Verminderde complicaties na arteriële heraansluiting in een ratmodel van orthotopische levertransplantatie

Rat orthotopische levertransplantatie model is een krachtig instrument voor het bestuderen van meerdere aspecten van levertransplantatie. Van een immuunrespons op de infectie, tot technische aspecten van de procedure. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het complicaties kan verminderen, beter vertegenwoordigen comely levertransplantatie, en verbetering van de overleving van de ontvanger.

Dit gemodificeerde ratten orthotopische levertransplantatie protocol bootst aspecten van menselijke levertransplantatie nauw na en zal dienen als variabel en klinisch relevant onderzoeksmodel. Het is onze hoop dat door de visuele demonstratie, kijkers kunnen leren alle details en verkorten van de leercurve voor het beheersen van de microchirurgie vaardigheid die nodig is voor deze techniek. Na het injecteren van 300 internationale eenheden van heparine natrium in de intrahepatische inferieure vena cava van een verdoofde 12 tot 14 weken oude rat, maak een vijf millimeter incisie onder de galwegen bifurcatie, en steek de galwegen stent in de gemeenschappelijke galwegen.

Zet de stent vast met een 7-0 zijden ligatuur, een millimeter boven de incisie en één ligatuur 10 millimeter onder de splitsing. Snijd de galbuis tussen de twee banden en bloot de juiste leverslagader. Verdeel de gastroduodenale slagader over twee 7-0 zijden ligaturen en stel de linker maagslagader, miltslagader en coeliakie romp bloot.

Snijd vervolgens de linker maagslagader, miltslagader en coeliakie romp tussen de slagaderbanden. Gebruik een spuit van 20 milliliter uitgerust met een naald van 21,5 meter om langzaam 20 milliliter van vier graden Celsius Ringer lactaatoplossing in de poortader te injecteren. Om de donorlever voor te bereiden, opengesneden de splitsing van de spleliatam, miltslagader en linker maagslagader om een grotere arteriële mouw manchet te vormen en steek de 1,5 millimeter lengte 24 meter slagader stent in de donor gemeenschappelijke leverslagader via de manchet.

Zet de stent vervolgens vast met een 8-0 polypropyleen ligatuur en spoel de stent door met Ringer's lactaatoplossing. Na het blootstellen van de poortader van een 12 tot 14 weken oude rat ontvanger, verdeel de ontvanger galkanaal op 0,5 centimeter onder een tegelzetter bifurcatie, en steek een galkanaal stent in de distale galkanaal. Bloot de linker, midden en rechter leverslagaders en bind de vaten distaal aan de leverslagader bifurcatie.

Snijd de slagaders dicht bij de lever boven de banden en plaats een lang dun stukje gaas achter de super leverinferische vena cava. Plaats een 3D-geprinte intrahepatische vena cava houder achter de intrahepatische vena cava en gebruik een Tenno niet-absorberende monofilament hechting om de uiteinden van de 3D geprinte handgreep aan elkaar te naaien. Bind losjes een 7-0 zijden ligatuur onder zowel de 3D-geprinte houder tussen de intrahepatische vena cava en de poortader, en klem de intrahepatische vena cava net boven de juiste nierader onder de 3D-geprinte cava houder.

Klem de poortader net boven de pylorische ader en onder de 3D-geprinte PV-houder. Met behulp van een drie milliliter spuit met een 27-meter naald bevestigd, spoel twee milliliter van 37 graden Celsius Ringer lactaat oplossing via de bifurcatie van de poort ader, en klem de super hepatische vena cava boven de lever met een Kitzmiller klem. Snijd vervolgens onder de klem zo dicht mogelijk bij de lever en snijd boven de 3D-geprinte houders voor zowel de poortader als de interpatic vena cava om de lever van de ontvanger te verwijderen.

Voor donorlevertransplantatie, zorgvuldig oriënteren van de donorlever in de lichaamsholte van de ontvanger op een zodanige wijze dat een bovenste kasseienanose kan worden gemaakt. Plaats de portaalader manchet van de donor in de geadresseerde portaalader en draai de 7-0 zijden das aan. Verwijder de atraumatische klem uit de super hepatische vena cava en verwijder de microvasculaire clip voor de poortader.

Na het opnieuw doordringen van de lever met warm bloed, steek de donor intrahepatische vena cava manchet in de ontvanger intrahepatische vena cava en zet het vat met de 7-0 zijden das. Verwijder vervolgens de donor intrahepatische vena cava clip voordat u de ontvanger clip. Voor het uitvoeren van een arteriële anastomose, afgesneden het gedeelte van de coeliakie stam van de donor die zich uitstrekt buiten de stent, en klem de juiste leverslagader van de ontvanger.

Snijd de das aan het einde en eventuele extra weefsel rond het vat. En gebruik Ringer's lactaatoplossing om de lumen van zowel de donor- als de ontvanger van het vaartuig te spoelen. Met behulp van een gebogen naald, plaats een 10-0 ethilon hechting door het linkeraspect van de donor leverslagader, 2,5 millimeter boven de distale opening van de stent, en uit door het einde van de stent.

Transfix de ontvanger juiste leverslagader 0,5 millimeter onder de scheepsopening van de linkerkant van het vat, aan de rechterkant van de slagader. Plaats de volgende hechting door de rechterwand van de donor leverslagader van binnen naar buiten, op een afstand van de stent opening identiek aan de oorspronkelijke steek, en trek op de twee uiteinden van de 10-0 niet-bevattende monofilament aan de ontvanger juiste leverslagader slip omhoog, en in de leverslagader stent. Bind dan de 10-0 niet-onabsorbare monofilament met zichzelf over de donor leverslagader.

Spoel zowel de ontvanger als de donorgalwegen door en steek de donorgalenstent in het galkanaal van de ontvanger. Draai vervolgens de das die eerder werd geplaatst rond de ontvanger galkanaal. In dit representatieve experiment, de niet leverslagader anastomose rat orthopedische levertransplantatie model aangetoond 50 en 37,5%overlevingskansen, op 21 dagen en 60 dagen, na de operatie respectievelijk.

Daarentegen verhoogde de geoptimaliseerde hepatische slagaderherkoppelingsprocedure de overleving op lange termijn aanzienlijk. Histologische analyse van een representatieve subgroep van getransplanteerde dieren zonder hepatische slagader heraansluiting bleek tekenen van hypoxische leverletsel met centrale lobaire necrose, op dag zes en dertien na de transplantatie. Uitgebreide levernecrose werd geassocieerd met enorm verhoogde niveaus van alanine immuno-overdrachten en aspartaat aminotransferase bij deze dieren.

In tegenstelling, getransplanteerde ratten met leverslagader heraansluiting vertoonde geen tekenen van leverletsel en histologische analyse bleek een normale lever parenchyma structuur, met georganiseerde acini, lobules, slagaders en galwegen. Bovendien, histologische analyse van de levers van niet-leverslagader reconnectie model ratten bleek reactieve veranderingen na hypoxische leverletsel. Inclusief de markt galkanaal proliferatie, peri portal fibrose en ontsteking, en vervormde lever parenchyma.

Dit protocol kan worden aangepast om vele immunologische en chirurgische aspecten van levertransplantatie te bestuderen en kan dienen als een model voor het testen van nieuwe therapeutische interventies die relevant zijn voor transplantatie.