8 mei 2020
Hier gepresenteerd is een protocol om depressie-achtig en anhedonisch gedrag bij ratten te bestuderen. Het combineert twee gevestigde gedragsmethoden, de sacharose voorkeur en nieuwheid-geïnduceerde hypofagie tests, met een geautomatiseerd voedsel en vloeibare inname monitoring systeem, om indirect te onderzoeken knaagdier gedrag met behulp van surrogaat parameters.
De Sucrose Preference en Novelty-Induced Hypophagia Tests zijn gevestigde technieken voor de evaluatie van anhedonia. Hun combinatie met het geautomatiseerde intake monitoring systeem, maakt een gedetailleerde analyse met hoge nauwkeurigheid mogelijk. Dit protocol vermindert de incidentie van fouten, door het integreren van morsen in de data-analyse voorkomen van harding, en het verminderen van onbedoelde vochtverlies.
Daarnaast maakt het protocol het mogelijk om de innamemicrostructuur te beoordelen. Deze techniek is bedoeld om te voldoen aan de behoefte aan geldige tests, het detecteren van anhedonia bij knaagdieren. Gezien de toenemende prevalentie van depressieve stoornissen.
Het kan ook worden gebruikt om antidepressieve effecten van drugs te bestuderen. Bij het gebruik van het Automated Intake Monitoring System is het belangrijk om te onthouden dat het dagelijks goed moet worden onderhouden en gereinigd om nauwkeurige gegevens te kunnen verstrekken. Om de training uit te voeren, sluit u alle poorten en verwijdert u de voedselcontainer en de waterfles uit de microbalansen.
Plaats voorbeende voeding op de kooi en documenteer het gewicht dagelijks. Vul een schone waterfles met ongeveer 100 milliliter water en plaats het terug op de hopper. Vul een tweede fles met 100 milliliter vers gemaakte 1%sucrose oplossing, en plaats het op de hopper.
Zorg ervoor dat u de flessen markeert en hun locaties documenteert. Documenteer de start van de training in het bewakingssysteem en open alle poorten. Laat de poorten open voor 24 uur, wat resulteert in ad libido maxes aan beide flessen.
Documenteer dan het einde van de training en sluit de poorten. Bereid dagelijks verse sacharoseoplossing en zorg ervoor dat flessen elke 24 uur worden gereinigd en bijgevuld. Het schakelen van de positie van de flessen om gewenning te voorkomen.
Voer de training minstens 48 uur uit. Alleen doorgaan met het testen, Wanneer de sucrose preferentieratio's ongeveer één bereiken. Verwijder 24 uur voor de test de fles met de sacharoseoplossing, zodat de rat alleen toegang heeft tot standaard chow en water.
Bereid voorafgaand aan het testen een verse fles gevuld met kraanwater en een andere gevuld met 1%sucrose. Sluit alle poorten. Haal de voedselcontainer uit de hopper en vervang deze door de bereide flessen water en sacharose.
Documenteer vervolgens de start van de test in het bewakingssysteem en open alle poorten. Laat de poorten 60 minuten open. Documenteer vervolgens het einde van de test en sluit ze.
Om voor te bereiden op de trainingsperiode, sluit alle poorten, en verwijder de hopper met de standaard chow. Vul een verse hopper met een smakelijke snack, het invoegen van de crackers zorgvuldig om afbrokkeling te voorkomen. Plaats vervolgens de hopper op de kooi mount op de top van de microbalans.
Documenteer het begin van de training in het bewakingssysteem en open de poorten gedurende 30 minuten, zodat de rat ad libitum maxes aan de snack en het water heeft. Na 30 minuten, documenteer het einde van de training en sluit de poorten. Vervang vervolgens de snack door standaard chow.
Herhaal de training dagelijks totdat een stabiele basislijn van smakelijke snackinname is bereikt en statistisch gezien niet verschilt tussen trainingsdagen. Wanneer u klaar bent om de test uit te voeren, bereidt u een lege vers gereinigde kooi zonder beddengoed of verrijking en bevestig deze aan het geautomatiseerde systeem voor het bewaken van de voedselinname. Plaats een hopper met een fles kraanwater en een hopper met een smakelijke snack op de kooisteunen.
