Name: Ontwerp van een biocompatibele drug-Eluting tracheale stent in muizen met Laryngotracheale stenose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-21T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Leer hoe je een biocompatibele drug-eluting tracheale stent ontwerpt voor laryngotracheale stenose bij muizen. Deze transorale techniek biedt een minimaal invasief preklinisch model voor lokaal geneesmiddelonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Nationaal Instituut voor doofheid en andere communicatiestoornissen van de National Institutes of Health onder de awardnummers 1K23DC014082 en 1R21DC017225 (Alexander Hillel). Deze studie werd ook financieel gesteund door de Triological Society en American College of Surgeons (Alexander Hillel), de American Medical Association Foundation, Chicago, IL (Madhavi Duvvuri) en een T32 NIDCD training Grant (Kevin Motz).

<ol><li>Minnigerode, B., Richter, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+subglottic+tracheal+stenosis+in+childhood%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood.</a> Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).</li>
<li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrotic+disease+and+the+T%28H%291%2FT%28H%292+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 (2004).</li>
<li>Kaplan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+Toxicity+Following+Administration+of+Sirolimus+%28formerly+Rapamycin%29+for+Psoriasis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Systemic Toxicity Following Administration of Sirolimus (formerly Rapamycin) for Psoriasis.</a> Archives of Dermatology. 135 (5), 553-557 (1999).</li>
<li>Kalra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New-Generation+Coronary+Stents%3A+Current+Data+and+Future+Directions%5BTitle%5D)+AND+%22Currrent+Atherosclerosis+Reports%22%5BJournal%5D)">New-Generation Coronary Stents: Current Data and Future Directions.</a> Currrent Atherosclerosis Reports. 19 (3), 14(2017).</li>
<li>Chao, Y. K., Liu, K. S., Wang, Y. C., Huang, Y. L., Liu, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+cisplatin-eluting+tracheal+stent+for+malignant+airway+obstruction%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Biodegradable cisplatin-eluting tracheal stent for malignant airway obstruction: in vivo and in vitro studies.</a> Chest. 144 (1), 193-199 (2013).</li>
<li>Duvvuri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+an+immunomodulatory+drug-eluting+stent+to+treat+laryngotracheal+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials+Science%22%5BJournal%5D)">Engineering an immunomodulatory drug-eluting stent to treat laryngotracheal stenosis.</a> Biomaterials Science. 7 (5), 1863-1874 (2019).</li>
<li>Mugru, S. D., Colt, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+silicone+stent+insertion+in+patients+with+expiratory+central+airway+collapse%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complications of silicone stent insertion in patients with expiratory central airway collapse.</a> Annals of Thoracic Surgery. 84 (6), 1870-1877 (2007).</li>
<li>Hillel, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+situ%2C+in+vivo+murine+model+for+the+study+of+laryngotracheal+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Otolaryngolology+Head+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">An in situ, in vivo murine model for the study of laryngotracheal stenosis.</a> JAMA Otolaryngolology Head Neck Surgery. 140 (10), 961-966 (2014).</li>
<li>Can, E., Udenir, G., Kanneci, A. I., Kose, G., Bucak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+PLLA%2FPCL+blends+and+paclitaxel+release+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+PharmSciTech%22%5BJournal%5D)">Investigation of PLLA/PCL blends and paclitaxel release profiles.</a> AAPS PharmSciTech. 12 (4), 1442-1453 (2011).</li>
<li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paclitaxel+Drug-eluting+Tracheal+Stent+Could+Reduce+Granulation+Tissue+Formation+in+a+Canine+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal+%28Engl%29%22%5BJournal%5D)">Paclitaxel Drug-eluting Tracheal Stent Could Reduce Granulation Tissue Formation in a Canine Model.</a> Chinese Medical Journal (Engl). 129 (22), 2708-2713 (2016).</li>
<li>Sigler, M., Klotzer, J., Quentin, T., Paul, T., Moller, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stent+implantation+into+the+tracheo-bronchial+system+in+rabbits%3A+histopathologic+sequelae+in+bare+metal+vs.+drug-eluting+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Molecularand+Cellular+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Stent implantation into the tracheo-bronchial system in rabbits: histopathologic sequelae in bare metal vs. drug-eluting stents.</a> Molecularand Cellular Pediatrics. 2 (1), 10(2015).</li>
<li>Robey, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+internal+bioabsorbable+PLGA+%22finger-type%22+stents+in+a+rabbit+tracheal+reconstruction+model%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Otolaryngology+Head+Neck+Surgery%22%5BJournal%5D)">Use of internal bioabsorbable PLGA "finger-type" stents in a rabbit tracheal reconstruction model.</a> Archives of Otolaryngology Head Neck Surgery. 126 (8), 985-991 (2000).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De meest kritische stappen voor het succesvol construeren en gebruiken van een drug-eluting stent in vivo zijn 1) het bepalen van de optimale PLLA-PCL ratio voor de gewenste drug elutie rate, 2) het bepalen van de juiste concentratie van het geneesmiddel dat moet worden verwijderd, 3) het vormen van de stents rond de angio katheter voor in vivo gebruik, en 4) transoraal het leveren van de stent in de muizen na LTS inductie zonder fatale luchtwegobstructie veroorzaken.
Hoewel er verschillende m...

