Name: Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: Leer de geoptimaliseerde cuff-techniek voor heterotopische harttransplantatie bij muizen met behulp van een innovatieve binnenbuismethode. Deze aanpak verkort de operatietijd aanzienlijk door samenwerking tussen ervaren chirurgen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Fujian Provincial Health Education Joint Research Project (WKJ2016-2-20), de National Natural Science Foundation of China (81771271 en 81800664), het National Key R&D Program of China (2018YFA0108304) en het Project Onderwijs en Wetenschappelijk Onderzoek voor jonge en middelbare docenten in de provincie Fujian (JAT170714), Natural Science Foundation van de provincie Hunan (2019JJ50842) en Huxiang Young Talents van de provincie Hunan (2019RS2013).

Dieren (BALB/c, C57BL/6, man, 8-12 weken) zijn ondergebracht in een specifieke ziekteverwekkervrije faciliteit in het Xiamen University Laboratory Animal Center. C57BL/6 wordt gebruikt als ontvanger en BALB/c wordt gebruikt als donor. Alle procedures worden uitgevoerd volgens de richtlijnen van het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
OPMERKING: Voor de bewerking is een reeks microchirurgische instrumenten nodig, waaronder een microschaar, micro straight tang,Table and Materialsmicrogebogen Figure 1tangen en micronaaldhouders. Er is één paar bulldogklemmen voor eenmalig gebruik nodig(figuur 1F). Twee manchetten voor de externe halsader en halsslagader worden bereid door het snijden van de aangepaste polyamide buizen met een no. 10 scalpel onder een microscoop. De diameter van de ader en de slagader manchet is respectievelijk 0,9 mm en 0,55 mm. Bovendien is de diameter van de binnenband voor de overeenkomstige ader manchet 0,6 mm, en deze van de binnenband voor de overeenkomstige slagader manchet is 0,28 mm (Figuur 1G).
1. Voorbereiding van de ontvanger
<ol><li>Verdoes de ontvangermuis met pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Gebruik atraumatische mechanische tondeuses om het haar te verwijderen in het rechter zijwaartse cervicale gebied.</li>
	<li>Gebruik een steriele katoenen tip applicator om het chirurgische gebied af te vegen met jodium antiseptisch gevolgd door 70% ethanol.</li>
	<li>Plaats de muis in de supinepositie op het bedieningsplatform. Bedek de muis met steriel gaas.</li>
	<li>Gebruik een oogheelkundige schaar om een dwarse incisie te maken van de onderste een derde nek middellijn naar het rechter schouder-sleutelbeen gewricht.</li>
	<li>Isoleer de juiste externe halsader met micro gebogen tangen om voldoende lengte bloot te leggen, de takken af te snijden via elektrocoagulatie en het vat aan het distale uiteinde te kruisen met behulp van een 6-0 zijden hechting.</li>
	<li>Klem de externe halsader proximally met behulp van een bulldog klem en vervolgens transect de ader proximally aan de ligatuur met behulp van een micro schaar.</li>
	<li>Was het vat lumen met 100 U/mL 0-4 °C gehepariniseerde zoutoplossing om eventueel restbloed te verwijderen.</li>
	<li>Trek de externe halsader door de ader manchet met behulp van micro rechte tangen; steek de ader binnenband in het lumen als een stent, en evert het vat muur over de manchet met micro rechte tangen (Figuur 2A).</li>
	<li>Bevestig het everted schip endotheel aan het proximale uiteinde van de manchet met behulp van een omtrek 8-0 zijden hechting (figuur 2B).</li>
	<li>Gebruik micro rechte tangen om de binnenband van de ader uit het adervat te halen.</li>
	<li>Voer stompe dissectie uit met microgebogen tangen om de rechter halsslagader naast de binnenrand van de sternocleidomastoïde te isoleren.</li>
	<li>Klem de rechter halsslagader proximally met behulp van een bulldog klem, ligate de halsslagader distaal met behulp van een 6-0 zijden hechting, en gebruik een micro schaar om de halsslagader proximaal transect aan de ligatuur.</li>
	<li>Was de halsslagader met 100 U/mL 0-4 °C gehepariniseerde zoutoplossing om eventueel restbloed te verwijderen.</li>
	<li>Geef de halsslagader door de slagader manchet en steek de binnenband van de slagader in het slagadervat met behulp van micro rechte tangen(figuur 2C).</li>
	<li>Evert het vat over de manchet met behulp van micro rechte tangen; vast te stellen het everted schip endotheel met behulp van een omtrek 8-0 zijden hechting (Figuur 2D).</li>
	<li>Haal de binnenband van de slagader met micro rechte tangen uit het slagadervat. OPMERKING: Bewaar de submandibulaire klier van de ontvanger.</li>
</ol>2. Voorbereiding van de donor
<ol><li>Verdoven de donormuis met pentobarbital (60 mg/kg, i.p). Gebruik atraumatische mechanische tondeuses om het haar in de buikstreek te verwijderen.</li>
	<li>Plaats de muis in de supinepositie op het bedieningsplatform. Bedek de muis met steriel gaas.</li>
	<li>Gebruik een steriele katoenen tip applicator om het chirurgische gebied af te vegen met jodium antiseptisch gevolgd door 70% ethanol.</li>
	<li>Maak een abdominale middellijn incisie met een oogheelkundige schaar en bloot de buikholte.</li>
	<li>Gebruik micro gebogen tangen om de inferieure vena cava bloot te stellen, en vervolgens intraveneus injecteren 200 μL van 100 U / mL 0-4 ° C heparinized zout lijn per 20 g lichaamsgewicht door de inferieure vena cava.</li>
	<li>Voer thoracotomie uit met oogheelkundige schaar, snijd de ribben door de bilaterale midaxillaire lijn insnijdingen, draai de voorste borstwand naar buiten om de borstholte bloot te leggen.</li>
	<li>Accijns de thymus met micro gebogen tangen.</li>
	<li>Stel de aorta bloot en doorsneed vervolgens 200 μL van 100 U/mL 0-4 °C en vervolgens zout aan de kransslagader door de aortaboog. OPMERKING: Voorkom dat er gasbellen in het donorhart worden doorzeefd.</li>
