Name: Orthotopische transplantatie van borsttumoren als preklinische modellen voor borstkanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-18T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Leer orthotopische transplantatie van borsttumorfragmenten in de mammaire vetkussen voor preklinisch borstkankeronderzoek. Deze minimaal invasieve techniek maakt evaluatie van meerdere therapieën mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health (R37CA228304 en R01HL146642 aan Xi Chen, CA148761 aan Jeffrey M. Rosen), het Amerikaanse ministerie van Defensie (W81XWH-19-1-0524 aan Xi Chen, W81XWH-19-1-0035 aan Xiangdong Lv), American Cancer Society (RSG-18-181-01-TBE aan Xi Chen) en cancer prevention and research institute of Texas (RR150009 CPRIT Scholar in Cancer Research Award aan Xi Chen), de Patient-Derived Xenograft and Advanced In Vivo Models Core aan het Baylor College of Medicine (financiering van RP170691 CPRIT Core Facility Award en NCI-CA125123 P30 Cancer Center Support Grant).

Alle protocollen waarbij dieren worden gebruikt, zijn beoordeeld en goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). De tumorfragmenten, ongeveer 1−2 mm3 groot, zijn afkomstig van venijnig bevroren voorraad verkregen uit de Patient-Derived Xenograft en Advanced In Vivo Models Core aan het Baylor College of Medicine.
1. Bereiding van gecryopreserveerde borsttumorfragmenten voor transplantatie
<ol><li>Breng het cryoviale met tumorfragmenten over van vloeibare stikstof naar een waterbad van 37 °C.</li>
	<li>Roer het cryoviaal met af en toe een zachte beweging tijdens het ontdooien.</li>
	<li>Nadat het weefsel is ontdooid, neemt u het cryoviale uit het waterbad en mengt u door zachte inversie.</li>
	<li>Droog de buitenkant van het cryoviaal af en spuit met 70% ethanol. Breng het over naar een bioveiligheidskap.</li>
	<li>Breng de ontdooide tumorweefsels over in een conische buis van 15 ml gevuld met 10 ml koud Dulbecco's gemodificeerd Eagle-medium (DMEM). Meng goed door de buis om te keren. Laat de weefselfragmenten naar de bodem van de buis zakken.</li>
	<li>Adem het supernatant op en resuspend in 10 ml koude DMEM. Meng goed door de buis om te keren. Laat de weefselfragmenten naar de bodem van de buis zakken.</li>
	<li>Adem het supernatant op en resuspend in 10 ml koude DMEM. Plaats de tube op ijs. OPMERKING: Het weefsel is klaar voor transplantatie.</li>
</ol>2. Verzameling en voorbereiding van verse borsttumor voor transplantatie
<ol><li>Euthanaseer de borsttumordragende muis. OPMERKING: PDX-gastheer kan SCID / Beige, NSG of NRG vrouwelijke muizen zijn, terwijl in de huidige studie vrouwelijke Balb / c-muizen van 3−5 weken worden gebruikt.</li>
	<li>Spuit het tumorgebied van de geëuthanaseerde muis met 70% ethanol. OPMERKING: Probeer haar met het tumormonster te vermijden dat besmetting van tumorfragmenten voor cryostorage of transplantatie kan veroorzaken.</li>
	<li>Met gekartelde tang om de huid rond de tumor te knijpen en op te tillen, gebruikt u een schaar om een korte incisie te maken.</li>
	<li>Scheid de tumor van de huid met de schaar om de hele tumor van de gastheermuis te ontleden. Snijd eventueel achtergebleven vetmatweefsel van de muis af van het buitenoppervlak van de tumor. Plaats de tumor in een conische buis van 15 ml gevuld met 5 ml koude DMEM. OPMERKING: Gebruik tumoren met een maximale diameter van 1 cm, omdat grotere tumoren waarschijnlijk necrotische kernen bevatten.</li>
	<li>Breng in een bioveiligheidskap de ontleedde tumor over naar een steriel petrischaaltje van 10 cm met voldoende DMEM om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Snijd de tumor in 1 mm3 fragmenten met scalpel of mes onder aseptische omstandigheden. OPMERKING: Het scalpel of mes moet gedurende ten minste 20 minuten voorafgaand aan gebruik worden blootgesteld aan UV in de bioveiligheidskap.</li>
