Name: Prostaat-Organoid culturen als hulpmiddelen om genotypes en Mutationele profielen te vertalen naar farmacologische reacties (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-10-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 36 s
Description: Leer hoe u farmacologische reacties beoordeelt in prostaat-organoidculturen met behulp van de dome-plating-methode. Deze techniek helpt onderzoekers om genotypische invloeden op medicijnresistentie te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

K.P. wordt ondersteund door NIH 1F32CA236126-01. C.L.S. wordt ondersteund door HHMI; CA193837; CA092629; CA224079; CA155169; CA008748; en Starr Cancer consortium. W.R.K. wordt ondersteund door de Nederlandse kanker Stichting/KWF buit 2015-7545 en de prostaatkanker Stichting PCF 17YOUN10.

Alle in dit protocol beschreven werkzaamheden zijn uitgevoerd met eerder vastgestelde muriene organoïden en door de patiënt afgeleide organoïden. Alle dierlijke werk werd uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van het onderzoek dierlijke hulpbronnen centrum van Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (IACUC: 06-07-012). Alle weefsels van de patiënt afgeleide werden verzameld in overeenstemming met de regels en voorschriften van Memorial Sloan-Kettering Cancer Center (IRB: 12001).
1. middelmatige en buffer voorbereiding
<ol><li>Het ontdooien van de kelder membraan matrix (bv. Matrigel) bij 4 °C 's nachts voor aanvang van het experiment. Houd het op ijs tijdens het gebruik.</li>
	<li>Plaats cultuur platen bij 37 °C gedurende 24 uur voorafgaand aan experimenten. Dit zal helpen de kelder membraan matrix koepel (hierna aangeduid als matrix Dome) te polymerize. Het bekleden van organoïden wordt beschreven in stap 2.1.2.</li>
	<li>Bereid het organoïde medium volgens het vastgestelde protocol5.</li>
	<li>Bereid het organoïde medium zonder toevoeging van epidermale groeifactor (EFG; Zie tabel van materialen voor componenten). EFG onderdrukt de AR transcriptionele output en verleent anti-androgeen resistentie5.</li>
	<li>Bereid Dulbecco's gemodificeerde adelaar medium (DMEM) met 10% foetaal runderserum (FBS). Opmerking: deze media worden gebruikt voor de remming van de enzymatische spijsvertering met trypsine-vervanging in secties 2-4.</li>
	<li>Bereid drugs oplossingen volgens het Protocol van de fabrikant. Voor enzalutamide/mdv3100 (hierna "tweede generatie anti-androgeen" genoemd), bereidt u een stamoplossing van 100 μM voor in dimethylsulfoxide (DMSO). De voorraad kan maximaal 6 maanden bij-20 °C worden bewaard en hoeft niet vers te worden gemaakt.</li>
</ol>2. isolatie, enzymatische spijsvertering en oprichting van organoïden
<ol><li>Isoleer de prostaat organoïden van de muis of het menselijk weefsel volgens de eerder vastgestelde protocollen5,7. Hieronder vindt u een korte beschrijving.<ol>
<li>Mince en enzymatisch verteren prostaatweefsel om een enkelvoudige celsuspensie te produceren. In dit experiment werd 1 mL van 5 mg/mL Collagenase type II in ADMEM/F12 gebruikt voor de vertering van 50 mg prostaatweefsel.</li>
		<li>Verzamel cellen door centrifugeren bij 300 x g gedurende 5 minuten, Tel de cellen, regeer ze in de kelder membraan matrix en plaat op de juiste dichtheid5,5in de matrix koepels op voorverwarmde organoïde-kweek platen (plating methode wordt weergegeven in Figuur 1A).</li>
		<li>Laat de koepels stollen en voeg media toe op de toppen van de koepels zodat ze volledig bedekt zijn.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kweek organoïden naar de gewenste hoeveelheid voor downstreamtoepassingen. Het celnummer kan worden bepaald door standaard tellings methoden. Zie de toepassingsspecifieke sectie van het protocol voor meer informatie over dichtheid.</li>
	<li>Gebruik een P1000 pipet en trek het medium en de pipet omhoog en omlaag om te verstoren. Wanneer de kelder membraan matrix volledig is verstoord, breng de suspensie over naar een conische buis van 15 mL. Plaats niet meer dan 10 koepels per enkele 15 mL conische buis. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek de supernatant uit en was de celpellet met 5 mL PBS. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek het supernatant uit en rebreng de pellet in 4 mL trypsine-vervanging. Verteren voor 5-10 min met schudden bij 37 °C. Voeg een gelijk volume organoïde medium + 10% FBS toe om de vervanging van trypsine te remmen. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek de supernatant uit en rebreng in 1 mL PBS.</li>
	<li>Filter de suspensie met een 40 μm filter om een enkelvoudige celsuspensie te garanderen. Kwantificeer het aantal cellen met een hemocytometer of een gelijkwaardig telapparaat. Opmerking: als het verkrijgen van levensvatbare afzonderlijke cellen moeilijk is, gebruikt u stroom sortering om een oplossing met één cel te verkrijgen.</li>
</ol>3. beoordeling organoïde vorming capaciteit
