Name: Pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-20T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Leer een staartaderinjectiemodel voor longmetastase-analyse met digitale beeldanalyse. Deze methode kwantificeert tumormetastasen nauwkeurig en reproduceerbaar in muizen voor kankeronderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Representatieve gegevens werden gefinancierd door het National Cancer Institute (K22CA218549 tot S.T.S). Naast hun hulp bij het ontwikkelen van de uitgebreide analysemethode die hierin wordt gerapporteerd, bedanken we de Ohio State University Comprehensive Cancer Center Comparative Pathology and Mouse Phenotyping Shared Resource (Directeur - Krista La Perle, DVM, PhD) voor histologie en immunohistochemiediensten en de Pathology Imaging Core voor de ontwikkeling en analyse van algoritmen.

Het gebruik van dieren volgde de voorschriften van de University Laboratory Animal Resources (ULAR) onder het OSU Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) - goedgekeurd protocol 2007A0120-R4 (PI: Dr. Gina Sizemore).
1. Staartader injectie van borstkankercellen
<ol><li>Bereiding van cellen en spuit voor injectie<ol>
<li>Plaats een passend aantal cellen op basis van het aantal muizen en de te gebruiken celconcentratie. OPMERKING: Het aantal geïnjecteerde cellen en de tijd tot de ontwikkeling van metastasen zijn afhankelijk van de gebruikte cellijn en moeten worden geoptimaliseerd. In deze demonstratie worden 1 x 106 MDA-MB-231 cellen intraveneus geïnjecteerd in NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) muizen, en macroscopische longlaesies worden uiterlijk 24 dagen na injectie waargenomen. Voor de MVT1 murine borsttumor cellijn17 worden 3 x 106 cellen geïnjecteerd in immuun-competente FVB/N muizen met talrijke longmetastasen waargenomen door 14 dagen22,23.</li>
		<li>Aanzuigmedium en spoelcelplaten met 1x PBS. Trypsiniseer cellen in minimaal volume, voeg het juiste volume media toe en tel cellen met behulp van een hematocytometer of een andere voorkeursmethode. Trypan blauw (0,4%) of andere levende / dode cel kleurstoffen kunnen worden gebruikt om levensvatbare cel tellingen te bepalen.</li>
		<li>Pelletcellen door gedurende 5 min op 180 x g te draaien.</li>
		<li>Resuspend het juiste aantal cellen in steriele 1x PBS, zodat een volume van 100 μL per muis wordt geïnjecteerd. Houd celsuspensie op ijs om de levensvatbaarheid te behouden.</li>
		<li>Vóór de injectie moet u de cellen grondig resuspenderen met een pipet van 200 μL of 1 ml om klonteren te voorkomen. Zuig 100 μL op in een insulinespuit van 28 G (zie Materiaaltabel).</li>
		<li>Verwijder eventuele luchtbellen door de spuit verticaal te houden, op de spuit te tikken en de zuiger langzaam aan te passen. Injectie van luchtbellen in de ader zal waarschijnlijk een lucht / gasembolie veroorzaken die fataal kan zijn.</li>
	</ol></li>
	<li>Laterale staartader injectie OPMERKING: Voor experimentele borstkankermetastasetests worden injecties uitgevoerd op > 6 weken oude vrouwelijke muizen.<ol>
<li>Hanteer de muis bij de staart en schuif het dier in een buis met sleuf/bevestigingsinrichting van een geschikte grootte (zie de tabel met materialen voor de gebruikte beveiligingsinrichting).</li>
		<li>Plaats het pluggedeelte van het beveiligingssysteem en plaats de muis op zijn kant zodat de laterale staartader gemakkelijk te zien is. De muis heeft een ventrale slagader in lijn met de genitaliën, een dorsale ader en twee laterale caudale aderen.</li>
		<li>Reinig het oppervlak van de staart van de muis met een aseptisch doekje. Pak de staart tussen wijsvinger en duim met niet-dominante hand en breng lichte spanning aan.</li>
		<li>Begin bij het distale deel van de staart en steek de naald parallel aan de ader in met het uiteinde.</li>
		<li>Indien toegestaan, sluit u de naald voorzichtig af en buigt u deze in een hoek van 20-30°. Een eenhandige benadering of naald recapping-apparaat wordt ten zeerste aanbevolen. OPMERKING: Het is niet nodig om te aspirateren, omdat dit ertoe kan leiden dat de ader instort. Er kan echter een kleine flits van bloed worden gezien wanneer deze voor het eerst wordt geplaatst. De naald zal soepel in de ader komen met de juiste plaatsing.</li>
		<li>Doseer langzaam het volledige volume in de ader. Er mag geen weerstand zijn wanneer de zuiger wordt ingedrukt.</li>
		<li>Als er weerstand wordt gevoeld, verwijder dan onmiddellijk de naald van de spuit. Indien nodig, breng de naald opnieuw in (idealiter niet meer dan 3 pogingen) die naar het proximale uiteinde van de staart of de tegengestelde laterale ader beweegt.</li>
		<li>Een klein volume bloed zal waarschijnlijk worden verplaatst na injectie. Oefen zachte druk uit met steriel gaas en veeg af met aseptisch doekje.</li>
		<li>Gooi de spuit onmiddellijk weg in de juiste naaldencontainer.</li>
		<li>Breng de muis terug naar een schone, geventileerde kooi en controleer op tekenen van nood.</li>
		<li>Controleer muizen 2-3x / wekelijks op tekenen van metastasevorming (moeizame ademhaling, gebogen houding, gewichtsverlies) en algemene nood. De tijd tot ontwikkeling van metastase zal afhangen van cellijn en muis stam.</li>
		<li>Bij gebruik van een in vivo levend dierbeeldvormingsapparaat, beeld muizen onmiddellijk na staartaderinjectie in om succesvolle injectie van cellen te bevestigen en tijd "nul" -gegevens te verkrijgen (specifieke details over in vivo bioluminescentiebeeldvorming zijn hierin niet opgenomen, maar worden beschreven door Yang et al.24).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Longweefselfixatie en analyse van gemetastaseerde longtumorbelasting
<ol><li>Longweefselinflatie om het structurele formaat van de longen voor histopathologie te behouden<ol>
<li>Nadat goedgekeurde euthanasieprocedures (bijv. koolstofdioxide bij 30 - 70% verplaatsing van het kamervolume / min) worden gevolgd, bevestigt u het muizenkarkas met pinnen aan een ontleedbord. Spray of breng 70% ethanol aan om de vacht van de muis uit de weg te houden tijdens de dissectie. OPMERKING: Kooldioxide-verstikking kan pulmonale bloeding veroorzaken als een verwachte achtergrondlaesie, vooral bij langzamere stroomsnelheden.</li>
		<li>Open de thorax met een middellijnincisie, verleng de incisie craniaal /caudaal door het peritoneum en snijd het diafragma weg door het xyfusische proces vast te pakken.</li>
		<li>Gebruik een aparte schaar om de messen niet te dof te maken, knip de ribben langs elke kant van het borstbeen en verwijder voorzichtig de ribbenkast, zodat er ruimte is voor de longen om uit te zetten.</li>
		<li>Isoleer de luchtpijp door submandibulaire speekselklieren en infrahyoïde spieren te verwijderen. Het plaatsen van pinnen aan weerszijden van de luchtpijp kan ongewenste bewegingen tijdens het inbrengen van de naald voorkomen.</li>
		<li>Vul een spuit van 26 G met 2-3 ml 10% neutraal gebufferde formaline en breng deze in de luchtpijp.</li>
		<li>Injecteer langzaam formaline en kijk uit voor de longen om uit te zetten (vereist meestal ~ 1,5 ml formaline).</li>
		<li>Zodra formaline uit de longen begint te lekken (vermijd overinflatie), knijp je de luchtpijp af met een tang, verwijder je de naald van de spuit en maak je het hele ademhalingsapparaat los. Plaats longen, hart, enz. direct in formaline, omdat extra trimmen van weefsel na fixatie kan worden gedaan.</li>
		<li>Volledige verwerking, inbedding, sectie van weefsel en hematoxyline en eosine (H & E) kleuring met behulp van standaardmethoden.</li>
	</ol></li>
	<li>Analyse van gemetastaseerde longtumorbelasting<ol>
<li>Scan H&E-gekleurde longsecties op een diascanner met hoge resolutie bij een vergroting van 40x (figuur 3).</li>
		<li>Importeer afbeeldingen in beeldanalysesoftware (bijv. Visiopharm Image Analysis) voor kwantificering van longmetastasen. OPMERKING: We raden nieuwe gebruikers aan om on-site of online training te krijgen om de beeldanalysesoftware te gebruiken. Tal van webinars zijn ook beschikbaar via de commerciële webpagina.</li>
