Name: Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 28 s
Description: Leer procesoptimalisatie met geautomatiseerde micro-bioreactoren voor high-throughput celteelt. Deze methode toont DOE-planning, celoogst en eiwitkwantificering met Protein A kolommen voor efficiënte bioprocesontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen het Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), het Federale Ministerie van Onderwijs en Onderzoek, Duitsland, en het BioProcessing-team van Sartorius Stedim Biotech GmbH, Duitsland, bedanken voor hun steun.

1. Precultuurprocedure
LET OP: Voor dit protocol worden recombinante CHO DG44-cellen met een levensvatbare celconcentratie van 1 x 107 cellen/mL gebruikt.
<ol><li>Ontdooi de flacon met 1,2 mL cellen op kamertemperatuur en breng de celsuspensie onmiddellijk over op een conische centrifugebuis van 15 mL met 10 mL koudzaadmedium.</li>
	<li>Centrifugeer de conische centrifugebuis 5 minuten op 190 x g en kamertemperatuur en gooi de supernatant weg.</li>
	<li>Verwarm 150 ml van het zaadmedium voor in een schudkolf van 500 ml tot 36,8 °C.</li>
	<li>Hang de celpellet voorzichtig op in 10 mL voorverwarmd zaadmedium en breng de cellen over in de schudkolf.</li>
	<li>Gebruik 1 mL van het monster uit de kolf om de initiële VCC en levensvatbaarheid te meten met behulp van een celteller. LET OP: De levensvatbaarheid moet boven de 70% liggen na ontdooiing voor een succesvolle teelt.</li>
	<li>Incubeer de schudkolf in een orbitale shaker (shakerdiameter van 19 mm) bij 36,8 °C en 7,5% CO2 met een schudsnelheid van 120 rpm. LET OP: Deze omstandigheden variëren afhankelijk van de celstam en het medium.</li>
	<li>Drie dagen na het passeren van de cellen, verwijder de schudkolf uit de shaker en plaats deze onder de laminaire stroomkast. Neem 1 mL monster om de uiteindelijke celconcentratie te meten. Bereken het volume dat moet worden overgebracht naar vers voorverwarmd zaadmedium zodanig dat de initiële celconcentratie in de nieuwe passage 2 x 105 cellen/mL bedraagt.</li>
	<li>Passage van de cellen 5 keer in totaal alvorens over te dragen aan de bioreactor voor de belangrijkste teelt.</li>
</ol>2. Hoofdteelt
<ol><li>Meet de uiteindelijke celconcentratie van de voorcultuur. Bereken het volume dat naar de bioreactor moet worden overgebracht, zodat de initiële celconcentratie in de reactor 3 x 105 cellen/mL bedraagt.</li>
	<li>Vul de reactor met productiemedium een dag voor de inenting om de reactor te equilibrate en stel de procesparameters zoals temperatuur, pH en DO in. LET OP: De teeltcondities zijn 36,8 °C en 60% opgeloste zuurstofconcentratie (DO). We testten roerstaafsnelheden van 1050 tpm en 1300 rpm samen met pH's van 6,9, 7,1 en 7,3. De totale duur van de teelt is 12 dagen tot de cellen worden geoogst. Het batchproces duurt 72 uur waarna het voermedium om de 24 uur wordt toegevoegd. Het protocol dat voor de teelt moet worden gebruikt, wordt in detail vermeld in het volgende segment.</li>
</ol>3. Het schrijven van het recept in de geautomatiseerde Micro-bioreactor Software
LET OP: Er zijn twee manieren om een recept te schrijven in de AMBR-celkweeksoftware: het wordt gemaakt met behulp van een wizard of door elke stap handmatig toe te voegen. Voor de toepassing van dit protocol worden stappen met de wizard weergegeven.
<ol><li>Een nieuw experiment maken
	<ol>
<li>Open de AMBR-celkweeksoftware en klik op het tabblad Inleiding op Nieuw experiment maken.</li>
	</ol></li>
	<li>Het laden van het recept
	<ol><li>Voer op het tabblad Nieuw experiment de naam van het experiment in, samen met de datum waarop het moet worden uitgevoerd.<ol>
<li>Activeer het controlepunt voor het kweekstation en de vaten die tijdens de teelt moeten worden gebruikt. De Auto Add DOE Tags worden ook geactiveerd voor een eenvoudige overgang tijdens de programmering van het DOE-experiment. Klik op Volgende om naar het volgende tabblad te gaan.</li>
		</ol></li>
		<li>Stel informatie in over de toevoeging van media in het vat samen met antischuim, entmateriaal, voer en glucose.<ol>
<li>Activeer het controlepunt Mediaplaat toevoegen. Definieer het type plaat, de naam en de locatie van de plaat die het medium bevat. LET OP: Afhankelijk van het type plaat en als de plaat een deksel bevat, activeert u de controle op Is Lidded om een goede werking van de vloeistofhandler te garanderen</li>
			<li>Klik op Media toevoegen aan schepen. Voer het volume van de media in die in de vaten moeten worden toegevoegd. Definieer de toewijzing van de overdracht van de media van de plaat naar de vaten. Klik op Volgende om naar het volgende tabblad te gaan.</li>
		</ol></li>
		<li>Stel de teeltomstandigheden in de reactor in.<ol>
<li>Nadat de media-informatie in de software is ingevoerd, wijst u de teeltvoorwaarden toe. Klik op Condition Media en vul de temperatuur, doel DO, bovenste pH-limiet en roeren RPM (Omhoog roeren of Omlaag roeren).</li>
		</ol></li>
		<li>Zet toevoeging van inoculumen in de vaten.<ol>
<li>Celplaat toevoegenactiveren . Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat die het medium bevat.</li>
			<li>Klik op Cellen toevoegen aan bloedvaten. Voer het tijdstip van inenting en het volume van de media toe te voegen aan de vaten.</li>
			<li>Definieer het pad dat door de vloeistofhandler naar de overdracht van de cel van de plaat naar de vaten wordt afgelegd. Klik op Volgende om naar het volgende tabblad te gaan. LET OP: Zorg ervoor dat PipetteTips voor hergebruik worden gedeactiveerd om kruisbesmetting en onjuiste initiële levensvatbare celconcentratie te voorkomen.</li>
		</ol></li>
		<li>Stel toevoeging van voer, glucose en antischuim in. LET OP: De procedure voor de toevoeging van diervoeders, glucose en antischuim is op elkaar vergelijkbaar. Omwille van dit protocol wordt de procedure vermeld voor "Feed". Dit kan worden gerepliceerd voor glucose en antischuim.<ol>
<li>Activeer de feedplaat toevoegen en definieer het type, de naam en de locatie van de plaat. Klik op Feed toevoegen aan schepen en voer het volume in van de feed die aan de vaten moet worden toegevoegd. Definieer de toewijzing van de overdracht van het voer van de plaat naar de vaten.</li>
			<li>Voeg afhankelijk van de teelt het aantal voertoevoegingen toe. Voor deze teelt wordt de reactor na 72 uur voor elke 24 uur gevoed.</li>
			<li>Voeg handmatig de vertraging tussen de voeding toe door de gegevens in te voeren in Vertraging van cellen die zijn toegevoegd. De eerste dag van het voeden is na 72 uur inenting en de volgende is na 96 uur en ga zo maar door. LET OP: Antischuim toevoeging is geprogrammeerd om elke dag worden toegevoegd om schuimvorming tijdens de teelt te voorkomen.</li>
		</ol></li>
		<li>Stel bemonstering tijdens de teelt.<ol>
<li>Activeer de voorbeeldplaat toevoegen en definieer het type, de naam en de locatie van de plaat.</li>
			<li>Controleer Take Sample van vaartuigen en voer het volume in van het monster dat uit de vaten moet worden verwijderd. Definieer de toewijzing van de overdracht van het monster van de vaten naar de plaat. Zorg ervoor dat het volume gedurende de gehele teeltgang niet onder de 10 mL daalt.</li>
			<li>Voeg het aantal monsters toe dat tijdens de teelt moet worden genomen. Voeg, net als bij het voeren, de tijd toe waarop het monster voor elk invoermonsterpunt uit het vat wordt verwijderd.</li>
		</ol></li>
		<li>Sla het proces op. Het is nu klaar voor uitvoering. LET OP: Als u de goede werking van het protocol wilt garanderen, schakelt u over naar het tabblad Processtappen in de AMBR-celkweeksoftware en selecteert u de weergave Processtap om de stroom van het recept te visualiseren.</li>
	</ol></li>
	<li>Ontwerp van experiment in de geautomatiseerde microbioreactor
	<ol>
<li>Om de DOE-software van de bioreactor uit te voeren, moet u ervoor zorgen dat het recept in de hoofdsoftware wordt opgeslagen en klaar voor gebruik.</li>
		<li>Open de AMBR 15 DOE-software en klik op Onderzoek en selecteer Nieuw.<ol>
<li>Voer de naam van het nieuwe DOE-onderzoek in het dialoogvenster Onderzoek maken in.</li>
			<li>Om een experiment toe te wijzen aan het DOE-onderzoek, opent u het recept dat is gemaakt om de verschillende parameters te bestuderen. Klik op Bladeren en selecteer het betreffende experiment.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Definieer de DOE-factor.<ol>
<li>De tags van het schip zijn al ingeschakeld in de kolom. Als u de gewenste DOE-factor wilt definiëren, selecteert u de parameter en klikt u op de kolom met het label DOE-factor. Selecteer Nieuw en voeg de eenheden, afkorting, onder- en bovengrens van de factoren toe (bijvoorbeeld temperatuur, DO, pH).</li>
		</ol>
</li>
		<li>Definieer de reactiefactor.<ol>
<li>Zodra de DOE-factoren zijn gedefinieerd, definieert u de respons op basis waarvan de experimentele analyse zou worden gestructureerd.</li>
			<li>Definieer op het tabblad Antwoorden de waarden die in aanmerking moeten worden genomen voor de analyse van de gegevens.</li>
			<li>Klik op Doe-antwoorden bewerken en definieer de naam van de respons, afkorting, eenheden, minimum- en maximumlimieten (bijvoorbeeld titer, levensvatbare celconcentratie).</li>
