Name: Detecteren van de totstandbrenging van gedeelde bloedtoevoer in parabiotische muizen door Caudal Vein Glucose Injection (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 27 s
Description: Leer een veilige methode om bloedchimerisme in parabiotische muizen te verifiëren via glucose-injectie in de staartader. Deze techniek maakt betrouwbare detectie van gedeelde bloedcirculatie mogelijk voor biomedisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de National Nature Science Foundation of China (81570399 en 81773735), het National Key Research and Development Program of China - Traditional Chinese Medicine Modernization Research project (2017YFC1702003), en Hei Long Jiang Outstanding Youth Science Fund (JC2017020).

Alle procedures met betrekking tot dieren en hun zorg werden goedgekeurd door het Institutioneel Comité voor dierenverzorging en -gebruik van de Harbin Medical University.
OPMERKING: De gereedschappen en apparatuur die nodig zijn voor de methode zijn opgenomen in de tabel met materialen.
1. Bereiding van materialen en dieren
<ol><li>Bestel C57BL/6 mannelijke muizen met een gewicht tussen 20 g-25 g bij een standaard leverancier van laboratoriumdieren.</li>
	<li>Huis de muizen in een cyclus van 12 uur licht: 12 uur duisternis bij 24−26 °C met ad libitum toegang tot water en voedsel.</li>
</ol>2. Parabiose
<ol><li>Verdoven de muizen door intraperitoneale injectie van 20 g/L 2,2,2-tribromoethanol bij een concentratie van 0,1 mL/10 g. Bevestig een goede verdoving zoals aangegeven door spierontspanning, langzame en gestage ademhaling, verlies van huidstimulatiereflex en verdwijning van hoornvliesreflex.</li>
	<li>Breng oogheelkundige zalf aan met een Q-tip om droge ogen te voorkomen.</li>
	<li>Voer de parabioseprocedure uit zoals eerder beschreven5.<ol>
<li>Plaats de muizen in de supine positie. Scheer grondig de linkerkant van de ene muis en de rechterkant van de andere muis vanaf ongeveer 1 cm boven de elleboog tot 1 cm onder de knie met een elektrisch scheerapparaat. Gebruik ontharingscrème om de vacht op de geschoren huid volledig te wissen.</li>
		<li>Veeg de geschoren gebieden met iodophor. Plaats de muizen op een verwarmde pad bedekt met een steriele pad.</li>
		<li>Maak longitudinale huidinsnijdingen vanaf 0,5 cm boven de elleboog tot 0,5 cm onder het kniegewricht met behulp van een scherpe schaar aan de geschoren kant van elk dier.</li>
		<li>Maak de huid voorzichtig los van de onderhuidse fascia na de incisie.</li>
		<li>Sluit de olecranon en knie van de parabiont aan met een 3-0 hechting.</li>
		<li>Hecht de geschoren huid met een continue 5-0 hechting.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injecteer 0,5 mL van 0,9% NaCl onderhuids aan elke muis om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Injecteer tramadol (10 mg/25 g/dag) intramusair aan elke muis om pijn te verlichten.</li>
</ol>3. Validatie van circulatiechimerisme
<ol><li>Glucosefluctuatiemethode OPMERKING: Controleer de succesvolle constructie van circulatiechimerisme tussen parabionts met behulp van de glucosefluctuatiemethode (geen vasten) op de 10e dag na de parabiosechirurgie.<ol>
<li>Verdoven de parabionts door intraperitoneale injectie van 20 g/L 2,2,2-tribromoethanol aan elke muis bij een concentratie van 0,1 mL/10 g.</li>
		<li>Bevestig de donormuizen in een Venous visuele muisstaartfixator.</li>
		<li>Wrijf de staartaders in de flank van een van de staart van de parabiont met een katoenen bal gedrenkt in 70−75% alcohol om de staart schoon te maken en de bloedvaten te verwijden.</li>
		<li>Houd een 1,0 mL spuit met glucose in de rechterhand en houd de naald parallel aan de ader (minder dan 15°).</li>
		<li>Plaats de naald op een positie ongeveer 2−4 cm van de staartpunt.</li>
		<li>Injecteer 100 μL glucose (1,2 g/kg) in de donor binnen 10 s. OPMERKING: De term donor verwijst naar de parabiont die de glucose-injectie ontvangt via de staartader. De ontvanger is de andere parabiont, die niet direct glucose ontvangt.</li>
		<li>Maak de tenen schoon met iodophor. Snijd de tenen van de donor en de ontvangende muizen af met een schaar en verzamel een druppel bloed op verschillende tijdpunten na de injectie van glucose (1 min, 5 min, 10 min, 15 min, 20 min, 30 min, 40 min, 50 min en 60 min). Verwijder het bloedstolsel op elk verzamelmoment punt om meer schade te voorkomen. OPMERKING: Het volume van het verzamelde bloed was 10-25 ul voor een test, en 90-225 ul in totaal.</li>
		<li>Druppel het bloed in het midden van glucometer teststrips voor glucoseniveau detectie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Gebruik Evan's blauwe Counterstain als een positieve controle3.<ol>
<li>Injecteer 200 μL van 0,5% Evan's blauwe Counterstain intraperitoneally in de donormuis.</li>
		<li>2 uur later, euthanaseren de parabionten door intraperitoneale injectie van 20 g/L 2,2,2-tribromoethanol aan elke muis bij een concentratie van 0,2 mL/10 g, en verzamel bloed van beide parabionts door cardiale punctie.</li>
		<li>Centrifugeer de bloedmonsters op 916 x g gedurende 15 min.</li>
		<li>Verzamel serum van de supernatant.</li>
		<li>Verdun het serum met 0,9% NaCl om 1:50.</li>
		<li>Meet de absorptie van de verdunde serummonsters op 620 nm met een spectrofotometer.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Baruch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging-induced+type+I+interferon+response+at+the+choroid+plexus+negatively+affects+brain+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Aging-induced type I interferon response at the choroid plexus negatively affects brain function.</a> Science. 346 (6205), 89-93 (2014).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positional+cloning+of+the+mouse+obese+gene+and+its+human+homologue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue.</a> Nature. 372 (6505), 425-432 (1994).</li>
<li>Torres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiotic+model+for+differentiating+local+and+systemic+effects+of+continuous+and+intermittent+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Parabiotic model for differentiating local and systemic effects of continuous and intermittent hypoxia.</a> Journal of Applied Physiology (1985). 118 (1), 42-47 (2015).</li>
