Name: Dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Leer de dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben. Deze methode verbetert beeldkwaliteit door optimale oriëntatiestrategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen Claude Desplan bedanken voor het met ons delen van een aliquot van het Bsh-antilichaam. De DE-Cadherin, Dachshund, Eyes Absent, Seven-up en Bruchpilot monoklonale antilichamen werden verkregen van de Developmental Studies Hybridoma Bank, gemaakt door de NICHD van de NIH en onderhouden aan de Universiteit van Iowa, Department of Biology, Iowa City, IA 52242. Dit werk werd ondersteund door een NSERC Discovery Grant toegekend aan T.E.. UA wordt ondersteund door een NSERC Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship. PV wordt ondersteund door een Ontario Graduate Scholarship.

<ol><li>Fischbach, K. -F., Dittrich, A. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+optic+lobe+of+Drosophila+melanogaster.+I.+A+Golgi+analysis+of+wild-type+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The optic lobe of Drosophila melanogaster. I. A Golgi analysis of wild-type structure.</a> Cell Tissue Research. 258, (1989).</li>
<li>Hofbauer, A., Campos-Ortega, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+pattern+and+early+differentiation+of+the+optic+lobes+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux%27s+Archives+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Proliferation pattern and early differentiation of the optic lobes in Drosophila melanogaster.</a> Roux's Archives of Developmental Biology. 198, 264-274 (1990).</li>
<li>Sanes, J. R., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+Principles+of+Insect+and+Vertebrate+Visual+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Design Principles of Insect and Vertebrate Visual Systems.</a> Neuron. 66, 15-36 (2010).</li>
<li>Nériec, N., Desplan, C. From the Eye to the Brain. Development of the Drosophila Visual System. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aN%C3%A9riec%2C+N+%22Current+Topics+in+Developmental+Biology%22">Current Topics in Developmental Biology</a>. 116, Academic Press Inc. 247-271 (2016).</li>
<li>Apitz, H., Salecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Challenge+of+Numbers+and+Diversity%3A+Neurogenesis+in+the+Drosophila+Optic+Lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurogenetics%22%5BJournal%5D)">A Challenge of Numbers and Diversity: Neurogenesis in the Drosophila Optic Lobe.</a> Journal of Neurogenetics. 28, 233-249 (2014).</li>
<li>Contreras, E. G., Sierralta, J., Oliva, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+strategies+for+the+generation+of+neuronal+diversity%3A+Lessons+from+the+fly+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Novel strategies for the generation of neuronal diversity: Lessons from the fly visual system.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 12, 140(2019).</li>
<li>Erclik, T., Hartenstein, V., Lipshitz, H. D., McInnes, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+Role+of+the+Vsx+Genes+Supports+a+Monophyletic+Origin+for+Bilaterian+Visual+Systems%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Conserved Role of the Vsx Genes Supports a Monophyletic Origin for Bilaterian Visual Systems.</a> Current Biology. 18, 1278-1287 (2008).</li>
<li>Erclik, T., Hartenstein, V., McInnes, R. R., Lipshitz, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eye+evolution+at+high+resolution%3A+The+neuron+as+a+unit+of+homology%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Eye evolution at high resolution: The neuron as a unit of homology.</a> Developmental Biology. 332, 70-79 (2009).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+projection+neurons+in+the+Drosophila+lobula+link+feature+detection+to+distinct+behavioral+programs%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual projection neurons in the Drosophila lobula link feature detection to distinct behavioral programs.</a> eLife. 5, (2016).</li>
<li>Ngo, K. T., Andrade, I., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatio-temporal+pattern+of+neuronal+differentiation+in+the+Drosophila+visual+system%3A+A+user%27s+guide+to+the+dynamic+morphology+of+the+developing+optic+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Spatio-temporal pattern of neuronal differentiation in the Drosophila visual system: A user's guide to the dynamic morphology of the developing optic lobe.</a> Developmental Biology. 428, 1-24 (2017).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+patterning+of+Drosophila+medulla+neuroblasts+controls+neural+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Temporal patterning of Drosophila medulla neuroblasts controls neural fates.</a> Nature. 498, 456-462 (2013).</li>
<li>Erclik, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+temporal+and+spatial+patterning+generates+neural+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Integration of temporal and spatial patterning generates neural diversity.</a> Nature. 541, 365-370 (2017).</li>
<li>Apitz, H., Salecker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+region-specific+neurogenesis+mode+requires+migratory+progenitors+in+the+Drosophila+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A region-specific neurogenesis mode requires migratory progenitors in the Drosophila visual system.</a> Nature Neuroscience. 18, 46-55 (2015).</li>