	<li>Gebruik een microschaar om de opgaande aorta aan het begin van de aortaboog te transecteren.</li>
	<li>Transect de longslagader aan het begin van de twee belangrijkste takken met een micro schaar.</li>
	<li>Ligate de superieure vena cava en inferieure vena cava proximally met behulp van een 6-0 zijden hechting en gebruik een micro schaar om ader distally transect aan de ligatuur.</li>
	<li>Ligate de longaders aan elkaar, omtrek, met behulp van een enkele 6-0 zijden hechting, en afgesneden van de ader takken distally aan de ligatuur met behulp van een micro schaar.</li>
	<li>Verwijder het harttransplantatie uit de omliggende zachte weefsels; bewaren in 0-4 °C heparinized zoutoplossing.</li>
</ol>3. Hartimplantatie
<ol><li>Plaats het donorhart ondersteboven in het rechter nekgebied van de ontvanger.</li>
	<li>Voer de longslagader van het donorhart in tot een 6-0 zijden lus met micro rechte tangen.</li>
	<li>Wikkel het vat lumen rond de ader manchet, en draai vervolgens de 6-0 zijden hechting lussen rond de manchet om het vat gezamenlijke band.</li>
	<li>Voer anastomose uit van de aorta van het transplantaat en de slagaderboechet door de in stap 3.2 beschreven stappen te volgen.</li>
	<li>Laat de geklemde halsader los, gevolgd door de geklemde halsslagader. Houd het vat gewricht ontmoedigd en zorg ervoor dat de bloedstroom vrij is. LET OP: Het sinusritme dat binnen 1 min terugkeert naar meer dan 200 keer, wordt als normaal beschouwd.</li>
	<li>Bevochtig het donorhart met warme (37 °C) zoutoplossing en controleer of het transplantaat bloedt. Stel het pulserende hart graft in de onderhuidse ruimte, en dan hecht de incisie.</li>
</ol>4. Postoperatieve zorg- en graftbeoordeling
<ol><li>Noteer de tijd tot normaal sinusritme en het behoud van het normale sinusritme gedurende ten minste 5 minuten na het loslaten van de klem om de postoperatieve graftfunctie te controleren.</li>
	<li>Plaats de ontvanger alleen op een warme deken totdat de ontvanger wakker wordt van anesthesie. Toleer buprenorfine analgesie, 0,05 mg/kg, s.c, aan het einde van de operatie en elke 12 uur gedurende 72 uur na de operatie.</li>
	<li>Nota dagelijks het gewicht en de postoperatieve herstelstatus van de ontvanger. In het geval van >15% gewichtsverlies ten opzichte van die op de operatiedatum, hemiplegische verlamming, of infectie, euthanaseren de ontvanger via terminale isoflurane inhalatie21.</li>
	<li>Monitor graft overleving door palpatie dagelijks. De operatie wordt beschouwd als succesvol als de murine allograft overleeft voor >72 uur. Rangschik de graftfunctie, zoals eerder gemeld22: Schaal 3 - krachtig pulseren en frequentie; Schaal 2 - minder pulseren; Schaal 1- fibrillatie en dreigende afwijzing; of Schaal - 0, verlies van hartslag en volledige afwijzing.</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplantation Proceedings. 5 (1), 733-735 (1973).</li>
<li>Que, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+cold+ischemia+time+in+mouse+heart+transplantation+using+supercooling+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Prolonged cold ischemia time in mouse heart transplantation using supercooling preservation.</a> Transplantation. , (2019).</li>
<li>Wang, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+murine+cardiac+allograft+arteriopathy+by+long-term+blockade+of+CD40-CD154+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Suppression of murine cardiac allograft arteriopathy by long-term blockade of CD40-CD154 interactions.</a> Circulation. 105 (13), 1609-1614 (2002).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52 (6), 1099-1101 (1991).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Wang, Q., Liu, Y., Li, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+technique+for+heterotopic+vascularized+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Simplified technique for heterotopic vascularized cervical heart transplantation in mice.</a> Microsurgery. 25 (1), 76-79 (2005).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+technique+for+lung+retransplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Surgical technique for lung retransplantation in the mouse.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (3), 321-325 (2013).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), Pt 1 64-69 (1983).</li>
<li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice%3A+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PLoS One. 8 (10), 77278(2013).</li>
<li>Miller, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+restoration+of+transplantation+tolerance+after+acute+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Spontaneous restoration of transplantation tolerance after acute rejection.</a> Nature Communications. 6, 7566(2015).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Jagged-1+combined+with+blockade+of+CD40+pathway+prolongs+allograft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Jagged-1 combined with blockade of CD40 pathway prolongs allograft survival.</a> Immunology and Cell Biology. 93 (2), 213-217 (2015).</li>
<li>Xie, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+costimulation+blockade+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+alloantigen-primed+memory+T+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Combined costimulation blockade inhibits accelerated rejection mediated by alloantigen-primed memory T cells in mice.</a> Immunological Investigations. 38 (7), 639-651 (2009).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+monoclonal+antibodies+with+DST+inhibits+accelerated+rejection+mediated+by+memory+T+cells+to+induce+long-lived+heart+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Combination of monoclonal antibodies with DST inhibits accelerated rejection mediated by memory T cells to induce long-lived heart allograft acceptance in mice.</a> Immunology Letters. 138 (2), 122-128 (2011).</li>