<li>Loffredo, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+differentiation+factor+11+is+a+circulating+factor+that+reverses+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Growth differentiation factor 11 is a circulating factor that reverses age-related cardiac hypertrophy.</a> Cell. 153 (4), 828-839 (2013).</li>
<li>Kamran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parabiosis+in+mice%3A+a+detailed+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Parabiosis in mice: a detailed protocol.</a> Journal of Visualized Experiments. (80), e50556(2013).</li>
<li>Conboy, M. J., Conboy, I. M., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterochronic+parabiosis%3A+historical+perspective+and+methodological+considerations+for+studies+of+aging+and+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Heterochronic parabiosis: historical perspective and methodological considerations for studies of aging and longevity.</a> Aging Cell. 12 (3), 525-530 (2013).</li>
<li>Eggel, A., Wyss-Coray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+revival+of+parabiosis+in+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Swiss+Medical+Weekly%22%5BJournal%5D)">A revival of parabiosis in biomedical research.</a> Swiss Medical Weekly. 144, w13914(2014).</li>
<li>Brack, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ageing+of+the+heart+reversed+by+youthful+systemic+factors%21%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Ageing of the heart reversed by youthful systemic factors!</a> EMBO Journal. 32 (16), 2189-2190 (2013).</li>
<li>Wu, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+cells+contribute+to+cardiomyocyte+regeneration+after+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Circulating cells contribute to cardiomyocyte regeneration after injury.</a> Circulation Research. 116 (4), 633-641 (2015).</li>
<li>Kaiser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27Rejuvenation+factor%27+in+blood+turns+back+the+clock+in+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">'Rejuvenation factor' in blood turns back the clock in old mice.</a> Science. 344 (6184), 570-571 (2014).</li>
<li>Rando, T. A., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+aging+and+rejuvenation--a+sense+of+humors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cardiac aging and rejuvenation--a sense of humors?</a> New England Journal of Medicine. 369 (6), 575-576 (2013).</li>
<li>Heidt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+contribution+of+monocytes+to+heart+macrophages+in+steady-state+and+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Differential contribution of monocytes to heart macrophages in steady-state and after myocardial infarction.</a> Circulation Research. 115 (2), 284-295 (2014).</li>
<li>McPherron, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Through+thick+and+thin%3A+a+circulating+growth+factor+inhibits+age-related+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Through thick and thin: a circulating growth factor inhibits age-related cardiac hypertrophy.</a> Circulation Research. 113 (5), 487-491 (2013).</li>
<li>Villeda, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+blood+reverses+age-related+impairments+in+cognitive+function+and+synaptic+plasticity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Young blood reverses age-related impairments in cognitive function and synaptic plasticity in mice.</a> Nature Medicine. 20 (6), 659-663 (2014).</li>
<li>Katsimpardi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+and+neurogenic+rejuvenation+of+the+aging+mouse+brain+by+young+systemic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Vascular and neurogenic rejuvenation of the aging mouse brain by young systemic factors.</a> Science. 344 (6184), 630-634 (2014).</li>
<li>Starzl, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lost+chord%3A+microchimerism+and+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Today%22%5BJournal%5D)">The lost chord: microchimerism and allograft survival.</a> Immunology Today. 17 (12), 577-584 (1996).</li>
<li>Coleman, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+historical+perspective+on+leptin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">A historical perspective on leptin.</a> Nature Medicine. 16 (10), 1097-1099 (2010).</li>
<li>Salpeter, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+regulation+of+the+age-related+decline+of+pancreatic+beta-cell+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Systemic regulation of the age-related decline of pancreatic beta-cell replication.</a> Diabetes. 62 (8), 2843-2848 (2013).</li>
<li>Sheldon, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gestational+exercise+protects+adult+male+offspring+from+high-fat+diet-induced+hepatic+steatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hepatology%22%5BJournal%5D)">Gestational exercise protects adult male offspring from high-fat diet-induced hepatic steatosis.</a> Journal of Hepatology. 64 (1), 171-178 (2016).</li>
<li>Martineau, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+metabolic+profile+of+intrahepatic+cholestasis+of+pregnancy+is+associated+with+impaired+glucose+tolerance%2C+dyslipidemia%2C+and+increased+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">The metabolic profile of intrahepatic cholestasis of pregnancy is associated with impaired glucose tolerance, dyslipidemia, and increased fetal growth.</a> Diabetes Care. 38 (2), 243-248 (2015).</li>
<li>Wang, F., Liu, Y., Yuan, J., Yang, W., Mo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+C+Protects+Mice+from+HFD-Induced+Obesity+and+Nonalcoholic+Fatty+Liver+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Compound C Protects Mice from HFD-Induced Obesity and Nonalcoholic Fatty Liver Disease.</a> International Journal of Endocrinology. 2019, 3206587(2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Parabiose verwijst naar de chirurgische techniek om twee levende dieren met elkaar te verbinden om een gemeenschappelijk vasculair systeem op te zetten met experimentele middelen6,7,8. Het voordeel van dit model is dat de stoffen die door één enkel individu worden geproduceerd tegelijkertijd op beide dieren kunnen werken. Zo kan het parabiosemodel worden gebruikt om de rol van een stof of factor in een verwante ziekte te onderzo...