	<li>Breng de tumorfragmenten over naar een conische buis van 15 ml gevuld met koude DMEM. Plaats de tube op ijs. OPMERKING: Het weefsel is klaar voor transplantatie. De ontleedde tumorfragmenten uit stap 2.4 kunnen worden, 1) vastgevroren in vloeibare stikstof voor eiwit- en RNA/ DNA-extractie, 2) gefixeerd met 4% paraformaldehyde (PFA) of 10% neutraal gebufferd formaline (NBF) voor hematoxyline en eosine (H & E) en immunohistochemie (IHC) analyse, of 3) gecryopreserveerd in 1,25 ml vriesmedium (10% dimethylsulfoxide [DMSO], 40% DMEM en 50% foetaal runderserum [FBS]) door een nacht langzaam in te vriezen in een vriezer van -80 °C en vervolgens over te gaan op vloeibare stikstof voor langdurige opslag.</li>
</ol>3. Bereid het dier voor op een operatie
<ol><li>Voor pijnbestrijding bij dieren, injecteer subcutaan buprenorfine aanhoudende afgifte 60 minuten voorafgaand aan de operatie in een dosis van 1 mg / kg of volg de richtlijn van de instelling voor 72 uur pijnstillende dekking.</li>
	<li>Stel de chirurgische suite in volgens de institutionele richtlijnen voor aseptische operaties.</li>
	<li>Anesthetiseer een 4 weken oud vrouwtje in een inductiekamer van het isofluraan anesthesieapparaat met een snelheid van ~ 11,25 ml / h. Breng de muis over naar het ingreepgebied, op de steriele (siliconenrubberen) operatiekaart, waar hij via een klein gezichtsmasker anesthesie krijgt. Leg de muis op zijn rug en plak de poten in hun natuurlijke posities vast. OPMERKING: SCID/Beige, NSG of NRG worden gebruikt voor PDX en Balb/c wordt gebruikt voor GEMM-transplantatiemodellen.</li>
	<li>Breng oogheelkundige zalf aan op de ogen om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Bevestig het juiste niveau van sedatie door teen te knijpen. OPMERKING: Geen enkele reactie/beweging van het dier geeft aan dat het dier voldoende verdoofd is en klaar is voor een operatie.</li>
	<li>Scheer de muis op de onderbuik, vooral het gebied rond de vierde tepel waar de operatie zal plaatsvinden.</li>
	<li>Met behulp van een cirkelvormige beweging en beginnend in het midden van de operatieplaats, werk naar de buitenranden met povidon-jodium chirurgische scrub, gevolgd door verwijdering van povidon-jodium met een 70% isopropyl ethanol pad. Herhaal dit nog twee keer.</li>
</ol>4. Transplantatie van tumorfragmenten in het vierde (inguinale) borstvetkussen
<ol><li>Gebruik een steriel chirurgisch gordijn om het lichaam van het dier te bedekken, behalve de incisieplaats. OPMERKING: Bevestig het juiste niveau van sedatie door teen te knijpen voordat u de incisie maakt.</li>
	<li>Met behulp van gekartelde tang knijp en til de huid op bij de # 4 tepel.</li>
	<li>Gebruik met de stompe kant naar beneden een schaar om een korte (ongeveer 1 cm) parasagittale incisie te maken, van de # 4 tepel naar het hoofd.</li>
	<li>Gebruik een applicator met katoenen punt om de huid te scheiden van het peritoneum aan de mediale kant van de incisie.</li>
	<li>Terwijl u de laterale kant van de incisie vasthoudt, pelt u voorzichtig het # 4 borstvetkussen van de huid met hetzelfde wattenstaafje.</li>
	<li>Zodra het vetkussen is gescheiden, pint u de huid vast met een naald van 27 G dicht bij het lichaam van het dier.</li>
	<li>Als het experimenteel noodzakelijk is om het vetkussen van endogene muismamapitheel te verwijderen, voert u de volgende stappen uit.<ol>
<li>Gebruik de gekartelde tang voorzichtig om het vetkussen van het lichaam af te strekken en de inguinale lymfeklier te lokaliseren, die zich onder de snijpunten van de belangrijkste bloedvaten in de klier bevindt (dicht bij waar de tang de klier zal vasthouden).</li>
		<li>Cauteriseer de bloedvaten zorgvuldig mediaal naar de lymfeklier en het vet dat de vierde en vijfde vetkussens samenvoegt, wat een driehoekig gebied vormt. OPMERKING: Schakel de zuurstofbron voor deze stap tijdelijk uit.</li>