Laryngotracheale stenose (LTS) is een pathologisch vernauwing van de luchtpijp, meestal als gevolg van iatrogene post-intubatie letsel. De combinatie van bacteriële kolonisatie, reactie van het buitenlandse lichaam op een tracheostomie of endotracheale buis, en patiëntspecifieke factoren leiden tot een afwijkende ontstekingsreactie. Deze maladaptieve immuunrespons leidt tot de afzetting van collageen in de luchtpijp, resulterend in Luminale vernauwing van de luchtpijp en daaropvolgende stenose1,2. Aangezien de huidige behandeling voor deze ziekte primair chirurgisch is, is het ontwikkelen van een alternatief medisch gebaseerd behandelings paradigma gericht op de afwijkende inflammatoire en profibrotische trajecten die leiden tot overmatige collageen depositie. Rapamycine, die remt de mTOR signalering complex, is gebleken dat immunosuppressieve effecten evenals een robuuste antifibroblast effect. Wanneer rapamycine echter systemisch wordt toegediend, kunnen vaak voorkomende bijwerkingen (bijv. hyperlipidemie, anemie, trombocytopenie) worden uitgesproken3. Het doel van onze methodologie is het ontwikkelen van een voertuig voor lokale geneesmiddelafgifte uitvoerbaar voor gebruik op de luchtweg die deze systemische effecten zou verminderen. Onze beoordelingen zijn gericht op het onderzoeken van de lokale immuunrespons op de drug delivery construct evenals de capaciteit voor de remming van fibroblast functie en de lokale immune micro omgeving te veranderen. Ziektespecifieke uitkomsten omvatten in vivo testen die markers van fibrose evalueren.
Biologisch afbreekbare drug-eluting stents zijn gebruikt in diermodellen van de ziekte in meerdere orgel systemen, met inbegrip van de luchtweg4. Voor het beheer van de luchtweg stenose of instorting, hebben eerdere onderzoeken gebruik gemaakt van met drugs beklede siliconen en op nikkel gebaseerde stents5. Een PLLA-PCL-constructie werd gekozen voor deze specifieke methode vanwege zijn geneesmiddel elutie profiel en mechanische sterkte in fysiologische omstandigheden gedurende een periode van 3 weken, wat is aangetoond in eerdere gepubliceerde studies6. PLLA-PCL is ook een biocompatibel en biologisch afbreekbaar materiaal dat al is goedgekeurd door de FDA4. Biocompatibele stents eluering cisplatine en MMC zijn bestudeerd in grote diermodellen zoals konijnen en honden. Echter, in deze diermodellen, stents werden niet geplaatst in een diermodel van de ziekte en werden geïmplanteerd transcervically. Deze studie biedt een unieke methode voor het beoordelen van een biocompatibele drug-eluting stent geplaatst transoraal in een muismodel van luchtweg letsel en laryngotracheale stenose. Een biocompatibele stent die lokaal een immunomodulerend geneesmiddel wegspost en kan worden geminiaturiseerd voor studie in een muriaans model is waardevol voor translationeel preklinisch onderzoek. Eerdere pogingen tot stent-gebruik met andere materiaal constructies genereerden robuuste reacties van het buitenlandse lichaam en verergeren de onderliggende ontstekingdie LTS onderscheidt. Deze methodologie, naar onze kennis, is de eerste in zijn soort om de immunomodulerende en antifibrotische effecten van een stent-based geneesmiddel bezorgingssysteem in een muriene model van LTS te bestuderen. Het model van de Murine zelf biedt verschillende voordelen voor het bestuderen van de effecten van een immunomodulerende drug op de luchtpijp. Genetisch gemodificeerde muizen en experimentele cohorten van gezonde en zieke muizen kunnen worden bestudeerd, wat kan leiden tot experimentele reproduceerbaarheid en het verbeteren van de kosteneffectiviteit. Bovendien bootst de levering van de stent transoraal in de luchtpijp van de muis de klinische levering van een dergelijke stent bij mensen na, wat het translationeel voordeel van deze methode verder benadrukt. Ten slotte, het relatieve gemak waarmee de PLLA-PCL stent met het medicijn kan worden geproduceerd, maakt het mogelijk om alternatieve medicamenteuze therapieën te leveren die gericht zijn op het verminderen van littekenvorming in de luchtpijp.