		<li>Selecteer de Visiopharm 10118 H&E Lung Metastasis-app in de app-bibliotheek van de software. OPMERKING: Het doel van deze app is om longmetastasen op H & E-gekleurde dia's te labelen en te kwantificeren. Als onderdeel van de 10118 H&E Lung Metastasis App segmenteert de eerste beeldverwerkingsstap het longweefsel met de Tissue Detection App. De tweede beeldverwerkingsstap maakt gebruik van de Metastasis Detect App die de metastasen in het longweefsel identificeert. Metastasen worden geïdentificeerd via vorm samen met regio's die ofwel te misvormd, te rood of te schaars zijn om als metastasen te worden geïdentificeerd.</li>
		<li>Pas de parameters die vorm en spaarzaamheid definiëren aan om het beste bij representatieve afbeeldingen te passen. Gesegmenteerde gebieden van tumormetastasen en normaal longweefsel kunnen worden weergegeven met behulp van verschillende kleurlabels voor elk weefseltype. OPMERKING: In het geval dat de app metastasen niet nauwkeurig kan scheiden van normaal longweefsel, moet mogelijk een aangepaste app met behulp van het Visiopharm Decision Forest-programma worden geschreven zoals werd gedaan voor de experimenten (zie figuur 2 en figuur 3). Details voor het schrijven van een aangepast algoritme volgen hieronder. Ga anders verder met stap 2.2.9.</li>
		<li>Open het Decision Forest-programma, dat werkt door meerdere klassen [d.w.z. longweefsel (niet-neoplastisch), metastasen, rode bloedcellen, epitheel en / of witruimte] te trainen op een gewenst beeld. In figuur 2 zijn tumormetastasen blauw, normaal weefsel is groen en bronchiolair epitheel is geel. Ook bevinden rode bloedcellen zich in rode en luchtruimtes in roze.</li>
		<li>Volg de gevraagde reeks ja- of nee-vragen om elke klas op de juiste manier te trainen voor een afbeelding. De nauwkeurigheid van het algoritme bepaalt het aantal ja/nee-vragen. Voor de analyse is het aangepaste algoritme /app geschreven met een nauwkeurigheid die is ingesteld op 50 (bereik 0-100).</li>
		<li>Pas functies voor elke klasse aan door filters toe te passen om te verscherpen, vervagen, sorteren op vorm, enz. om de nauwkeurigheid van het algoritme / app te verbeteren. Visiopharm bekijkt elke klasse via een of meerdere lenzen die bekend staan als Functies. Functies wijzigen de manier waarop de klasse de afbeelding ziet om bepaalde kleuren of intensiteiten naar voren te brengen. OPMERKING: Voor het aangepaste algoritme worden metastasen van 8500 μm2 en hoger gelabeld en gemeten als metastasen. Dit verklaart de groottevariatie en metastasen die te klein zijn om te detecteren. Kleine misvormde gebieden en kleine gemetastaseerde gebieden onder 8500 μm2 werden opgenomen in de normale weefselkwantificering.</li>
		<li>Sla de gewijzigde instellingen van de app of het aangepaste algoritme op en pas het algoritme / de app vervolgens toe op een hele set of reeks H & E-gekleurde weefsels.</li>
		<li>Exporteer ten slotte alle uitvoervariabelen, waaronder de variabelen die in tabel 1 zijn vermeld. Oppervlakte in micron in het kwadraat (μm2) kan worden gekwantificeerd voor elk weefseltype en percentages worden afgeleid van het totale netto weefseloppervlak van het monster (d.w.z. totaal weefsel minus luchtoppervlak).</li>
		<li>Bij het maken van een aangepast algoritme, bekijk weefselmarkeringen in overleg met een veterinaire patholoog-gecertificeerd door het American College of Veterinary Pathologists om nauwkeurige metingen te garanderen en onderscheid te maken tussen weefseltypen.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nature Reviews: Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Cancer%22%5BJournal%5D)">Targeting metastasis.</a> Nature Reviews: Cancer. 16 (4), 201-218 (2016).</li>
<li>Gupta, G. P., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+metastasis%3A+building+a+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer metastasis: building a framework.</a> Cell. 127 (4), 679-695 (2006).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nature Medicine. 12 (8), 895-904 (2006).</li>
<li>Chaffer, C. L., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perspective+on+cancer+cell+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A perspective on cancer cell metastasis.</a> Science. 331 (6024), 1559-1564 (2011).</li>
<li>Eckhardt, B. L., Francis, P. A., Parker, B. S., Anderson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+discovery+and+development+of+therapies+for+metastatic+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Strategies for the discovery and development of therapies for metastatic breast cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 11 (6), 479-497 (2012).</li>
<li>Gomez-Cuadrado, L., Tracey, N., Ma, R., Qian, B., Brunton, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+metastasis%3A+progress+and+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Mouse models of metastasis: progress and prospects.</a> Disease Models & Mechanisms. 10 (9), 1061-1074 (2017).</li>
<li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Research. 8 (4), 212(2006).</li>
<li>Schoenenberger, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+c-myc+gene+expression+in+mammary+glands+of+transgenic+mice+induces+mammary+tumours+with+constitutive+milk+protein+gene+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Targeted c-myc gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammary tumours with constitutive milk protein gene transcription.</a> EMBO Journal. 7 (1), 169-175 (1988).</li>
<li>Nusse, R., Varmus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Many+tumors+induced+by+the+mouse+mammary+tumor+virus+contain+a+provirus+integrated+in+the+same+region+of+the+host+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Many tumors induced by the mouse mammary tumor virus contain a provirus integrated in the same region of the host genome.</a> Cell. 31 (1), 99-109 (1982).</li>
<li>Muller, W. J., Sinn, E., Pattengale, P. K., Wallace, R., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+induction+of+mammary+adenocarcinoma+in+transgenic+mice+bearing+the+activated+c-neu+oncogene%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Single-step induction of mammary adenocarcinoma in transgenic mice bearing the activated c-neu oncogene.</a> Cell. 54 (1), 105-115 (1988).</li>
<li>Lin, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+to+malignancy+in+the+polyoma+middle+T+oncoprotein+mouse+breast+cancer+model+provides+a+reliable+model+for+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Progression to malignancy in the polyoma middle T oncoprotein mouse breast cancer model provides a reliable model for human diseases.</a> American Journal of Pathology. 163 (5), 2113-2126 (2003).</li>
<li>Green, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+C3%281%29%2FSV40+T-antigen+transgenic+mouse+model+of+mammary+cancer%3A+ductal+epithelial+cell+targeting+with+multistage+progression+to+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The C3(1)/SV40 T-antigen transgenic mouse model of mammary cancer: ductal epithelial cell targeting with multistage progression to carcinoma.</a> Oncogene. 19 (1), 1020-1027 (2000).</li>
<li>Iorns, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mouse+model+for+the+study+of+human+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis.</a> PloS One. 7 (10), 47995(2012).</li>
<li>Kim, I. S., Baek, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Mouse models for breast cancer metastasis.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 394 (3), 443-447 (2010).</li>
<li>Mariotto, A. B., Etzioni, R., Hurlbert, M., Penberthy, L., Mayer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+Number+of+Women+Living+with+Metastatic+Breast+Cancer+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiology%2C+Biomarkers+and+Prevention%22%5BJournal%5D)">Estimation of the Number of Women Living with Metastatic Breast Cancer in the United States.</a> Cancer Epidemiology, Biomarkers and Prevention. 26 (6), 809-815 (2017).</li>
