Name: Productie van kiemvrije snelgroeiende vleeskuikens uit een commerciële lijn voor microbiotastudies (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-18T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Ontdek een methode om kiemvrije vleeskuikens te produceren uit commerciële Ross PM3-eieren voor microbiotastudies. Deze techniek maakt onderzoek naar microbiota-invloeden op vogelfysiologie en gezondheid mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs zijn de fokkers en de vereniging Boyé accouvage (La Boissière en Gâtine, Frankrijk) dankbaar voor de levering van bevruchte eieren. Deze studie werd uitgevoerd onder auspiciën van het onderzoeksconsortium APR-IA 'INTEGRITY' (2017-2019), dat werd gefinancierd door het Région Centre Val de Loire, Frankrijk.

De procedures voor dierverzorging werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtsnoeren van de Richtlijn van de Raad van de Europese Gemeenschappen (86/609/EEG) en van de Franse regelgeving inzake dierproeven.
1. Isolatorbereiding
<ol><li>Plaats de benodigde materialen onder overdruk in een stijve isolator: buizen van 50 ml, plastic pipetten van 5, 10 en 25 ml, bestraalde voeding, geautoclaveerd water en steriele verzegelde plastic containers.</li>
	<li>Vul de transferkiemdodende val met een 2% quaternaire ammoniumoplossing.</li>
	<li>Steriliseer de isolator driemaal met formaldehydedamp door 60 ml formaline (24% formaldehyde) toegevoegd aan 30 g kaliumpermanganaat per kubieke meter (m3) te gebruiken. Verplaats de materialen in de isolator tussen elke sterilisatie om de sterilisatie van alle contactoppervlakken te garanderen.</li>
	<li>Stel de isolatortemperatuur in op 37 °C gedurende ten minste 2 dagen voordat u de eieren inbrengt. Stel de hygrometer in op 65-70% van de relatieve vochtigheid (RV) op de dag van introductie.</li>
</ol>2. Eierverzameling en incubatie
<ol><li>Verzamel de eieren van bedrijven die zijn geselecteerd op basis van een goede broedsnelheid van de legkippen (ten minste 80% op het hoogtepunt van de eierproductie) en hun goede hygiënische toestand (d.w.z. afwezigheid van gemeenschappelijke pluimveepathogenen en afwezigheid van ziekten binnen het koppel). Selecteer visueel schone en onberispelijke eieren op de loopband.</li>
	<li>Ontsmet het eioppervlak onmiddellijk door ze gedurende 5 minuten in een 1,5% perazijnzuuroplossing bij kamertemperatuur te dopen.</li>
	<li>Transporteer de eieren naar de experimentele faciliteit met behulp van een doos ontsmet met formaldehydedamp.</li>
	<li>Bewaar de eieren 24 uur bij 4 °C. Herhaal het in stap 2.2 beschreven ontsmettingsproces en plaats ze gedurende 19 dagen in een broedmachine (dag 0).</li>
</ol>3. Uitkomen
<ol><li>Controleer op dag 19 de vruchtbaarheid, de levensvatbaarheid (beweeglijkheid) en de ontwikkeling van het embryo door ze te candellen met behulp van een lichte ei-kaars onder steriele omstandigheden. Introduceer alleen levend-embryonale eieren in de steriele broedisolatoren.</li>
	<li>Ontsmet de geselecteerde eieren door 1,5% perazijnzuuroplossing gedurende 30 s te spuiten of totdat het volledige oppervlak van elk ei bedekt is. Eieren blijven gedurende 16 minuten en 30 s in contact met de spray tijdens de overdracht in isolatoren.</li>
	<li>Breng de eieren over in de steriele broedisolatoren en spoel ze af met steriel gedemineraliseerd water voordat je ze in de broedruimte plaatst. OPMERKING: Dieren worden uitgebroed en gefokt in steriele isolatoren. Ze worden ad libitum gevoed met een commercieel dieet gesteriliseerd door gammabestraling en bewaterd met geautoclaveerd kraanwater dat wordt geleverd door waterdispensers.</li>
</ol>4. Bacteriologische statusanalyse
<ol><li>Neem een dag na het uitkomen een fecaal monster rechtstreeks uit het rectum van verschillende kuikens en bundel ze in een gesteriliseerde glazen buis om dit monster representatief te maken voor alle dieren binnen een bepaalde isolator.</li>
	<li>De fecale monsters die min of meer vloeibaar zijn, voegen een equivalent van 1 ml ontlasting toe aan 9 ml thioglycolaatbouillon met resazurine. Voeg het resterende fecale monster toe aan 9 ml hersenhartinfusiebouillon (BHI) en incubeer de buisjes bij 37 °C zonder te schudden gedurende 18 tot 48 uur. Dit zal de groei van een breed scala aan aerobe, facultatieve aerobe en niet-kieskeurige anaerobe soorten mogelijk maken. OPMERKING: Thioglycolaatbouillon met resazurine is bedoeld voor de detectie van niet-kieskeurige anaerobe bacteriën, maar het maakt ook de detectie van aerobe bacteriën mogelijk. Dit medium voldoet aan de Europese, Amerikaanse en Japanse farmacopees voor steriliteitstesten 18,19,20.</li>
	<li>Observeer visueel of er een wijziging in de groeimedia optreedt na 18 uur incubatie. Neem na 48 uur een druppel uit de BHI fecale bouillonmedia, plaats deze op een glasplaat en observeer onder een microscoop (40X vergroting) op de afwezigheid of aanwezigheid van bacteriën.</li>
	<li>Als er een vermoeden is over de aanwezigheid van bacteriën, neem dan een monster uit de BHI-cultuur en zaai het op BHI-agarplaten. Incubeer bij 37 °C gedurende 18 tot 48 uur.</li>
	<li>Als er kolonies aanwezig zijn, voer dan high-throughput technieken uit zoals MALDI-TOF massaspectrometrie voor nauwkeurige microbiële identificatie. OPMERKING: Na 72 uur, als de bacteriologische analyses negatief zijn, worden de dieren kiemvrij verklaard.</li>
</ol>

