Name: Chemisch-geïnduceerde huid carcinogenese model met behulp van Dimethylbenz a anthraceen en 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-acetaat (DMBA-TPA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: Leer een tweefasig huidcarcinogenesemodel met DMBA en TPA om tumorinitiatie en -progressie te bestuderen. Deze methode maakt onderzoek naar inflammatie en immuunreacties in huidkanker mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de Academie van Finland (subsidies 25013080481 en 25013142041 (I.J.), 286377 en 295814 (M.P.), 287907 (T.J.)), Päivikki en Sakari Sohlberg Foundation (M.P., T.J.), Finnish Medical Foundation (T.P.), het competitieve State Research Financiering van het gebied van de deskundige verantwoordelijkheid van het universitair ziekenhuis van Tampere (Grant 9V049 en 9X044 (M.P.), 9X011 en 9V010 (T.J.)), de competitieve staats onderzoeksfinanciering van het deskundige verantwoordelijkheidsgebied van Fimlab Laboratories (Grant X51409 (I.J.)), tays Support Foundation (I.J., M.P., T.J.), Tampere Tuberculosefonds (I.J., M.P., T.J.), de Finse culturele stichting (M.V.), de Paulo Foundation (T.P.), kanker Sociëteit van Finland (M.P.), en de Emil Aaltonen Foundation (T.P.).