<li>Xiao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+and+survival+outcomes+in+patients+with+breast+cancer+and+lung+metastasis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Medicine%22%5BJournal%5D)">Risk factors and survival outcomes in patients with breast cancer and lung metastasis: a population-based study.</a> Cancer Medicine. 7 (3), 922-930 (2018).</li>
<li>Smid, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtypes+of+breast+cancer+show+preferential+site+of+relapse%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Subtypes of breast cancer show preferential site of relapse.</a> Cancer Research. 68 (9), 3108-3114 (2008).</li>
<li>Kennecke, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastatic+behavior+of+breast+cancer+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Metastatic behavior of breast cancer subtypes.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (20), 3271-3277 (2010).</li>
<li>Soni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+subtypes+predispose+the+site+of+distant+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Breast cancer subtypes predispose the site of distant metastases.</a> American Journal of Clinical Pathology. 143 (4), 471-478 (2015).</li>
<li>Leone, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+impact+of+metastatic+pattern+in+stage+IV+breast+cancer+at+initial+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Prognostic impact of metastatic pattern in stage IV breast cancer at initial diagnosis.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 161 (3), 537-548 (2017).</li>
<li>Pei, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant-cell+culture+of+primary+mammary+tumors+from+MMTV-c-Myc+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cellular+and+Developmental+Biology%3A+Animal%22%5BJournal%5D)">Explant-cell culture of primary mammary tumors from MMTV-c-Myc transgenic mice.</a> In Vitro Cellular and Developmental Biology: Animal. 40 (1-2), 14-21 (2004).</li>
<li>Mathsyaraja, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CSF1-ETS2-induced+microRNA+in+myeloid+cells+promote+metastatic+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">CSF1-ETS2-induced microRNA in myeloid cells promote metastatic tumor growth.</a> Oncogene. 34 (28), 3651-3661 (2015).</li>
<li>Yang, S., Zhang, J. J., Huang, X. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse models for tumor metastasis.</a> Methods in Molecular Biology. 928, 221-228 (2012).</li>
<li>La Perle, K. M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Pathologists%3A+Ultimate+Control+Freaks+Seeking+Validation%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Comparative Pathologists: Ultimate Control Freaks Seeking Validation.</a> Veterinary Pathology. 56 (1), 19-23 (2019).</li>
<li>Blomberg, O. S., Spagnuolo, L., de Visser, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+regulation+of+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+therapeutic+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Immune regulation of metastasis: mechanistic insights and therapeutic opportunities.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (10), (2018).</li>
<li>Gonzalez, H., Hagerling, C., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+immune+system+in+cancer%3A+from+tumor+initiation+to+metastatic+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Roles of the immune system in cancer: from tumor initiation to metastatic progression.</a> Genes and Development. 32 (19-20), 1267-1284 (2018).</li>
<li>Borowsky, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Syngeneic+mouse+mammary+carcinoma+cell+lines%3A+two+closely+related+cell+lines+with+divergent+metastatic+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Syngeneic mouse mammary carcinoma cell lines: two closely related cell lines with divergent metastatic behavior.</a> Clinical and Experimental Metastasis. 22 (1), 47-59 (2005).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunocompetent+mouse+allograft+models+for+development+of+therapies+to+target+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Immunocompetent mouse allograft models for development of therapies to target breast cancer metastasis.</a> Oncotarget. 8 (19), 30621-30643 (2017).</li>
<li>Resch, M., Neels, T., Tichy, A., Palme, R., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+assessment+of+tail-vein+injection+in+mice+using+a+modified+anaesthesia+induction+chamber+versus+a+common+restrainer+without+anaesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">Impact assessment of tail-vein injection in mice using a modified anaesthesia induction chamber versus a common restrainer without anaesthesia.</a> Laboratory Animals. 53 (2), 190-201 (2019).</li>
<li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Disease%22%5BJournal%5D)">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model.</a> Journal of Thoracic Disease. 5 (4), 385-392 (2013).</li>
<li>Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+tumor+cell+dissemination+patterns+in+preclinical+models+of+cancer+metastasis+using+flow+cytometry+and+laser+scanning+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry.</a> Cytometry Part A. 75 (4), 344-355 (2009).</li>
<li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).</li>
<li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804(2016).</li>
<li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Bone+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Bone Metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+orthotopic+mouse+models+of+patient-derived+breast+cancer+brain+metastases+by+a+modified+intracarotid+injection+method%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Improving orthotopic mouse models of patient-derived breast cancer brain metastases by a modified intracarotid injection method.</a> Scientific Reports. 9 (1), 622(2019).</li>
<li>Kodack, D. P., Askoxylakis, V., Ferraro, G. B., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+strategies+for+treating+brain+metastases+from+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Emerging strategies for treating brain metastases from breast cancer.</a> Cancer Cell. 27 (2), 163-175 (2015).</li>
<li>Brown, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+Stereology+Applications+for+the+Pathologist%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Practical Stereology Applications for the Pathologist.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 358-368 (2017).</li>
<li>Aeffner, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+Microscopy%2C+Image+Analysis%2C+and+Virtual+Slide+Repository%5BTitle%5D)+AND+%22Institute+for+Laboratory+Animal+Research+Journal%22%5BJournal%5D)">Digital Microscopy, Image Analysis, and Virtual Slide Repository.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 59 (1), 66-79 (2018).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Omdat onderzoekers intraveneuze injectie van tumorcellen blijven gebruiken als een experimenteel model voor metastase, ontbreken standaardpraktijken om de resulterende gemetastaseerde tumorbelasting te analyseren. In sommige gevallen kunnen significante verschillen in gemetastaseerde tumorbelasting bij manipulatie van bepaalde cellijnen en/of gebruik van chemische verbindingen macroscopisch worden waargenomen. In andere gevallen kunnen subtiele verschillen in gemetastaseerde zaaiing en groei echter over het hoofd worden ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61270/pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein">Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells</a>. The author list was updated.
The author list was updated from:
Katie A. Thies1,&#160;Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center 
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University
to:
Katie A. Thies1, Sarah Steck1, Sue E. Knoblaugh2, and Steven T. Sizemore1 
1Department of Radiation Oncology, Arthur G. James Comprehensive Cancer Center and Richard L. Solove Research Institute, The Ohio State University Medical Center 
2Department of Veterinary Biosciences, Comparative Pathology and Digital Imaging Shared Resource, The Ohio State University