<ol><li>Shang, Y., Kumar, S., Oakley, B., Kim, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chicken+microbiota%3A+importance+and+detection+echnology%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Chicken microbiota: importance and detection echnology.</a> Frontiers in Veterinary Science. 23, 5(2018).</li>
<li>Grover, M., Kashyap, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germ-free+mice+as+a+model+to+study+effect+of+gut+microbiota+on+host+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterology+%26+Motility%22%5BJournal%5D)">Germ-free mice as a model to study effect of gut microbiota on host physiology.</a> Neurogastroenterology & Motility. 26 (6), 745-748 (2014).</li>
<li>Umesaki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+gnotobiotic+mice+to+identify+and+characterize+key+microbes+responsible+for+the+development+of+the+intestinal+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Japan+Academy%2C+Ser.+B%2C+Physical+and+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Use of gnotobiotic mice to identify and characterize key microbes responsible for the development of the intestinal immune system.</a> Proceedings of the Japan Academy, Ser. B, Physical and Biological Sciences. 90 (9), 313-332 (2014).</li>
<li>Carrasco, J. M., Casanova, N. A., Fernández, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota%2C+gut+health+and+chicken+productivity%3A+what+is+the+connection%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Miyakawa.+Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Microbiota, gut health and chicken productivity: what is the connection?</a> Miyakawa. Microorganisms. 7 (10), 374(2019).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microbial+communities+in+the+chicken+oviduct+and+the+origin+of+chicken+embryo+gut+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Characterization of microbial communities in the chicken oviduct and the origin of chicken embryo gut microbiota.</a> International Journal of Scientific Reports. 9 (1), 6838(2019).</li>
<li>Hincke, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+structural+barriers+and+innate+immune+components+during+incubation+of+the+avian+egg%3A+critical+interplay+between+autonomous+embryonic+development+and+maternal+anticipation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Dynamics of structural barriers and innate immune components during incubation of the avian egg: critical interplay between autonomous embryonic development and maternal anticipation.</a> Journal of Innate Immunity. 11 (2), 111-124 (2019).</li>
<li>Le Bars, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstration+of+a+protocol+for+obtaining+germ-free+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Demonstration of a protocol for obtaining germ-free chickens.</a> Annals of Veterinary Research. 7, 383-396 (1976).</li>
<li>Lafont, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+study+of+some+factors+limiting+%27competitive+exclusion%27+of+Salmonella+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Veterinary+Science%22%5BJournal%5D)">Experimental study of some factors limiting 'competitive exclusion' of Salmonella in chickens.</a> Research in Veterinary Science. 34 (1), 16-20 (1983).</li>
<li>Brée, A., Dho, M., Lafont, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+infectivity+for+axenic+and+specific-pathogen-free+chickens+of+O2+Escherichia+coli+strains+with+or+without+virulence+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Comparative infectivity for axenic and specific-pathogen-free chickens of O2 Escherichia coli strains with or without virulence factors.</a> Avian Diseases. 33 (1), 134-139 (1989).</li>
<li>Dozois, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+colonization+and+in+vivo+expression+of+F1+%28type+1%29+fimbrial+antigens+in+chickens+experimentally+infected+with+pathogenic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Diseases%22%5BJournal%5D)">Bacterial colonization and in vivo expression of F1 (type 1) fimbrial antigens in chickens experimentally infected with pathogenic Escherichia coli.</a> Avian Diseases. 38 (2), 231-239 (1994).</li>
<li>Schouler, C., Taki, A., Chouikha, I., Moulin-Schouleur, M., Gilot, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genomic+island+of+an+extraintestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain+enables+the+metabolism+of+fructooligosaccharides%2C+which+improves+intestinal+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">A genomic island of an extraintestinal pathogenic Escherichia coli strain enables the metabolism of fructooligosaccharides, which improves intestinal colonization.</a> Journal of Bacteriology. 191 (1), 388-393 (2009).</li>
<li>Porcheron, G., Chanteloup, N., Trotereau, A., Brée, A., Schouler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+fructooligosaccharide+metabolism+on+chicken+colonization+by+an+extra-intestinal+pathogenic+Escherichia+coli+strain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effect of fructooligosaccharide metabolism on chicken colonization by an extra-intestinal pathogenic Escherichia coli strain.</a> PLoS One. 7 (4), 35475(2012).</li>
<li>Kraimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+gut+microbiota+transfer+on+emotional+reactivity+in+Japanese+quails+%28Coturnix+japonica%29%5BTitle%5D)+AND+%22of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of a gut microbiota transfer on emotional reactivity in Japanese quails (Coturnix japonica).</a> of Experimental Biology. 222, (2019).</li>
<li>Stanley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+microbiota+associated+with+differential+feed+conversion+efficiency+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+microbiology+and+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Intestinal microbiota associated with differential feed conversion efficiency in chickens.</a> Applied microbiology and biotechnology. 96, 1361-1369 (2012).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+the+gut+microbiota+composition+on+Campylobacter+jejuni+colonization+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Influence of the gut microbiota composition on Campylobacter jejuni colonization in chickens.</a> Infection and Immunity. 85 (11), 0038017(2017).</li>
<li>Thomas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbial+dynamics+during+conventionalization+of+germ-free+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22mSphere%22%5BJournal%5D)">Gut microbial dynamics during conventionalization of germ-free chicken.</a> mSphere. 4 (2), 00035-00119 (2019).</li>
<li>Langhout, D. J., Schutte, J. B., de Jong, J., Sloetjes, H., Verstegen, M. W., Tamminga, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+viscosity+on+digestion+of+nutrients+in+conventional+and+germ-free+chicks%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Effect of viscosity on digestion of nutrients in conventional and germ-free chicks.</a> British Journal of Nutrition. 83 (5), 533-540 (2000).</li>
<li>European Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22European+Pharmacopoeia+%28Ph.+Eur.%29%3A+Supplement+6.3%2C+Sterility%22">European Pharmacopoeia (Ph. Eur.): Supplement 6.3, Sterility</a>. , reference 01/2009:20601 (2009).</li>
<li>Japanese Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJapanese+Pharmacopoeia%2C++%22Japanese+Pharmacopoeia+%28JP%29%3A+The+4.06+Sterility+Test+as+it+appeared+in+the+partial+revision+of+the+JP+15th+edition%22">Japanese Pharmacopoeia (JP): The 4.06 Sterility Test as it appeared in the partial revision of the JP 15th edition</a>. , made official March 31, 2009, by the Ministry of Health, Labour and Welfare Ministerial Notification No. 190 (2009).</li>
<li>United States Pharmacopeia (USP). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22United+States+Pharmacopeia+%28USP%29%3A+Sterility+Tests+as+presented+in+Pharmacopeial+Forum%2C+Interim+Revision+Announcement+No.+6%22">United States Pharmacopeia (USP): Sterility Tests as presented in Pharmacopeial Forum, Interim Revision Announcement No. 6</a>. 34 (6), December 1, 2008, official on May 1, 2009 (2008).</li>
<li>Harrison, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+germ-free+chicks%3A+a+comparison+of+the+hatchability+of+eggs+sterilized+externally+by+different+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Production of germ-free chicks: a comparison of the hatchability of eggs sterilized externally by different methods.</a> Laboratory Animals. 3 (1), 51-59 (1969).</li>
<li>Yokota, H., Furuse, M., Okumura, J., Iwao Task, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+production+and+rearing+of+the+germ-free+chick%5BTitle%5D)+AND+%22J-STAGE+home+Nihon+Chikusan+Gakkaiho%22%5BJournal%5D)">A simple method for production and rearing of the germ-free chick.</a> J-STAGE home Nihon Chikusan Gakkaiho. 55 (8), (1984).</li>
<li>Ding, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+and+establishment+of+gut+microbiota+in+chickens%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Inheritance and establishment of gut microbiota in chickens.</a> Frontiers in Microbiology. 8, 1967(2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Verschillende methoden om kiemvrije kippen te genereren zijn eerder beschreven 7,21,22. Eenvoudige methoden, zoals die hier worden gepresenteerd, gebruiken verschillende ontsmettingsmiddelen om de bacteriële belasting in het eioppervlak en in de isolatoren te verminderen. De meest gebruikte ontsmettingsmiddelen zijn kwikchloride, quaternair ammonium, joodvorm, natriumhypochloriet en chloordioxide-oplossingen. De resultaten zijn vaak bevredigend. Ondanks de toegankelijkheid van deze methoden kunnen echter maar weinig structuren de methode toepassen en de dieren op grote schaal grootbrengen, waardoor het gebruik van kiemvrije kippen een relatief zeldzame benadering is, alleen gebruikt om zeer specifieke wetenschappelijke vragen aan te pakken. De hier beschreven methoden, materialen en apparatuur maken een zeer efficiënt broedpercentage kiemvrije slachtkuikens mogelijk, die gedurende ten minste 3 weken gezond en steriel blijven (de duur van de wetenschappelijke experimenten waarvoor ze zijn geproduceerd).
De resultaten tonen aan dat de aanpassing van het protocol aan de productie van kiemvrije kuikens uit eieren verzameld in commerciële pluimveebedrijven succesvol is. De ervaring met de productie van SPF-eieren leert dat de efficiëntie van het uitkomen voornamelijk afhangt van de leeftijd van de leghennen en van de kwaliteit van de verzamelde eieren. Beide parameters werden in aanmerking genomen bij de keuze van boerderijen en de eieren. Met dezelfde methode is de gemiddelde broedsnelheid van kiemvrije slachtkuikens veel beter dan die verkregen bij de laatste productie van SPF-leghennen in onze faciliteit (79% versus 35%), zonder de steriliteit van dieren te beïnvloeden (87% versus 83%). Deze verschillen kunnen verband houden met de genetische achtergrond van de vogels (slachtkuikens versus leghennen) en met de kwaliteit van de eierschaal, die waarschijnlijk kwetsbaarder is in de eieren van de SPF-dieren, die meer dan 40 jaar in gesloten fokkerij worden gehouden. Bovendien laten we ook zien dat transport van meer dan 2 uur (van de bedrijven naar de experimentele faciliteit) geen invloed heeft op de efficiëntie en kwaliteit van het broeden.
Hoewel het sterilisatieproces dat wordt gebruikt voor het uitkomen van isolatoren en het protocol voor het ontsmetten van eieren zijn geoptimaliseerd, was ongeveer 10% van de isolatoren niet kiemvrij. Om de oorsprong van de besmetting te begrijpen, is het erg belangrijk om routinematige steriliteitscontrole van de uitgekomen isolatoren uit te voeren voordat het ei wordt binnengebracht.
Met betrekking tot de steriliteitsstatus van de vogels hebben we geprobeerd methoden toe te passen die de groei van aërobe en niet-kieskeurige anaerobe bacteriën uit fecale monsters mogelijk maken, waardoor we ervoor zorgen dat we levende, levensvatbare bacteriën detecteren. Deze methoden voldoen aan internationale farmacopees voor steriliteitstests en vertegenwoordigen snelle, eenvoudige en kostenbesparende technieken die routinematig kunnen worden gebruikt. Moleculair biologische technieken zoals 16S rRNA-gensequencing, hoewel ze geen informatie geven over de levensvatbaarheid van bacteriën, kunnen echter worden toegepast voor de bevestiging van de aanwezigheid van niet-cultivbare bacteriën. Inderdaad, een recente studie suggereerde dat sommige bacteriën van de maternale eileidermicrobiota via het eiwit naar het embryo lijken te worden overgebracht, later het grootste deel van de embryonale darmbacteriepopulatievormen 5. Bovendien suggereerde een andere studie dat een deel van de microbiële kolonisatoren in vroege embryo's werden geërfd van maternale kippen, en de darm microbiële overvloed en diversiteit werden later beïnvloed door omgevingsfactoren en gastheergenetica tijdens de ontwikkeling23. De resultaten van deze studies zijn echter gebaseerd op DNA-sequentieanalyse, waarbij een groot aantal van die bacteriën dood zou kunnen zijn of niet repliceerbaar in het eiwit (sterk geladen met antimicrobiële moleculen). Thomas en medewerkers16 voerden steriliteitstests uit door de beoordeling van cultivable aerobe en facultatieve aerobe bacteriën door fecale dropping op BHI-platen, waardoor de efficiëntie van standaard bacteriologische methoden voor kiemvrije steriliteitscontrole werd benadrukt. Bovendien gebruikten we in het voorgestelde protocol groeimonitoring in thioglycolaatbouillon met resazurine om de groei van niet-kieskeurige anaerobe bacteriën te kunnen detecteren.
Het protocol, dat al wordt gebruikt voor de productie van kiemvrije kwartels en kippen, is aanpasbaar aan de productie van kiemvrije dieren van de meeste broedende vogels en biedt perspectieven voor de studie van de bijdrage van de microbiota aan de fysiologie van deze dieren. Naast het gebruik van dit model om de onderlinge interacties tussen gastheer en microbiota in de pluimveebuik te onderzoeken, kan het ook nuttig zijn voor toegepast onderzoek. Het kan bijvoorbeeld worden gebruikt om de veiligheid en werkzaamheid van probiotica afgeleid van commensale micro-organismen van kippendarm te beoordelen om de gezondheid en robuustheid van dieren te verbeteren.