		<li>Knip met behulp van een micro-ontleedschaar elk dichtgeschroeid vat één voor één (om ervoor te zorgen dat er na elke snede geen bloeding is) totdat het gedeelte van het vetkussen dat de lymfeklier bevat, is verwijderd.</li>
		<li>Gooi het "opgeruimde" vetkussenweefsel weg.</li>
	</ol></li>
	<li>Houd het vierde borstvetkussen vast met een stompe scheidings tang. Steek met de andere hand de gesloten punt van de schuine fijne tang in het midden van het vetkussen boven het resterende vat en dicht bij de wand van het peritoneum. Open langzaam de tang om een klein zakje te maken. Verwijder de schuine fijne tang uit het vetkussen.</li>
	<li>Gebruik de schuine fijne tang om een stuk tumorfragment te nemen en in de zak te steken.</li>
	<li>Open langzaam de uiteinden van de tang om het tumorfragment in de vetkussenzak vrij te maken.</li>
	<li>Trek de schuine fijne tang voorzichtig terug. OPMERKING: Kijk naar de zak om te bevestigen dat het tumorfragment in de zak van het borstvetkussen blijft bij het terugtrekken van de tang. Tumoren kunnen worden geïmplanteerd in beide contralaterale vetkussens wanneer overtollig tumorweefsel nodig is voor experimenten of bankieren. Dieren met dubbelzijdige transplantaties worden niet aanbevolen voor behandelingsstudies vanwege bekende interacties tussen contralaterale tumoren. Als alternatief kan een trocar-apparaat worden gebruikt voor het implantatieproces.</li>
	<li>Begin vanaf de basis van de incisie en verzamel de huid aan elke kant met behulp van de klauw en de gekartelde tang. Breng de twee zijden samen en til iets op om de huid voor te bereiden op het aanbrengen van de wondclip. Maak de randen van de incisie los met de klauw tang en knijp de randen samen om een doorlopend oppervlak aan de bovenkant te vormen.</li>
	<li>Houd de twee zijden bij elkaar met een gekartelde tang en gebruik de wondclipapplicator om een wondclip in het midden van de incisie te plaatsen. Breng indien nodig weefsellijm aan op de uiteinden van de incisie om ze gesloten en beveiligd te houden.</li>
	<li>Plaats het dier in een schone kooi die zich op een verwarmend oppervlak bevindt. Controleer op bloedingen, tekenen van dehiscentie en pijn tijdens de postoperatieve periode. Het dier moet binnen enkele minuten na de oproergie op en in beweging zijn.</li>
	<li>Let goed op de incisieplaats en de algehele gezondheid van de dieren gedurende ten minste 3 dagen na de operatie. Volg de institutionele richtlijnen voor pijnbestrijding.</li>
	<li>Reinig de chirurgische hulpmiddelen gedurende 10 s in een glazen kralen sterilisator voordat u doorgaat met de volgende transplantatie. Wacht tot het gereedschap is afgekoeld voor gebruik.</li>
	<li>Herhaal stap 4.1−4.15 totdat alle muizen zijn getransplanteerd. OPMERKING: Oestrogeensuppletie is vereist voor ER+ tumoren, die kunnen worden geleverd via water of pellets met langzame afgifte59.</li>
</ol>5. Monitoring van tumorgroei als reactie op medicamenteuze behandeling
OPMERKING: Palpabele tumoren van gevestigde transplanteerbare PDX's en p53-nul tumoren duurt tussen 2 weken en 8 weken om zich te ontwikkelen na de operatie, afhankelijk van de intrinsieke tumorgroeisnelheden.
<ol><li>Meet tumoren in twee dimensies met behulp van remklauwen twee keer per week. Bereken het volume met behulp van de formule: Tumorvolume (mm3) = B2 x L/2 waarbij W breedte is en L de lengte van de tumor.</li>
	<li>Start de medicamenteuze behandeling wanneer het tumorvolume 150−300 mm bereikt3. OPMERKING: Afhankelijk van de eigenschap van de geneesmiddelen kan orale maagsonde of intraperitoneale injectie worden gebruikt om de geneesmiddelen af te leveren.</li>
	<li>Verzamel tumormonsters en voer IHC-kleuring60,eiwit- en RNA / DNA-isolatie en immuunfenotypering61 uit voor verschillende doeleinden. Verzamel bloed en voer immuunfenotypering uit of gebruik het voor farmacokinetische / farmacodynamische studies.</li>
</ol>