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/61270/pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein">Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells</a>. The author list was updated.

Erratum: Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Ondanks het feit dat het een zeer complex en inefficiënt proces1 is, levert metastase een belangrijke bijdrage aan de morbiditeit en mortaliteit van kankerpatiënten2. In feite worden de meeste kankergerelateerde sterfgevallen toegeschreven aan gemetastaseerde verspreiding van ziekte3,4. Om tumorcellen met succes te laten metastaseren, moeten ze zich losmaken van de primaire plaats, binnendringen door aangrenzend stroma, intravaseren in de bloedcirculatie of lymfevaten, reizen naar het capillaire bed van een secundaire plaats, extravaseren in het secundaire weefsel en prolifereren of groeien om metastatische laesies te vormen5. Het gebruik van muismodellen is van cruciaal belang geweest voor het bevorderen van het begrip van de moleculaire mechanismen die verantwoordelijk zijn voor gemetastaseerd zaaien en groei6,7. Hierin richten we ons op borstkankermetastase, waarvoor zowel genetisch gemodificeerde muismodellen als transplantatiemethoden vaak worden gebruikt - elk met hun eigen reeks voordelen en beperkingen.
Genetisch gemanipuleerde borsttumormodellen maken gebruik van borstklierspecifieke promotors, waaronder MMTV-LTR (muismamatumorvirus long terminal repeat) en WAP (Whey Acidic Protein), om de expressie van transgenen in het borstepitheel8 te stimuleren. Oncogenen waaronder polyoma midden T-antigeen (PyMT), ErbB2 / Neu, c-Myc, Wnt-1 en simian virus 40 (SV40) zijn op deze manier tot expressie gebracht9,10,11,12,13, en hoewel deze genetische modellen nuttig zijn voor het bestuderen van primaire tumorinitiatie en -progressie, zijn er maar weinig gemakkelijk uitgezaaid naar verre organen. Bovendien zijn deze genetische muismodellen vaak duurder dan spontane of experimentele metastasemodellen. Gezien de beperking van de meeste genetisch gemanipuleerde borsttumormodellen om metastase te bestuderen, zijn transplantatietechnieken aantrekkelijke methoden geworden om dit complexe proces te bestuderen. Dit omvat orthotopische, staartader-, intracardiale en intracraniale injectie van geschikte cellijnen.
Hoewel verschillende borstkankercellijnen gemakkelijk uitzaaien na orthotopische injectie in het borstvetkussen14,15, kan de consistentie en reproduceerbaarheid van gemetastaseerde tumorbelasting een uitdaging zijn en kan de duur van dergelijke onderzoeken enkele maanden zijn. Voor het evalueren van longmetastase, in het bijzonder, is intraveneuze injectie in de staartader vaak een meer reproduceerbare en tijdseffectieve methode met gemetastaseerde verspreiding die meestal binnen een tijdsbestek van enkele weken optreedt. Aangezien het intraveneuze injectiemodel echter de eerste stappen van de metastatische cascade omzeilt, moet voorzichtigheid worden betracht bij het interpreteren van de resultaten van deze onderzoeken. In deze demonstratie tonen we staartaderinjectie van borsttumorcellen samen met een nauwkeurige en uitgebreide analysemethode.
Hoewel de onderzoeksgemeenschap aanzienlijke vooruitgang heeft geboekt bij het begrijpen van het complexe proces van borstkankermetastase, wordt geschat dat meer dan 150.000 vrouwen momenteel gemetastaseerde borstkanker hebben16. Van degenen met stadium IV borstkanker heeft >36% van de patiënten longmetastase17; het plaatsspecifieke patroon en de incidentie van metastasen kunnen echter variëren op basis van moleculair subtype18,19,20,21. Patiënten met borstkanker-geassocieerde longmetastasen hebben een mediane overleving van slechts 21 maanden, wat de noodzaak benadrukt om effectieve behandelingen en nieuwe biomarkers voor deze ziekte te identificeren17. Het gebruik van experimentele metastasemodellen, waaronder de intraveneuze injectie van tumorcellen, zal onze kennis van deze belangrijke klinische uitdaging blijven vergroten. In combinatie met digitale beeldvormingspathologie en de methode van metastatische longtumorbelastingsanalyse die in dit protocol wordt beschreven, zijn staartaderinjecties een waardevol hulpmiddel voor onderzoek naar borstkankermetastase.

