Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt

In deze video, de gebruikers geïntroduceerd in de micro bioreactor software met de planning en uitvoering van het ontwerp van experimenten of DOE. De analyzers hulpkleppen worden ook gedemonstreerd om de procesconditie te optimaliseren. De integratie van modet in de geautomatiseerde micro bioreactor software is officieel voor de data-analyse.

Een groot aantal experimenten kan tegelijkertijd op kleine schaal worden gepland en uitgevoerd. Het aantonen van de procedure zal Tamanna Nagraik, een promovendus uit mijn laboratorium. Begin met de pre-cultuurprocedure in de hoofdteelt zoals beschreven in het tekstprotocol.

Als u een nieuw experiment wilt maken, opent u de Amber-zelfcultuursoftware en klikt u in het tabblad introductie op nieuw experiment. Voer in het nieuwe experimenttabblad de naam van het experiment in, samen met de datum waarop het wordt uitgevoerd. Activeer de controlepost voor het kweekstation in de schepen die tijdens de teelt moeten worden gebruikt.

De doe-tags automatisch worden ook geactiveerd voor een eenvoudige overgang tijdens de programmering van het DOE-experiment. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u informatie wilt instellen over het toevoegen van media in het vat, samen met antischuim, entmateriaal, feed en glucose, activeert u de controlepost voor media-toevoegen.

Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op media toevoegen aan schepen. Voer het volume van de media in die in de vaten moeten worden toegevoegd.

Definieer het in kaart brengen van mediaoverdracht van de plaat naar de schepen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Nadat de media-informatie in de software is ingevoerd, wijst u de teeltomstandigheden toe.

Klik op conditie media, en vul de temperatuur, doel DO, bovenste PH limiet, en roeren RPM. Klik vervolgens op Op roeren"of naar beneden roeren. Als u de toevoeging van entmateriaal in de vaten wilt plaatsen, activeert u de celplaat toevoegen.

Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op cellen toevoegen aan bloedvaten. Voer het tijdstip van de inenting en het volume van de media toe te voegen aan de schepen.

Definieer het pad dat de vloeistofafhandelaar bewandelt om de cel van de plaat naar de vaten over te brengen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u de toevoeging van voer, glucose en het antischuim wilt instellen, activeert u de invoerplaat toevoegen en definieert u het plaattype, de naam en de locatie.

Klik op voer toevoegen aan vaartuigen en voer het volume van het voer in dat aan de vaten moet worden toegevoegd. Voeg afhankelijk van de teelt het aantal voertoevoelen toe. Voor deze teelt wordt de reactor na 72 uur elke 24 uur gevoed.

Voeg handmatig de vertraging tussen de voeding door het invoeren van de gegevens in vertraging van cellen toegevoegd. De eerste dag van het voeden is na 72 uur inenting, de volgende is na 96 uur, enzovoort. Definieer het in kaart brengen van de overdracht van het voer van de plaat naar de vaten.

Als u de bemonstering tijdens de teelt wilt instellen, activeert u de add sample plate"en definieert u het plaattype, de naam en de locatie. Controleer het monster van de vaartuigen"en voer het volume van het monster in dat uit de vaten moet worden verwijderd. Zorg ervoor dat het volume niet daalt tot onder de 10 mililiters tijdens het gehele verloop van de teelt.

Voeg het aantal monsters toe dat tijdens de teelt moet worden genomen. Voeg, net als bij het voederen, de tijd toe waarop het monster uit het vaartuig wordt verwijderd voor elk invoermonsterpunt. Sla het proces op.

Het is nu klaar voor executie. Tot slot, definieer het in kaart brengen van de overdracht van het monster van de vaten naar de plaat. Open de Amber 15 DOE Software.

Klik op onderzoek"en selecteer nieuw. Voer de naam van het nieuwe DOE-onderzoek in het kader van de dialoog voor onderzoek in. Om een experiment toe te wijzen aan het DOE-onderzoek, opent u het recept dat is gemaakt om de verschillende parameters te bestuderen.