MTL is de oprichter van een beperkte partner in StemMed, Ltd. en oprichter en manager in StemMed Holdings, de algemene partner. MTL is een oprichter van en een aandeelhouder in Tvardi Therapeutics, Inc. LED is een gecompenseerde werknemer van StemMed, Ltd.

Om variaties in tumorgroei tussen dieren te verminderen, is het van cruciaal belang om het tumorweefsel in 1 mm3-fragmenten te snijden voor transplantatie. Modellen die zacht weefsel kweken zijn moeilijker om mee te werken en de tumorfragmenten moeten iets groter worden gesneden (1−2 mm3). Wanneer u het weefsel in de borstvetzak plaatst, moet u ervoor zorgen dat het weefsel niet in meerdere stukken wordt gesplitst, omdat dit zal resulteren in meerdere kleine tumoren of vreemd gevormde tumoren.
<...

De meeste sterfgevallen door borstkanker kunnen worden toegeschreven aan terugkerende ziekten die resistent zijn tegen conventionele therapieën1,2. De inter- en intratumorale heterogeniteit van borstkankers dragen bij aan therapieresistentie. Bovendien kan tumorheterogeniteit van de juiste prognose beïnvloeden en het ziektebeheeruitdagen 3,4. Identificatie van voorspellende biomarkers van respons zal de klinische resultaten van patiënten met borstkanker aanzienlijk verbeteren. Hoewel de meeste soorten borstkanker immunologisch 'koude' tumoren zijn die waarschijnlijk niet reageren op immunotherapie, zijn immuuncheckpointremmers veelbelovend gebleken in klinische onderzoeken2,5. Een fase III-studie toonde bijvoorbeeld een verbeterde ziektevrije overleving (DFS) en voorlopig bewijs dat atezolizumab (monoklonaal antilichaam tegen PD-L1) in combinatie met nab-paclitaxel een algemeen overlevingsvoordeel kan bieden in vergelijking met nab-paclitaxel alleen in tumoren met ≥1% PD-L1-kleuring6. De ontwikkeling van therapieën die borsttumoren sensibiliseren voor immunotherapie zal een revolutie teweegbrengen in de behandelingsregimes.
Preklinische modellen die de heterogeniteit van menselijke borstkanker en medicijnrespons getrouw samenvatten, zijn van cruciaal belang om tumorbiologie te bestuderen en potentiële biomarkers voor gerichte therapie te identificeren. Onsterfelijke cellijnen worden veel gebruikt voor borstkankeronderzoek, omdat deze cellijnen gemakkelijk te kweken en genetisch te modificeren zijn om moleculaire mechanismen te bestuderen. Vanwege de selectieve druk van langdurige celkweek in vitro, kan genetische drift echter in de loop van de tijd optreden en kunnen borstkankercellijnen cellijnspecifieke genomische veranderingen dragen die verschillen van aberraties in primaire borsttumoren7,8,9.
Patiënt-afgeleide xenograft (PDX) tumorbrokken zijn in staat om de heterogeniteit van menselijke ziekten samen te vatten en zijn histologisch en immunohistochemisch vergelijkbaar met de tumor van oorsprong10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22 ,23,24,25,26,27,28,29. Belangrijk is dat PDX-modellen fenotypisch stabiel zijn over meerdere transplantaties, zoals blijkt uit histologie, transcriptoom, proteoom en genomische analyse10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22 ,23,24,25,26,27,28,29. PDX-modellen tonen behandelingsresponsen die vergelijkbaar zijn met die waargenomen klinisch10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24, 25,26,27,28,29. PDX-modellen voor oestrogeenreceptorpositief (ER+),progesteronreceptorpositief (PR+),epidermale groeifactor 2 positief (ERBB2+, HER2+) en triple negatieve borstkanker (TNBC) PDX-modellen zijn vastgesteld en bieden een uitstekend platform om endocriene, chemo- en gerichte therapieën te testen. Een belangrijk voorbehoud van PDX-modellen op dit moment is echter het ontbreken van een functioneel immuunsysteem in de muis.