			<li>Zodra de antwoorden zijn gedefinieerd, selecteert u de AMBR-variabele voor elke respons en definieert u de variabele. Een reactie kan automatisch worden gekoppeld aan een micro-bioreactor variabele, Kies de vereiste variabele uit de vervolgkeuzelijst.</li>
			<li>Wijzig de vergelijking voor elk van de antwoorden, afhankelijk van de vereiste. De keuze is tussen de minimale, maximale, eerste, laatste en gemiddelde gegevens.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Maak een ontwerp.<ol>
<li>Gebruik de wizard Ontwerp starten om het type experimenteel ontwerp te selecteren om het aantal replicaties en middelpunten toe te voegen of te verwijderen.</li>
			<li>Selecteer de doelstelling, die de keuze van ontwerpen en modellen bepaalt: Screening: Gebruikt lineaire en interactiemodellen om de belangrijke factoren te vinden Optimalisatie (RSM), Maakt gebruik van kwadratische en kubieke modellen voor gedetailleerde modellering en optimalisatie Gespleten doelstelling: Modellen voor formulerings- en procesfactoren kunnen afzonderlijk worden gekozen</li>
			<li>Zodra het doel is bepaald, selecteert u het model en het ontwerp samen met het aantal middelpunten en repliceert.</li>
			<li>Klik op Voltooien en ga naar het volgende tabblad.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Definieer het experiment. LET OP: De DOE-factoren staan vermeld in de rechterkolom van de software. Bij het selecteren van de gewenste factoren worden de vaartuigen die met de gewenste parameter experimenteren gemarkeerd. De schepen binnen het cultuurstation kunnen worden verplaatst door met de rechtermuisknop op het schip te klikken en het naar de gewenste locatie te verplaatsen.<ol>
<li>Werkpakketten maken die kunnen worden geïmporteerd in de AMBR-celkweeksoftware. Afhankelijk van het aantal experimenten worden de verschillende werkpakketten gemaakt en opgeslagen voor verdere implementatie</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Uitvoering van het experiment in de werkpakketten die op de AMBR-besturingslaptop zijn gemaakt
	<ol>
<li>Klik op het tabblad Experiment op Doe-experiment maken en blader naar het werkpakket dat is gemaakt met de DOE-software.</li>
		<li>Initialiseer het proces door op Startte klikken.</li>
	</ol></li>
	<li>Analyse van experimentele resultaten
	<ol>
<li>Zodra het experiment is uitgevoerd, exporteert u de gegevens met Export DOE-resultaten. Het venster DOE-resultaten exporteren wordt geopend en de rijen die het kweekschip en station aangeven, worden in de tabel weergegeven.</li>
		<li>Selecteer de gewenste rijen en klik op Geselecteerde rijen exporteren of Experimentele gegevens exporteren om alle resultaten op te slaan en het bestand op te slaan voor verdere analyse.</li>
		<li>Importeer de gegevens in de AMBR DOE-module door over te schakelen naar het tabblad Resultaten en Importresultaten teselecteren .</li>
		<li>Blader naar het gewenste gegevensbestand en klik op de analyseresultaten.</li>
		<li>Analyseer de resultaten verder in MODDE.</li>
	</ol></li>
</ol>4. Uitvoering van de teelt in de geautomatiseerde microbioreactor
LET OP: De volgende stappen worden uitgevoerd door de gebruiker met behulp van het protocol geschreven in de bovengenoemde software. De stappen worden uitgevoerd door de gebruiker, tenzij anders vermeld.
<ol><li>Laden van de schepen
	<ol>
<li>Open de gamma gesteriliseerde kweekvaten onder een laminaire stroomkast en oriënt in het cultuurstation zoals afgebeeld in figuur 2.</li>
		<li>Reinig de klemplaat met 70% ethanol en dubbel gedestilleerd water. Dan, autoclave de plaat en plaats op de top van het schip.</li>
		<li>Monteer de klemplaat met een roerrplaat, zodat elke pin stevig wordt bevestigd.</li>
		<li>Draai zowel de roergangerplaat als de klemplaat op de roerbak.</li>
	</ol></li>
	<li>Het uitvoeren van de microbioreactorsoftware
	<ol>
<li>Gebruik het programma geschreven in sectie 3 om de teelt uit te voeren.</li>
		<li>Visualiseer de geplande of voltooide processtappen in het tabblad Proces. Wijzig de teeltstappen tijdens het proces dat wordt uitgevoerd als dat nodig is door eerst de vloeistofhandler te pauzeren en vervolgens het procesrecept te bewerken.</li>
		<li>Voeg antischuim toe aan de vaten voordat de roerganger wordt gestart om ervoor te zorgen dat er geen overmatig schuimen is tijdens de teelt. Het antischuim zal regelmatig worden toegevoegd, en het schuim visueel gedetecteerd.</li>
	</ol></li>
	<li>Toevoeging van media aan het schip
	<ol>
<li>Vul de 24 putplaat die bij de microbioreactoren is voorzien handmatig met steriele media en plaats in het aangewezen dek van het systeem. Zorg ervoor dat de plaat in het dek wordt geplaatst dat door het geschreven programma is aangewezen (punt 3). De vulling van het vaartuig vindt plaats zoals ontworpen in punt 3.2.2. LET OP: De temperatuur en roerstaaf beginnen onmiddellijk na de toevoeging van de media en het antischuim. De sensorlezer wordt 1 uur na het vullen van het vat geactiveerd (Start Monitor stap). Het vergassen naar elk schip begint zodra de lezer is geactiveerd. Media wordt overgelaten aan evenwicht voor een minimum van 6 uur voor pH herijking en inenting. De procesparameters kunnen worden gewijzigd in de software zoals vermeld in punt 3.2.3.</li>
	</ol></li>
	<li>Inenting
	<ol>
<li>Meet de levensvatbare celconcentratie na de5e passage. Bereken het aantal cellen dat naar de vaten moet worden overgebracht om ervoor te zorgen dat de initiële celconcentratie in alle vaten 3 x 105 cellen/mL bedraagt.</li>
		<li>Breng de cellen over op een 24 diepe putplaat, zodat het volume van de suspensie ten minste 1,6 keer het vereiste volume is. Voor een vereiste volume van 2 mL van het entmateriaal, breng 3,2 mL celsuspensie in elke put in de plaat.</li>
		<li>Plaats de 24 putplaat in het aangewezen dek. De schepen worden ingeënt als in punt 3.2.4.</li>
	</ol></li>
	<li>Dagelijkse bemonstering en analyse
	<ol>
<li>Verwijder elke dag een monster van 460 μL uit de vaten met behulp van de vloeistofhandler. Verdun 200 μL van het monster met 800 μL gefilterde 1x PBS-buffer (5x verduning) en plaats deze vervolgens in het celteller.</li>
		<li>Centrifugeer het resterende monster gedurende 5 minuten bij 190 x g en kamertemperatuur en bewaar het supernatant voor verdere analyse (glucose, lactaat, glutamine en glutamaat).</li>
		<li>Vries 100 μL van de supernatant in bij -20 °C tot het einde van de teelt voor eiwitkwantificering.</li>
	</ol></li>
	<li>Einde van de teelt
	<ol>
<li>Wanneer de procesparametercontrole (d.w.z. temperatuur, agitatie, pH en DO) is beëindigd, stopt u de controle van het proces.</li>
		<li>Schroef de roerrplaat en klemplaat los.</li>
		<li>Verwijder de kweekvaten en maak de cultuurstations schoon. Leg de droogplaten op de kweekstations en schroef ze erin.</li>
		<li>Reinig ondertussen de klemplaten grondig met 70% ethanol en dubbel gedestilleerd water.</li>
		<li>Klik op Stop in de bioreactorsoftware zodra de droogcyclus is voltooid.</li>
	</ol></li>
	<li>De cultuuroogst van de cel
	<ol>
<li>Oogst cellen op dag 12 van de teelt door de inhoud van de vaten handmatig te verwijderen in centrifugebuizen van 50 mL. Centrifugeer de celbouillon op 190 x g gedurende 30 min.</li>
		<li>Gooi de celpellet weg en bewaar de supernatant op -20 °C.</li>
	</ol></li>
</ol>5.
<ol><li>Gebruik een 1,7 mL Eiwit A kolom voor de kwantificering van het eiwit tijdens de teelt run.</li>
	<li>
Bereid de evenwichts- en elutiebuffer voor voordat u de monsters ontdooit.
	<ol>
<li>Gebruik een oplossing van 0,5 M Na2HPO4 met 0,5 M NaCl met een pH van 7,9 als evenwichtsbuffer en een oplossing van 100 mM glycine met 0,5 M NaCl met een pH van 2 als elutiebuffer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Filtreer beide buffers door een membraan van 0,2 μm en ontgas voordat ze voor de analyse worden geplaatst.</li>
	<li>Zuiver het hoogwaardige vloeistofchromatografiesysteem (HPLC) met vers bereide evenwichtsbuffer.</li>
	<li>Laad het eiwit Een kolom op het HPLC-systeem.</li>
	<li>Chromatografie uitvoeren met een stroomsnelheid van 1 mL/min. Stel de temperatuur van de kolomoven in op 30 °C en de temperatuur van de autosampler op 10 °C</li>
	<li>Ontdooi de bevroren monsters bij kamertemperatuur en filter 225 μL van elk monster door een 0,22 μm PVDF-membraan. Verdun de monsters met een hogere concentratie van het gewenste eiwit zijn in een 1:20 verhouding met evenwichtbuffer en filter door het membraan voordat u in de autosampler plaatst.</li>
	<li>Plaats de monsters in de autosampler. Laad de methode en volgorde in de software en start de reeks. LET OP: De methode bestaat uit drie fasen (zie figuur 1):injectie van het monster in de kolom gedurende de eerste twee minuten; gevolgd door elutiebuffer voor 8 min en kolomregeneratie met evenwichtsbuffer gedurende 10 min.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig01.jpg"> Figuur 1: Eiwit Een chromatogram, dat de verschillende fasen tijdens één keer weergeeft. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60577/60577fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>