Er is een dramatische toename van de wetenschappelijke en populaire belangstelling voor de bijdrage van de darmmicrobiota aan de diergezondheid. De microbiota, bestaande uit bacteriën, virussen, schimmels en archaea die verschillende niches in de darm van het dier bewonen, is direct of indirect betrokken bij de regulatie van inflammatoire, infectieuze en metabole ziekten die niet alleen zoogdiersoorten treffen, maar ook vee, zoals pluimvee1. Verschillende diermodellen werden ontwikkeld om de bijdrage van de darmmicrobiota aan gezondheid en ziekte beter te bestuderen. Kiemvrije en gnotobiotische dieren maken bijvoorbeeld de studie van de volledige afwezigheid van microben of van een bekende microbiota mogelijk, respectievelijk op de fysiopathologie van infecties 2,3. Het genereren en onderhouden van deze dieren vereist echter gespecialiseerde technieken en faciliteiten, en de kosten, arbeid en vaardigheden die nodig zijn om ze te onderhouden, beperken hun toegang tot veel onderzoekers. Kiemvrije dieren moeten inderdaad regelmatig worden gecontroleerd op mogelijke besmetting met behulp van een combinatie van bacteriekweekmethoden, microscopie, serologie, grove morfologie en op sequencing gebaseerde detectietechnieken. Soortgelijke procedures zijn ook van toepassing op andere soorten, zoals vee, waar dieren over het algemeen groter zijn en grotere faciliteiten nodig hebben voor hun fokkerij en onderhoud, wat tot op zekere hoogte het onderzoek naar de microbiota kan belemmeren.
Pluimvee, meer bepaald kippen, zijn de hoeksteen van de veeteelt wereldwijd, met een kuddepopulatie die meer dan 40 miljard vogels per jaar kan overschrijden. Het is de belangrijkste bron van dierlijke eiwitten ter wereld (http://www.fao.org/poultry-production-products/en/). Bovendien zijn er geen culturele of religieuze taboes verbonden aan het fokken of consumeren van kippen. De darmmicrobiota van pluimvee is belangrijk betrokken bij de groei van het dier, de voederconversieverhouding, immuniteit, pathogene resistentie, naast vele andere nutritionele, fysiologische of pathologische processen4. Het genereren van kiemvrije kippen is daarom onmisbaar om de dialoog tussen de microbiota en zijn gastheerte onderstrepen 4. Zelfs als microbiële gemeenschappen de kippenneus5 bewonen, is de inhoud van een ei vers gelegd door een gezonde kip meestal vrij van micro-organismen, de eierschaal en membranen bezitten mechanische barrières om micro-organismeninvasie te voorkomen4. Bovendien worden kuikens gemakkelijk grootgebracht in afwezigheid van hun familieleden, wat, in tegenstelling tot zoogdieren, de productie van kiemvrije dieren mogelijk maakt zonder ouderlijke opfok onder steriele omstandigheden.
De experimentele faciliteit "Infectiology of Farm, Model and Wild Animals" (PFIE, UE-1277, Centre INRAE Val de Loire, Nouzilly, Frankrijk, https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12) maakt deel uit van het Franse nationale infrastructuurnetwerk EMERG'IN (https://www.emergin.fr/). PFIE beheerst de productie van kiemvrije kippen om verschillende experimentele studies uit te voeren gedurende meer dan 40 jaar 7,8,9,10,11. Deze dieren werden geproduceerd uit specifieke pathogeenvrije (SPF) eieren van een witte leghorn leglijn die sinds de jaren 1970 in gesloten fokkerij is grootgebracht. Voornamelijk gebruikt voor microbiologische studies 7,8,9, ervaren kiemvrije vogels een heropleving van interesse met vragen zoals de bijdrage van de darmmicrobiota aan gedrag 13, nutriëntengebruik14, immuunontwikkeling15 en endocriene activiteit. Zelfs als sommige studies zijn gepubliceerd met kiemvrije vleeskuikenlijnen16, blijven deze studies ondervertegenwoordigd in vergelijking met studies met experimentele laaglijnen. De evolutie van wetenschappelijke vragen naar de kruisverwijzing tussen de microbiota en zijn gastheer in de gezondheid en het welzijn van pluimvee heeft ons ertoe gebracht ons historische protocol aan te passen om kiemvrije slachtkuikens van de Ross PM3-lijn te produceren, 's werelds meest gebruikte vleeskuikenkippenlijn.