Opmerking: om het percentage cellen te bepalen dat een organoïde kan genereren, kan een zaaien test worden uitgevoerd als een proxy voor de stam-/voorloper mogelijkheden. De organoïde formatie capaciteit is ook belangrijk voor het definiëren van een cel zaaien nummer voor de levensvatbaarheid testen.
<ol><li>Verdun de celsuspensie die is verkregen in stap 2,7 tot 100 cellen per 10 μL van de suspensie met behulp van organoïde medium dat 10 μM Rho kinase remmer Y-27632 bevat.</li>
	<li>Breng 1.100 cellen (110 μL suspensie) over in een nieuwe conische buis.</li>
	<li>Voeg 285 μL van de kelder membraan matrix toe en hervat de cellen. Dit zal resulteren in een ~ 70% matrix concentratie. Opmerking: verdunning van de kelder membraan matrix tijdens het zaaien sterk vermindert de variatie in koepel grootte, veroorzaakt door de viscositeit van de eiwit matrix.</li>
	<li>Zaadcellen in 35 μL matrix koepels in een voorverwarmde 24-goed plaat, resulterend in 200 cellen/goed. Plaat 3-5 repliceert per monster (Zie ook de beplating methode in Figuur 1A en stap 2.1.2).</li>
	<li>Om ervoor te zorgen dat de cellen binnen de matrix koepel blijven, moet u de plaat omdraaien en in een celincubator plaatsen om de kelder membraan matrix te stollen.</li>
	<li>Na 10 min, verwijder de plaat van de incubator en voeg medium met de Rho kinase remmer.</li>
	<li>Vernieuw het medium elke 2 dagen. Kwantificeer na 7 dagen het aantal organoïden. Houd de Rho kinase remmer in de media tijdens het experiment.</li>
	<li>Tel het aantal organoïden dat per koepel is vastgesteld en bereken het percentage van de organoïden dat is gevormd uit het totale aantal cellen dat is verguld (200 cellen). Opmerking: Organoïde-inrichting ratio's variëren van 3%-60%, afhankelijk van het celtype en het genotype.</li>
</ol>4. bepaling van de farmacologische reacties van organoïden
<ol><li>Voortzetting van stap 2,7, zaad 1000-10000 cellen in een matrix koepel. Gebruik de organoïde formatie efficiëntie en groeisnelheid als een proxy voor het bepalen van het uiteindelijke celnummer. Opmerking: aanbevolen celnummers zijn beschikbaar in tabel 1. Gebruik drie tot vijf replicaties per voorwaarde per analyse. Gebruik een eindconcentratie van 70% kelder membraan matrix om Pipetteer fouten geïnduceerd door de viscositeit te verminderen.</li>
	<li>Zaai 35 μL matrix koepels in een 24-pits plaatje en laat de koepels stollen zoals gedaan in rubriek 3 (Zie ook de plating methode in Figuur 1a en stap 2.1.2). Voeg medium met de Rho kinase remmer en drug van keuze. Deze methode kan worden toegepast op alle drugs, maar in dit protocol, een tweede generatie anti-androgeen wordt gebruikt bij 10 μM voor een voorbeeld. Om de helft van de maximale remmende concentratie (IC50) te bepalen, voert u een log10 incrementeel uit en gebruikt u als controle het voertuig waarin het geneesmiddel is opgelost.</li>
	<li>Vernieuw het medium om de twee of drie dagen en analyseer de organoïden op dag 7 om de farmacologische reactie van het medicijn te bepalen. De tijdspunten kunnen variëren tussen de keuze van het experiment en de drug. Opmerking: Organoïden hoeven niet te worden trypsinized om deze testen uit te voeren.</li>
	<li>Om organoïden intact te houden met behulp van een P1000 Pipet, stelt u het medium en de pipet omhoog en omlaag in om de kelder membraan matrix te verstoren.</li>
	<li>Wanneer de kelder membraan matrix volledig verstoord is, breng de suspensie over naar een conische buis van 15 mL. Breng niet meer dan 10 matrix koepels aan per 15 mL conische buis.</li>
	<li>Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min. Trek de supernatant uit en was met 5 ml PBS.</li>
	<li>Respendeer organoïden in 1 mL PBS en ontwer de organoïden met behulp van trituratie en een glazen Pasteur pipet.</li>
	<li>Kwantificeer het aantal organoïde fragmenten. Zaad 5 repliceert met 100 organoïde fragmenten zoals beschreven in stap 2.1.2.</li>
	<li>Voer de test van de levensvatbaarheid van de cel uit zoals hieronder beschreven in rubriek 7.</li>
</ol>5. RNA-isolatie van organoïden
Opmerking: in de handel verkrijgbare methoden op basis van kolommen leveren een goede hoeveelheid en kwaliteit van RNA. Om te zorgen voor een goede hoeveelheid RNA, gebruik een minimum van één koepel per monster; echter, met behulp van drie koepels wordt aanbevolen, die kan worden geseeid in een enkele put van een 12 goed plaat.
<ol><li>ß-mercaptoethanol toevoegen (1%) aan de glutathion lysisbuffer in de RNA Isolation Kit.</li>
	<li>Trek het medium uit de kelder membraan koepels met organoïden en voeg 750 μL van deze buffer toe. Pipetteer op en neer met een P1000 pipet. Controleer of alle kelder membraan matrix is opgelost.</li>
	<li>Voeg 750 μL van 70% ethanol toe en meng door Pipetting. Breng vervolgens 700 μL van het mengsel naar de kolom, centrifugeer bij 12.000 x g gedurende 1 minuut en herhaal dit met de rest van het lysaat.</li>
	<li>Voer wast en DNase behandeling op de kolom uit volgens de instructies van de fabrikant. Elute RNA in 30-50 μL RNAse-vrij water.</li>