De genetisch gemanipuleerde muismodellen (GEMM), zoals Trp53 homozygote null, cMyc, Wnt1, PyMT of Her2 overexpressiemodellen, maken de studie van spontane tumorinitiatie, progressie en metastase mogelijk in de context van een intact immuunsysteem. De tumorlatentie is echter lang, waardoor het moeilijk is om preklinische onderzoeken uit te voeren met meerdere armen30,31. GEMM kan echter worden getransplanteerd naar syngenetische gastheren om voldoende tumoren te genereren die menselijke tumoren nauw samenvatten32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45, 46,47,48,49,50,51,52,53,54,55. Het borstepitheel van een p53-nul BALB / c-muis werd bijvoorbeeld getransplanteerd in de geklaarde vetkussens van syngenetische wild-type ontvangende muizen om primaire tumoren te vormen, die verder kunnen worden getransplanteerd in syngenetische gastheren56,57. De p53-nul tumoren recapituleerden verschillende subtypes van menselijke tumoren.
De combinatie van PDX-modellen en transplanteerbare GEMM biedt waardevolle preklinische hulpmiddelen om de biologie van borsttumoren, geneesmiddelrespons en antitumorimmuniteit te onderzoeken. In het huidige protocol wordt een methode van orthotopische transplantatie van PDX- en GEMM-tumorfragmenten in de borstvetmat van de muis beschreven. Deze modellen zijn vatbaar voor seriële passages en behouden meestal een stabiel fenotype. Om het risico op genetische drift of verlies van heterogeniteit over passages in de loop van de tijd te verminderen, worden meerdere weefselfragmenten bij elke passage gecryopreserveerd voor daaropvolgende transplantatie in het geval dat biologische of morfologische veranderingen in de loop van de tijd worden waargenomen29,58.

<table><tbody><tr><td>1 mg/mL Buprenorfine-SR</td><td>ZooPharm (via BCM dierenartsen)</td><td></td><td>Steriele</td></tr><tr><td>26G spuit</td><td>BD</td><td>148232E</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Betadine Scrub</td><td>Fisher</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>VWR International Laboratory</td><td>89031-272</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Fisher</td><td>MT 10-013-CM</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Elektrisch scheerapparaat</td><td>Oster</td><td>78005-050</td><td></td></tr><tr><td>Glaskralen sterilisator (Germinator)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>DS-401</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmische smeermiddel zalf</td><td>Akorn Animal Health</td><td>17478-062-35</td><td></td></tr><tr><td>Micro dissectief pincet; Gekarteld, hoekig (regulier pincet)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5139</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Micro dissectief veerschaar (vetkussen snijder)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5658BT</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Micro pincet (weefselplaatsingstang)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5069</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Petrischaal</td><td>Fisher</td><td>08-757- 100D</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Steriele doek</td><td>Sai Infusion Technology</td><td>PSS-SD1</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Operatie schaar</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5960</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Weefseltang (klauwtang)</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5158</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Wondclip applicator</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Wondclip verwijderaar</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804-15</td><td>Steriele</td></tr><tr><td>Wondclips</td><td>BD Autoclip Wound System</td><td>01-804-5</td><td>Steriele</td></tr></tbody></table>

orthotopische transplantatie van borsttumoren als preklinische modellen voor borstkanker