Parabiose is een modelleringsmethode waarbij twee levende organismen chirurgisch worden samengevoegd en zich ontwikkelen als één fysiologisch systeem met een gedeelde bloedsomloop1. Dergelijke modellen zijn op grote schaal gebruikt voor het bestuderen van de fysiologie vanwege het voordeel dat de stoffen die door één enkel individu worden geproduceerd, tegelijkertijd via de gedeelde bloedsomloop op beide dieren kunnen werken. Sinds het midden van de jaren 1800, toen parabiotische experimenten werden gepionierd door Paul Bert2, zijn de methoden voor de bouw van parabiotische modellen gestandaardiseerd geworden. Echter, een eenvoudige en handige methode voor het verifiëren van de succesvolle oprichting van bloedchimerisme is verdwenen. Er is gemeld dat cross-circulation met succes kan worden beoordeeld door intraperitoneally injecteren 0,5% Evans blauwe kleurstof in een van de parabionten, gevolgd door meting van de absorptie van Evans blauw in het bloed van beide parabionts met een microplate lezer3. Een andere methode vereist een specifiek muisras dat CD45.1+- en CD45.2+-gelabelde monocyten in elke parabiont bevat. Celcytometrie wordt vervolgens gebruikt om bloedchimerisme te bepalen door de frequentie van de twee markers in monocyten van milt of bloed te meten4. Deze methoden zijn echter vaak dodelijk of omslachtig voor de dieren, en een veilige en eenvoudige methode voor snelle en betrouwbare verificatie van parabiotische modellen is zeer wenselijk. In deze studie hebben we hiervoor een nieuwe methode vastgesteld, die werd gevalideerd in een muismodel van parabiose. Glucoseconcentratie in bloedmonsters uit een staartader wordt gemeten met behulp van een glucometer, en het patroon van veranderingen van glucoseniveau bij donor- en ontvangende muizen wordt beschouwd als een indicatie van circulatiechimerisme. We noemden deze methode de "glucose fluctuatiemethode". De toepassing van deze validatiemethode is niet beperkt tot muizen, maar kan worden uitgebreid tot diverse pathologische modellen, behalve voor modellen met ernstige dysregulatie van het glucosemetabolisme. De procedure is eenvoudig, tijdbesparend en veilig.