<ol><li>Langer, E. S. 15th Annual report and survey of Biopharmaceutical Manufacturing Capacity and Production: A study of Biotherapeutical Developers and Contract Manufacturing Organizations. Bioplan Associates. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://bioplanassociates.com/wp-content/uploads/2018/07/15thAnnualBiomfgReport_TABLEOFCONTENTS-LR.pdf">http://bioplanassociates.com/wp-content/uploads/2018/07/15thAnnualBiomfgReport_TABLEOFCONTENTS-LR.pdf</a> (2019).</li>
<li>Walsh, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biopharmaceutical+benchmarks+2018%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Biopharmaceutical benchmarks 2018.</a> Nature Biotechnology. 36, 1136(2018).</li>
<li>Kim, J. Y., Kim, Y., Lee, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHO+cells+in+biotechnology+for+production+of+recombinant+proteins%3A+current+state+and+further+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">CHO cells in biotechnology for production of recombinant proteins: current state and further potential.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 93 (3), 917-930 (2012).</li>
<li>Lai, T., Yang, Y., Ng, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Mammalian+cell+line+development+technologies+for+recombinant+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceuticals+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advances in Mammalian cell line development technologies for recombinant protein production.</a> Pharmaceuticals (Basel). 6 (5), 579-603 (2013).</li>
<li>Carlage, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+dynamic+changes+in+the+proteome+of+a+Bcl-XL+overexpressing+Chinese+hamster+ovary+cell+culture+during+exponential+and+stationary+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">Analysis of dynamic changes in the proteome of a Bcl-XL overexpressing Chinese hamster ovary cell culture during exponential and stationary phases.</a> Biotechnology Progress. 28 (3), 814-823 (2012).</li>
<li>Hacker, D. L., de Jesus, M., Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((25+years+of+recombinant+proteins+from+reactor-grown+cells+-+where+do+we+go+from+here%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Advances%22%5BJournal%5D)">25 years of recombinant proteins from reactor-grown cells - where do we go from here.</a> Biotechnology Advances. 27 (6), 1023-1027 (2009).</li>
<li>Shukla, A. A., Gottschalk, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-use+disposable+technologies+for+biopharmaceutical+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Single-use disposable technologies for biopharmaceutical manufacturing.</a> Trends in Biotechnology. 31 (3), 147-154 (2013).</li>
<li>Ao, S., Gelman, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAo%2C+S+%22Advances+in+electrical+engineering+and+computational+science.+Lecture+notes+in+electrical+engineering%22">Advances in electrical engineering and computational science. Lecture notes in electrical engineering</a>. 39, Springer. New York. (2009).</li>
<li>Bareither, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+disposable+small+scale+reactor+for+high+throughput+bioprocess+development%3A+a+proof+of+concept+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Automated disposable small scale reactor for high throughput bioprocess development: a proof of concept study.</a> Biotechnology and Bioengineering. 110 (12), 3126-3138 (2013).</li>
<li>Kang, Y., Ludwig, D. L., Balderes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+cell+culture+flocculation+offer+for+antibody+purification+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutical+Bioprocessing%22%5BJournal%5D)">What can cell culture flocculation offer for antibody purification processes.</a> Pharmaceutical Bioprocessing. 2 (6), 483-485 (2014).</li>
<li>Choe, W., Durgannavar, T. A., Chung, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fc-Binding+Ligands+of+Immunoglobulin+G%3A+An+Overview+of+High+Affinity+Proteins+and+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Materials+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Fc-Binding Ligands of Immunoglobulin G: An Overview of High Affinity Proteins and Peptides.</a> Materials (Basel). 9 (12), (2016).</li>
<li>Schäpper, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbioreactors+in+fermentation+process+development%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Application of microbioreactors in fermentation process development: a review.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 395 (3), 679-695 (2009).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbioreactors+for+Bioprocess+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Laboratory+Automation%22%5BJournal%5D)">Microbioreactors for Bioprocess Development.</a> Journal of the Association for Laboratory Automation. 12 (3), 143-151 (2007).</li>
<li>Claßen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectroscopic+sensors+for+in-line+bioprocess+monitoring+in+research+and+pharmaceutical+industrial+application%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Spectroscopic sensors for in-line bioprocess monitoring in research and pharmaceutical industrial application.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (3), 651-666 (2017).</li>
<li>Janoschek, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+transfer+a+fed-batch+platform+process+into+semi-perfusion+mode%3A+The+benefit+of+automated+small-scale+bioreactors+compared+to+shake+flasks+as+scale-down+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Progress%22%5BJournal%5D)">A protocol to transfer a fed-batch platform process into semi-perfusion mode: The benefit of automated small-scale bioreactors compared to shake flasks as scale-down model.</a> Biotechnology Progress. 35 (2), 2757(2019).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Optimalisatie van het proces om de opbrengst te verhogen is van cruciaal belang in de biofarmaceutische industrie. Schudkolven kunnen mogelijk worden gebruikt voor het screenen van de stam; De bewaking van de procesparameters zoals pH en DO zijn echter niet beschikbaar in de kolven. De microbioreactoren hebben een voordeel omdat ze continue monitoring en controle van het proces mogelijk maken. Deze controlelussen in de microbioreactor bieden ook een toestand die vergelijkbaar is met die op grotere schaal en leveren dus r...