Haal de rat uit de kooi en plaats deze in de nieuwe kooi. Open de poorten voor 30 minuten. Zorg ervoor dat u het begin en einde van het testen documenteert.
Wanneer u klaar bent, plaats de rat terug in zijn huis kooi. Een Sucrose Voorkeurstest toegediend aan acht ratten, toonde een toename van het verbruik van sacharose en een afname van de waterinname tijdens de testperiode. De Sucrose Preference Ratio steeg van gemiddeld 0,8 op de eerste dag naar 0,99 op de tweede dag.
De sucrose-innamemicrostructuur werd automatisch beoordeeld met behulp van het bewakingssysteem. Maaltijdgrootte, maaltijdduur, aantal maaltijden en negen andere parameters werden automatisch gemeten. Om de voordelen van het gebruik van het Automated Intake Monitoring System aan te tonen, werden geautomatiseerde metingen vergeleken met die welke werden verkregen, met behulp van conventionele handmatige beoordelingen.
Alle metingen waren verschillend tussen groepen. Mogelijk als gevolg van ten onrechte hoge meting of morsen wanneer handmatig beoordeeld. Tijdens de trainingsperiode voor de Nieuwigheid-Geïnduceerde Hypophagia Test nam de totale inname van de smakelijke snacks gestaag toe, wat wijst op een aanpassing gedurende de eerste twee tot drie dagen.
Evenzo neigde de maaltijdgrootte naar een toename tussen trainingsdagen, terwijl de maaltijdduur dat niet deed. Op de testdag, naïeve ratten blootgesteld aan de snack en een nieuwe omgeving, toonde een smakelijke snack inname van ongeveer een gram. Andere parameters van de microstructuur van de voedselinname, zoals maaltijdduur, tijd die in maaltijd, en latency aan eerste bout wordt doorgebracht, werden ook automatisch beoordeeld.
Documenteer bij het uitvoeren van dit protocol alle procedures, in een gemeenschappelijk gedeelte van de bewakingssoftware, om de tijd van het begin en het einde van elke sessie te besparen. Documenteer altijd welke stof op welk saldo wordt geplaatst. Aangezien deze methode niet is gekoppeld aan stress, kan de taak worden herhaald na een geschikt tijdstip van training tussen het testen door.
Na het vaststellen van deze techniek werd het gebruikt om anhedonic kenmerken, van verschillende Neuropeptiden en ongestoorde dieren te verkennen, het uitbreiden van de kennis van hun functies.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Dit protocol presenteert een methode om depressie-achtig en anhedonisch gedrag bij ratten te bestuderen door de sucrosepreferentie- en de door nieuwigheid geïnduceerde hypofagietests te combineren met een geautomatiseerd monitoringsysteem. Deze benadering maakt een gedetailleerde en nauwkeurige analyse van het gedrag van knaagdieren mogelijk.
Geautomatiseerde testen voor sucrosepreferentie en door nieuwigheid geïnduceerde hypofagie bij ratten bieden een gedetailleerde gedragsmatige fenotypering van anhedonie, een kernsymptoom dat relevant is voor de ontdekking van neuropsychiatrische geneesmiddelen. De integratie van geautomatiseerde monitoring van de inname vermindert meetfouten en maakt kwantitatieve, reproduceerbare eindpunten mogelijk voor vroege target-validatie en mechanistische risicoreductie. Deze mogelijkheden ondersteunen het voorspellende vertrouwen in preklinische modellen, wat bijdraagt aan de triage van portfolio's en de translationele continuïteit van therapeutica voor het centrale zenuwstelsel.
Dit geautomatiseerde platform voor gedragsfenotypering past binnen het continuüm van vroege ontdekking tot preklinische validatie voor de ontwikkeling van geneesmiddelen voor het centrale zenuwstelsel (CZS).