	<li>Meet de concentraties met behulp van een fluor meter bij OD = 260 nm en 280 nm en bewaar bij-80 °C of ga verder met downstreamtoepassingen.</li>
</ol>6. eiwit isolatie van organoïden
Opmerking: voor eiwit isolatie bereidt u standaard RIPA-buffer met fosfatase-en proteaseremmers (tabel met materialen). Het gebruik van ten minste drie koepels wordt aanbevolen, die kunnen worden gesest in een enkele 12 goed.
<ol><li>Met behulp van een P1000 Pipet, het medium uit de cel met de kelder membraan koepels met organoïden en pipet op en neer te verstoren de kelder membraan matrix.</li>
	<li>Wanneer het volledig verstoord is, breng de suspensie over in een conische buis van 15 mL. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek de supernatant af en was met 5 mL ijskoude PBS. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek het supernatant uit en rebreng de pellet in 4 mL trypsine-vervanging. Verteren voor 5-10 min tijdens het schudden bij 37 °C.</li>
	<li>Voeg een gelijk volume organoïde medium + 10% FCS toe om de vervanging van trypsine te remmen. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min. Opmerking: Postcentrifugeren, geen kelder membraan matrix moet zichtbaar zijn in de pellet.</li>
	<li>Trek de supernatant af en was met 5 mL ijskoude PBS. Trek het supernatant uit en regeer de celpellet in 300 μL lysisbuffer met behulp van een P1000 pipet en breng vervolgens over naar een micro centrifugebuis van 1,5 mL.</li>
	<li>Incuberen op ijs gedurende 10 minuten en vervolgens soniceren 2x voor 30 s elk bij gekoeld water met een temperatuur van 4 °C. Plaats de buis weer op ijs en voer eiwit kwantificering uit met behulp van standaardmethoden.</li>
	<li>Denatureren van het eiwit door toevoeging van natriumdodecylsulfaat (SDS) met laad kleurstof en kook gedurende 5 minuten bij 95 °C. Bewaar lysaten bij-80 °C of ga verder met downstreamtoepassingen.</li>
</ol>7. cellevens vatbaarheid test met organoïden
Opmerking: de levensvatbaarheid van de cellen kan worden beoordeeld aan de hand van de in de handel verkrijgbare testkit en een luminometer. Buffers voorbereiden volgens de instructies van de fabrikant. Vijf replicaten per aandoening wordt aanbevolen: één replicaat bestaande uit 1 35 μL kelder membraan matrix koepel in een put van een 24 goed plaat.
<ol><li>Trek het medium van de organoïde cultuur uit en zorg ervoor dat de matrix koepels intact blijven.</li>
	<li>Voeg 65 μL PBS toe en Pipetteer omhoog en omlaag om de matrix koepel te verstoren.</li>
	<li>Voeg 100 μL van de cel levensvatbaarheid assay buffer en respenderen door pipetteren.</li>
	<li>Incuberen bij kamertemperatuur (RT) gedurende 10 minuten met schudden.</li>
	<li>Breng 100 μL van het mengsel over naar een niet-doorschijnende plaat die geschikt is voor de luminometer en voer de meting uit volgens de instructies van de fabrikant voor de cel-levensvatbaarheid-assay kit.</li>
</ol>8. bereiding van organoïden voor xenotransplanteren
Opmerking: Organoïden zijn ook vatbaar voor subcutaan enten in zowel immuungecompromitteerde dieren, als voor isogene muizen. Om ervoor te zorgen dat geïnjecteerde organoïden in vivo te onderscheiden zijn, etiket organoïden met een constitutief uitdrukken van de5. Het wordt aanbevolen om een proef experiment uit te voeren voor het enten met 5 x 105 cellen tot 2 x 106 cellen per injectie, met een veelvoud van 5 x 106 cellen, aangezien het enten van de transplantatie-efficiëntie varieert tussen organoïde lijnen.
<ol><li>Gebruik een P1000 pipet en trek het medium en de pipet omhoog en omlaag om de kelder membraan matrix te verstoren. Wanneer het volledig verstoord is, breng de suspensie over in een conische buis van 15 mL. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min. Opmerking: Breng niet meer dan 10 matrix koepels per 15 mL conische buis over.</li>
	<li>Trek de supernatant uit en was met 5 mL PBS. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek het supernatant uit en rebreng de pellet in 4 mL trypsine-vervanging. Verteren voor 5-10 min tijdens het schudden bij 37 °C.</li>
	<li>Voeg gelijk volume organoïde medium + 10% FBS toe om trypsine-vervanging te remmen. Centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 min.</li>
	<li>Trek de supernatant uit en rebreng in 1 mL PBS. Filter de suspensie met een 40 μm filter om een enkelvoudige celsuspensie te garanderen. Kwantificeer cellen met behulp van standaardmethoden.</li>
	<li>Spin naar beneden en regeer de cellen in PBS + Rho-remmer tot een concentratie van 2 x 106 cellen per 100 μL (Zie tabel 2 voor celconcentraties en absoluut celgetal dat nodig is voor verschillende concentraties). Gebruik een gelijk volume van de kelder membraan matrix om een 1:1 suspensie te genereren. Plaats de suspensie op ijs.</li>
	<li>Injecteer cellen volgens standaardprotocollen en bewaak de groei van xenotransplantaat met behulp van standaardmethoden8.</li>
</ol>