<table><tbody><tr><td>alcohol prep pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td>voor het schoonmaken van de staart voorafgaand aan injectie</td></tr><tr><td>dissectie schaar</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-951-5</td><td>voor muis dissectie en longweefsel inflatie</td></tr><tr><td>DMEM met L-Glutamine, 4,5g/L Glucose en Sodium Pyruvaat</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10013CV</td><td>celkweek medium basis voor MDA-MB-231 en MVT1 cel lijnen</td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT21030CV</td><td>gebruikt voor het opnieuw ophangen van tumorcellen voor injectie</td></tr><tr><td>ethanol (70% oplossing)</td><td>OSU</td><td></td><td>gebruikt om het haar van de muis te minimaliseren tijdens de dissectie; gebruik met voorzichtigheid - brandbaar</td></tr><tr><td>Evan's blue kleurstof</td><td>Millipore Sigma</td><td>E2129</td><td>gebruikt op 1% in steriel PBS voor oefening met staart-vene injectiemethode; gebruik met voorzichtigheid - gevaarlijk reagens</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Millipore Sigma</td><td>F4135</td><td>celkweek medium toevoeging; gebruikt op 10% in DMEM</td></tr><tr><td>forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-270</td><td>voor dissectie en longweefsel inflatie</td></tr><tr><td>FVB/NJ muizen</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001800</td><td>syngene muisstam voor MVT1 cellen</td></tr><tr><td>hemacytometer (Bright-Line)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z359629</td><td>voor gebruik in celkweek om celtellingen te verkrijgen</td></tr><tr><td>insuline spuit (28 G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-1B</td><td>voor staart-vene injecties (BD 329424)</td></tr><tr><td>MDA-MB-231 cellen</td><td>ATCC</td><td></td><td>menselijke borstkanker cel lijn</td></tr><tr><td>MVT1 cellen</td><td></td><td></td><td>muis borsttumor cellen</td></tr><tr><td>naalden (26 G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-15</td><td>gebruikt om de longen van de muis op te blazen</td></tr><tr><td>neutraal gebufferd formaline (10%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>245685</td><td>gebruikt als een weefsel fixatief en om longweefsel op te blazen; gebruik met voorzichtigheid - gevaarlijk reagens</td></tr><tr><td>NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) muizen</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>005557</td><td>onderhouden door OSUCCC Target Validatie Gedeeld Resource</td></tr><tr><td>Penicilline Streptomycine 100x</td><td>ThermoFisher</td><td>15140163</td><td>celkweek medium toevoeging</td></tr><tr><td>steriele gaas</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9379092</td><td>voor het aanbrengen van druk op de staart van de muis als er bloeding optreedt</td></tr><tr><td>spuit (5 mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-458</td><td>gebruikt om muis longweefsel op te blazen</td></tr><tr><td>staart-vene fixator</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>TV-150 STD</td><td>gebruikt om de muis te fixeren voor staart-vene injecties</td></tr><tr><td>Trypan blauw (0,4%)</td><td>ThermoFisher</td><td>15250061</td><td>gebruikt in celkweek om levensvatbaarheid te beoordelen</td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA 0,25%</td><td>ThermoFisher</td><td>25200-114</td><td>gebruikt in celkweek om tumorcellen los te maken van de plaat</td></tr></tbody></table>

pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Metastase, de primaire oorzaak van morbiditeit en mortaliteit voor de meeste kankerpatiënten, kan een uitdaging zijn om preklinisch te modelleren bij muizen. Er zijn weinig spontane uitzaaimodellen beschikbaar. Het experimentele metastasemodel met staartaderinjectie van geschikte cellijnen is dus een steunpilaar van metastaseonderzoek. Wanneer kankercellen in de laterale staartader worden geïnjecteerd, is de long hun voorkeursplaats van kolonisatie. Een mogelijke beperking van deze techniek is de nauwkeurige kwantificering van de gemetastaseerde longtumorbelasting. Terwijl sommige onderzoekers macrometastasen van een vooraf gedefinieerde grootte tellen en / of micrometastasen omvatten na sectie van weefsel, bepalen anderen het gebied van gemetastaseerde laesies ten opzichte van het normale weefselgebied. Beide kwantificeringsmethoden kunnen buitengewoon moeilijk zijn wanneer de metastatische belasting hoog is. Hierin demonstreren we een intraveneus injectiemodel van longmetastase gevolgd door een geavanceerde methode voor het kwantificeren van gemetastaseerde tumorbelasting met behulp van beeldanalysesoftware. Dit proces maakt het mogelijk om meerdere eindpuntparameters te onderzoeken, waaronder de gemiddelde metastasegrootte, het totale aantal metastasen en het totale metastasegebied, om een uitgebreide analyse te bieden. Bovendien is deze methode beoordeeld door een veterinaire patholoog-board-gecertificeerd door het American College of Veterinary Pathologists (SEK) om nauwkeurigheid te garanderen.

Bij gebruik van niet-gelabelde cellen voor staartaderinjectie kan het moeilijk zijn om longkolonisatie te bevestigen tot (1) het tijdstip van obductie als macrometastasen kunnen worden waargenomen of (2) na histologische analyse als er microscopische metastasen bestaan. Met uitgebreide uitgezaaide longtumorbelasting zullen muizen moeizaam ademhalen. Zoals bij elk tumoronderzoek, moeten muizen zorgvuldig worden gecontroleerd gedurende de hele duur van het onderzoek. Het gebruik van gelabelde cellen is een eenvoudige manie...