<li>Dai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+CD27%2FCD70+pathway+to+reduce+the+generation+of+memory+T+cells+and+markedly+prolong+the+survival+of+heart+allografts+in+presensitized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Blockade of CD27/CD70 pathway to reduce the generation of memory T cells and markedly prolong the survival of heart allografts in presensitized mice.</a> Transplant Immunology. 24 (4), 195-202 (2011).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonged+allograft+survival+by+arsenic+trioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+Investigations%22%5BJournal%5D)">Inhibition of accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonged allograft survival by arsenic trioxide.</a> Immunological Investigations. 42 (5), 438-454 (2013).</li>
<li>Yan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+accelerated+rejection+mediated+by+alloreactive+CD4%28%2B%29+memory+T+cells+and+prolonging+allograft+survival+by+1alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D%283%29+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology+Letters%22%5BJournal%5D)">Inhibiting accelerated rejection mediated by alloreactive CD4(+) memory T cells and prolonging allograft survival by 1alpha,25-dihydroxyvitamin D(3) in nude mice.</a> Immunology Letters. 149 (1-2), 54-61 (2013).</li>
<li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arsenic+trioxide+is+a+novel+agent+for+combination+therapy+to+prolong+heart+allograft+survival+in+allo-primed+T+cells+transferred+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Arsenic trioxide is a novel agent for combination therapy to prolong heart allograft survival in allo-primed T cells transferred mice.</a> Transplant Immunology. 25 (4), 194-201 (2011).</li>
<li>Shao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44%2FCD70+blockade+and+anti-CD154%2FLFA-1+treatment+synergistically+suppress+accelerated+rejection+and+prolong+cardiac+allograft+survival+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD44/CD70 blockade and anti-CD154/LFA-1 treatment synergistically suppress accelerated rejection and prolong cardiac allograft survival in mice.</a> Scandinavian Journal of Immunology. 74 (5), 430-437 (2011).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+reproducible+cervical+cuff+technique+for+rat-to-mouse+heterotopic+heart+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">A highly reproducible cervical cuff technique for rat-to-mouse heterotopic heart xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. , (2017).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Blanchard, J. M., Pollak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+perfusion+and+storage+of+heterotopic+heart+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Techniques for perfusion and storage of heterotopic heart transplants in mice.</a> Microsurgery. 6 (3), 169-174 (1985).</li>
<li>Felix, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((H2-DMalpha%28-%2F-%29+mice+show+the+importance+of+major+histocompatibility+complex-bound+peptide+in+cardiac+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">H2-DMalpha(-/-) mice show the importance of major histocompatibility complex-bound peptide in cardiac allograft rejection.</a> Journal of Experimental Medicine. 192 (1), 31-40 (2000).</li>
<li>Tomita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heterotopic+cervical+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heterotopic cervical heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 64 (11), 1598-1601 (1997).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Wang, K., Zhang, N., Li, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+mouse+heterotopic+heart+graft+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of mouse heterotopic heart graft retransplantation.</a> Microsurgery. 26 (3), 200-202 (2006).</li>
<li>Plenter, R. J., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+heterotopic+heart+transplant+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine heterotopic heart transplant technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (89), (2014).</li>
<li>Ratschiller, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52907(2015).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 8 (3), 245-249 (2010).</li>
<li>Fukunaga, N., Bissoondath, V., Rao, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Submandibular+Gland-preserving+Technique+for+Heterotopic+Cervical+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Submandibular Gland-preserving Technique for Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice.</a> Transplantation. 102 (11), 464-465 (2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Muisharttransplantaties modellen zijn belangrijke instrumenten voor transplantatie immunologie onderzoek, als instrumenten en materialen voor de evaluatie van de immuunmechanismen van dit model en een groot aantal gen-gemodificeerde muizen beschikbaar zijn. Microchirurgische technische uitdagingen, zoals de hechting en de edsie van schepen, hebben echter het wijdverbreide gebruik ervan beperkt. In deze studie hebben we bepaalde technische belangrijkste uitdagingen van murineharttransplantatie onderzocht en goede resultat...