Klik op bladeren en selecteer het betreffende experiment. De vaartuigtags zijn al in de kolom opgenomen. Als u de gewenste DOE-factor wilt definiëren, selecteert u de parameter en klikt u op de kolom met het label DOE-factor.

Selecteer nieuwe"en voeg de eenheden, afkorting, evenals de onderste en bovengrens van de factoren. Definieer op het tabblad Antwoorden de waarden die in aanmerking moeten worden genomen voor de analyse van de gegevens. Klik op DOE-antwoorden bewerken en definieer de naam van het antwoord, de afkorting, eenheden en minimum- en maximumlimieten.

Zodra de antwoorden zijn gedefinieerd, selecteert u de oranje variabele voor elke reactie en definieert u. Een reactie kan automatisch worden gekoppeld aan een microbe bioreactor variabele. Kies de vereiste variabele in de vervolgkeuzelijst.

Wijzig de vergelijking voor elke reactie, afhankelijk van de vereiste. De keuzes tussen de minimale, maximale, eerste, laatste en gemiddelde gegevens. Als u een ontwerp wilt maken, gebruikt u de wizard Ontwerp starten om het type experimenteel ontwerp te selecteren en het aantal replica's en middelpunten toe te voegen of te verwijderen.

Selecteer de doelstelling, die de keuze van ontwerpen en modellen bepaalt. Werkpakketten voltooien en maken die kunnen worden geïmporteerd in de Amber-zelfcultuursoftware zoals beschreven in het tekstprotocol. Klik op het tabblad experiment op doe-experiment maken en blader naar het werkpakket dat is gemaakt met de DOE-software.

Initialiseer het proces door op Start te klikken. Zodra het experiment is uitgevoerd, exporteert u de gegevens met behulp van doe-resultaten exporteren. Het venster export doe-resultaten wordt geopend en de rijen met vermelding van het kweekschip en het station worden in de tabel vermeld.

Selecteer de gewenste rijen en klik op geselecteerde rijen exporteren of exporteer experimentele gegevens om alle resultaten op te slaan en het bestand op te slaan voor verdere analyse. Importeer de gegevens in de Amber DOE-module door over te schakelen naar het tabblad resultaten en importresultaten te selecteren. Blader naar het gewenste gegevensbestand en klik op resultaten analyseren.

De celgroei in de geautomatiseerde microbe bioreactoren is vergelijkbaar met de multiuse bioreactoren. Bij het vergelijken van de celconcentratie van drie verschillende schalen, wordt opgemerkt dat de 15 milliliter geautomatiseerde microbe bioreactor bootst de twee liter glas bioreactor. De resultaten van de schudkolf worden ook vergeleken om het voordeel van Amber tentoon te stellen.

De invloed van verschillende roersnelheid en PH wordt bestudeerd in de geautomatiseerde microbe bioreactoren. Hier is een vergelijking van de levensvatbare celconcentratie, of VCC, en monoklonale antilichaamconcentratie in de verschillende microbe bioreactoren. De negatieve invloed van PH 6.9 op de VCC kan worden waargenomen.

Bovendien verbeterde de groei van de cellen aanzienlijk onder de cultuur bij PH 7.3 in vergelijking met PH 7.1. Hier zijn de respons contour percelen van VCC en monoklonale antilichaam concentratie. De waarden zijn vergelijkbaar in de vaten met dezelfde PH- en verschillende roersnelheid, wat aangeeft dat de voor dit proces verzamelde roerrsnelheid geen significante invloed heeft op de procesoutput.

Elke instructie die aan de machine wordt gegeven, moet zorgvuldig worden geschreven om fouten tijdens de uitvoering van het experiment te voorkomen. De software is flexibel en kan een aantal experimenten tegelijk uitvoeren, waardoor de tijd die nodig is om een proces te optimaliseren, wordt verminderd. Het ontwerp van experiment is nuttig op het gebied van bioproces, omdat de resultaten kennisgebaseerd procesbegrip geven, dat tot op zekere hoogte kan worden uitgebreid tot andere organismen.