Intraveneuze injectie van kankercellen wordt vaak gebruikt in metastaseonderzoek, maar de gemetastaseerde tumorbelasting kan moeilijk te analyseren zijn. Hierin demonstreren we een staartaderinjectiemodel van metastase en nemen we een nieuwe benadering op om de resulterende gemetastaseerde longtumorbelasting te analyseren.

Pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Er is momenteel geen gouden standaard voor het analyseren van de door staartvene-injectie geïnduceerde metastatische longtumorbelasting. We gebruikten digitale beeldanalyse om longmetastasen op een nauwkeurige en reproduceerbare manier te kwantificeren. Deze methode is tijd- en kosteneffectief.En, in combinatie met digitale beeldanalyse, maakt een zeer nauwkeurige en uitgebreide analyse van de resulterende longmetastatische tumorbelasting mogelijk. Om humane borstkankercellen voor injectie voor te bereiden, plaatst u eerst een geschikt aantal cellen in een geschikt celkweekmedium, op basis van het aantal muizen en celconcentratie dat zal worden gebruikt. Wanneer de cellen een 80 tot 90%confluency bereiken, was de platen met PBS en los de cellen in een minimaal volume trypsine, volgens standaardprotocollen.Wanneer de cellen los zijn, suspendeer de cellen opnieuw in vers kweekmedium voor telling en verzamel de cellen door centrifugatie. Breng de cellen vervolgens op de juiste concentratie in 100 microliter PBS per muis, op ijs. Vlak voor de injectie, suspendeer de cellen grondig op ijs om klonteren te voorkomen, en laad 100 microliter van de cellen in een 28-gauge insulinespuit.Houd de spuit verticaal, tik op de schacht terwijl u de plunjer langzaam aanpast om eventuele luchtbellen te verwijderen. Indien toegestaan, sluit de naald voorzichtig af en buig de naaldpunt naar een hoek van 20 tot 30 graden. Houd een muis ouder dan zes weken vast in een plastic muisbegrenzer en plaats de muis op zijn zij zodat de laterale staartvene gemakkelijk zichtbaar is.Locateer de ventrale slagader in lijn met de geslachtsdelen, een dorsale ader en twee laterale caudale aders, en gebruik een aseptische doek om het staartoppervlak schoon te maken. Grijp de staart met de indexvinger en duim van de niet-dominante hand, breng lichte spanning aan en begin bij het distale deel van de staart de naald in te brengen, met de snede naar boven, parallel aan de ader. Lever langzaam het volledige volume cellen af in de ader.Na de injectie zal waarschijnlijk een kleine hoeveelheid bloed worden verplaatst. Breng zachte druk uit met een steriele gaas op de injectieplaats. Gooi vervolgens de spuit in een geschikte container voor scherpe voorwerpen en plaats de muis in een schone, geventileerde kooi met bewaking.Binnen een uur na de staartvene-injectie, voer live dier in vivo-beeldvorming uit om een ​​succesvolle celinjectie te bevestigen en om gegevens van tijd nul te verkrijgen. Om het structurele formaat van de longen voor histopathologie te behouden, bevestig de muis aan een dissectiebord en bevochtig het haar met 70%ethanol. Open de thorax met een midline incisie, verleng de incisie craniaal en caudal door het peritoneum en grijp het xiphoïdproces om verwijdering van het diafragma mogelijk te maken.Gebruik een tweede paar schaar om de ribben langs elke kant van het borstbeen te snijden en verwijder voorzichtig het ribbenkast om ruimte te laten voor de longen om uit te zetten. Om de luchtpijp te isoleren, verwijder de onderkaakklieren en infrahyoïde musculatuur en plaats pinnen aan weerszijden van de luchtpijp om ongewenste beweging tijdens de naaldinjectie te voorkomen. Laad een drie milliliter spuit, uitgerust met een 26-gauge naald, met twee tot drie milliliter 10%neutraal gebufferd Formelin en steek de naald in de luchtpijp.Injecteer langzaam het Formelin, terwijl u de longen observeert om te zien dat ze uitzetten. Zodra het Formelin uit de longen begint te lekken, gebruikt u een pincet om de luchtpijp af te knijpen en de naald te verwijderen. Trek vervolgens het hele ademhalingsapparaat los en plaats de organen direct in een container met vers Formelin.Voor analyse van de metastatische longtumorbelasting, scan H&E gekleurde longweefselsecties op een hoge resolutie diascanner bij een 40-voudige vergroting en importeer de afbeeldingen in een geschikt beeldanalysesoftwareprogramma. Pas de parameters aan die de vorm en dunheid definiëren om het beste bij de afbeeldingen te passen. Om de gesegmenteerde gebieden van tumormetastasen en normaal longweefsel weer te geven, gebruikt u verschillende gekleurde labels voor elk weefseltype, opent u het Decision Forest-programma en volgt u de gevraagde reeks ja- of nee-vragen om elke klasse voor een afbeelding geschikt te trainen.Om de functies voor elke klasse aan te passen, pas filters toe om te scherpen, te vervagen of te sorteren op vorm om de nauwkeurigheid van het algoritme te verbeteren. In deze analyse verschijnen de tumormetastasen in blauw. Het normale weefsel is groen en het bronchiolaire epitheel is geel.Rode bloedcellen kunnen worden waargenomen in rood en luchtruimen verschijnen in roze. Wanneer alle functies zijn ingesteld, slaat u de gewijzigde instellingen op en past u het algoritme toe op de volledige set of reeks van H&E gekleurde weefsels. Exporteer vervolgens alle uitvoergegevens om het gebied in micrometer vierkant te kunnen kwantificeren voor elk weefseltype en om de percentages vanuit het totale netto weefseloppervlak van het specimen te kunnen berekenen.De aanwezigheid van een bioluminescentie signaal binnen de thoracale ruimte minder dan twee uur na de staartvene-injectie van luciferase-gelabelde humane epitheelborstkankercellen kan worden beschouwd als bevestiging van een nauwkeurige injectie. In dit experiment namen de fotontellingen in de thoracale regio in de loop van de tijd toe en was er op dag 24 na injectie nog steeds een sterk bioluminescentie signaal aanwezig. Op het moment van necropsie werden veel macroscopische longlaesies waargenomen bij deze muizen.Met behulp van beeldanalysesoftware en een aangepast algoritme, zoals gedemonstreerd, kan het hele longweefsel worden gesegmenteerd door verschillende weefselkenmerken. Door het longweefsel op deze manier te segmenteren, kan de software verschillende parameters kwantificeren. Hier worden ruwe gegevens getoond van een analyse uitgevoerd op longweefsel van muizen geïnjecteerd met humane epitheelborstkankercellen, gevolgd door behandeling met een geneesmiddel ontworpen om metastatische kolonisatie te blokkeren.Zoals gedemonstreerd door deze afbeeldingen, zou een verschil in metastatische tumorbelasting tussen deze behandelingsgroepen