Het hier beschreven protocol is goedgekeurd door de nationale Commissie voor dierenethiek van Finland (protocolnummer ESAVI/23659/2018).
1. proefdieren, reagentia en apparatuur
<ol><li>Gebruik leeftijd en seks-gematchte muizen. Start de studie met een leeftijd van 7 – 9 weken, omdat de huid in de meeste muizen zich in telogene bevindt (de rustfase) rond die leeftijd2.</li>
	<li>Observeer het gedrag van de dieren tijdens de studie en als ze vechten, wat vaak gebeurt met mannen, huis ze apart. Gevechten kunnen snijden in de huid veroorzaken, die tumorvorming bevorderen. Vrouwelijke muizen hebben de voorkeur vanwege hun minder agressief gedrag. De typische experimentele groepsgrootte varieert tussen de 8 – 20 dieren per groep24,25,26,27. Opmerking: vermogens berekeningen op basis van de biologische variantie in eerdere studies helpen bij het kiezen van een voldoende grote groepsgrootte. De stammen die worden gebruikt als voorbeelden in dit artikel zijn Balb/c en C57BL/6. Echter, veel andere muis stammen zoals sencar en FVB zijn gebruikt met de dmba-TPA-model, evenals Wistar en Sprague-Dawley ratten2,28,29. Een licentie van het nationale of lokale Comité van dierlijke werk is nodig voor de inleiding van de studie. Naast algemene welzijnsoverwegingen zijn de modelspecifieke eindpunten meestal plaveiselcelcarcinoom (SCC) en een infectie van de huid. Krassen in de huid als gevolg van jeuk na het aanbrengen van de tumorigene chemicaliën in aceton is typerend, maar anders moeten de dieren geen tekenen van ongemak vertonen. Regelmatig wegen (bijvoorbeeld 2x per maand) helpt bij het evalueren van het welzijn van de dieren.</li>
	<li>Gebruik de DMBA en TPA, beide verdund in aceton. De werkconcentratie van DMBA is 250 g/L. Een dosis voor één dier is 50 μg DMBA in 200 μL aceton. De stam concentratie van TPA is 125 g/L en de behandelings concentratie 25 g/L. Een TPA-dosis voor één dier is 5 μg in 200 μL aceton. Letop: dmba is schadelijk bij inslikken en kan kanker veroorzaken. Aceton verdampt snel en is ontvlambaar. Het kan leiden tot duizeligheid en irriteren ogen. Gebruik een ademhalingsmasker en/of werk onder een vacuüm stroom. Verander handschoenen na het hanteren van een van deze chemicaliën. Kooien voor individueel geventileerde voorkomen de verspreiding van de chemicaliën tijdens de behuizing van de muizen. Verzamel na het aanbrengen de pipetpunten die worden gebruikt voor het hanteren van de DMBA en gooi deze weg als gevaarlijk afval. Opmerking: de dmba moet beschermd zijn tegen licht. De verdunde TPA wordt bewaard in-20 °C, bij voorkeur beschermd tegen licht.</li>
	<li>Aanschaffen van de volgende apparatuur: een schaal, een gewone scheerapparaat voor de vacht, pipetten en tips van een geschikte grootte, een gewone liniaal, een digitale camera, een Kladblok en een pen of een computer voor het opnemen van de papillomas, een geïnhaleerd anesthesie systeem of een muis fixator met een opening op de achterkant, en een kooldioxide-narcotische systeem voor het opofferen van muizen.</li>
</ol>2. huid papilloma inductie en promotie
<ol><li>Scheer de achterste huid en weeg het dier. Later, Scheer de huid wanneer nodig, maar niet op het moment van de chemische blootstelling. Letop: Wees voorzichtig bij het scheren rond de papillomas en Vermijd het maken van bezuinigingen op de huid. Weeg elk dier elke 2 weken om eventuele gewichtsverlies op te merken.</li>
	<li>Breng 50 μg DMBA in 200 μL aceton topisch op het geschoren gebied aan met behulp van een pipet 48 h na het scheren van de vacht. Indien nodig, bedwingen het dier met behulp van lichte inhalatie anesthesie of een muis fixator.</li>
	<li>Na 7 dagen, geef de eerste dosis TPA. Breng 5 μg TPA aan in 200 μL aceton topisch met een pipet 2x per week, bij voorkeur maandag en donderdag of dinsdag en vrijdag.</li>
	<li>Tellen, opnemen en fotograferen van de papillomas elke week. Een palpabele massa groter dan 1 mm in diameter wordt als een papillomavirus beschouwd als het langer dan 1 week blijft. Markeer elke afzonderlijke papillomavirus op een kaart en vermeld de grootte wekelijks. Bewaar digitale foto's.</li>
</ol>3. dieren offer en Monsterverzameling
<ol><li>Ga door met de behandeling totdat de tumor reactie een plateau bereikt. Over het algemeen zal de papillomavirus-last naar verwachting 10 – 20 weken na de initiatie toenemen, afhankelijk van de gebruikte muis stam. Het plateau wordt verwacht in 15 – 20 weken. Een klein deel van de papillomas (onder 3%) kan zich ontwikkelen tot Scc's binnen 20 – 50 weken2.</li>
	<li>Offer de dieren 24 h na de laatste TPA-toepassing. Gebruik kooldioxide-narcose met cervicale dislocatie of een andere geschikte methode.</li>
	<li>Afhankelijk van de onderzoeksvraag, verzamelen van de juiste monster materiaal van de dieren30,31.<ol>
<li>Neem bijvoorbeeld bloedmonsters voor het opofferen en scheid het plasma.</li>
		<li>Snij stukjes van de huid voor de kleuring van immunohistochemie (IHC) (bijv. hematoxyline en eosine, prolifererende of inflammatoire cellen).</li>
		<li>Gebruik biopsie stoten om huid stukjes te verzamelen met papillomavirus weefsel of niet-papillomavirus (behandelde) huid voor genexpressie (bijv. qPCR) en/of eiwit analyses (bijv. Western Blot of ELISA).</li>
		<li>Verzamel een stukje van de milt en huid-afvoerende lymfeklieren voor Flowcytometrie analyse als meer gedetailleerde analyse van de immuuncelpopulaties gewenst is. U ook de epidermale en dermale lagen scheiden voor verdere analyses.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. statistieken
<ol><li>Teken een Kaplan-Meier-overlevings curve van de papilloom vrije tijd en gebruik de mantel-Cox log-Rank test voor de overleving. Teken een lineaire curve van het aantal papillomas per week. Omdat dit aantal gegevens is, gebruikt u een niet-lineaire regressiemodel. Raadpleeg indien nodig een statisticus.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

DMBA-TPA-geïnduceerde huidkanker is een van de meest gebruikte kanker modellen omdat het zeer reproduceerbaar is en informatie verschaft over de progressie van de tumor van initiatie tot maligniteit. De belangrijkste uitkomst maatregel, de vorming van papillomavirus, is eenvoudig en betrouwbaar kwantitatief. Het model behandelt beide tumor initiatie (tumor-vrije overleving) en progressie (tumor aantallen en-maten) tegelijkertijd. Het model is geschikt voor het bestuderen van verschillende verbindingen, zoals potentiële t...