De oprichting van muis heterotopische harttransplantatie door end-to-end anastomose in de buik in 1973 was een belangrijke mijlpaal in de fundamentele transplantatie immunologie onderzoek1. Dit model bood een belangrijk en geldig hulpmiddel voor het analyseren van de mechanismen van ischemie reperfusieletsel2, immunologische afstoting en tolerantie3,4. Echter, de complexe en tijdrovende aard van de operatie, alsmede het potentieel voor infecties kan resulteren in ernstige perioperatieve buikverklevingen en ontstekingsreacties, wat resulteert in een lage efficiëntie voor heterotopische harttransplantatie model.
De cervicale heterotopische harttransplantatie techniek werd voor het eerst beschreven door Chen in 19915. In dit model wordt de externe halsader van de ontvanger anastomosed aan de longslagader van de graft en de halsslagader is anastomosed aan de stijgende aorta. De belangrijkste voordelen van deze methode zijn het gemak van monitoring en het verminderen van trauma aan de ontvanger. In hetzelfde jaar beschreef Matsuura een verbeterde techniek, waarbij het einde van de externe halsader en halsslagader over een Teflon manchet werden gefixeerd en met een omtrekvormige zijdeligbondtuur6werden bevestigd. Sommige onderzoekers bevestigden ook de manchet aan de juiste longslagader in het donorhart alvorens de manchet in de externe halsader van de ontvanger7te plaatsen. Tot nu toe is de manchettechniek op grote schaal toegepast in verschillende vasculaire pedicletransplantatiemodellen, waaronder die voor long8,lever9en nier10-transplantatie.
Tot op heden zijn er verschillende problemen in verband met de manchettechniek. Bijvoorbeeld, de halsslagader is moeilijk te evert over de manchet als gevolg van de extra elasticiteit, wat resulteert in het weefsel naar achteren draaien. Daarom kan extra praktijk en een microchirurgische dilatator nodig zijn om deze stap te voltooien. Bovendien kan de voorbereiding van het cervicale vat tot 25 minuten duren.
Om deze problemen op te lossen, introduceren we de binnenbandtechniek, die is gebaseerd op de manchettechniek en omvat het bevestigen van de manchet op de externe halsader en halsslagader met behulp van een binnenband om te helpen bij de edsie van de vaatwand. Bovendien, met eenvoudige training, de ontvanger voorbereiding wordt teruggebracht tot 15,5 minuten. Deze techniek vermindert de complexiteit van de operatie en vereist geen extra oefening of het gebruik van een vasculaire dilatator. Het kan worden toegepast in alle transplantatie immuunonderzoek, vooral voor het verifiëren van derden immuuntolerantie waarbij de ontvanger ontvangt twee cardiale allografts, een in de buik en de andere in de nek11. We raden ook samenwerking aan tussen twee ervaren chirurgen om dit model vast te stellen, waarbij een chirurg het ontvangende dier voorbereidt en het andere het donorhart oogst en implanteert. Een dergelijke samenwerking kan de bewerkingstijd verkorten tot 25 minuten. Met behulp van deze geoptimaliseerde procedure hebben we syngene, allogene12,13,,14,15,16,17,18,19en xenogeneic muisharttransplantatiemodellen20vastgesteld .,
De reden voor de ontwikkeling van de binnenbandtechniek was om de verrichtingstijd voor de totstandbrenging van een model van de muisharttransplantatie met een hoog slagingspercentage te verminderen. Optimalisatie van het cervicale harttransplantatiemodel vergemakkelijkt de verwerving van hoge slagingspercentages in een korte periode van operatietijd in vergelijking met de traditionele hechtings- en manchettechniek21. Verder kan het samenwerkingsmodel de warme ischemische tijd van het donorhart verder verkorten in vergelijking met operaties die met één operator worden uitgevoerd.