<table><tbody><tr><td>1. Voor stent</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-gauge angiocatheter</td><td>Jelco</td><td>4050</td><td></td></tr><tr><td>Dichloromethaan</td><td>Sigma Aldrich</td><td>270997-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>56-81-5</td><td>Ook verkrijgbaar bij andere leveranciers.</td></tr><tr><td>PDLGA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>739955-5G</td><td></td></tr><tr><td>PLLA-PCL (70 : 30)</td><td>Evonik Industries AG</td><td>65053</td><td></td></tr><tr><td>Rapamycine</td><td>LC Laboratories</td><td>R-5000</td><td></td></tr><tr><td>2. Dierchirurgie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Draadoog</td><td>Mill-Rose Company</td><td>320101</td><td></td></tr><tr><td>3. Voor immunohistochemisch kleuring</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antigenen-opname buffer</td><td>Abcam</td><td>ab93678</td><td>Ook verkrijgbaar bij andere leveranciers; zure pH vereist</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Cell Signaling</td><td>8961S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11965-092</td><td>Ook verkrijgbaar bij andere leveranciers.</td></tr><tr><td>FBS (foetaal bovien serum)</td><td>MilliporeSigma</td><td>F4135-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-konijn-488 antilichaam</td><td>Lif technology</td><td>a11008</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-rat-633 antilichaam</td><td>Lif technology</td><td>a21094</td><td></td></tr><tr><td>Hydrofiele plus glijbaan</td><td>BSB7028</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>100-10023</td><td>Ook verkrijgbaar bij andere leveranciers.</td></tr><tr><td>Konijn anti-CD3 antilichaam</td><td>Abcam</td><td>ab5690</td><td></td></tr><tr><td>Rat antiF4/80 antilichaam</td><td>Biolengend</td><td>123101</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM 510 Meta Confocal Microscoop</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4. Voor kwantitatieve PCR</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5 mm glazen kralen</td><td>OMNI International</td><td>19-645</td><td></td></tr><tr><td>Bead Mill Homogenizer</td><td>OMNI International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gen Specifieke Forward/Reverse Primers</td><td>Genomic Resources Core Facility</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop 2000 spectrofotometer</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green Mastermix</td><td>Life Technologies</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy mini kit</td><td>Qiagen</td><td>80404</td><td></td></tr><tr><td>StepOnePlus Real Time PCR systeem</td><td>Life Technologies</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ontwerp van een biocompatibele drug-eluting tracheale stent in muizen met laryngotracheale stenose

Design of a Biocompatible Drug-Eluting Tracheal Stent in Mice with Laryngotracheal Stenosis