<table><tbody><tr><td>2 mL steriele plastic pipettes</td><td>Starsted</td><td>86.1252.001</td><td></td></tr><tr><td>50 mL buizen</td><td>Falcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BHI agar platen</td><td>Thermo fisher diagnostic</td><td>PO1198A</td><td></td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion bouillon</td><td>Thermo fisher diagnostic</td><td>CM1135</td><td></td></tr><tr><td>Glazen buizen met 9 mL BHI bouillon</td><td></td><td></td><td>zelfgemaakt en gesteriliseerd door autoclaving</td></tr><tr><td>Glazen buizen met 9 mL thioglycolaat bouillon met resazurin</td><td></td><td></td><td>zelfgemaakt en gesteriliseerd door autoclaving</td></tr><tr><td>Broedincubator</td><td>Fieme</td><td>MG 576</td><td></td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Memmert</td><td></td><td>voor bacteriologisch kweekwerk, 37 &deg;C</td></tr><tr><td>Bestraald voer</td><td>Safe</td><td>U8983G10R</td><td>40 kG bestraald</td></tr><tr><td>Isolatoren</td><td></td><td></td><td>zelfgemaakt. 1 m3 starre isolator onder positieve druk</td></tr><tr><td>Microbiologische veiligheidskast</td><td>thermon electron corporation</td><td></td><td>model: Hera Safe</td></tr><tr><td>Microscoop Visiscope serie 300</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipettenussen</td><td>Drummond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastieke pipetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele verzegeld dozen</td><td>Tuperware</td><td></td><td>diameter</td></tr><tr><td>Gesteriliseerde glazen buis</td><td></td><td></td><td>"sovirel"</td></tr><tr><td>Thioglycolaat Bouillon met Resazurin</td><td>Merck</td><td>90404-500G</td><td></td></tr><tr><td>Waterbad</td><td>Fisher scientific</td><td></td><td>model: polystat 36, gebruikt om 10 min te incuberen bij 100 &deg;C de glazen buizen met 9 mL thioglycolaat bouillon met resazurin om het medium te regenereren</td></tr></tbody></table>