<table><tbody><tr><td>Slagader manchet</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td>Polyamide buis. diameter: 0,55 mm,lengte: 1,0 mm</td></tr><tr><td>Slagader binnenbuis</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td>Polyamide buis. Diameter: 0,28 mm</td></tr><tr><td>Micro gebogen pincetten</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische instrumentenfabriek</td><td>WA3050</td><td>1/8 boog, 0,3-mm punt zonder haak</td></tr><tr><td>Micro naaldhouders</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische instrumentenfabriek</td><td>WA2050</td><td>0,2-mm punt</td></tr><tr><td>Micro schaar</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische instrumentenfabriek</td><td>WA1050</td><td>Recht, bladlengte: 10 mm</td></tr><tr><td>Micro rechte pincetten</td><td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Chirurgische instrumentenfabriek</td><td>WA3060</td><td>0,15-mm punt zonder haak</td></tr><tr><td>Scanlan Vascu-Statt Bulldogklemmen</td><td>Scanlan International Inc</td><td>1001-531</td><td>Klemdruk 20&ndash;25 gram</td></tr><tr><td>Venen manchet</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td>Polyamide buis. diameter: 0,9 mm,lengte: 1,2 mm</td></tr><tr><td>Venen binnenbuis</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td>Polyamide buis. Diameter: 0,6 mm</td></tr></tbody></table>