<table><tbody><tr><td>curved forceps</td><td>JZ chirurgische instrumenten, China</td><td>J31340</td><td></td></tr><tr><td>fijne schaar</td><td>JZ chirurgische instrumenten, China</td><td>WA1030</td><td></td></tr><tr><td>naaldtang</td><td>JZ chirurgische instrumenten, China</td><td>60017961</td><td></td></tr><tr><td>2,5 mL spuiten</td><td>Agilent, USA</td><td>5182-9642</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethano</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>T48402-5G</td><td></td></tr><tr><td>penicilline</td><td>Solarbio, China</td><td>IP0150</td><td></td></tr><tr><td>tramadol</td><td>Yijishiye, China</td><td>YJT712520</td><td></td></tr><tr><td>glucometer</td><td>Roche Diabetes Care, Indiana</td><td>Accu-Chek Active test strips</td><td></td></tr><tr><td>Evan's blue Counterstain</td><td>Solarbio, China</td><td>G1810</td><td></td></tr><tr><td>ontharingscrème</td><td>Nair, USA</td><td>LL9161</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingsdeken (Verwarmingskussen)</td><td>Kent Scientific Corp, USA</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Elektrisch scheerapparaat</td><td>Codos, China</td><td>CP-5000</td><td></td></tr><tr><td>3-0,5-0 chirurgische hechting</td><td>Shanghai Medical Suture Needle Factory, China</td><td>SYZ 3-0#, SYZ 5-0#</td><td></td></tr></tbody></table>

detecteren van de totstandbrenging van gedeelde bloedtoevoer in parabiotische muizen door caudal vein glucose injection

Detecting Establishment of Shared Blood Supply in Parabiotic Mice by Caudal Vein Glucose Injection