Kanker is een van de belangrijkste doodsoorzaken in de wereld. Daarom is er een eis om betrouwbare experimentele ziekte modellen te ontwikkelen om een beter begrip van de ziekte te verkrijgen en om mogelijke therapeutische benaderingen te onderzoeken. Een van de meest gebruikte experimentele in vivo modellen om de ontwikkeling van huidkanker te bestuderen is de chemisch geïnduceerde tweetraps huid carcinogenese model1,2. Het model biedt een hulpmiddel om tumor initiatie, promotie en progressie te bestuderen naast specifieke gebeurtenissen zoals immuuncelinfiltratie en angiogenese.
Om het tweetraps huid carcinogenese model te gebruiken, wordt de rughuid van muizen behandeld met twee verschillende chemicaliën die samen tumorvorming induceren. Het model wordt geïnitieerd met een lage dosis van de mutagene stof, DMBA, gevolgd door langdurige blootstelling aan de tumor promotor, TPA3 (Figuur 1). Dmba muteert DNA willekeurig door covalente adducten te vormen met het DNA van epidermale cellen en primaire Keratinocyt stamcellen4,5,6,7. Sommige van deze willekeurige mutaties vinden plaats in een proto-oncogen, zoals Hras1 (mutaties in kras en Nri's worden ook gedetecteerd) en de omzetting van proto-oncogenen naar oncogenen stimuleert de tumorvorming onder de juiste stimuli. TPA, op zijn beurt, is de meest gebruikte tumor groeibevorderende agent. Het moleculaire doelwit is proteïne kinase C (PKC)8. TPA activeert ook WNT/β-bovenbouw in signalering die cruciaal is voor tumorvorming in model9. Herhaalde en langdurige blootstelling aan de bevorderend middel leidt tot verbeterde celsigna lering, verhoogde productie van groeifactoren, en een lokale ontstekingsreactie, die duidelijk zijn als gevolg van verhoogde DNA-synthese en inflammatoire celinfiltratie in de behandelde huid.
De belangrijkste ontstekingsmediatoren in het DMBA-TPA-model zijn geïdentificeerd10. Interleukine-17a (Il-17a) is bekend dat het bijzonder tumorigene in de dmba-TPA model11,12. Het werkt in synergie met Interleukine 6 (Il-6) en participeert in macrofaag en neutrofiele recruitment13,14. Daarnaast is aangetoond dat CD4+ T-cellen en neutrofielen tumorigene zijn in het dmba-TPA-model. Tot slot, macrofagen kunnen ook bevorderen tumorvorming in het model15,16,17.
Tijdens de promotie fase wordt de celproliferatie van de gemuleerde cellen versterkt en wordt een aanhoudende hyperplasie van de epidermis gehandhaafd1. Dit leidt tot de ontwikkeling van papillomavirus in de huid in 10 – 20 weken, waarna de papillomas beginnen te converteren naar kwaadaardige tumoren, plaveiselcel carcinomen (SCCs)2. Echter, minder dan 10% van de papillomas vooruitgang naar maligniteit, hoewel dit percentage ook afhangt van de genetische achtergrond van de muizen2,18. Decennia lang was het niet bekend wat voor soort cellen werden aanvankelijk gemuleerd in de tumoren leidt tot maligniteit, hoewel sommige studies duidelijk onderscheiden kenmerken in de kwaadaardige tumoren had gemeld in vergelijking met goedaardige papillomas19,20. Echter, recente studies hebben sterk toegenomen ons begrip op de klonale oorsprong van tumorvorming in de DMBA-TPA model21. 22. 23. aangetoond is dat zowel epitheliale cellen als haarfollikel stamcellen in het beenmerg bijdragen aan de tumorvorming22. Stage-specifieke Lineage tracing studies hebben onthuld dat goedaardige papillomas van monoklonale oorsprong zijn, maar ze rekruteren nieuwe epitheliale celpopulaties21,23. Echter, slechts één van de cel klonen fungeert als een driver voor carcinogenese; het bevat een Hras-mutatie23. De progressie naar carcinoom vorming wordt geassocieerd met een van klonen sweep23.
De kankerverwekkende stof DMBA initieert de papillomavirus-formatie en TPA bevordert de tumorgroei. Vandaar, de tumor initiatie kan afzonderlijk worden bestudeerd van de promotie door het onderbreken van het experiment voor de TPA behandelingsperiode. Als de tumorprogressie wekelijks wordt bestudeerd biedt het een grote kans voor gedetailleerde tumorgroei analyse gedurende de studie. Omdat de tumoren worden gegenereerd door externe chemicaliën, is een oncogene mutatie in de kiembaan overbodig. Het bestuderen van de effecten van een genetische achtergrond (bijv. Knockout/transgene vs. wild type) op tumorvorming is dus rechtlijnig2. Kortom, de DMBA/TPA huidkanker model is een bijzonder nuttige aanpak voor het bestuderen van de rol van het immuunsysteem in de progressie van de tumor, alsmede voor de evaluatie van de inleiding van de tumor en promotie stappen onafhankelijk of onderling afhankelijk.