<li>Suzuki, T., Kaido, M., Takayama, R., Sato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+temporal+mechanism+that+produces+neuronal+diversity+in+the+Drosophila+visual+center%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">A temporal mechanism that produces neuronal diversity in the Drosophila visual center.</a> Developmental Biology. 380, 12-24 (2013).</li>
<li>Hara, Y., Sudo, T., Togane, Y., Akagawa, H., Tsujimura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+death+in+neural+precursor+cells+and+neurons+before+neurite+formation+prevents+the+emergence+of+abnormal+neural+structures+in+the+Drosophila+optic+lobe%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell death in neural precursor cells and neurons before neurite formation prevents the emergence of abnormal neural structures in the Drosophila optic lobe.</a> Developmental Biology. 436, 28-41 (2018).</li>
<li>Morante, J., Erclik, T., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+in+Drosophila+optic+lobe+neurons+is+controlled+by+eyeless%2FPax6%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cell migration in Drosophila optic lobe neurons is controlled by eyeless/Pax6.</a> Development. 138, 687-693 (2011).</li>
<li>Millard, S. S., Pecot, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+assembling+columns+and+layers+in+the+Drosophila+visual+system%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Development%22%5BJournal%5D)">Strategies for assembling columns and layers in the Drosophila visual system.</a> Neural Development. 13, 1-17 (2018).</li>
<li>Takemura, S. Y., Lu, Z., Meinertzhagen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+circuits+of+the+Drosophila+optic+lobe%3A+The+input+terminals+to+the+medulla%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Synaptic circuits of the Drosophila optic lobe: The input terminals to the medulla.</a> Journal of Comparative Neurology. 509, 493-513 (2008).</li>
<li>Akin, O., Bajar, B. T., Keles, M. F., Frye, M. A., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-Specific+Patterned+Stimulus-Independent+Neuronal+Activity+in+the+Drosophila+Visual+System+during+Synapse+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cell-type-Specific Patterned Stimulus-Independent Neuronal Activity in the Drosophila Visual System during Synapse Formation.</a> Neuron. 101, 894-904 (2019).</li>
<li>Spratford, C. M., Kumar, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunostaining+of+imaginal+discs+from+drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunostaining of imaginal discs from drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51792(2014).</li>
<li>Dokucu, M. E., Zipursky, S. L., Cagan, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atonal%2C+rough+and+the+resoluton+of+proneural+clusters+in+the+developing+Drosophila+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Atonal, rough and the resoluton of proneural clusters in the developing Drosophila retina.</a> Development. 122, Cambridge, England. 4139-4147 (1996).</li>
<li>Hsiao, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunohistochemistry+of+larval%2C+pupal+and+adult+Drosophila+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunohistochemistry of larval, pupal and adult Drosophila retinas.</a> Journal of visualized experiments. , e4347(2012).</li>
<li>Kelly, S. M., Elchert, A., Kahl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+immunofluorescent+staining+of+mushroom+body+and+photoreceptor+neurons+in+adult+Drosophila+melanogaster+brains%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Dissection and immunofluorescent staining of mushroom body and photoreceptor neurons in adult Drosophila melanogaster brains.</a> Journal of Visualized Experiments. , e56174(2017).</li>
<li>Williamson, R. W., Hiesinger, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+developing+and+adult+Drosophila+brains+and+retinae+for+live+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of developing and adult Drosophila brains and retinae for live imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. , e1936(2010).</li>
<li>Bertet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+patterning+of+neuroblasts+controls+notch-mediated+cell+survival+through+regulation+of+hid+or+reaper%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Temporal patterning of neuroblasts controls notch-mediated cell survival through regulation of hid or reaper.</a> Cell. 158, 1173-1186 (2014).</li>
<li>Pinto-Teixeira, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Concurrent+Retinotopic+Maps+in+the+Fly+Motion+Detection+Circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Development of Concurrent Retinotopic Maps in the Fly Motion Detection Circuit.</a> Cell. 173, 485-498 (2018).</li>
<li>Plevock, D. A., Rusan, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+Imaging+of+Drosophila+Larval+Neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts.</a> Journal of Visualized Experiments. , e51756(2014).</li>
<li>Ting, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+dendritic+morphology+in+columns+and+layers%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Analyzing dendritic morphology in columns and layers.</a> Journal of Visualized Experiments. , e55410(2017).</li>
<li>Özel, M. N., Langen, M., Hassan, B. A., Hiesinger, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filopodial+dynamics+and+growth+cone+stabilization+in+Drosophila+visual+circuit+development%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Filopodial dynamics and growth cone stabilization in Drosophila visual circuit development.</a> eLife. 4, (2015).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