productie van kiemvrije snelgroeiende vleeskuikens uit een commerciële lijn voor microbiotastudies

Production of Germ-Free Fast-Growing Broilers from a Commercial Line for Microbiota Studies

Studies van de bijdrage van de darmmicrobiota aan de gastheerfysiologie en immunocompetentie worden vergemakkelijkt door de beschikbaarheid van kiemvrije diermodellen, die als de gouden standaard worden beschouwd. Nestelende vogels zijn ideale modellen voor de productie van kiemvrije dieren, omdat het niet nodig is om hun familieleden onder steriele omstandigheden groot te brengen. Kiemvrije kippen worden voornamelijk gegenereerd uit specifiek-pathogeenvrije (SPF) experimentele lijnen, die slecht representatief zijn voor commerciële kippenlijnen. De hier voorgestelde methode maakte de productie van kiemvrije kippen mogelijk uit de snelgroeiende vleeskuikenlijn Ross PM3, die vaak wordt gebruikt door de pluimvee-industrie. Eieren werden snel verzameld na het leggen op een vleeskuikenouderboerderij. Ze ondergingen een strikt ontsmettingsproces van de verzameling tot de introductie in een steriele ei-broedisolator. De kuikens zijn uitgebroed en in deze steriele isolatoren gehouden gedurende de periode die nodig is om hun steriliteit te controleren. Oorspronkelijk ontwikkeld voor een experimentele SPF witte leghorn lijn, is het huidige protocol niet alleen aangepast aan de Ross PM3 vleeskuikenlijn, maar ook aan kwartels. Het is daarom een robuuste en gemakkelijk aan te passen procedure voor andere pluimveesoorten en nestelende vogels van economisch, biologisch of ecologisch belang.