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig1a.jpg"> Figuur 1: DMBA-TPA-geïnduceerde huid carcinogenese modeloverzicht. De kankerverwekkende stof DMBA wordt topisch toegepast om DNA-mutaties in de initiatie fase van het model te induceren. De groeibevorderende agent TPA wordt 2 x per week toegediend om de celproliferatie tijdens de promotie fase te verbeteren, wat leidt tot de ontwikkeling van papillomas in de huid. Dieren worden geofferd nadat de papillomavirus-reactie een plateau bereikt, meestal binnen weken 15 – 20, afhankelijk van de genetische achtergrond van de muizen. Een klein deel van de papillomas kan binnen 20 – 50 weken verder uitgroeien tot Scc's. Voor het bestuderen van vroege gebeurtenissen in de initiatie-en vroege promotie fase kunnen monsters worden verzameld (bijvoorbeeld kort na de tweede TPA-toepassing). Een representatieve foto en hematoxyline en eosine gekleurd doorsnede van papillomas op een C57BL/6 muis huid na 19 weken behandeling worden getoond. Schaalbalk = 0,1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60445/60445fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>

```html
<table><tbody><tr><td>1000 ul RPT XL Graduated Filter Tip (Steriele), Refill</td><td>Starlab</td><td>S1182-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>300 ul RTP Graduated Filter Tip (steriele), Refill</td><td>Starlab</td><td>S1180-9710-C</td><td></td></tr><tr><td>7,12-Dimethylbenz[a]anthracene (DMBA)</td><td>Sigma</td><td>D3254-100MG</td><td>Schadelijk bij inslikken en kan kanker veroorzaken. Beschermd tegen licht bewaren.</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Sigma</td><td>1000141011</td><td>Verdampt snel en is ontvlambaar.</td></tr><tr><td>Attane vet 1000 mg/g</td><td>Piramal Critical Care Limited</td><td></td><td>Vloeibaar isofluraan voor inademing</td></tr><tr><td>Batterij-aangedreven Clipper Isis</td><td>Albert Kerlb GmbH</td><td>GT421</td><td>Voor het scheren van de vacht</td></tr><tr><td>CONTRAfluran-Restgasfilter</td><td>ZeoSys GmbH</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>Linex Nature N1030 Lineaal 30 cm</td><td>Staples Business Advantage</td><td>60383</td><td>Voor het meten van papillomen</td></tr><tr><td>Medium CO2-kamer 300 x 200 x 200mm - Rood</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN045AR</td><td>Voor slacht</td></tr><tr><td>Mekasoft</td><td>Mekalasi</td><td>23008</td><td>Tabelovertrek</td></tr><tr><td>Muizen (Balb/c JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>Andere stammen ook mogelijk</td></tr><tr><td>Muizen (C57BL/6JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>Andere stammen ook mogelijk</td></tr><tr><td>Panasonic Lumix DMC-FS5 Digitale Camera</td><td>Panasonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Merck</td><td>30525-89-4</td><td>Voor histologie-monsters</td></tr><tr><td>Phorbol 12-myristaat 13-acetaat ook bekend als 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetaat (TPA)</td><td>Enzo</td><td>BML-PE160-0001</td><td></td></tr><tr><td>Precisiebalans PLJ-C/PLJ-G</td><td>KERN &amp; SOHN GmbH</td><td>PLJ 600-3CM</td><td></td></tr><tr><td>Vooraf ingestelde CO2-systeem-2-kamer-S/S-behuizing</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN044BX</td><td>Voor slacht</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>Voor nucleïnezuurmonsters</td></tr><tr><td>Tacta pipette 100-1000 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729070</td><td></td></tr><tr><td>Tacta pipette 20-200 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729060</td><td></td></tr><tr><td>UNO Anesthetisch sleutelvulmiddel</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>UNO Gezichtsmasker voor Muis</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>UNO FM2200 Flowmeter</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>UNO Gasafvoereenheid</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>UNO Inductiebox</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>UNO200VAP Verdamper</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr></tbody></table>
```