In dit protocol beschrijven we een methode om de hersenen van larven en volwassen Drosophila te immunokleuren en ze in verschillende richtingen te monteren. Hoewel methoden om larvale en volwassen hersenen te kleuren eerder zijn beschreven 22,23,24,27,28, hebben montagestrategieën voor de optimale visualisatie van specifieke oogkwabstructuren minder aandacht gekregen <sup cl...

Het visuele systeem van Drosophila, bestaande uit het samengestelde oog en de onderliggende oogkwab, is een uitstekend model geweest voor de studie van de ontwikkeling en functie van neurale circuits. In de afgelopen jaren is met name de optische kwab naar voren gekomen als een krachtig systeem om neurologische ontwikkelingsprocessen zoals neurogenese en circuitbedrading te bestuderen 1,2,3,4,5,6,7,8. Het bestaat uit vier neuropils: de lamina, medulla, lobula en lobulaplaat (de laatste twee vormen het lobulacomplex)1,2,3,4,5,6. Fotoreceptoren van het oog richten zich op neuronen van de lamina en medulla, die visuele input verwerken en doorgeven aan de neuropils van het lobulacomplex 1,2,3,4,5,6. Projectieneuronen in het lobulacomplex sturen vervolgens visuele informatie naar de verwerkingscentra van hogere orde in de centrale hersenen 1,5,9. De complexe organisatie van de optische kwab, noodzakelijk door de noodzaak om retinotopie te handhaven en om verschillende soorten visuele stimuli te verwerken, maakt het een aantrekkelijk systeem om te bestuderen hoe geavanceerde neurale circuits worden samengesteld. Met name de medulla vertoont opvallende overeenkomsten in zowel zijn organisatie als ontwikkeling met de neuroretina, die al lang een model is voor de ontwikkeling van neurale circuits van gewerveldedieren3,8.
De ontwikkeling van de optische kwab begint tijdens de embryogenese, met de specificatie van ~35 ectodermale cellen die de optische placode 2,4,5,6,7,8 vormen. Na het uitkomen van de larven wordt de optische placode onderverdeeld in twee verschillende primordia: 1) het buitenste proliferatiecentrum (OPC), dat de neuronen van de lamina en het buitenste merg genereert en 2) het binnenste proliferatiecentrum (IPC), dat neuronen van het binnenste merg en lobulacomplex genereert 4,5,6,10 . In de late larve van de tweede instar beginnen de neuro-epitheelcellen van de OPC en IPC te transformeren in neuroblasten die vervolgens neuronen genereren via intermediaire ganglionmoedercellen 4,5,11,12. Neuroblasten in de oogkwab worden gevormd door ruimtelijk en temporeel beperkte transcriptiefactoren, die samenwerken om neurale diversiteit in hun nageslacht te genereren 11,12,13,14. In de pop worden de circuits van de neuropils van de oogkwab geassembleerd via de coördinatie van verschillende processen, waaronder geprogrammeerde celdood11,15, neuronale migratie12,16, axonale/dendritische targeting10,17, synapsvorming18,19 en neuropilrotaties10,17.
Hier beschrijven we de methodologie waarmee larvale en volwassen hersenen worden ontleed, immunogekleurd en gemonteerd voor beeldvorming van de oogkwab. Gezien de complexe driedimensionale organisatie, vereist analyse van de optische kwab dat men begrijpt hoe de volwassen neuropils en larvale voorlopers ten opzichte van elkaar en de centrale hersenen zijn gepositioneerd. Daarom leggen we speciale nadruk op hoe de oriëntatie van de montage zich verhoudt tot de ruimtelijke organisatie van de optische lobstructuren. We beschrijven drie montagestrategieën voor larvale hersenen (voorste, achterste en laterale) en drie voor volwassen hersenen (voorste, achterste en horizontale), die elk een optimale hoek bieden voor het afbeelden van een specifieke populatie van optische kwab-voorlopercellen of neuropil.