optimalisatie van de cuff techniek voor murine heart transplantation

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Murine harttransplantatie is uitgevoerd voor meer dan 40 jaar. Met de vooruitgang in de microchirurgie, zijn bepaalde nieuwe technieken gebruikt om chirurgische efficiëntie te verbeteren. In ons lab hebben we de manchettechniek geoptimaliseerd met twee grote stappen. Eerst gebruikten we de binnenbandtechniek om een tijdelijke binnenband in de externe halsader en halsslagaderbloedvat te plaatsen om de edlijsie van het vat over de manchet te vergemakkelijken. Ten tweede hebben we volledige heterotopische harttransplantatie uitgevoerd door de samenwerking van twee ervaren chirurgen. Deze wijzigingen hebben de bedrijfstijd effectief teruggebracht tot 25 minuten, met een slagingspercentage van 95%. In dit rapport beschrijven we deze procedures in detail en geven we een aanvullende video. Wij zijn van mening dat dit verslag over de verbeterde manchettechniek praktische richtlijnen zal bieden voor murine heterotopische harttransplantatie en het nut van dit muismodel voor fundamenteel onderzoek zal verbeteren.

Chirurgische operatietijd
Na de training kan een ervaren chirurg de operatie met succes binnen 35 minuten uitvoeren met behulp van de binnenbandtechniek, waarbij ongeveer 15,5 minuten nodig zijn voor de voorbereiding van de ontvanger, 10,9 minuten nodig zijn voor de voorbereiding van de donor en 4,4 minuten nodig zijn voor donorhartanastos. De koude en warme ischemietijd (van donorpreparaat tot hartimplantatie) wordt teruggebracht tot 15,3 minuten in vergelijking met de operat...

We introduceren een binnenband benadering van de manchettechniek voor muis cervicale heterotopische harttransplantatie om evert het vat over de manchet te helpen. We ontdekten dat de samenwerking tussen twee ervaren chirurgen de operatietijd aanzienlijk verkort.