Zes reeksen kiemvrije kuikens werden uitgevoerd met Ross PM3-eieren afkomstig van twee verschillende Franse boerderijen (tabel 1). In totaal werden 853 eieren verzameld en na twee ontsmettingsstappen en 19 dagen incubatie was 86,40% levensvatbaar. 490 van deze levensvatbare eieren ondergingen een derde ontsmettingsstap en werden in verschillende broedisolatoren geïntroduceerd, voor een gemiddelde broedsnelheid van 79,80%. Dit vertegenwoordigt een broedsnelheid van 68,94% in vergelijking met het aanvankelijke aantal verzamelde eieren.
De uitkomsten van het uitkomen variëren echter aanzienlijk afhankelijk van de uitgevoerde reeks: van 41,67% tot 88,16% van de levensvatbare kuikens in vergelijking met het aantal verzamelde eieren. Deze variaties werden ook waargenomen tussen de verschillende luiken tijdens hetzelfde experiment. Omdat niet alle isolatoren voor alle runs zijn gebruikt, is het moeilijk om een isolatorafhankelijk effect uit te sluiten. Dit batcheffect was echter direct gecorreleerd met de leeftijd van de leghennen (figuur 1), waarbij eieren van oudere kippen minder levensvatbaar waren.
De zes runs werden uitgevoerd met behulp van vier verschillende broedisolatoren. Na bacteriologische controle werd bevestigd dat de dieren van 14 van de 16 isolatoren kiemvrij waren. Dit komt overeen met een slagingspercentage van 87,5%. De twee resterende isolatoren waren besmet met een enkele milieu- en niet-pathogene bacterie.
Alle dieren die voor de wetenschappelijke experimenten werden gebruikt, bleven kiemvrij tot het einde van de studies, gedurende ten minste drie weken na het uitkomen.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2.jpg"> Figuur 1: Effect van de leeftijd van de kip op de uitkomstsnelheid De huidige figuur geeft de waargenomen broedsnelheden weer op basis van de leeftijd van het legkoppel, uitgedrukt in weken van leg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61148/61148fig1v2large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<table border="1" fo:font-size="5px" fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Verzamelde eieren</td>
			<td>D19 levensvatbare eieren</td>
			<td>D19 levensvatbare eieren/verzamelde eieren</td>
			<td>Eieren omgezet in isolator 1</td>
			<td>Eieren omgezet in isolator 2</td>
			<td>Eieren omgezet in isolator 3</td>
			<td>Eieren omgezet in isolator 4</td>
			<td>totaal aantal overgebrachte eieren</td>
			<td>levensvatbare kuikens uitgekomen in isolator 1</td>
			<td>levensvatbare kuikens uitgekomen in isolator 2</td>
			<td>levensvatbare kuikens uitgekomen in isolator 3</td>
			<td>levensvatbare kuikens uitgekomen in isolator 4</td>
			<td>totaal aantal levensvatbare uitgekomen kuikens</td>
			<td>levensvatbare uitgekomen/overgebrachte eieren isolator1</td>
			<td>levensvatbare uitgekomen/overgebrachte eieren isolator2</td>
			<td>levensvatbare uitgekomen/overgebrachte eieren isolator3</td>
			<td>levensvatbare uitgekomen/overgebrachte eieren isolator4</td>
			<td c="">levensvatbare uitgekomen/overgebrachte eieren wereldwijd</td>
		</tr>
<tr>
<td>Run 1</td>
			<td>101</td>
			<td>93</td>
			<td>92.08%</td>
			<td>23</td>
			<td>24</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>47</td>
			<td>22</td>
			<td>23</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>45</td>
			<td>95.65%</td>
			<td>95.83%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>95.74%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uitvoeren 2</td>
			<td>130</td>
			<td>117</td>
			<td>90.00%</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td>25</td>
			<td></td>
			<td>75</td>
			<td>20</td>
			<td>24</td>
			<td>18</td>
			<td>-</td>
			<td>62</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>96.00%</td>
			<td>72.00%</td>
			<td></td>
			<td>82.67%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uitvoeren 3</td>
			<td>132</td>
			<td>97</td>
			<td>73.48%</td>
			<td>26</td>
			<td>-</td>
			<td>26</td>
			<td>45</td>
			<td>97</td>
			<td>14</td>
			<td>-</td>
			<td>13</td>
			<td>28*</td>
			<td>27</td>
			<td>53.85%</td>
			<td></td>
			<td>50.00%</td>
			<td>62.22%</td>
			<td>56.70%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uitvoeren 4</td>
			<td>130</td>
			<td>116</td>
			<td>89.23%</td>
			<td>36</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>71</td>
			<td>33</td>
			<td>34</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>67</td>
			<td>91.67%</td>
			<td>97.14%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>94.37%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uitvoeren 5</td>
			<td>180</td>
			<td>148</td>
			<td>82.22%</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>30</td>
			<td>120</td>
			<td>26*</td>
			<td>25</td>
			<td>17</td>
			<td>24</td>
			<td>66</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>83.33%</td>
			<td>56.67%</td>
			<td>80.00%</td>
			<td>76.67%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uitvoeren 6</td>
			<td>180</td>
			<td>166</td>
			<td>92.22%</td>
			<td>-</td>
			<td>40</td>
			<td>40</td>
			<td>-</td>
			<td>80</td>
			<td>-</td>
			<td>35</td>
			<td>35</td>
			<td>-</td>
			<td>70</td>
			<td>86.67%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td>87.50%</td>
			<td></td>
			<td>87.50%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Totaal</td>
			<td>853</td>
			<td>737</td>
			<td>86.40%</td>
			<td>140</td>
			<td>154</td>
			<td>121</td>
			<td>75</td>
			<td>490</td>
			<td>89</td>
			<td>141</td>
			<td>83</td>
			<td>24</td>
			<td>337</td>
			<td>82.14%</td>
			<td>91.56%</td>
			<td>68.60%</td>
			<td>69.33%</td>
			<td>79.80%</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Technische resultaten van de verschillende broedexperimenten. De huidige tabel belicht de resultaten van de 6 reeksen kiemvrije broedsels die zijn uitgevoerd: aantal verzamelde eieren, levensvatbaarheid van het embryo na 19 dagen en levensvatbare uitgekomen kuikens in de verschillende isolatoren.