<ol><li>Robinson, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+Clinical+Genomics+of+Advanced+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Integrative Clinical Genomics of Advanced Prostate Cancer.</a> Cell. 162 (2), 454(2015).</li>
<li>Arora, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid+Receptor+Confers+Resistance+to+Antiandrogens+by+Bypassing+Androgen+Receptor+Blockade%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid Receptor Confers Resistance to Antiandrogens by Bypassing Androgen Receptor Blockade.</a> Cell. 155 (6), 1309-1322 (2013).</li>
<li>Ku, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rb1+and+Trp53+cooperate+to+suppress+prostate+cancer+lineage+plasticity%2C+metastasis%2C+and+antiandrogen+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rb1 and Trp53 cooperate to suppress prostate cancer lineage plasticity, metastasis, and antiandrogen resistance.</a> Science. 355 (6320), 78-83 (2017).</li>
<li>Mu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX2+promotes+lineage+plasticity+and+antiandrogen+resistance+in+TP53-+and+RB1-deficient+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">SOX2 promotes lineage plasticity and antiandrogen resistance in TP53- and RB1-deficient prostate cancer.</a> Science. 355 (6320), 84-88 (2017).</li>
<li>Karthaus, W. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Multipotent+Luminal+Progenitor+Cells+in+Human+Prostate+Organoid+Cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of Multipotent Luminal Progenitor Cells in Human Prostate Organoid Cultures.</a> Cell. 159 (1), 163-175 (2014).</li>
<li>Gao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+Cultures+Derived+from+Patients+with+Advanced+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid Cultures Derived from Patients with Advanced Prostate Cancer.</a> Cell. 159 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Drost, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+for+prostate+epithelial+and+cancer+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems for prostate epithelial and cancer tissue.</a> Nature Protocols. 11 (2), 347-358 (2016).</li>
<li>Bose, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERF+mutations+reveal+a+balance+of+ETS+factors+controlling+prostate+oncogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">ERF mutations reveal a balance of ETS factors controlling prostate oncogenesis.</a> Nature. 546 (7660), 671-675 (2017).</li>
<li>Platt, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9+Knockin+Mice+for+Genome+Editing+and+Cancer+Modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9 Knockin Mice for Genome Editing and Cancer Modeling.</a> Cell. 159 (2), 440-455 (2014).</li>
<li>Carver, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+feedback+regulation+of+PI3K+and+androgen+receptor+signaling+in+PTEN-deficient+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Reciprocal feedback regulation of PI3K and androgen receptor signaling in PTEN-deficient prostate cancer.</a> Cancer Cell. 19 (5), 575-586 (2011).</li>
<li>Puca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient+derived+organoids+to+model+rare+prostate+cancer+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Patient derived organoids to model rare prostate cancer phenotypes.</a> Nature Communications. 9 (1), 2404(2018).</li>
<li>Gao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+Cultures+Derived+from+Patients+with+Advanced+Prostate+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid Cultures Derived from Patients with Advanced Prostate Cancer.</a> Cell. 159 (1), 176-187 (2014).</li>
<li>Puca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delta-like+protein+3+expression+and+therapeutic+targeting+in+neuroendocrine+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Delta-like protein 3 expression and therapeutic targeting in neuroendocrine prostate cancer.</a> Science Translational Medicine. 11 (484), eaav0891(2019).</li>
<li>Dijkstra, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Tumor-Reactive+T+Cells+by+Co-culture+of+Peripheral+Blood+Lymphocytes+and+Tumor+Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of Tumor-Reactive T Cells by Co-culture of Peripheral Blood Lymphocytes and Tumor Organoids.</a> Cell. 174 (6), 1586-1598 (2018).</li>
<li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Barker, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lgr5%28%2Bve%29+stem+cells+drive+self-renewal+in+the+stomach+and+build+long-lived+gastric+units+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Lgr5(+ve) stem cells drive self-renewal in the stomach and build long-lived gastric units in vitro.</a> Cell stem cell. 6 (1), 25-36 (2010).</li>
<li>Bartfeld, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+human+gastric+epithelial+stem+cells+and+their+responses+to+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of human gastric epithelial stem cells and their responses to bacterial infection.</a> Gastroenterology. 148 (1), 126-136 (2015).</li>
<li>Huch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+culture+of+genome-stable+bipotent+stem+cells+from+adult+human+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Long-term culture of genome-stable bipotent stem cells from adult human liver.</a> Cell. 160 (1-2), 299-312 (2015).</li>
<li>Boj, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+human+and+mouse+ductal+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer.</a> Cell. 160 (1-2), 324-338 (2015).</li>
<li>Schutgens, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tubuloids+derived+from+human+adult+kidney+and+urine+for+personalized+disease+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Tubuloids derived from human adult kidney and urine for personalized disease modeling.</a> Nature Biotechnology. 37 (3), 303-313 (2019).</li>
<li>Sachs, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Living+Biobank+of+Breast+Cancer+Organoids+Captures+Disease+Heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity.</a> Cell. , 1-25 (2017).</li>
</ol>