Parabiose is een experimentele methode voor het chirurgisch combineren van twee parallelle dieren langs de lengteas van het lichaam. We presenteren een protocol voor het opsporen van de succesvolle oprichting van bloedchimerisme in parabionts door een caudal aderinjectie van glucose. Parabiotische muizen werden geconstrueerd. Glucose werd geïnjecteerd in de donormuis door de staartader, en de fluctuatie van de bloedsuikerspiegel werd gemeten bij beide muizen met behulp van een bloedglucometer op verschillende tijdspunten. Onze resultaten toonden aan dat na glucose-injectie het bloedglucoseniveau bij donormuizen na 1 min sterk steeg en daarna langzaam daalde. Ondertussen piekte de bloedsuikerspiegel van de ontvangende muizen 15 min na injectie. Vergelijkbare resultaten werden verkregen met Evans blauw, gebruikt als een positieve controle voor glucose. De synchrone fluctuatie van de bloedsuikerspiegel geeft aan dat de bloedstroom tussen de twee muizen met succes werd vastgesteld.

Bij zes donormuizen steeg de bloedsuikerspiegel sterk tot 26,5 μmol/L (173% toename) met een gemiddelde van 1 min na de injectie van 100 μL glucose (1,2 g/kg) door de staartader en daalde vervolgens geleidelijk tot 13,3 mol μ/L bij 60 min. Bij de ontvangende muizen nam de bloedglucose na de injectie langzaam toe en bereikte het eerste piekniveau op 15 min (47% toename, 12,2 μmol/L). Op basis van de bovenstaande resultaten werd de norm voor circulatiechimerisme als volgt vastgesteld: 1) ee...

Hier beschrijven we een nieuwe methode voor het opsporen van een succesvolle vaststelling van gedeelde bloedcirculatie van twee parabionten door middel van een caudale ader injectie van glucose, die minimale schade veroorzaakt en is niet fataal voor de parabionts.

Detecteren van de totstandbrenging van gedeelde bloedtoevoer in parabiotische muizen door Caudal Vein Glucose Injection

Parabiosis is an experimental method for surgically combining two parallel animals along the longitudinal axis of the body. We present a protocol for ...