chemisch-geïnduceerde huid carcinogenese model met behulp van dimethylbenz [a] anthraceen en 12-o-tetradecanoyl phorbol-13-acetaat (dmba-tpa)

Chemical-Induced Skin Carcinogenesis Model Using Dimethylbenz[a]Anthracene and 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Kanker is een van de meest verwoestende menselijke ziekten. Experimentele kanker modellen zijn belangrijk om inzicht te krijgen in het complexe samenspel van verschillende celtypen en genen in het bevorderen van tumorprogressie en om een platform te bieden voor het testen van de werkzaamheid van verschillende therapeutische benaderingen. Een van de meest gebruikte experimentele inflammatoire kanker modellen is de DMBA-TPA tweetraps huid carcinogenese model. Tumor vorming wordt in dit model geïnduceerd door de actuele toepassing van twee verschillende chemicaliën, 7, 12-dimethylbenz [a] antraceen (DMBA) en 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetaat (TPA), die samen de papillomavirus vorming in de huid veroorzaken. Omdat het primaire resultaat papillomavirus-vorming in de huid is, is het model een ideale, betrouwbare en reproduceerbaar manier om beide tumor initiatie (tumor vrije overleving) en tumorprogressie (aantal en grootte van zichtbare tumoren) aan te pakken. De effecten van de DMBA-TPA-behandeling worden overgebracht via een ontstekingsmechanisme, waardoor dit model vooral geschikt is om de rol van het immuunsysteem bij tumorvorming te bestuderen. Dit model is echter beperkt tot de huid en andere oppervlakken waar de chemicaliën kunnen worden aangebracht. In dit artikel vindt u een gedetailleerd protocol om het model te kunnen gebruiken.

Het belangrijkste resultaat is de overleving (d.w.z. papillomavirus vrije) tijd tussen de behandelings-of genotype groepen. Het secundaire resultaat is het aantal papillomas per week in elke groep (Figuur 2). De verwachte resultaten zijn een statistisch significant verschil in het papillomavirus vrije tijd en in het aantal papillomen tussen de experimentele (twee of meer) groepen. Het wordt aanbevolen om het aantal papillomas te tellen en een curve te tekenen tijdens de promotie fase (TPA) o...

Tweetraps huid carcinogenese wordt geïnduceerd door twee topisch toegepaste chemicaliën. Een mutagene stof 7, 12-dimethylbenz [a] anthraceen) veroorzaakt mutaties in de epidermale cellen en een continue toepassing van de algemene groeistimulator 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetaat versnelt de vorming van papillomavirus.

Chemisch-geïnduceerde huid carcinogenese model met behulp van Dimethylbenz [a] anthraceen en 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-acetaat (DMBA-TPA)

Cancer is one of the most devastating human diseases. Experimental cancer models are important to gain insight into the complex interplay of different ...