De wereldwijde biofarmaceutische markt was in 2018 meer dan US $250 miljard waard en is voortdurend gegroeid1. Farmaceutische bedrijven gaan af van de productie van kleine moleculaire geneesmiddelen naar biotechnologisch geproduceerde therapieën zoals recombinante eiwitten. Deze alleen al zijn verantwoordelijk voor een omzet van meer dan $ 150 miljard1. Zoogdiercellen worden nu op grote schaal gebruikt voor de productie van deze farmaceutische recombinante eiwitten. In de huidige periode worden onder de 68 goedgekeurde producten die door zoogdiercellen worden geproduceerd, 57 geproduceerd door Chinese hamstereierstokcellen (CHO)2. CHO cellen worden specifiek gebruikt voor de productie van recombinante eiwitten die post-translationele wijzigingen vereisen. Deze cellen hebben de voorkeur omdat ze in een suspensie groeien en daardoor reproduceerbare resultaten mogelijk maken in een serumvrij chemisch gedefinieerd medium3,4. Het andere voordeel van het gebruik van CHO-cellen is dat de glycanstructuur van het product lijkt op die van het menselijke monoklonale antilichaam (mAb) en resulteert in een hogere recombinante eiwitopbrengst en specifieke productiviteit als gevolg van genversterking5.
De opbrengst van recombinant CHO (rCHO) celcultuur is de afgelopen twee decennia met honderd keer toegenomen. Deze verbetering wordt toegeschreven aan de optimalisatie van de procesparameters, voedingsstrategie en ontwikkeling van serumvrij chemisch gedefinieerd medium6. Met de toename van de eisen van de farmaceutische producten neemt de druk toe op kosten- en tijdefficiëntie voor de ontwikkeling van het productieproces7. Om de druk te verminderen en tegelijkertijd de productkwaliteit te waarborgen, heeft de focus van de farmaceutische industrie op Quality by Design (QbD) verschoven. QbD wordt gebruikt om de productproductie en het proces te begrijpen. Een essentieel hulpmiddel dat in obd wordt gebruikt is het Ontwerp van Experiment (DOE). Het helpt het begrip van het proces te vergroten door de relatie tussen verschillende invoervariabelen en resulterende uitvoergegevens te onthullen. Het toepassen van de DOE-aanpak om het bioproces te optimaliseren is nuttig in de vroege stadia van het project bij het assimileren van de procesomstandigheden en het verhogen van de titer kwantiteit en kwaliteit. Deze aanpak is gunstig in vergelijking met de ouderwetse strategie: one-factor-at-a-time (OFAT). De statistische benaderingen van DOE met behulp van Klassieke, Shainin of Taguchi zijn veel beter dan de OFAT8.
Het proces en de media optimalisatie kan worden uitgevoerd in shake kolven. De kolven zijn relatief goedkoop. Het is echter niet mogelijk om parameters zoals temperatuur, pH en opgeloste zuurstof (DO) te regelen. Om deze nadelen te overwinnen, kunnen multifunctionele bench-top bioreactoren, variërend van werkvolume van 0,5 L tot 5 L, worden gebruikt. De reactoren zorgen voor een uitgebreide on-line monitoring en procescontrole. Het gebruik van de multifunctionele bioreactor is echter tijd- en arbeidsintensief. Om deze nadelen te overwinnen, wordt een nieuwe bioreactor voor eenmalig gebruik gebruikt die het uitgebreide proces van het monitoren van de bench-top bioreactor en het eenvoudig hanteren van de schudkolf combineert. Het screeningsysteem met een hoge doorvoer en de technologie voor eenmalig gebruik hebben bijgedragen tot een verbetering van de efficiëntie van procesprestaties en -ontwikkeling9.
In dit artikel worden de richtlijnen voor het laden van het recept in de geautomatiseerde microbioreactor (AMBR) software vermeld. De invloed van verschillende roerdersnelheden en pH op de levensvatbare celconcentratie (VCC) en titer wordt in de loop van dit experiment bestudeerd. Het experimentele resultaat en de analyse worden uitgevoerd met ontwerp van experimentsoftware MODDE 12. De productanalyses worden uitgevoerd in een hplc-systeem (hoge druk vloeistofchromatografie) met een Protein A-kolom. Het is gebaseerd op het principe dat het Fc-gebied van de mAb bindt aan eiwit A met hoge affiniteit10,11. Met deze methode is het mogelijk om de mAb te identificeren en te kwantificeren. De kwantificering vindt plaats boven de gemeten elutiepiekgebieden met 280 nm.