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preklinische modellen die tumorheterogeniteit en therapeutische respons getrouw samenvatten, zijn van cruciaal belang voor translationeel borstkankeronderzoek. Onsterfelijke cellijnen zijn gemakkelijk te kweken en genetisch te modificeren om moleculaire mechanismen te bestuderen, maar de selectieve druk van celkweek leidt vaak tot genetische en epigenetische veranderingen in de loop van de tijd. Patient-derived xenograft (PDX) modellen getrouw de heterogeniteit en geneesmiddelrespons van menselijke borsttumoren samenvatten. PDX-modellen vertonen een relatief korte latentie na orthotopische transplantatie die het onderzoek naar de biologie van borsttumoren en de respons op geneesmiddelen vergemakkelijkt. De transplanteerbare genetisch gemanipuleerde muismodellen maken de studie van borsttumorimmuniteit mogelijk. Het huidige protocol beschrijft de methode om borsttumorfragmenten orthotopisch in het borstvetkussen te transplanteren, gevolgd door medicamenteuze behandelingen. Deze preklinische modellen bieden waardevolle benaderingen voor het onderzoeken van borsttumorbiologie, medicijnrespons, ontdekking van biomarkers en mechanismen van medicijnresistentie.

Figuur 1 toont de apparatuur (Figuur 1A) en de belangrijkste procedures (Figuur 1B) van orthotopische transplantatie. Figuur 2 toont de karakterisering van een getransplanteerde PDX-tumor (MC1). Tumorfragmenten (1 mm3) van het MC1-model werden getransplanteerd in het # 4 vetkussen van SCID / Beige-muizen. Een maand later berei...

Patient-derived xenograft (PDX) modellen en transplanteerbare genetisch gemanipuleerde muismodellen getrouw de menselijke ziekte samenvatten en zijn voorkeursmodellen voor fundamenteel en translationeel borstkankeronderzoek. Hier wordt een methode beschreven om borsttumorfragmenten orthotopisch in het borstvetkussen te transplanteren om tumorbiologie te bestuderen en de respons van geneesmiddelen te evalueren.

Orthotopische transplantatie van borsttumoren als preklinische modellen voor borstkanker

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Dit protocol beschrijft de orthotopische transplantatie van borsttumorfragmenten in de borstvetkussen en biedt waardevolle benaderingen voor het onderzoeken van tumorbiologie, medicijnreacties en het mechanisme van medicijnresistentie. Deze techniek is minimaal invasief en zorgt voor een juiste plaatsing van de tumorweefsels in het borstvetkussen, toegankelijkheid voor het tellen per meting en het behoud van de mobiliteit van het dier. Deze techniek maakt de transplantatie van tientallen dieren mogelijk vanuit een enkel patiëntafgeleide inter-graft, voor de evaluatie van meerdere kandidaat-kankertherapieën gelijktijdig in een preklinisch trialformaat.Deze methode is superieur aan subcutane weefselimplantatie voor het opzetten van patiëntafgeleidde inter-graft modellen, en kan ook worden gebruikt wanneer orthotopische implantaten niet mogelijk zijn. De moeilijkste dingen zijn het toepassen van de juiste hoeveelheid druk om het vetkussen van de lichaamswand te pellen en het maken van de weefselzak. Visualisatie van het pellen van het vetkussen en de gebarsten anatomische plaatsing van het weefselfragment, zal u helpen een succesvolle uitvoering van de procedure te garanderen.Om cryob

orthotopic-transplantation-breast-tumors-as-preclinical-models-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

De video toont de orthotopische inentingstechniek voor borstkanker in een muismodel. Deze techniek produceert een hoge tumorigenesesnelheid met minder variabiliteit in tumorgrootte en vorm in vergelijking met subcutane of niet-chirurgische injectie.

Orthotopische injectie: weefselspecifieke kankercellen implanteren in een volwassen muis

Kanker is een complexe ziekte die wordt beïnvloed door het weefsel rondom de tumor en lokale pro- en anti-inflammatoire mediatoren. Daarom kan orthotroop injectie modellen plaats subcutane modellen nuttig om de progressie van kanker te bestuderen op een wijze die beter nabootst humane pathologie.

