van een levermicrofysiologisch systeem (MPS). Het levermodel maakt gebruik van de cocultuur van primaire levercellen en translationeel relevante eindpunten om cellulaire reacties op de behandeling te beoordelen.

Humane lever microfysiologisch systeem voor het beoordelen van geneesmiddel-geïnduceerde levertoxiciteit in vitro

Biopsie-afgeleide intestinale organoïden en organ-on-a-chips technologieën worden gecombineerd in een microfysiologisch platform om regiospecifieke darmfunctionaliteit te recapituleren.

Het combineren van menselijke organoïden en organ-on-a-chip-technologie om intestinale regiospecifieke functionaliteit te modelleren

Recente technische ontwikkelingen maakten de grootschalige productie mogelijk van een in vitro platform voor toepassingen op het gebied van geneesmiddelmetabolisme en toxiciteit. Een volledig menselijk 2D+ leversysteem (TV2D+) levert fysiologisch relevante resultaten met behulp van traditionele tweedimensionale kweekmethoden. Dit protocol ondersteunt eindgebruikers bij de installatie, het onderhoud en de toepassing van het systeem.

Een volledig menselijk leverkweeksysteem voor toepassingen bij de ontwikkeling van geneesmiddelen

Dit experimentele protocol beschrijft een leverlymfebuis-gecanuleerd rattenmodel dat directe en kwantitatieve beoordeling van leverlymfatische en vaatdrainage mogelijk maakt. Het model maakt gelijktijdige bemonstering van leverlymfe en systemisch bloed mogelijk om levertransport, metabolisme en immuunsignalering te onderzoeken, ter ondersteuning van studies naar geneesmiddelfarmacokinetiek en leverspecifieke biologie.

Een uitgebreid rattenmodel voor het beoordelen van levertransportroutes door gelijktijdige lymfatische en bloedvaatbemonstering

Het doel van dit protocol is om SDF-1α, een stamcel-home-factor, te integreren in dextransulfaat-chitosan nanodeeltjes.  De resulterende deeltjes worden gemeten op hun grootte en zetapotentiaal, evenals de inhoud, activiteit en in vitro afgiftesnelheid van SDF-1α uit de nanodeeltjes.

Bereiding en karakterisering van SDF-1α-Chitosan-Dextransulfaat Nanodeeltjes

Leer een microfysiologisch systeem met darm- en leverorganoids voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling van acetaminofen. Deze methode vervangt dierproeven en versnelt geneesmiddelonderzoek.

Een darm/levermicrofysiologisch systeem voor farmacokinetische en toxicologische beoordeling

Meer video's verkennen