<table><tbody><tr><td>1 mL wegwerp pipettentips, gesteriliseerd</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0040</td><td></td></tr><tr><td>200 mM L-glutamine</td><td>Corning, Merck</td><td>25-005-CV</td><td></td></tr><tr><td>24 Well deep well platen</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0038</td><td></td></tr><tr><td>5 mL wegwerp pipettentips, gesteriliseerd</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>A-0039</td><td></td></tr><tr><td>ambr 15 geautomatiseerd microbioreactorsysteem</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>001-2804</td><td></td></tr><tr><td>ambr 15 Cel Cultuur 24 Wegwerp Bioreactoren - Sparged</td><td>Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td>001-1B86</td><td></td></tr><tr><td>Antifoam C Emulsie</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>A8011</td><td></td></tr><tr><td>Sterile flesdop filter</td><td>Corning, Merck</td><td>CLS431474</td><td>0,1 μm poriegrootte</td></tr><tr><td>CEDEX Detergent (3% Mucosol)</td><td>Roche Innovatis AG</td><td>05-650-658-001</td><td></td></tr><tr><td>Celteller</td><td>Roche Innovatis AG</td><td>05-650-216-001</td><td>CEDEX HiRes</td></tr><tr><td>CHO DG44 cellijn</td><td>Cellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Feed Media A (FMA)</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80025</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Feed Media B (FMB)</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80026</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Productie Medium</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80027</td><td></td></tr><tr><td>CHOKO Stock Cultuur Medium</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>CR80028</td><td></td></tr><tr><td>Chromaster hogedruk vloeistof chromatografiesysteem</td><td>VWR International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Conische centrifugeerbuis</td><td>Corning, Merck</td><td>SIAL0790</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Merck</td><td>1070179026</td><td></td></tr><tr><td>Glycine</td><td>Carl Roth</td><td>56-40-6</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Vials</td><td>VWR International</td><td>SUPLSU860181</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Protein A Kolom</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1502226</td><td>POROS&trade; A 1,7 mL</td></tr><tr><td>Natriumchloride</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Natriumfosfaat dibasisch watervrij</td><td>Sigma-Aldrich, Merck</td><td>7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blauw</td><td>VWR International</td><td>VWRVK940</td><td></td></tr><tr><td>YSI</td><td>YSI Inc</td><td>2900D</td><td>YSI 2900 Select</td></tr></tbody></table>

proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de chinese hamster eierstok celteelt

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

Optimalisatie van bioprocessen om de opbrengst van gewenste producten te verhogen is van belang in de biofarmaceutische industrie. Dit kan worden bereikt door stamselectie en door bioprocesparameters te ontwikkelen. Hiervoor zijn schudkolven gebruikt. Ze missen echter de mogelijkheid om de procesparameters zoals pH en opgeloste zuurstof (DO) te controleren. Deze beperking kan worden overwonnen met behulp van een geautomatiseerde micro-bioreactor. Deze bioreactoren bootsen de teelt op grotere schaal na. Een van de grote voordelen van dit systeem is de integratie van het Design of Experiment (DOE) in de software. Deze integratie maakt het mogelijk om een ontwerp te maken waarbij meerdere procesparameters tegelijkertijd kunnen worden gevarieerd. De kritische procesparameters en optimale bioprocesomstandigheden kunnen binnen de software worden geanalyseerd. De focus van het werk hier gepresenteerd is om de gebruiker kennis te laten maken met de stappen die betrokken zijn bij procesontwerp in de software en integratie van de DOE binnen de teelt run.

Een overzicht van de teelt die in deze studie wordt uitgevoerd, wordt gepresenteerd in figuur 2.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60577/60577fig02.jpg"> Figuur 2: Schematische weergave van de experimentele omstandigheden om pH- en roerstaafsnelheidsprofielen in de cultuurstations te testen. De figuur vertegenwoordigt ook de juiste lay-out om de schepen te plaatsen. <a href="https://www....

Hier presenteren we een gedetailleerde procedure om een ontwerp van experiment uit te voeren in een geautomatiseerde micro-bioreactor gevolgd door celoogst en eiwitkwantificering met behulp van een Protein A-kolom.

Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

In deze video, de gebruikers geïntroduceerd in de micro bioreactor software met de planning en uitvoering van het ontwerp van experimenten of DOE. De analyzers hulpkleppen worden ook gedemonstreerd om de procesconditie te optimaliseren. De integratie van modet in de geautomatiseerde micro bioreactor software is officieel voor de data-analyse.Een groot aantal experimenten kan tegelijkertijd op kleine schaal worden gepland en uitgevoerd. Het aantonen van de procedure zal Tamanna Nagraik, een promovendus uit mijn laboratorium. Begin met de pre-cultuurprocedure in de hoofdteelt zoals beschreven in het tekstprotocol.Als u een nieuw experiment wilt maken, opent u de Amber-zelfcultuursoftware en klikt u in het tabblad introductie op nieuw experiment. Voer in het nieuwe experimenttabblad de naam van het experiment in, samen met de datum waarop het wordt uitgevoerd. Activeer de controlepost voor het kweekstation in de schepen die tijdens de teelt moeten worden gebruikt.De doe-tags automatisch worden ook geactiveerd voor een eenvoudige overgang tijdens de programmering van het DOE-experiment. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u informatie wilt instellen over het toevoegen van media in het vat, samen met antischuim, entmateriaal, feed en glucose, activeert u de controlepost voor media-toevoegen.Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op media toevoegen aan schepen. Voer het volume van de media in die in de vaten moeten worden toegevoegd.Definieer het in kaart brengen van mediaoverdracht van de plaat naar de schepen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Nadat de media-informatie in de software is ingevoerd, wijst u de teeltomstandigheden toe.Klik op conditie media, en vul de temperatuur, doel DO, bovenste PH limiet, en roeren RPM. Klik vervolgens op Op roeren"of naar beneden roeren. Als u de toevoeging van entmateriaal in de vaten wilt plaatsen, activeert u de celplaat toevoegen.Definieer het plaattype, de naam en de locatie van de plaat met het medium. Klik op cellen toevoegen aan bloedvaten. Voer het tijdstip van de inenting en het volume van de media toe te voegen aan de schepen.Definieer het pad dat de vloeistofafhandelaar bewandelt om de cel van de plaat naar de vaten over te brengen. Klik op volgende"om over te schakelen naar het volgende tabblad. Als u de toevoeging van voer, glucose en het antischuim wilt instellen, activeert u de invoerplaat toevoegen en definieert u het plaattype, de naam en de locatie.Klik op voer toevoegen aan vaartuigen en voer het volume van het voer in dat aan de vaten moet worden toegevoegd. Voeg afhankelijk van de teelt het aantal voertoevoelen toe. Voor deze teelt wordt de reactor na 72 uur elke 24 uur gevoed.Voeg handmatig de vertraging tussen de voeding door het invoeren van de gegevens in vertraging van cellen toegevoegd. De eerste dag van het voeden is na 72 uur inenting, de volgende is na 96 uur, enzovoort. Definieer het in kaart brengen van de overdracht van het voer van de plaat naar de vaten.Als u de bemonstering tijdens de teelt wilt instellen, activeert u de add sample plate"en definieert u het plaattype, de naam en de locatie. Controleer het monster van de vaartuigen"en voer het volume van het monster in dat uit de vaten moet worden verwijderd. Zorg ervoor dat het volume niet daalt tot onder de 10 mililiters tijdens het gehele verloop van de teelt.Voeg het aantal monsters toe dat tijdens de teelt moet worden genomen. Voeg, net als bij het voederen, de tijd toe waarop het monster uit het vaartuig wordt verwijderd voor elk invoermonsterpunt. Sla het proces op.Het is nu klaar voor executie. Tot slot, definieer het in kaart brengen van de overdracht van het monster van de vaten naar de plaat. Open de Amber 15 DOE Software.Klik op onderzoek"en selecteer nieuw. Voer de naam van het nieuwe DOE-onderzoek in het kader van de dialoog voor onderzoek in. Om een experiment toe te wijzen aan het DOE-onderzoek, opent u het recept dat is gemaakt om de verschillende parameters te bestuderen.Klik op bladeren en selecteer het betreffende experiment. De vaartuigtags zijn al in de kolom opgenomen. Als u de gewenste DOE-factor wilt definiëren, selecteert u de parameter en klikt u op de kolom met het label DOE-factor.Selecteer nieuwe"en voeg de eenheden, afkorting, evenals de onderste en bovengrens van de factoren. Definieer op het tabblad Antwoorden de waarden die in aanmerking moeten worden genomen voor de analyse van de gegevens. Klik op DOE-antwoorden bewerken en definieer de naam van het antwoord, de afkorting, eenheden en minimum- en maximumlimieten.Zodra de antwoorden zijn gedefinieerd, selecteert u de oranje variabele voor elke reactie en definieert u. Een reactie kan automatisch worden gekoppeld aan een microbe bioreactor variabele. Kies de vereiste variabele in de vervolgkeuzelijst.Wijzig de vergelijking voor elke reactie, afhankelijk van de vereiste. De keuzes tussen de minimale, maximale, eerste, laatste en gemiddelde gegevens. Als u een ontwerp wilt maken, gebruikt u de wizard Ontwerp starten om het type experimenteel ontwerp te selecteren en het aantal replica's en middelpunten toe te voegen of te verwijderen.Selecteer de doelstelling, die de keuze van ontwerpen en modellen bepaalt. Werkpakketten voltooien en maken die kunnen worden geïmporteerd in de Amber-zelfcultuursoftware zoals beschreven in het tekstprotocol. Klik op het tabblad experiment op doe-experiment maken en blader naar het werkpakket dat is gemaakt met de DOE-software.Initialiseer het proces door op Start te klikken. Zodra het experiment is uitgevoerd, exporteert u de gegevens met behulp van doe-resultaten exporteren. Het venster export doe-resultaten wordt geopend en de rijen met vermelding van het kweekschip en het station worden in de tabel vermeld.Selecteer de gewenste rijen en klik op geselecteerde rijen exporteren of exporteer experimentele gegevens om alle resultaten op te slaan en het bestand op te slaan voor verdere analyse. Importeer de gegevens in de Amber DOE-module door over te schakelen naar het tabblad resultaten en importresultaten te selecteren. Blader naar het gewenste gegevensbestand en klik op resultaten analyseren.De celgroei in de geautomatiseerde microbe bioreactoren is vergelijkbaar met de multiuse bioreactoren. Bij het vergelijken van de celconcentratie van drie verschillende schalen, wordt opgemerkt dat de 15 milliliter geautomatiseerde microbe bioreactor bootst de twee liter glas bioreactor. De resultaten van de schudkolf worden ook vergeleken om het voordeel van Amber tentoon te stellen.De invloed van verschillende roersnelheid en PH wordt bestudeerd in de geautomatiseerde microbe bioreactoren. Hier is een vergelijking van de levensvatbare celconcentratie, of VCC, en monoklonale antilichaamconcentratie in de verschillende microbe bioreactoren. De negatieve invloed van PH 6.9 op de VCC kan worden waargenomen.Bovendien verbeterde de groei van de cellen aanzienlijk onder de cultuur bij PH 7.3 in vergelijking met PH 7.1. Hier zijn de respons contour percelen van VCC en monoklonale antilichaam concentratie. De waarden zijn vergelijkbaar in de vaten met dezelfde PH- en verschillende roersnelheid, wat aangeeft dat de voor dit proces verzamelde roerrsnelheid geen significante invloed heeft op de procesoutput.Elke instructie die aan de machine wordt gegeven, moet zorgvuldig worden geschreven om fouten tijdens de uitvoering van het experiment te voorkomen. De software is flexibel en kan een aantal experimenten tegelijk uitvoeren, waardoor de tijd die nodig is om een proces te optimaliseren, wordt verminderd. Het ontwerp van experiment is nuttig op het gebied van bioproces, omdat de resultaten kennisgebaseerd procesbegrip geven, dat tot op zekere hoogte kan worden uitgebreid tot andere organismen.

process-optimization-using-high-throughput-automated-micro

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Ontwikkeling van op maat assays op de ViBE platform voor meer gevoelige, reproduceerbare, geautomatiseerd resulteert in complexe matrices beschreven. De universele patroon laat testen eenvoudig worden aangepast voor gebruik met aangepaste assays. Deze veelzijdigheid maakt snelle ontwikkeling en validatie van nieuwe testen of geautomatiseerde versies van bestaande manuele testen, geïllustreerd in deze video.