Ons protocol biedt een verbeterde verificatiemethode voor circulatiechimerisme en een methode voor succesvolle parabiose model setup voor biomedisch onderzoek. Vergeleken met bestaande methoden voor de detectie van bloedchimerisme bij parabiose die vaak dodelijk of omslachtig zijn, is ons protocol veilig en eenvoudig, waardoor een snelle en betrouwbare verificatie mogelijk is. Hoewel deze methode specifiek is voor de detectie van bloedchimerisme in parabiosemodellen, kan deze worden toegepast op biomedische studies met parabiotische procedures.De meest uitdagende stap is glucose-injectie. Zorg er daarom voor dat u de staartaderinjectie oefent voordat u een experimentele procedure uitvoert, of gebruik een veneuze visuele muisstaartfixator. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op pedaalreflex, plaats twee 20 tot 25-gram verdoofde C57 zwarte 6 mannelijke muizen in de supine positie, en gebruik een elektrisch scheerapparaat om de linkerkant van een muis en de rechterkant van de tweede muis grondig scheren van ongeveer een centimeter boven de elleboog tot een centimeter onder de knie.Verwijder het resterende haar met ontharingscrème voordat u langshuids incisies maakt in de gerooide huid van elk dier, vanaf 0,5 centimeter boven de elleboog tot 0,5 centimeter onder het kniegewricht, en maak de huid voorzichtig los van de onderhuidse fascia. Sluit de olecranon en de knie van de parabiont met 3-0 hechting, en hecht de geschoren huid met een continue 5-0 hechting. Dan onderhuids injecteren 0,5 milliliter van 0,9% natriumchloride om uitdroging te voorkomen, en intramusculair injecteren 10 milligram tramadol per 25 gram muis om pijn te verlichten, in elke muis per dag gedurende drie dagen.Om de succesvolle constructie van de circulatie tussen chimamerisme tussen parabionts door glucose fluctuatie te verifiëren, op de 10e dag na parabiose chirurgie, veilig de donor muizen in een veneuze visuele muis staart fixator, en gebruik maken van een 70 tot 75%ethanol doordrenkte katoenen bal om de staart aderen wrijven in de flank van een parabiont staart. Steek een spuitnaald van één milliliter in de staartader twee tot vier centimeter van de staartpunt en zo parallel aan de ader mogelijk, en injecteer één tot twee gram per kilogram glucose in 100 microliter zoute oplossing in de donor op een periode van 10 seconden. Gebruik vervolgens een schaar om de tenen van de donor en de ontvangende dieren te verwijderen om het verzamelen van een druppel bloed op verschillende tijdstippen van belang na de injectie mogelijk te maken.Voeg vervolgens een druppel van elk bloedmonster toe in het midden van een glucometerteststrook voor detectie van glucoseniveau. Om de succesvolle constructie van de circulatie door Evans blauwe kleurstof absorptie te verifiëren, injecteren 200 microliters van 0,5%Evans blauwe teller intraperitoneally in de donormuis, en het verzamelen van bloed van beide parabionen door hartpunctie na twee uur. Scheid het serum door centrifugatie en breng het serum over in een conische buis voor verdunning bij een verhouding van 1 tot 50 in 0,9% natriumchloride.Meet vervolgens de absorptie van de verdunde serummonsters op 620 nanometer op een spectrofotometer. In deze representatieve analyse van de bloedsuikerspiegel bij zes donormuizen steeg de bloedglucose sterk tot 26,5 micromolar per liter op een gemiddelde van één minuut na de injectie van 100 microliter glucose via de staartader. Bloedsuikerspiegel vervolgens geleidelijk gedaald tot 13,3 microliter per liter op 60 minuten.Bij ontvangende muizen nam de bloedglucose na de injectie langzaam toe, waarbij het eerste piekniveau op 15 minuten werd bereikt. De concentratie van Evans blauwe kleurstof in het serum van parabints wees ook op een succesvolle constructie van de circulatie chimerism, en onderhuidse vasculaire knooppunten tussen de parabionen kon duidelijk worden waargenomen. Bij parabionten die 15 dagen na de parabioseoperatie geen bloedchisma vaststelden, vertoonden de ontvangende muizen niet binnen 60 minuten na glucose-injectie in het donordier een verhoogde bloedglucosespiegel.De bloedconcentratie van Evans blauw in de twee ontvangers was ook niet verhoogd, waaruit blijkt dat de glucose fluctuatie methode is zo gevoelig als de Evans blauwe methode. Bovendien werd het bloedeinsulineniveau een uur na de glucose-injectie aanzienlijk verlaagd vanwege de snel verhoogde glucosespiegels en met drie uur teruggewonnen naar normale niveaus, wat aangeeft dat de effecten van de geïnjecteerde glucose op het insulinemetabolisme herstelbaar zijn. Zorg ervoor dat de naald direct in de staartader wordt gestoken.Na het bevestigen van het bloedchimerisme van de parabionts met deze methode, kunnen fysiopathologische veranderingen worden bestudeerd bij levende parabiotische dieren.

detecting-establishment-shared-blood-supply-parabiotic-mice-caudal

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Parabiotic samenvoegen van twee organismen leidt tot de ontwikkeling van een gedeelde bloedsomloop. In dit protocol beschrijven we de chirurgische stappen om parabiotic verbinding tussen een wildtype muis en een constitutieve GFP-expressie muis vormen.

Parabiose in Muizen: Een gedetailleerd protocol

Insuline-geïnduceerde vasodilatatie regelt spier perfusie en verhoogt de Microvasculaire oppervlakte (microvasculaire werving) beschikbaar voor opgeloste uitwisseling tussen bloed en weefsel interstitium. Gecombineerde intravital microscopie en contrast-enhanced Ultrasonografie is bedoeld om te beoordelen gelijktijdig insuline de actie op de grotere schepen en de microcirculatie in vivo.

Gecombineerde Intravital microscopie en Contrast-enhanced Ultrasonografie van het stuk van de muis om te bestuderen van de insuline-geïnduceerde vasodilatatie en spier perfusie

Het huidige artikel beschrijft het genereren en metabole karakterisering van vetrijke dieet-gevoed muizen als een model van dieet-geïnduceerde insulineresistentie en overgewicht. Het beschikt verder over gedetailleerde protocollen voor het uitvoeren van de orale glucose tolerantie test en de insuline tolerantie test, toezicht op de gehele lichaam wijzigingen van het glucose metabolisme in vivo.