<table><tbody><tr><td>10x PBS</td><td>Bioshop</td><td>PBS405</td><td></td></tr><tr><td>37% formaldehyde</td><td>Bioshop</td><td>FOR201</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 (geit) secundair</td><td>Invitrogen</td><td>A-11055</td><td>gebruik bij 1:500</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 (muis) secundair</td><td>Invitrogen</td><td>A-31570</td><td>gebruik bij 1:500</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 (guinea pig) secundair</td><td>Invitrogen</td><td>A-21450</td><td>gebruik bij 1:500</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 (rat) secundair</td><td>Invitrogen</td><td>A-21247</td><td>gebruik bij 1:500</td></tr><tr><td>Dekselglazen</td><td>VWR</td><td>48366-067</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiepincet - #5</td><td>Dumont</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiepincet - #55</td><td>Dumont</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiebakje</td><td>Corning</td><td>722085</td><td></td></tr><tr><td>Droogdoekjes</td><td>Kimbery Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-Bgal primaire antistof</td><td>Biogenesis</td><td></td><td>gebruik bij 1:1000</td></tr><tr><td>Guinea pig anti-Bsh primaire antistof</td><td>Gift van Claude Desplan</td><td></td><td>gebruik bij 1:500</td></tr><tr><td>Guinea pig anti-Vsx1 primaire antistof</td><td>Erclik et al. 2008</td><td></td><td>gebruik bij 1:1000</td></tr><tr><td>Laboratoriumfolie</td><td>Parafilm</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifugebuisjes</td><td>Sarstedt</td><td>72.706.600</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopglaasjes</td><td>VWR</td><td>CA4823-180</td><td></td></tr><tr><td>Muis anti-dac primaire antistof</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB)</td><td>mabdac2-3</td><td>gebruik bij 1:20</td></tr><tr><td>Muis anti-eya primaire antistof</td><td>DSHB</td><td>eya10H6</td><td>gebruik bij 1:20</td></tr><tr><td>Muis anti-nc82 primaire antistof</td><td>DSHB</td><td>nc82</td><td>gebruik bij 1:50</td></tr><tr><td>Muis anti-svp primaire antistof</td><td>DSHB</td><td>Seven-up 2D3</td><td>gebruik bij 1:100</td></tr><tr><td>Polymer Clay</td><td>Elke soort klei kan worden gebruikt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konijn anti-GFP</td><td>Invitrogen</td><td>A-11122</td><td>gebruik bij 1:1000</td></tr><tr><td>Rat anti-DE-Cadherin primaire antistof</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td>gebruik bij 1:20</td></tr><tr><td>Slowfade montagemedium</td><td>Invitrogen</td><td>S36967</td><td>Vectashield montagemedium ( cat# H-1000) kan ook worden gebruikt</td></tr><tr><td>Triton-x-100</td><td>Bioshop</td><td>TRX506</td><td></td></tr></tbody></table>

dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben

Dissection, Immunohistochemistry and Mounting of Larval and Adult Drosophila Brains for Optic Lobe Visualization

De optische kwab van Drosophila , bestaande uit vier neuropils: de lamina, medulla, lobula en lobulaplaat, is een uitstekend modelsysteem voor het verkennen van de ontwikkelingsmechanismen die neurale diversiteit genereren en de assemblage van circuits aandrijven. Gezien de complexe driedimensionale organisatie, vereist analyse van de optische kwab dat men begrijpt hoe de volwassen neuropils en larvale voorlopers ten opzichte van elkaar en de centrale hersenen zijn gepositioneerd. Hier beschrijven we een protocol voor de dissectie, immunokleuring en montage van larvale en volwassen hersenen voor beeldvorming van de oogkwab. Speciale nadruk wordt gelegd op de relatie tussen de montageoriëntatie en de ruimtelijke organisatie van de optische kwab. We beschrijven drie montagestrategieën in de larve (voorkant, posterieur en lateraal) en drie in de volwassen larve (anterieur, posterieur en horizontaal), die elk een ideale beeldvormingshoek bieden voor een duidelijke oogkwabstructuur.

Confocale beelden van larvale en volwassen oogkwabben gemonteerd in de oriëntaties beschreven in het protocol worden weergegeven in figuur 1 en figuur 2.
Figuur 1 toont schema's en representatieve confocale plakjes van larvale hersenen, gepositioneerd in de anterieure, posterieure en laterale oriëntaties. In de voorste montageoriëntatie verschijnen het OPC-epitheel (DE-Cadherin), medulla-neuroblasten (<em...