pathological-analysis-lung-metastasis-following-lateral-tail-vein

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.

Experimentele Metastase Assay

Deze video beschrijft een techniek van het injecteren van gelabelde kankercellen met behulp van staartaderinjectie in een muismodel. We monitoren verder de vorming van borstkankermetastasen en groei met behulp van real-time in vivo live dierbeeldvorming.

Staartaderinjectie: een methode om kankercellen toe te dienen voor gemetastaseerde studies in een muismodel

In this video, melanoma cells are intravenously injected through the tail vein in the mouse model. The melanoma cells further travel through the circulatory system, adapting to the distant microenvironment and causing metastasis in organs like lungs.

Experimental Metastatic Melanoma Mouse Model: A Platform to Study the Metastatic Potential of Melanoma Cells in the Lungs

Kanker is een complexe ziekte die wordt beïnvloed door het weefsel rondom de tumor en lokale pro- en anti-inflammatoire mediatoren. Daarom kan orthotroop injectie modellen plaats subcutane modellen nuttig om de progressie van kanker te bestuderen op een wijze die beter nabootst humane pathologie.

Orthotopische Injectie van borstkankercellen in de uiervet Pad van Muizen tumorgroei te bestuderen.

Dit manuscript beschrijft een methode om te kwantificeren tumor cel accumulatie in de longen in een diermodel van uitzaaiing van de tumor.

Long Tumor cel aanwerving Assay

Metastase vormt een belangrijk onderdeel van de virulentie van kanker en is naar schatting verantwoordelijk voor 90% van de sterfgevallen.  We rapporteren een protocol voor een metastatisch melanoommodel bij muizen dat nuttig is voor het bepalen van de werkzaamheid van therapeutische middelen tegen dit klinische fenomeen.

Injectie van Syngene muizen Melanoma Cells om hun gemetastaseerde potentieel in de longen bepalen

Er werd een chirurgische procedure ontwikkeld om mamma-tumorcellen via injectie in de poortader in de muizenlever af te leveren. Dit model maakt onderzoek naar late stadia van levermetastase mogelijk bij een volledig immuuncompetente gastheer, inclusief extravasatie van tumorcellen, zaaien, overleven en metastatische uitgroei in de lever.

Een poortader Injection Model op de studie van de lever metastase van borstkanker

Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde beschrijving van het protocol voor de pulmonaire metastase assay (PuMA). Dit model staat onderzoekers bestuderen metastatische Osteosarcoom (OS) celgroei in longweefsel met behulp van een widefield fluorescentie- of confocale laser scanning microscoop.

Praktische overwegingen bij het bestuderen van uitgezaaide longkanker kolonisatie in met behulp van de pulmonaire metastase Assay Osteosarcoom

De beschreven aanpak combineert experimentele staart ader metastase assays met in vivo levende dierlijke beeldvorming zodat real-time monitoring van borstkanker metastase vorming en groei in aanvulling op de kwantificering van metastasen aantal en grootte in de longen.

Gecombineerd gebruik van staart ader metastase assays en real-time in vivo beeldvorming om borstkanker te kwantificeren gemetastaseerde kolonisatie en last in de longen

We beschrijven een xenograft muismodel van borstkanker hersenmetastase gegenereerd via staart-ader injectie van een endogene HER2-versterkte inflammatoire borstkankercellijn.

Modellering van hersenmetastase via staartaderinjectie van inflammatoire borstkankercellen

Het manuscript beschrijft een methodologie voor het opzetten en longitudinaal monitoren van spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumoren, die vatbaar is voor interventie in alle stadia van de metastatische cascade.

In vivo Beeldvorming om spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumorcellen te meten

Leer een staartaderinjectiemodel voor longmetastase-analyse met digitale beeldanalyse. Deze methode kwantificeert tumormetastasen nauwkeurig en reproduceerbaar in muizen voor kankeronderzoek.

Pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen

Meer video's verkennen