Studie van In Vivo Glucose metabolisme in High-fat dieet-gevoed muizen met behulp van orale Glucose tolerantie Test (OGTT) en insuline tolerantie Test (ITT)

Deze studie beschrijft de directe meting van de leverglucoseproductie in een polycysteus ovariumsyndroom muismodel door gebruik te maken van een stabiele isotopische glucose tracer via staartader in zowel nuchtere als glucoserijke toestanden in tandem.

Evaluatie van leverglucoseproductie in een muismodel met polycysteus ovariumsyndroom

Hier beschrijven we een eenvoudige methode om een commerciële continue glucosemonitor te implanteren die is ontworpen voor patiënten op muizen en de scripts te leveren om de resultaten te analyseren.

Eenvoudige continue glucosemonitoring bij vrij bewegende muizen

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en minimaal invasieve methode voor het transplanteren en afbeelden van NIT-1-cellen in niet-obese diabetische (NOD) -ernstige gecombineerde immunodeficiënte muizen die worden uitgedaagd met splenocyten gezuiverd van spontaan diabetische NOD-muizen.

Bioluminescente monitoring van transplantaatoverleving in een adoptief transfermodel van auto-immuundiabetes bij muizen

Een hyperglykemische klem wordt gebruikt voor het meten van de insulineafgifte bij een aangehouden hogere bloedglucoseconcentratie. Een hypoglykemische klem is voor het meten van de glucoseproductie die wordt geïnduceerd door tegenregulerende reacties. Beide methoden maken gebruik van dezelfde chirurgische ingreep. Hier presenteren we een klemtechniek om het systemische glucosemetabolisme te beoordelen.

Hyperglykemische klem en hypoglykemische klem bij bewuste muizen

In dit protocol worden methoden geschetst die relevant zijn voor BAT-geoptimaliseerde arterioveneuze metabolomics met behulp van GC-MS in een muismodel. Deze methoden maken het mogelijk om waardevolle inzichten te verwerven in de uitwisseling van BBT-gemedieerde metabolieten op organismaal niveau.

Arterioveneuze metabolomics om in vivo metabolietuitwisseling in bruin vetweefsel te meten

Hier presenteren we een protocol om een intracytoplasmatisch sperma-injectie (ICSI)-embryotransfer (ET) muismodel op te zetten, waardoor we leeftijdsgerelateerde veranderingen in het glucosemetabolisme kunnen observeren die kunnen worden toegeschreven aan ICSI, waardoor we inzicht krijgen in de mogelijke langetermijneffecten op de menselijke ontwikkeling.

Controle van de bloedglucose bij nakomelingen van muizen na intracytoplasmatische sperma-injectie

Het protocol demonstreert een methode om achtereenvolgens bloed te verzamelen uit poortaders en inferieure vena cava van muizen om de productie en absorptie van microbiële metabolieten in de darm te evalueren.

Sequentiële bloedafname uit inferieure vena cava gevolgd door poortader om microbiële metabolieten in de darm bij muizen te evalueren

Hier geven we details over het uitvoeren van glucose-gestimuleerde insulinesecretie (GSIS) via perfusie door het vaatstelsel van de muizen met een intacte alvleesklier als een aanvullende techniek om de endocriene pancreasfunctie te beoordelen met vermindering van mogelijke confounders.

Glucose-gestimuleerde insulinesecretie via perfusie door het vaatstelsel van muizen met een intacte alvleesklier

Leer een veilige methode om bloedchimerisme in parabiotische muizen te verifiëren via glucose-injectie in de staartader. Deze techniek maakt betrouwbare detectie van gedeelde bloedcirculatie mogelijk voor biomedisch onderzoek.

Detecteren van de totstandbrenging van gedeelde bloedtoevoer in parabiotische muizen door Caudal Vein Glucose Injection

Meer video's verkennen