Hier beschrijven we een methode voor het genereren van kiemvrije kuikens uit eieren van een commerciële vleeskuikenlijn, de Ross PM3. Deze methode kan worden aangepast voor het genereren van kiemvrije dieren van andere pluimveesoorten.

Productie van kiemvrije snelgroeiende vleeskuikens uit een commerciële lijn voor microbiotastudies

Studies of the gut microbiota contribution to the host physiology and immunocompetence are facilitated by the availability of germ-free animal models, ...

Tot nu toe was de productie van kiemvrije vogels beperkt tot dierlijke rassen voor onderzoek. We laten hier zien dat het mogelijk is om het met commerciële dieren te doen. Deze techniek maakt het mogelijk om studies uit te voeren naar de invloed van de microbiota met behulp van de genetische achtergrond van boerderijvogels.Bij het uitvoeren van dit protocol is het belangrijk om de fok van de gekozen soort onder standaardomstandigheden te controleren en sterke kennis te hebben van het werken in isolatoren. Begin met het opzetten van 50 milliliter buizen, plastic pipetten, bestraald voer, geautoclaveerd water en steriele verzegelde plastic containers in een stijve isolator onder positieve druk. Vul de overdrachtsmicrobicide val met een 2% quaternaire ammoniumoplossing en steriliseer de isolator drie keer met formaldehydedamp door de materialen in de isolator tussen elke sterilisatie te verplaatsen om de desinfectie van alle contactoppervlakken te garanderen.Stel de isolatortemperatuur ten minste twee dagen voor het introduceren van de eieren in op 37 graden Celsius. Op de dag van introductie, stel de hydrometer in op 65 tot 70% relatieve luchtvochtigheid. Na selectie van schone en onberispelijke eieren, decontamineer onmiddellijk het oppervlak van de eieren door ze vijf minuten in een 1,5% perazijnzuuroplossing te dopen en breng de eieren vervolgens naar de experimentele faciliteit in een doos die gedecontamineerd is met formaldehydedamp.Bewaar de eieren gedurende 24 uur op 14 graden Celsius, herhaal vervolgens de sterilisatie met 1,5% perazijnzuur en plaats de eieren in een broedincubator gedurende 19 dagen. Op dag 19, controleer de vruchtbaarheid, levensvatbaarheid en ontwikkeling van het embryo met behulp van een lichte eierkaars onder steriele omstandigheden. Selecteer levende, embryoneerde eieren en decontamineer ze door ze 30 seconden of totdat het hele oppervlak van elk ei bedekt is, met een 1,5% perazijnzuuroplossing te besproeien.Breng de eieren over in de steriele broedisolatoren en spoel ze af met steriele gedemineraliseerde water voordat ze in de broedruimte worden geplaatst. Na het uitkomen worden de dieren in de steriele isolatoren gehouden, ad libitum gevoerd met een commercieel dieet gesteriliseerd door gammastraling en bewaterd met geautoclaveerd kraanwater. Een dag na het uitkomen, neem een ​​stoelmonster rechtstreeks uit het rectum van verschillende kuikens en verzamel ze in een gesteriliseerde glazen buis.Voeg een milliliter ontlasting toe aan negen milliliter thioglycolaatbouillon met resazurin en voeg het resterende monster toe aan negen milliliter Brain Heart Infusion of BHI-bouillon. Incubeer de buizen gedurende 18 tot 48 uur bij 37 graden Celsius zonder te schudden. Na 18 uur, onderzoek de buizen visueel op eventuele wijzigingen in het groeimedium.Na 48 uur, neem een ​​druppel van het BHI fecale bouillonmedium, plaats het op een glazen plaat en observeer het onder een microscoop. Als de aanwezigheid van bacteriën wordt vermoed, neem een ​​monster van de BHI-cultuur en zaai het op een BHI-agarplaat, en incubeer vervolgens de plaat gedurende 18 tot 48 uur bij 37 graden. Als er kolonies verschijnen, identificeer de bacteriën met behulp van een high-throughputtechniek zoals MALDI-TOF massaspectrometrie.Zes runs van generatie van kiemvrije kuikens werden uitgevoerd met ROSS PM3 eieren afkomstig van twee verschillende Franse boerderijen. In totaal werden 853 eieren verzameld en na twee ontsmettingsstappen en 19 dagen incubatie, was 86,40% ervan levensvatbaar. Van de levensvatbare eieren ondergingen 490 een derde ontsmettingsstap en werden geïntroduceerd in verschillende broedisolatoren voor een gemiddelde uitkomst van 79,80%. Dit vertegenwoordigt een uitkomst van 68,94% in vergelijking met het aantal verzamelde eieren.De uitkomstresultaten variëren aanzienlijk van 41,67% tot 88,16% van levensvatbare kuikens in vergelijking met het aantal verzamelde eieren. Dit effect was direct gecorreleerd met de leeftijd van de leghennen waarbij eieren van oudere hennen minder levensvatbaar waren. De zes runs werden uitgevoerd met behulp van vier verschillende broedisolatoren.Na bacteriologische controle werd bij de dieren uit 14 van de 16 isolatoren bevestigd dat ze kiemvrij waren, wat overeenkomt met een succespercentage van 86,5%. Het sleutelpunt van deze procedure is het handhaven van de steriliteit van de isolator. Dit vereist naleving van desinfectieprocedures en vooral het controleren van de introductie van de elementen via de vloeibare luchtsluis. Deze procedure levert dieren op om de impact van de microbiota op de fysiologie en gezondheid van vogels te meten.Het kan worden aangepast en gebruikt om microbiota van andere gedomesticeerde vogels of wilde dieren te bestuderen als de eieren toegankelijk zijn.

production-germ-free-fast-growing-broilers-from-commercial-line-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Source: Taylor, M. N., et.al. Using Single-Worm Data to Quantify Heterogeneity in Caenorhabditis elegans-Bacterial Interactions. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates the exposure of germ-free, age-matched Caenorhabditis elegans worms to a bacterial strain for intestinal colonization. It explains the selective removal of non-adhered and external bacteria, leaving only viable bacteria adhered to the gut epithelium for quantification.