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Hallo, iedereen. Mijn naam is Dr.Zhongquan Qi.It is algemeen bekend dat de manchettechniek sinds 1991 wordt gebruikt als harttransplantatie. Hoewel er grote vooruitgang in de medische chirurgie en de nieuwe chirurgische techniek, er zijn nog enkele problemen op basis van manchet techniek.Het is een vorm van onthulling, waarbij ze je een optimotische halve techniek laten zien, die aanzienlijk kan gelijk zijn aan de chirurgische efficiëntie. De belangrijkste procedures is het tijdelijk inbrengen van een tijdelijk in die buis in het vizier. Bewijs lees de ISO bijna de helft.Het invoegen van de buistechniek. Een ervaren chirurg kan de operatie uitvoeren binnen 35 minuten met 95% slagingspercentage. Dan kunnen ze gebruik maken van de Thermal Surgeon Operation Module, die verder verbetert de efficiëntie van de operatie weergegeven in de skeptimic en de operatie tijd zal worden verkort tot ongeveer 35 minuten.Bedankt. En dat is dat bindt het recept en mijlen met pentobarbital. Gebruik atraumatische mechanische tondeuses om het haar te verwijderen op de rechter later cervicale regio.Gebruik een steriele katoenen tip applicator om het chirurgische gebied af te vegen met jodium antiseptisch gevolgd door 70%-ethanol. Plaats de muis in de supinepositie op het bedieningsplatform. Bedek de muis met steriel gaas.Gebruik een oogheelkundige schaar om een dwarse incisie te maken van de onderste een derde NACMEC-lijn naar het rechter schoudersleutelbeengewricht. Isoleer de juiste externe jungulaire ader met micro gebogen tangen om voldoende lengte bloot te leggen. Snijd de brunches af via elektrostollulatie.En zoek het schip bij de disto en gebruik een zes 2 0 zes hechting. Klem de externe junglar ader proximally met behulp van een poederklem. En dan de ader proximately vertalen naar de ligatuur met behulp van een micro schaar.Was het vat lumen met 100 eenheden per milliliter 02 vier Celsius graden heparine saillant om eventueel restbloed te verwijderen. Trek de externe junglar ader door de vena cava met behulp van micro rechte tangen. Steek de ader binnenband in het lumen als een stent en over de vaatwand over de curve met micro rechte tangen.Bevestig het irriterende Faso-endotheel aan het proximale uiteinde van de curve met behulp van een omtrek acht tot 06 hechting. Gebruik micro rechte tangen om de binnenband van de ader uit het adervat te halen. Voer stompe dissectie uit met microforceps om de rechter halsslagader te isoleren, grenzend aan de binnenrand van de sternocleidomastoïde.Klem de rechter halsslagader proximally met behulp van een babcock klem. Zoek de halsslagader distally met behulp van een zes tot 06 hechting. En gebruik een micro schaar om de halsslagader proximaal trans-ed om de ligatuur.Was de halsslagader met 100 eenheden per milliliter 02 vier Celsius heparine saillant om eventueel restbloed te verwijderen. Geef de halsslagader door de slagadercurve en steek de binnenband van de slagader in het slagadervat met behulp van micro rechte tangen. Richt op het vat over de curve met behulp van micro rechte tangen.Bevestig het omgekeerde facile endotheel met behulp van een omtrek acht tot 06 hechting. Haal de binnenpunt van de slagader uit het slagadervat met micro rechte tangen. Anesthesie en de infectie zijn hetzelfde als de ontvanger.Maak een abdominale middenlijn incisie met een oogheelkundige schaar en bloot de buikholte. Gebruik micro curve tangen om de inferieure vena cava bloot. En dan intraveneus injecteren 200 microliter van 100 eenheden per milliliter 02 vier Celsius graden heparine saillant per 20 gram lichaamsgewicht door de inferieure vena cava.Voer thoracotomie uit met oogheelkundige schaar. Snijd de ribben door de paletten Romita axillaire lichte insnijdingen. Flav de voorste borstwand naar buiten om de borstholte bloot te leggen.Vereeng de thymus met micro tangen. Bloot de aorta en vervolgens overvloedig 200 microliter van 100 eenheden per milliliter 02 vier Graden Celsius heparine salient aan de kransslagader door de aortaboog. Gebruik een microschaar om de opgaande aorta aan het begin van de aortaboog te transecteren.Transect de longslagader aan het begin van de twee belangrijkste takken met een micro schaar. Zoek de superieure vena cava en inferieure vena cava ongeveer met behulp van een zes tot 02 hechting en gebruik een micro schaar om de ader destillaat transect aan de ligatuur. Zoek de longaders samen met behulp van een enkele zes, tot 06 hechting en snijd de ader takken distally aan de ligatuur met behulp van een micro schaar.Verwijder het harttransplantatie uit de omliggende zachte weefsels. Plaats het donorhart ondersteboven in het rechter nekgebied van de ontvanger. Voer de longslagader van het donorhart in tot een zes tot 06-lus met micro rechte tangen.Wikkel het vat lumen rond de vena cava en draai vervolgens de zes tot 06 hechtlus rond het kalf om het vat gewricht te buigen. Voer anastomose uit van de aorta van de graft- en slagadercurve. Laat de samengeklonterde halsader los, gevolgd door geklonterde halsslagader.Houd het vat verbonden en gedraaid en zorg ervoor dat de bloedstroom vrij is. Zet het passerende hart graft in de onderhuidse ruimte en vervolgens hecht de incisie. Noteer de tijd tot normaal sinusritme en het behoud van het normale sinusritme gedurende ten minste vijf minuten na het loslaten van de klem om de postoperatieve graftfunctie te controleren.Plaats de ontvanger alleen op de ene deken totdat de ontvanger wakker wordt van anesthesie. Samen, hoewel onze chirurgie gebruik maakt van manchet technieken die zijn gemeld, hebben we de innerlijke kern techniek op basis van deze. Verminder de moeilijkheidsgraad bij een operatie en verkort de anastomosetijd door optimalisatietechniek.We stelden het motto voor van dubbele chirurgie om de efficiëntie van de operatie in het schema verder te verbeteren. En de bewerkingstijd wordt verkort tot ongeveer 25 minuten. Een volledig MHC mismatched BALBC allograft hart kan worden afgewezen met acht dagen na transplantatie in C57BL6 ontvanger muizen.Syngeneic harttransplantaties gebruikt in ons onderzoek overleefde meer dan 100 dagen, behalve een zeldzaam geval als gevolg van een 15%gewichtsverlies in vergelijking met normaal gewicht voor de operatie. Histopathologie van de allograft op dag zeven onthulde typische kenmerken van acute afstoting, waaronder een zware cellulaire infiltreren met weefselnecrose. Syngeneic grafts zijn bijna normaal zonder bewijs van myocyte necrose of inflammatoire celinfiltratie.100 dagen na syngenetische harttransplantatie kan het vasculaire endotheel van anastomoseplaats worden verzameld en gekleurd door immunofluorescent. In deze analyse werden geen afkering van vaatwand, trombose of verdikking van de intima waargenomen. Elektromicroscopische beeldvorming toonde aan dat een glad endotheel en een regelmatige longitudinale korstvorming met de endotheelcellen netjes en dicht gerangschikt zonder duidelijk sediment op het oppervlak.

optimization-of-the-cuff-technique-for-murine-heart-transplantation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Het murine cervicale harttransplantatie model is geschikt voor immunologische en ischemie-reperfusie schade studies. We pasten de procedure met een niet-hechtingsmanchet techniek en uitgevoerd meer dan 1000 succesvolle transplantaties met deze benadering.  Hierin geven we meer details van deze techniek om de video te vullen.