Dit tweestaps huidkankermodel maakt de studie van de rol van ontsteking bij huidkanker mogelijk en maakt het mogelijk om de tumorinitiatie te bestuderen als een apart proces van tumorprogressie. De tumorvorming in dit model wordt chemisch geïnduceerd en maakt het gebruik van knock-outstammen mogelijk om de effecten van omgevingsfactoren of therapeutische kandidaten te bestuderen. Het model is zeer geschikt voor het bestuderen van de rol van het immuunsysteem en angiogenese bij kanker.Het toont een vergelijkbare ziekte pathologie plaveiselcelcarcinoom bij menselijke patiënten. Hoewel deze methode relatief eenvoudig uit te voeren is, is een nauwkeurige timing essentieel. Het is ook belangrijk om passende veiligheidsmaatregelen te nemen bij de behandeling van DMBA, dat is een kankerverwekkende stof.Voor het begin van het experiment, huis een agressieve zeven tot negen weken oude muizen in aparte kooien om te voorkomen dat vechten en huidletsels. Voor huidpailloma inductie scheer je eerst de rughuiden van de proefdieren en weeg je de muizen individueel. Gebruik 48 uur na het scheren een pipet om 50 microgram DMBA in 200 microliter aceton aan te brengen op het geschoren gebied van elke verdoofde muis.Voor huid papilloma promotie, zeven dagen na DMBA toepassing behandelen de huid met vijf microgram TPA in 200 microliters van aceton twee keer per week tot het einde van het experiment. Bestudeer de dieren op papillomen en fotografeer en fotografeer en notuleer elke week de grootte van elk individueel papilloma op een kaart. Een voelbare massa groter dan een millimeter in diameter wordt beschouwd als een papilloma als het langer dan een week blijft.Wanneer de tumorrespons een plateau bereikt, oogst u 24 uur na de laatste TPA-toepassing het juiste monstermateriaal van de dieren en verzamel u volledige diktestukken van de huid voor immunohistochemische analyse. Gebruik een biopsie punch om huidstukken te verzamelen van papilloma en niet-papilloma huidmonsters voor genexpressie en of eiwitanaylenen en gebruik een scalpel om stukjes papilloma en niet-papilloma huid te verzamelen voor immunohistochemische analyse. Verzamel vervolgens de huid drainerende lymfeklieren en een stuk van de milt voor flow cytometrische analyse zoals gewenst.Een statistisch significant verschil in de papilloma vrije tijd en in het aantal papillomen tussen de experimentele groepen wordt meestal waargenomen in het DMBA TPA tumormodel. Histologische analyses zijn geschikt voor het bestuderen van de structuur van de papillomen, de morfologie van de huid, of de infiltratie van immuuncellen van belang. Het is essentieel om de DMBA en TPA gelijkmatig op de huid toe te passen en TPA in consistente intervallen aan te brengen.Het is ook belangrijk om de papillomen regelmatig te tellen. De mechanismen die het aantal en de tijd van tumorvorming beïnvloeden, kunnen worden bestudeerd met behulp van verschillende methoden, waaronder immunohistochemie, stroomcytometrie, kwantitatieve PCR en eiwitanalyse. Deze conventionele techniek kan gemakkelijk worden aangepast en toegepast om de effecten van verschillende genen, omgevingsfactoren of therapieën van belang te bestuderen op tumorinitiatie en progressie.Voorzichtigheid is geboden bij het uitvoeren van de techniek, omdat DMBA kankerverwekkend is en aceton snel verdampt. Een geschikt ademhalingsmasker en het gebruik van de stroomkast worden aanbevolen.

chemical-induced-skin-carcinogenesis-model-using

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

We tonen een protocol waarbij toediening van het genotoxisch azoxymethaan (AOM), gevolgd door drie cycli van het pro-ontstekingsmiddel dextransulfaat natrium (DSS) snel en efficiënt genereert colon tumoren in muizen met morfologische en moleculaire overeenkomsten met die van menselijke colitis geassocieerde kanker.

Modeling Colitis geassocieerde kanker met Azoxymethaan (AOM) en dextransulfaat natrium (DSS)

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method for lung cancer treatment. Photosensitizers selectively accumulate in tumor tissue and lead to tumor cell death in the presence of oxygen and the proper wavelength of light. In this protocol video, PDT-based method is used to evaluate the phototoxic potential of a potential photosensitizer in lung cancer cells.

In Vitro Phototoxicity Assay: A PDT-based Method to Evaluate the Phototoxic Potential of a Photosensitizer in Lung Cancer Cells

This video describes the procedure to induce two-stage skin carcinogenesis to study tumor initiation by topical application of chemicals. In the first step, a mutagen, DMBA, is applied onto the skin of a mouse model which initiates tumor formation by causing mutations in the stem cells, followed by the application of a growth stimulator, TPA, which accelerates skin papilloma formation.