C. L. S dient in de Raad van bestuur van Novartis; is een medeoprichter van ORIC Pharmaceuticals en coinventor van enzalutamide en apalutamide; is een wetenschaps adviseur van Agios, Beigene, Blueprint, Column Group, Foghorn, housey Pharma, Nextech, KSQ, Petra en PMV; en is medeoprichter van Seragon, aangekocht door Genentech/Roche in 2014. W.R.K. is een coinventor en patenthouder van organoïde technologie.

Inzicht in de moleculaire mechanismen onderliggende anti-androgeen resistentie en het ontdekken van potentiële therapeutische kwetsbaarheden vereist testen van farmacologische reacties in modelsystemen nabootsen van prostaatkanker. Hier beschreven is een gedetailleerd protocol voor de betrouwbare analyse van farmacologische reacties bij patiënten afgeleide en genetisch gemanipuleerde prostaat organoïden en de bereiding van deze organoïde monsters voor downstreamtoepassingen.
Er zijn twee belan...

Resistentie tegen geneesmiddelen is een van de belangrijkste klinische problemen bij de behandeling van kanker. De behandeling met gemetastaseerde prostaatkanker (PCa) is primair gericht op de androgeen-signalering van de as. De volgende generatie anti-androgeen therapieën (bijv. enzalutamide en abirateron) hebben een groot klinisch succes aangetoond, maar vrijwel alle PCa vordert uiteindelijk in de richting van een androgeen onafhankelijke staat of castratieresistente prostaatkanker (CRPC).
Recente genomische en transcriptomische profilering van CRPC onthuld er zijn drie algemene mechanismen van resistentie bij prostaatkanker: 1) activerende mutaties resulterend in het herstel van de androgeen receptor (AR) signalering1; 2) activering van bypass signalering, zoals geïllustreerd in een pre-klinisch model voor de volgende generatie anti-androgeen therapie resistentie waarbij activering van de glucocorticoide receptor (GR) kan compenseren voor verlies van AR signalering2; en 3) het recent geïdentificeerde proces van de afstamming plasticiteit, waarin tumorcellen weerstand verwerven door het overschakelen van de lijn van een celtype afhankelijk van het doel van de drug naar een ander celtype dat niet afhankelijk is van deze (die, in PCa, wordt weergegeven als AR-negatieve en/of neuro-endocriene ziekte [nepc])3,4. Echter, de moleculaire mechanismen die drug resistentie veroorzaken zijn niet begrepen. Bovendien, verworven anti-androgeen resistentie kan leiden tot therapeutische kwetsbaarheden die kunnen worden uitgebuit. Daarom is het essentieel om te evalueren van drug reacties in modelsystemen die patiënten fenotypes en genotypes nabootsen.
Prostaat-organoïden zijn organotypische culturen die worden gekweekt in een 3D-eiwit matrix met een gedefinieerd medium. Belangrijk is dat prostaat organoïden kunnen worden vastgesteld uit goedaardig en kanker weefsel van Murine of menselijke oorsprong, en ze behouden fenotypische en genotypische kenmerken die in vivo5,6worden aangetroffen. Belangrijk is dat zowel de anti-androgeen gevoelige PCa-en CRPC-cellen worden vertegenwoordigd in het huidige compendium van organoïden. Bovendien zijn prostaat organoïden gemakkelijk genetisch gemanipuleerd met CRISPR/Cas9 en shRNA5. Dus, prostaat organoïden zijn een geschikt modelsysteem voor het testen van drug reacties en verhelderende resistentiemechanismen. Hier wordt een gedetailleerd protocol beschreven om medicijn testen uit te voeren en farmacologische reacties te analyseren met behulp van prostaat organoïden.

<table><tbody><tr><td>A83-01</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie200nM</td></tr><tr><td>ADMEM/F12</td><td>Gibco/Lifetechnologies</td><td>12634028</td><td>Organoïdemediumcomponent</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco/Lifetechnologies</td><td>17504-044</td><td>Organoïdemediumcomponent</td></tr><tr><td>Cellcultureplates</td><td>Fisher</td><td>657185</td><td></td></tr><tr><td>CellTiterGlo</td><td>Promega</td><td>G7571</td><td></td></tr><tr><td>DHT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-073</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie1nM</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher</td><td>BP231-100</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Peprotech</td><td>315-09</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie50ng/mlvoormuis,5ng/nlvoormens</td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>Specifiekvoormensorganoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10ng/ml</td></tr><tr><td>FGF2</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td>Specifiekvoormensorganoïdemediumcomponent:Eindconcentratie5ng/ml</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco/Lifetechnologies</td><td>35050079</td><td>Organoïdemediumcomponent</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>MADE IN-HOUSE</td><td>N/A</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10mM</td></tr><tr><td>Matrigel (Growthfactorreduced&amp;PhenolRedfree)</td><td>Corning</td><td>CB-40230C</td><td>Organoïdemediumcomponent</td></tr><tr><td>N-Acetylcysteïne</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie1,25mM</td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636</td><td>Specifiekvoormensorganoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10mM</td></tr><tr><td>NOGGIN</td><td>Peprotech ofstabielgetransfecteerde293tcellenmetNogginconstruct(Karthousetal.2014)</td><td>120-10C</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10%geconditioneerdmediumof100ng/ml</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptavidin</td><td>GeminiBio-Products</td><td>400-109</td><td>Organoïdemediumcomponent</td></tr><tr><td>Phospataseremmers</td><td>MerckMillipore</td><td>524629</td><td></td></tr><tr><td>ProstaglandineE2</td><td>Tocris</td><td>3632464</td><td></td></tr><tr><td>Proteaseremmers</td><td>MerckMillipore</td><td>539131</td><td></td></tr><tr><td>R-SPONDIN</td><td>Peprotech ofstabielgetransfecteerde293tcellenmetR-Spondin1construct(Karthousetal.2014)</td><td>120-38</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10%geconditioneerdmediumof500ng/ml</td></tr><tr><td>RIPAbuffer</td><td>Merck</td><td>20-188</td><td></td></tr><tr><td>RNA-easyminikit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma-Aldrich</td><td><ahref="https://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=152121-30-7&amp;interface=CAS%20No.&amp;lang=en&amp;region=US&amp;focus=product">152121-30-7</a></td><td>Specifiekvoormensorganoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10&mu;M</td></tr><tr><td>TryplE</td><td>ThermoFisher</td><td>12605036</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleckchem</td><td>S1049</td><td>Organoïdemediumcomponent:Eindconcentratie10&mu;M</td></tr></tbody></table>

prostaat-organoid culturen als hulpmiddelen om genotypes en mutationele profielen te vertalen naar farmacologische reacties