Muizen Baarmoederhalskanker harttransplantatie Model met een aangepaste manchet Techniek

Het manuscript beschrijft de stappen die nodig zijn om de heterotopische harttransplantatie uit te voeren in de muis.

Muizen Heterotope Heart Transplant Techniek

De manchettechniek verkort en vergemakkelijkt het model van heterotope cervicale harttransplantatie bij muizen door technisch uitdagende hechtingsanastomosen van kleine bloedvaten te vermijden. De technische details die in dit videopapier worden getoond, zouden onderzoekers in staat moeten stellen dit model in hun laboratoria tot stand te brengen.

Heterotopische Cervical harttransplantatie in Muizen

Hier presenteren we een protocol van heterotopische aorta transplantatie in muizen met behulp van de niet-hecht manchet techniek in een cervicale Murine model. Dit model kan worden gebruikt om de onderliggende pathologie van chronische transplantaat vasculopathie (CAV) te bestuderen en kan helpen bij het evalueren van nieuwe therapeutische middelen om de vorming ervan te voorkomen.

Murine cervicaal aorta transplantatie model met behulp van een gemodificeerde niet-hecht manchet techniek

In het huidige protocol wordt een muisharttransplantatiemodel gebruikt voor het onderzoeken van het mechanisme van cardiale allograftafstoting. In dit heterotope harttransplantatiemodel wordt de operatie-efficiëntie verbeterd en wordt de overleving van harttransplantaten verzekerd door een cervicale end-to-end anastomose van hartimplantatie met behulp van een gemodificeerde Cuff-techniek.

Een aangepaste manchettechniek voor muis cervicaal heterotopisch harttransplantatiemodel

Harttransplantatiemodellen bij muizen vertegenwoordigen waardevolle onderzoeksinstrumenten voor het bestuderen van de immunologie van transplantaties. Het huidige protocol beschrijft muis heterotopische cervicale harttransplantatie waarbij manchetten op de gemeenschappelijke halsslagader van de ontvanger en de longslagaderstam van de donor worden geplaatst om laminaire bloedstroom mogelijk te maken.

Muis heterotopische cervicale harttransplantatie met behulp van vasculaire manchetten

Dit protocol biedt technische informatie voor vatreconstructie met behulp van de manchettechniek bij orthotope levertransplantatie bij muizen.

Vasculaire reconstructie met de manchettechniek bij orthotope levertransplantatie bij muizen

Dit protocol biedt een manchetvrije, hecht-gebaseerde cervicale heterotopische harttransplantatietechniek bij muizen, ontworpen om de betrouwbare plaatsing van een tweede heterotopische harttransplantatie mogelijk te maken voor het evalueren van donorspecifieke immuuntolerantie onder fysiologische omstandigheden met minimale interferentie door vreemd materiaal.

Manchetvrije hechtingsgebaseerde cervicale model voor secundaire heterotopische harttransplantatie om donorspecifieke immuuntolerantie bij muizen te evalueren

Dit protocol presenteert een vereenvoudigde, end-to-side hechtingsanastomosetechniek voor muis-cervicale harttransplantatie, en biedt een robuust en reproduceerbaar model voor het bestuderen van transplantatie-immunologie.

Cervicale heterotopische muisharttransplantatie met behulp van end-to-side anastomosetechniek om transplantatie-immunologie te bestuderen

In deze video, tonen we de procedure van de CD40-activatie en expansie van B-cellen van muizen splenocyten van C57BL / 6 muizen, die gebruikt kan worden als een model antigeen-presenterende cel (APC), de inductie van immuniteit bestuderen.

Muizenmodel van CD40-activatie van B-cellen

Leer de geoptimaliseerde cuff-techniek voor heterotopische harttransplantatie bij muizen met behulp van een innovatieve binnenbuismethode. Deze aanpak verkort de operatietijd aanzienlijk door samenwerking tussen ervaren chirurgen.

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

Meer video's verkennen