Orthotopische Injectie van borstkankercellen in de uiervet Pad van Muizen tumorgroei te bestuderen.

Een orthotope borstkanker primaire tumor model en chirurgische verwijdering van de primaire tumor de muis het leven uit te breiden tot spontane metastase genereren beschreven. De tumorgroei en progressie worden gecontroleerd en gekwantificeerd luciferase fluorescentiebeeldvorming.

Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker

Prostaatkanker is de op een na meest voorkomende oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen in de Verenigde Staten. Een orthotopisch kankermodel biedt een nuttige benadering om de biologie van prostaatkanker te begrijpen en de werkzaamheid van therapeutische regimes te evalueren. Dit protocol beschrijft gedetailleerde stappen die nodig zijn om een orthotopisch muismodel voor prostaatkanker te vestigen.

Pre-klinische Orthotope muizenmodel van Human prostaatkanker

Wij introduceren een lymfkliertest orthotopic borst kanker en radicale mastectomie model met bioluminescentie technologie te kwantificeren van de last van de tumor om na te bootsen menselijke borst kanker progressie.

Het genereren van een lymfkliertest Orthotopic uitgezaaide borst kanker Model en het uitvoeren van lymfkliertest radicale mastectomie

Hier presenteren we een protocol om het implantaat van borstkankercellen in de borstklier vet pad in een eenvoudige, minder invasief, en gemakkelijk te bedienen manier, en deze orthotopic borst kanker muismodel met een juiste borstklier vet pad omgeving kan worden gebruikt voor het onderzoeken van verschillende aspecten van kanker.

Orthotopic injectie van borstkankercellen in de borstklier vet Pad muizen

Dit werk presets een geavanceerd protocol om nauwkeurig te beoordelen tumor laden door detectie van groene fluorescerende eiwitten en bioluminescentie signalen, alsmede de integratie van kwantitatieve moleculaire detectie techniek.

Studeren Triple Negatieve Borstkanker met behulp van Orthotopische Borstkanker Model

Botmetastasemodellen ontwikkelen metastase niet uniform of met een 100% incidentie. Directe intra-osseuze tumorcelinjectie kan leiden tot embolisatie van de long. We presenteren onze techniek voor het modelleren van primaire bottumoren en botmetastase met behulp van solide tumortransplantaatimplantatie in bot, wat leidt tot reproduceerbare transplantatie en groei.

Modellering van primaire bottumoren en botmetastase met implantatie van solide tumortransplantaten in bot

Het huidige protocol beschrijft intratibia osteosarcoom celinjectie om muismodellen te genereren met orthotopisch osteosarcoom en pulmonale metastase laesies.

Intratibiale osteosarcoomcelinjectie om orthotopisch osteosarcoom en longmetastase muismodellen te genereren

Het manuscript beschrijft een methodologie voor het opzetten en longitudinaal monitoren van spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumoren, die vatbaar is voor interventie in alle stadia van de metastatische cascade.

In vivo Beeldvorming om spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumorcellen te meten

Dit protocol beschrijft een efficiënte, niet-chirurgische methode voor de orthotope implantatie van xenotransplantaten afkomstig van borstkankerpatiënten bij muizen. De techniek omvat enzymatische tumordissociatie gevolgd door directe injectie in de borstvetkussens, waardoor implantatie met hoge doorvoer mogelijk is. Uitgebreide validatie zorgt voor modelgetrouwheid en maakt rigoureuze studies in verschillende subtypes van borstkanker mogelijk.

High-throughput dissociatie en orthotope implantatie van borstkanker Patiënt-afgeleide xenotransplantaten

Leer orthotopische transplantatie van borsttumorfragmenten in de mammaire vetkussen voor preklinisch borstkankeronderzoek. Deze minimaal invasieve techniek maakt evaluatie van meerdere therapieën mogelijk.

Orthotopische transplantatie van borsttumoren als preklinische modellen voor borstkanker

Meer video's verkennen