Prostate Organoid Cultures as Tools to Translate Genotypes and Mutational Profiles to Pharmacological Responses

Hier gepresenteerd is een protocol voor het bestuderen van farmacodynamica, stamcel potentieel, en kanker differentiatie in prostaat epitheel organoïden. Prostaat organoïden zijn androgeen responsieve, driedimensionale (3D) culturen geteeld in een gedefinieerd medium dat lijkt op het prostaat epitheel. Prostaat organoïden kunnen worden opgebouwd uit wild-type en genetisch gemanipuleerde muismodellen, goedaardig menselijk weefsel en gevorderde prostaatkanker. Belangrijk, patiënt afgeleide organoïden sterk lijken op tumoren in de genetica en in vivo tumor biologie. Bovendien kunnen organoïden genetisch gemanipuleerd worden met behulp van CRISPR/Cas9 en shRNA systemen. Deze gecontroleerde genetica maken de organoïde cultuur aantrekkelijk als een platform voor het snel testen van de effecten van genotypen en mutationele profielen op farmacologische reacties. Experimentele protocollen moeten echter specifiek worden aangepast aan de 3D-aard van organoïde culturen om reproduceerbare resultaten te verkrijgen. Hier beschreven zijn gedetailleerde protocollen voor het uitvoeren van zaaien testen om te bepalen van de organoïde vorming capaciteit. Vervolgens laat dit rapport zien hoe u medicamenteuze behandelingen uitvoert en de farmacologische respons analyseert via de levensvatbaarheid metingen, eiwit isolatie en RNA-isolatie. Ten slotte wordt in het protocol beschreven hoe organoïden voor xenografting en daaropvolgende in vivo groei testen worden bereid met subcutane enten. Deze protocollen leveren zeer reproduceerbare gegevens op en zijn algemeen toepasbaar op 3D-kweeksystemen.

Seeding efficiency De organoïde vorming wordt bepaald door fenotype en genotype. Wild-type (WT) prostaat basale cellen toonde superieure organoïde vorming capaciteit (30%-40%) vergeleken met Luminale cellen (3%) (Figuur 1A). Na organoïde inrichting nam de capaciteits formatie drastisch toe. Normaalgesproken kan 25%-30% van de cellen afgeleid van een GEW organoïde een nieuwe organoïde vormen (Figuur 1</...

Hier gepresenteerd is een protocol om farmacologische reacties te bestuderen in prostaat epitheel organoïden. Organoïden lijken nauw in vivo biologie en even patiënt genetica, waardoor ze aantrekkelijk modelsystemen. Prostaat organoïden kunnen worden vastgesteld uit wild type prostates, genetisch gemanipuleerde muismodellen, goedaardig menselijk weefsel en gevorderde prostaatkanker.

Prostaat-Organoid culturen als hulpmiddelen om genotypes en Mutationele profielen te vertalen naar farmacologische reacties

Presented here is a protocol to study pharmacodynamics, stem cell potential, and cancer differentiation in prostate epithelial organoids. Prostate ...