Het ontwikkelen van aangepaste Chinese hamster ovarium-host Cell Protein Testen met behulp van akoestisch vlies micropartikel Technology

Een high-throughput, geautomatiseerd platform van de productie cellijn ontwikkeling voor de productie van therapeutische eiwitten is beschreven. Uitvoering van de BD FACS Aria Cell Sorter, heeft CloneSelect Imager en Tecan Freedom EVO liquid handling systeem gedemonstreerd aanzienlijk toegenomen verwerkingscapaciteit in cellijn ontwikkeling met verbeterde cellijn kwaliteit en een hoge reproduceerbaarheid.

Een High-throughput geautomatiseerd platform voor de ontwikkeling van Manufacturing Cell Protein Therapeutics Lines voor

Source: Hemmerich, J., et al. Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates the use of an automated microbioreactor to monitor bacterial growth and fluorescent protein secretion in response to varying media formulations. A genetically modified bacterium expressing a secretory fluorescent protein is cultured under antibiotic selection and inoculated into nutrient-varied wells. Real-time optical...

Monitoring Bacterial Growth in Distinct Media Formulations with an Automated Microbioreactor

This video demonstrates an assay for purifying monoclonal antibodies from cell culture fluid harvested from Chinese Hamster Ovarian cells. It employs a porous glass resin with immobilized protein A, which binds to the Fc region of the antibodies in the sample, effectively separating them from contaminants. The use of a low-pH elution buffer weakens the interaction, facilitating the retrieval of purified antibodies.

A Technique to Purify Monoclonal Antibodies Produced by Chinese Hamster Ovary Cells

Met behulp van een pneumatische bioreactor demonstreren we de assemblage, werking en prestaties van dit bioreactorsysteem voor eenmalig gebruik voor de groei van zoogdiercellen.

Teelt van zoogdiercellen met behulp van een Single-use Pneumatische bioreactorsysteem

Dit manuscript beschrijft een algemene aanpak voor op maat gemaakte ontwerp van microbiële teelt media. Deze optie is ingeschakeld door een iteratieve werkstroom combineren Kriging gebaseerde experimentele design en microbioreactor technologie voor voldoende teelt doorvoer, die wordt ondersteund door lab robotica om betrouwbaarheid en snelheid in vloeistof behandeling van media voorbereiding.

Generic-Protocol voor optimalisatie van heterologe eiwitproductie met behulp van geautomatiseerde Microbioreactor technologie

Een gedetailleerd protocol voor de gelijktijdige werking van 48 parallelle celculturen onder uiteenlopende omstandigheden in een systeem van microbioreactor wordt gepresenteerd. Proces van de cultuur van de cel, oogst en latere antilichaam titer analyse worden beschreven.

Gebruik van High-Throughput geautomatiseerd Microbioreactor-systeem voor de productie van Model IgG1 in CHO cellen

Een gedetailleerd protocol voor de zuivering en daaropvolgende analyse van een monoklonaal antilichaam uit geoogste celkweek vloeistof (HCCF) van geautomatiseerde microbioreactoren is beschreven. Het gebruik van analyses om kritische kwaliteitskenmerken (CQAs) te bepalen en beperkt sample volume te maximaliseren om vitale informatie te extraheren wordt ook gepresenteerd.

Zuivering en analyse van een monoklonaal antilichaam van Chinese Hamster Ovariumcellen met behulp van een geautomatiseerd Microbioreactor systeem

Het glycosyleringspatroon van een antilichaam bepaalt de klinische prestaties, dus industriële en academische inspanningen om glycosylatie te beheersen blijven bestaan. Omdat typische glyco-engineeringcampagnes tijd- en arbeidsintensief zijn, zou het genereren van een snel protocol om de impact van glycosyleringsgenen te karakteriseren met behulp van transiënte uitschakeling nuttig zijn.

Snelle antilichaamglycosengineering in ovariumcellen van Chinese hamsters

Hier presenteren we een protocol om de grootschalige productie van aanhangende cellen te bereiken via een volledig gesloten systeem op basis van GMP-kwaliteit oplosbare microdragers. De kweek van menselijke mesenchymale stamcellen, HEK293T cellen en Vero-cellen werd gevalideerd en voldeed aan zowel de kwantiteitseisen als de kwaliteitscriteria voor de cel- en gentherapie-industrie.

Grootschalige celproductie op basis van GMP-kwaliteit oplosbare poreuze microdragers

Dit protocol beschrijft hoe het Single-cell Microliter-droplet Culture Omics System (MISS-cel) kan worden gebruikt om microbiële monoklonale isolatie, teelt en pluk uit te voeren. De MISS-cel bereikt een geïntegreerde workflow op basis van microfluïdische druppeltechnologie, die een uitstekende monodispersie van druppels, hoge parallelle teelt en detectie van biomassa met hoge doorvoer biedt.

Geautomatiseerde en high-throughput microbiële monoklonale teelt en plukken met behulp van het eencellige Microliter-druppel Culture Omics-systeem

Leer procesoptimalisatie met geautomatiseerde micro-bioreactoren voor high-throughput celteelt. Deze methode toont DOE-planning, celoogst en eiwitkwantificering met Protein A kolommen voor efficiënte bioprocesontwikkeling.

Proces optimalisatie met behulp van high throughput geautomatiseerde micro-bioreactoren in de Chinese Hamster Eierstok celteelt

Meer video's verkennen