Evaluating Intestinal Bacterial Colonization in Germ-Free C. elegans

Er is een methode ontwikkeld om kiemvrije Napakool te kweken, waarmee onderzoekers kunnen evalueren hoe enkele microbiële soorten of microbiële gemeenschappen op elkaar inwerken op koolbladoppervlakken. Er wordt ook een steriel groenteextract gepresenteerd dat kan worden gebruikt om verschuivingen in de samenstelling van de gemeenschap te meten tijdens de plantaardige gisting.

Een gnotobiotisch systeem voor het bestuderen van microbioomassemblage in de Phyllosfeer en in plantaardige fermentatie

Dit protocol wordt gebruikt bij het vaststellen en onderhouden van gnotobiotische Amerikaanse kakkerlakken (Periplaneta americana) door de eigevallen (oothecae) vóór het uitkomen te steriliseren. Deze gnotobiotische insecten bevatten hun verticaal overgedragen Blattabacterium endosymbionts maar hebben axenische darmen.

Oprichting en onderhoud van Gnotobiotische Amerikaanse kakkerlakken (Periplaneta americana)

Om een axeeninsect te verkrijgen, wordt het eioppervlak gesteriliseerd en wordt de uitgekomen larve vervolgens grootgebracht met behulp van axeenbladeren. Deze methode biedt een efficiënte manier voor axeeninsectenbereiding zonder antibiotica toe te dienen of een kunstmatig dieet te ontwikkelen, dat ook kan worden toegepast op andere bladetende insecten.

Het voorbereiden en fokken van axeeninsecten met weefsel gekweekte zaailingen voor gastheer-darmmicrobiota-interactiestudies van de bladkever

Er wordt een eenvoudige procedure beschreven voor het kweken van axenische Delia antiqua met halfgefermenteerde steriele diëten. Met behulp van PCR werd slechts één Wolbachia-stam gedetecteerd in elke instar van axenische D. antiqua .

Kweek van Axenic Delia antiqua met halfgefermenteerde steriele diëten

Dit protocol schetst de belangrijkste stappen voor het verkrijgen van kiemvrije (GF) visembryo's en het onderhouden ervan vanaf de larven tot het juveniele stadium, inclusief bemonstering en het detecteren van hun steriele status. Het gebruik van GF-modellen met infectie is belangrijk voor het begrijpen van de rol van microben in de gezondheid van de gastheer.

Generatie, onderhoud en identificatie van kiemvrije zebravismodellen van larven tot juveniele stadia

Het protocol presenteert twee methodologieën om de isolatie van anaërobe darmbacteriën te verbeteren. De eerste richt zich op de isolatie van een breed scala aan bacteriën met behulp van verschillende kweekmedia. De tweede richt zich op de kweekstappen van een specifieke microbiële groep, die mogelijk myo-inositol assimileert, om de ecologische betekenis ervan volledig te begrijpen.

Strategieën om de teelt van anaërobe bacteriën uit het maagdarmkanaal van kip te verbeteren

Dit protocol beschrijft een cystic fibrosis (CF) longrelevant vier-species polymicrobieel biofilmmodel dat kan worden gebruikt om de impact van bacteriële interacties tussen soorten te onderzoeken.

Het kweken van een cystische fibrose-relevante polymicrobiële biofilm om fenotypes van de gemeenschap te onderzoeken

Hier beschrijven we de structuur en operationele procedures, inclusief microbiële inperkingsmaatregelen van een faciliteit voor "Wilding-muizen" met behulp van bloedafname voor immunofenotypering als voorbeeld.

Operationele en biocontainmentprocedures van een faciliteit voor laboratoriummuizen met een natuurlijk microbioom: immunofenotyperingsprocedure

Dit protocol beschrijft de beste praktijken voor kiemvrije overdracht van muizen naar en huisvesting in experimentele isolatoren met één kooi (isocages) met behoud van steriele omstandigheden. Methoden voor fecale transplantatie in kiemvrije muizen en het verzamelen van levensvatbare bacteriën van deze darm "gehumaniseerde" muizen voor verdere toepassingen worden besproken.

Voorbereiding en onderhoud van Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment voor menselijke fecale transplantatie in kiemvrije muizen

Deze methode toont het kippenembryo als een eenvoudig en kosteneffectief in vivo model om de bacteriële ziekteverwekker L. monocytogenes te doen herleven uit een levensvatbare maar niet-kweekbare (VBNC) toestand en met mogelijke verdere toepassingen bij het begrijpen van bacteriële kiemwerkingsmechanismen.

Kippenembryo als een in vivo model om levensvatbare maar niet-kweekbare pathogenen te doen herleven

Ontdek een methode om kiemvrije vleeskuikens te produceren uit commerciële Ross PM3-eieren voor microbiotastudies. Deze techniek maakt onderzoek naar microbiota-invloeden op vogelfysiologie en gezondheid mogelijk.

Productie van kiemvrije snelgroeiende vleeskuikens uit een commerciële lijn voor microbiotastudies

Meer video's verkennen