Dit protocol biedt standaard en reproduceerbare methoden om farmacologische reacties in prostaatorganoïde culturen te beoordelen. Prostaat organoïde culturen bieden een in vitro systeem dat vele aspecten van in vivo biologie en farmacologische respons behoudt door cellen toe te staan om een driedimensionale structuur in een keldermembraanmatrix goed te keuren. We zijn vooral enthousiast over het gebruik van deze methoden om te beoordelen hoe genotype farmacologische respons in de prostaat dicteert en om resistentie tegen geneesmiddelen te modelleren.Deze methoden kunnen worden toegepast op organoïde kweeksystemen die gebruik maken van de koepelbeplatingsmethode. Echter, de componenten in de media, zoals groeifactoren kunnen verschillen afhankelijk van het weefseltype. Visuele demonstratie zal een meer specifieke en gedetailleerde bespreking van de protocolstappen mogelijk maken en hoe deze verschillen van de vele andere gepubliceerde organoïde cultuursystemen waarover onderzoekers beschikken.Organoïde cultuur is meestal meer tijd in beslag dan tweedimensionale celcultuur. Zorg ervoor dat u extra tijd toe te wijzen voor deze methoden. Begin met het isoleren van prostaatorganoïden van muis of menselijk weefsel.Mince en enzymatisch verteren het weefsel om een enkele cel suspensie te produceren en verzamel de cellen vervolgens door centrifugatie op 300 keer g gedurende vijf minuten. Tel de cellen en resuspend ze in de kelder membraan matrix. Dan plaat ze op de juiste dichtheid in de matrix koepels op voorverwarmde organoïde cultuurplaten.Koepels moeten twee millimeter uit elkaar en van de zijkant van de put. Eenmaal gestold, voorzichtig media toevoegen vanaf de zijkant van de put om te voorkomen dat het verstoren van de matrix. Nadat de koepels zijn gestold, voeg media op de top van de koepel, zodat ze volledig zijn bedekt.Kweek organoïden tot de gewenste hoeveelheid voor downstreamtoepassingen die celnummer bepalen met standaard telmethoden. Wanneer de organoïden klaar zijn voor gebruik, het opstellen van het medium met een Pten00 pipet en pipette het op en neer om de kelder membraan matrix verstoren. Breng de ophanging over op een conische buis van 15 milliliter en centrifuge gedurende vijf minuten op 300 keer g.Aspirate de supernatant en was de cel pellet met vijf milliliter PBS. Herhaal de centrifugatie, dan resuspend de pellet in vier milliliter van trypsine vervanging en laat het verteren voor vijf tot 10 minuten tijdens het schudden op 37 graden Celsius. Voeg een gelijk volume organoïde medium met 10%FBS toe om de trypsinevervanging te remmen en de buis vijf minuten op 300 keer g te centrifugeren.Aspirate de supernatant en resuspend de cellen in een milliliter van PBS. Dan stam de cellen met een 40 micrometer filter om een enkele cel suspensie te garanderen en tel ze met behulp van een hemocytometer. Verdun de celsuspensie tot 100 cellen per 10 microliter met organoïde medium met 10 micromolar rho kinase remmer Y27632.Breng 1, 100 cellen over naar een nieuwe conische buis en voeg 285 microliters van keldermembraanmatrix toe, wat resulteert in een matrixconcentratie van 70%. Vervolgens, zaad de cellen in 35 microliters van matrix koepels in een voorverwarmde 24 put plaat ervoor te zorgen dat de plaat drie tot vijf replica's per monster. Draai de plaat om en plaats deze in een celincubator om de keldermatrix te stollen.Na 10 minuten, verwijder de plaat uit de couveuse en voeg medium met de rho kinase remmer. Vernieuw het medium om de twee dagen en na zeven dagen, tel het aantal organoïden vastgesteld per koepel en bereken het percentage organoïden gevormd uit het totale aantal cellen. Na het isoleren van de organoïden zoals eerder beschreven, zaad 1.Dan zaad 35 microliters van matrix koepels in een 24 put plaat en laat de koepel stollen. Voeg medium met de rho kinase remmer en het medicijn naar keuze. Voer een log 10 incrementele om de helft maximale remmende concentratie te bepalen met behulp van het voertuig waarin het geneesmiddel werd opgelost als een controle.Verfris het medium om de twee tot drie dagen en analyseer de organoïden op dag zeven om farmacologische respons op het medicijn te bepalen door een celrendheidstest uit te voeren zoals beschreven in het manuscript. Om organoïde fragmenten te plaaten zonder trypsinisatie, gebruik een Pten00 pipet om het medium en pipet op en neer te halen om de keldermembraanmatrix te verstoren. Wanneer de matrix volledig is verstoord, breng de suspensie over op een conische buis van 15 milliliter en centrifuge gedurende vijf minuten op 300 keer g.Aspirate de supernatant en voeg vijf milliliter PBS. Na de wassing, resuspend de organoïden in een milliliter PBS en verstoren de organoïden door trituratie met een glazen Pasteur pipet. Kwantificeer het aantal organoïde fragmenten en zaad vijf repliceert met 100 fragmenten zoals eerder beschreven.Zeven dagen later, het uitvoeren van een cel levensvatbaarheid test volgens manuscript richtingen. Wild type prostaat basale cellen aangetoond superieure organoïde vorming in vergelijking met luminale cellen. Een kleine toename van de organoïde vorming werd bereikt met CRISPR-Cas9-gemedieerd verlies van Pten of P53 en verlies van beide verdere verhoogde vormingscapaciteit.De effecten van anti-androgene moleculen op de groei werden getest in murineorganoïden met verschillende genotypen. Verlies van P53 zorgde niet voor weerstand tegen de anti-androgene moleculen, maar het verlies van Pten verhoogde weerstand. Dubbel verlies van P53 en Pten resulteerde echter in volledige weerstand.Androgeen receptor remming veranderde ook fenotypes. Wild type Pten verwijderd en P53 verwijderde organoïden toonden de afname van organoïde lumen grootte, terwijl organoïden met verlies van zowel Pten en P53 werden fenotypisch onaangetast. Zoals verwacht, toen deze cellen onderhuids in de flank werden geënt, groeiden alleen de dubbel verwijderde Pten en P53 organoïden.Twee verschillende menselijke prostaatkanker organoïden MSKPCA2 en MSKPCA3 werden getest op hun reactie op anti-androgene moleculen. Proliferatie van MSKPCA2 organoïden werd sterk geremd terwijl MSKPCA3 organoïden onaangetast bleven. MSKPCA2 uitgedrukt hoge niveaus van androgeenreceptoren en FKBP5 evenals kenmerkende luminale eiwitten.MSKPCA3 uitte ook basale en mesenchymale markers en toonde geen uitdrukking van FKBP5 suggereert dat deze organoïden model een niet-luminale androgeen-onafhankelijke fenotype. Organoïden moeten periodiek worden verstoord door trypsinisatie of trituratie met een glazen pipet om levensvatbaar te blijven. Frequentie is afhankelijk van de oorsprong van de soort en genotype.Elk type sequencing of proteomics-experiment van de volgende generatie kan volgens de beschreven procedures worden uitgevoerd. Deze experimenten zouden de moleculaire basis van de fenotypes en farmacologische reacties onderzoeken. Deze driedimensionale organoïde cultuurtechniek stelt onderzoekers in staat om farmacologische reacties te bestuderen in een zeer gecontroleerde genetische context in vitro.Dit kan een betrouwbaar alternatief zijn voor langdurige in vivo studies.

prostate-organoid-cultures-as-tools-to-translate-genotypes-mutational

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Hier presenteren we een protocol om begeleiden van menselijke primaire prostaat organoid behandeling dan eindpunten om te beoordelen fenotype suggereren. Zaaien, cultuur onderhoud, herstel van matrix gel, worden morfologische kwantificering, insluiten en segmenteren, FFPE segmenteren, geheel-mount kleuring en toepassing van commerciële tests beschreven.