Laryngotracheale stenose (LTS) is een pathologische vernauwing van de subglottis en luchtpijp die leidt tot extrathoracale obstructie en significante kortademigheid. LTS resulteert in een slijmvlies beschadiging door een vreemd lichaam in de luchtpijp, wat leidt tot weefselbeschadiging en een lokale ontstekingsreactie die misgaat, wat leidt tot de afzetting van pathologisch littekenweefsel. De behandeling van LTS is chirurgisch vanwege het gebrek aan effectieve medische therapieën. Het doel van deze methode is om een biocompatibele stent te construeren die kan worden geminiaturiseerd om in muizen met LTS te plaatsen. We hebben aangetoond dat een plla-PCL (70% poly-L-lactide en 30% polycaprolactone) constructie een optimale biomechanische sterkte had, was biocompatibel, praktisch uitvoerbaar voor een in vivo plaatsing stent, en geschikt voor het eluering van drugs. Deze methode biedt een systeem voor het afleveren van geneesmiddelen voor het testen van verschillende immunomodulerende middelen om de ontsteking lokaal te remmen en de fibrose van de luchtwegen te verminderen. De productie van de stents duurt 28 − 30 uur en kan eenvoudig worden gereproduceerd, waardoor experimenten met grote cohorten mogelijk zijn. Hier hebben we het medicijn rapamycine binnen de stent opgenomen om de effectiviteit ervan te testen bij het verminderen van fibrose en collageen depositie. De resultaten toonden aan dat PLLA-PCL-tenten betrouwbare rapamycineafgifte vertoonden, mechanisch stabiel waren in fysiologische omstandigheden en biocompatibel waren, waardoor weinig ontstekingsreactie in de luchtpijp werd teweeggebracht. Verder vermindert de rapamycine-eluting PLLA-PCL stents de littekenvorming in de luchtpijp in vivo.

De biologisch afbreekbare PLLA-PCL stent constructie, geladen met rapamycine die in deze studie werd gebruikt, kon rapamycine op consistente en voorspelbare wijze in fysiologische omstandigheden Elzen (Figuur 1). Figuur 2 toont de plla-PCL stent die rond een 22 G angio katheter is geplaatst voor gebruik in een muriene model van LTS. Om te bepalen of de effecten van rapamycine elutie in de luchtpijp werkzaam zijn in verzachtende fibrose, kunnen gemeten veranderin...

Laryngotracheale stenose is het resultaat van pathologische litteken afzetting die de tracheale luchtweg kritisch vernauwt en geen effectieve medische therapieën mist. Met behulp van een PLLA-PCL (70% poly-L-lactide en 30% polycaprolactone) stent als een lokale drug delivery systeem, potentiële therapieën gericht op het verminderen van litteken proliferatie in de luchtpijp kan worden bestudeerd.

Ontwerp van een biocompatibele drug-Eluting tracheale stent in muizen met Laryngotracheale stenose

Laryngotracheal stenosis (LTS) is a pathologic narrowing of the subglottis and trachea leading to extrathoracic obstruction and significant shortness of ...

Dit protocol laat ons onderzoeken drug-eluting stents in een klein dier model van laryngotracheal stenose laat ons hefboomwerking genetisch gemodificeerde dieren in een kosteneffectieve manier. Transorale plaatsing van de drug-eluting luchtweg stent spaart de dieren van een open incisie in de luchtpijp die een meer klinisch relevant model van laryngotracheal stenose vertegenwoordigt. Deze techniek vergemakkelijkt preklinisch onderzoek van lokale strategieën voor de levering van geneesmiddelen voor de behandeling van laryngotracheal stenose.Deze techniek biedt een haalbaar en effectief platform voor het translationeel onderzoek naar drug-eluting luchtweg stents in een klein dier model dat kan worden toegepast voor toekomstig onderzoek in grotere diermodellen en klinische toepassing. techniek met name de transorale intubatie, inductie van luchtpijpletsel en de luchtweg stent plaatsingstap. Visuele demonstratie van deze technisch uitdagende operatie is van cruciaal belang omdat veel van de fijne details niet volledig in woorden kunnen worden beschreven.Om een 1%rapamycine met polymeer oplossing te maken, voeg zes milligram rapamycine tot 600 milligram 70-30 PLLA-PCL in een glazen flac

design-biocompatible-drug-eluting-tracheal-stent-mice-with

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Deze video laat zien en vergelijkt twee experimentele modellen te bestuderen van de ontwikkeling van obliteratieve luchtwegaandoeningen (OAD) in muizen, de heterotope en orthotope tracheale transplantatie model.