Chemical-induced Two-stage Skin Carcinogenesis Model: An Experimental In Vivo Mouse Model of Skin Cancer

This video describes a method to measure UV sensitivity in a humanized mouse model—a mouse model that mimics human skin. We determine the minimal erythematous dose (MED) of UV radiation that can cause erythema or edema on the skin. The method can help to find out the efficacy of drugs used to reduce UV sensitivity.

Minimum Erythematous Dose Assay: A Method for Measuring UV Sensitivity in Mouse Models

Carcinogenese is een proces waarbij interacties tussen kankercellen en kanker micromilieu. Om de moleculaire gebeurtenissen ontleden, moet men verschillende celpopulaties in verschillende stadia sluiten tijdens kankerontwikkeling. Met behulp van een muismodel voor basaalcelcarcinoom, een protocol voor mobiele analyses beschrijven we tijdens carcinogenese.

Cel Bevolking Analyses Tijdens Skin Carcinogenesis

Epidermale melanine wordt geïnduceerd door topische applicatie van forskolin in een muizenmodel van de lichte huid UV-gevoelige mens. Farmacologische manipulatie van cAMP niveaus in de huid en epidermale donkerder sterk tegen UV-gemedieerde inflammatie (zonnebrand) zoals gemeten door de minimale erythemateuze dosis (MED) assay.

Farmacologische Inductie van epidermale melanine en bescherming tegen zonnebrand in een gehumaniseerd muismodel

Dit protocol beschrijft een scalpel loading-fluorescerende kleurstof overdracht techniek die intercellulaire communicatie meet door middel van gap junction kanalen. Spleetovergangen intercellulaire communicatie is een belangrijke cellulaire proces waardoor weefsel homeostase wordt onderhouden en verstoring van deze cell signaling heeft nadelige gevolgen voor de gezondheid.

Gap Junctionele intercellulaire communicatie: Een functionele Biomarker om de negatieve gevolgen van de Giftige stoffen en toxines te beoordelen, en gezondheidsvoordelen van Natural Products

Hier presenteren we een protocol om te isoleren van de alvleesklier eilandjecellen muis voor het screenen van de ROS inducties door de xenobiotica teneinde de potentiële diabetogenic xenobiotische chemische stoffen.

Een lymfkliertest alvleesklier Islet cel-gebaseerde Screening voor Diabetogenic milieu chemische stoffen

De volgende procedure beschrijft een methode voor ruimtelijke en temporele controle van melanocytische tumor initiatie in muizen dorsale huid, met behulp van een genetisch gemanipuleerde muismodel. Dit protocol beschrijft macroscopische en microscopische cutane melanoom initiatie.

Ruimtelijke en temporele controle van muizen melanoom initiatie van mutant melanocyt stamcellen

Het doel van dit protocol is om voorbijgaande in vivo productie van niet-dodelijke niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de huid van muizen te induceren, waardoor fysiologische reacties in het weefsel verder worden bevorderd.

Stimulatie van stamcelniches en weefselregeneratie in muizenhuid door schakelbare protoporfyrine IX-afhankelijke fotogeneratie van reactieve zuurstofsoorten in situ

Een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van voortijdige veroudering in HNM met behulp van tBHP, gestandaardiseerde protocollen voor het analyseren van belangrijke senescentiemarkers, waaronder groeistop, SA-β-galactosidase-activiteit en SASP-factoren.

Een gestandaardiseerd protocol voor het induceren van door stress veroorzaakte voortijdige veroudering in primaire menselijke melanocyten met behulp van tert-butylhydroperoxide

Leer een tweefasig huidcarcinogenesemodel met DMBA en TPA om tumorinitiatie en -progressie te bestuderen. Deze methode maakt onderzoek naar inflammatie en immuunreacties in huidkanker mogelijk.

Chemisch-geïnduceerde huid carcinogenese model met behulp van Dimethylbenz a anthraceen en 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-acetaat (DMBA-TPA) (Video) | JoVE Journal

Chemisch-geïnduceerde huid carcinogenese model met behulp van Dimethylbenz [a] anthraceen en 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-acetaat (DMBA-TPA)

Meer video's verkennen