Behandeling en evaluatie van menselijke primaire prostaat Organoid cultuur

We tonen een methode voor obductie en dissectie van muizen prostaatkanker modellen, gericht op prostaat tumor dissectie. Een stap-voor-stap protocol voor het genereren van muis prostaat tumor organoïden wordt ook gepresenteerd.

Generatie van tumor Organoïden uit genetisch gemanipuleerde Muismodellen van prostaatkanker

Muis prostaat organoïden vertegenwoordigen een veelbelovende context voor het evalueren van mechanismen die differentiatie reguleren. Dit artikel beschrijft een verbeterde aanpak om prostaat organoïden vast te stellen, en introduceert methoden om (1) eiwit lysaat van organoïden te verzamelen, en (2) de organoïden voor de confocale microscopie van de hele Mount te fixeren en te vlechten.

Evaluatie van de differentiatie capaciteit van muizen prostaat epitheelcellen met behulp van Organoid cultuur

Driedimensionale culturen van patiënt BMPC-specimens en xenografts van botgemetastaseerde prostaatkanker behouden de functionele heterogeniteit van hun oorspronkelijke tumoren, wat resulteert in cysten, sferoïden en complexe, tumorachtige organoïden. Dit manuscript biedt een optimalisatiestrategie en protocol voor de 3D-cultuur van heterogene patiëntafgeleide monsters en hun analyse met behulp van IFC.

Oprichting en analyse van driedimensionale (3D) organoïden afgeleid van patiënt prostaatkanker Bot metastase Specimens en hun Xenografts

Dit protocol beschrijft een gestandaardiseerde evaluatie van geneesmiddelgevoeligheden voor gerichte signaleringsremmers in NSCLC-patiënt-afgeleide organoïdemodellen.

Profileringsgevoeligheid voor gerichte therapieën in EGFR-mutante NSCLC-patiënt-afgeleide organoïden

Dit protocol beschrijft een semi-geautomatiseerde methode voor medium- tot high-throughput organoïde medicijnscreenings en microscoop-agnostische, geautomatiseerde beeldanalysesoftware om multiparametrische, single-organoïde geneesmiddelresponsen te kwantificeren en te visualiseren om intratumor heterogeniteit vast te leggen.

Multiparametrische tumor organoïde drug screening met behulp van Widefield Live-Cell Imaging voor bulk en single-organoïde analyse

Een gedetailleerd protocol wordt hier verstrekt voor het vaststellen van menselijke borstorganoïden uit van de patiënt afgeleide borsttumorresecties of normaal borstweefsel. Het protocol biedt uitgebreide stapsgewijze instructies voor het kweken, bevriezen en ontdooien van menselijke patiënten afgeleide borstorganoïden.

Oprichting en kweek van van de patiënt afgeleide borstorganoïden

Tumororganoïden hebben een revolutie teweeggebracht in kankeronderzoek en de benadering van gepersonaliseerde geneeskunde. Ze vertegenwoordigen een klinisch relevant tumormodel waarmee onderzoekers de tumor in de kliniek een stap voor kunnen blijven. Dit protocol stelt tumororganoïden vast uit verse weefselmonsters van pancreastumoren en van patiënten afgeleide xenotransplantaten van pancreasadenocarcinoomoorsprong.

Oprichting van van alvleesklierkanker afgeleide tumororganoïden en fibroblasten uit vers weefsel

De heterogeniteit van prostaatkanker en de resistentie tegen de behandeling blijven uitdagingen. We beschrijven een protocol voor het genereren van patiënt-afgeleide organoïden (PDO's) die de belangrijkste kenmerken van de ouderlijke tumor behouden. Dit gestandaardiseerde model ondersteunt de screening van geneesmiddelen en de vooruitgang op het gebied van precisiegeneeskunde.

Oprichting en onderhoud van van patiënten afgeleide organoïden voor prostaatkanker: een gedetailleerd experimenteel protocol

Dit protocol beschrijft de generatie van een muisprostaat-organoïde-gebaseerd model dat in 2D is gekweekt. Het omvat organoïde dissociatie, celzaadvorming, differentiatie, beoordeling van de epitheelintegriteit en in-vitro infectie met uropathogene Escherichia coli. Het model biedt apicale toegankelijkheid en is geschikt voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties, waarmee het beperkingen van traditionele 3D-organoïde systemen overwint.

Generatie van een model gebaseerd op een muisprostaatorganoïde voor het bestuderen van gastheer-pathogeen interacties

Leer hoe u farmacologische reacties beoordeelt in prostaat-organoidculturen met behulp van de dome-plating-methode. Deze techniek helpt onderzoekers om genotypische invloeden op medicijnresistentie te bestuderen.

Prostaat-Organoid culturen als hulpmiddelen om genotypes en Mutationele profielen te vertalen naar farmacologische reacties

Meer video's verkennen