Heterotope en orthotope Tracheale transplantatie in Muizen worden gebruikt als modellen voor de ontwikkeling van de obliterans luchtwegaandoeningen Study

Een model van stent implantatie in muizen halsslagader wordt beschreven. In vergelijking met andere, soortgelijke middelen, deze procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, het aanbieden van de mogelijkheid om te studeren in een handige manier de vaatwand reactie op verschillende drug-eluting stents en de moleculaire mechanismen van restenose.

Een Muizenmodel van Stent Implantatie in de halsslagader voor de Studie van Restenose

Onze doelen waren voor het ontwerpen, produceren en testen ferromagnetische stents voor endotheelcellen capture. Ten stents werden getest op breuk en 10 meer stents werden getest behouden magnetisme. Tenslotte werden 10 stents getest in-vitro en 8 meer stents werden geïmplanteerd in 4 varkens cell capture en retentie vertonen.

Ferromagnetische Bare Metal Stent voor endotheelcellen Capture and Retention

Graft stenose vormt een kritische obstakel in weefsel ontworpen airway vervanging. Om te onderzoeken cellulaire mechanismen ten grondslag liggen aan stenose, gebruiken we een lymfkliertest model van weefsel ontworpen tracheale vervanging met geplaatste beenmerg mononucleaire cellen (BM-MNC). Hier, detail we onze protocol, met inbegrip van de steiger productie, BM-MNC isolatie, graft zaaien en implantatie.

Zaaien en implantatie van een Biosynthetic weefsel-engineered tracheale Graft in een muismodel

Dit protocol is bedoeld om een 3D-bioprint patch te transplanteren op het epicardium van infarct muizen die hartfalen modelleren. Het bevat details met betrekking tot anesthesie, de chirurgische borstopening, permanente ligatie van de linker voorste aflopende (LAD) kransslagader en toepassing van een bioprinted patch op het infarct gebied van het hart.

Transplantatie van een 3D Bioprinted Patch in een Murine Model van Myocardikoesie Infarct

Het protocol beschrijft een beeldvormingsgerichte bioreactor die de selectieve verwijdering van het endogene epitheel uit de rattenluchtpijp en homogene verdeling van exogene cellen op het lumenoppervlak mogelijk maakt, gevolgd door langdurige in vitro kweek van het celweefselconstruct.

Imaging-guided bioreactor voor het genereren van bio-technisch luchtwegweefsel

Het doel van dit manuscript is om de microchirurgische stappen te beschrijven die nodig zijn om een heterotope larynxtransplantatie bij muizen uit te voeren. De voordelen van dit muismodel ten opzichte van andere diermodellen van larynxtransplantatie zijn de kosteneffectiviteit en de beschikbaarheid van immunologische testen en gegevens.

Een heterotopisch muismodel voor het bestuderen van larynxtransplantatie

Het verkrijgen van sterilisatie is essentieel voor tracheale weefseltransplantatie. Hierin presenteren we een sterilisatieprotocol met behulp van lage dosis gammastraling die volledig wordt getolereerd door organen.

Lage dosis gammastralingssterilisatie voor gedecellulariseerde tracheale grafts

Hier stellen we een protocol voor intratracheale lipopolysaccharide (LPS) levering via niet-invasieve orofaryngeale endotracheale intubatie. Deze methode minimaliseert het trauma van de chirurgische procedure voor het dier en levert LPS nauwkeurig af aan de luchtpijp en vervolgens aan de longen.

Niet-invasieve intratracheale lipopolysaccharide-instillatie bij muizen

Het muizen intrapulmonale tracheale transplantatie (IPTT) model is waardevol voor het bestuderen van obliteratieve luchtwegaandoeningen (OAD) na longtransplantatie. Het biedt inzicht in longspecifiek immunologisch en angiogeen gedrag bij luchtwegvernietiging na allotransplantatie met een hoge reproduceerbaarheid. Hier beschrijven we de IPTT-procedure en de verwachte resultaten.

Intrapulmonale tracheale transplantatie bij muizen: een model voor het onderzoeken van obliteratieve luchtwegaandoeningen na longtransplantatie

Leer hoe je een biocompatibele drug-eluting tracheale stent ontwerpt voor laryngotracheale stenose bij muizen. Deze transorale techniek biedt een minimaal invasief preklinisch model voor lokaal geneesmiddelonderzoek.

Ontwerp van een biocompatibele drug-Eluting tracheale stent in muizen met Laryngotracheale stenose

Meer video's verkennen