Dit protocol beschrijft drie stappen om larvale en volwassen Drosophila optische kwabben voor te bereiden op beeldvorming: 1) hersendissecties, 2) immunohistochemie en 3) montage. De nadruk wordt gelegd op stap 3, omdat er verschillende montagerichtingen nodig zijn om specifieke optische lobstructuren te visualiseren.

Dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben

The Drosophila optic lobe, comprised of four neuropils: the lamina, medulla, lobula and lobula plate, is an excellent model system for exploring the ...

We beschrijven een protocol om larvale en volwassen Drosophila-hersenen te ontleden, immunokleuring en montage te monteren met een speciale nadruk op de oogkwabben. Gezien de complexe driedimensionale organisatie van de optische kwab, wordt verwacht dat het hier beschreven protocol onderzoekers een beter begrip zal geven van de relatie tussen de montageoriëntatie en de gevisualiseerde structuren van de optische kwab. Dit protocol beschrijft drie montagestrategieën voor zowel larvale als volwassen optische kwabben, die elk een optimale hoek bieden om een specifieke oogkwabstructuur te visualiseren tijdens beeldvorming.Voordat u met de dissectie begint, vult u alle putjes van een plaat met drie putjes met 400 microliter PBS per putje en gebruikt u een pincet om voorzichtig 15 zwervende larven van de derde instar te selecteren die aan de binnenkant van een flesje of fles van Drosophila kruipen. Plaats alle larven in het eerste putje van de plaat met drie putjes en plaats één larve in het middelste putje van de plaat. Gebruik de niet-dominante hand om het lichaam van de larve aan de basis van de put vast te houden en gebruik de dominante hand om de mondhaak van de larve voorzichtig vas

dissection-immunohistochemistry-mounting-larval-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Hier beschrijven we een protocol om de migratie van gliacellen te onderzoeken in de zich ontwikkelende Drosophila oog met behulp van levende microscopische analyse gecombineerd met GFP gelabelde gliacellen.

Live-Imaging van gliale cel migratie in de Drosophila Eye verbeelding Disc

Dissectie en Immunohistochemie van larven, popstadium en Volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Netvliezen

Deze video beschrijft een methode om intacte hersenen van volwassen vliegen onder een brugschuif te monteren en toont het protocol dat wordt uitgevoerd op immunostained hersenen voor fluorescerende microscopie.

Volwassen Drosophila-hersenen monteren: een methode om dia's voor confocale beeldvorming voor te bereiden

Immuunkleuring is een effectieve techniek voor het visualiseren van specifieke celtypen en eiwitten in weefsels. Door het gebruik van sonicatie vermindert het hier beschreven protocol de noodzaak om Drosophila melanogaster weefsels van laat-stadium embryo's en larven te dissekeren voordat immunokleuring wordt uitgevoerd. We bieden een efficiënte methodologie voor de immunokleuring van formaldehyde-gefixeerde hele larven.

-Sonicatie vergemakkelijkt immunofluorescentiekleuring van Late-fase embryonale en larvale<em&gt; Drosophila</em&gt; Weefsels<em&gt; In Situ</em

Dit protocol Gegevens een gestroomlijnde methode voor live cell imaging uitvoeren in het kader van een intact larvale hersenen. Live cell imaging benaderingen zijn van onschatbare waarde voor de studie van asymmetrische neurale stamcellen divisies evenals andere neurogene en ontwikkelingsprocessen, consequent blootleggen van mechanismen die eerder over het hoofd gezien.

Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvale neuroblasts

De volwassen structuren van Drosophila zijn afgeleid van zak-achtige structuren die imaginale schijven worden genoemd. Analyse van deze schijven biedt inzicht in vele ontwikkelingsprocessen, waaronder weefselbepaling, oprichting van compartimentgrenzen, celproliferatie, celbestemmingsspecificatie en cellulaire planaire polariteit. Dit protocol wordt gebruikt om imaginale schijven voor te bereiden op licht-/fluorescentiemicroscopie.

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit Drosophila melanogaster

De volwassen Drosophila hersenen waardevol voor de studie van neuronale circuits, hogere hersenfuncties, en complexe aandoeningen. Een efficiënte methode om hele hersenweefsel van de kleine vlieg hoofd ontleden zal brain-based studies vergemakkelijken. Hier beschrijven we een eenvoudige, een-stap dissectie protocol van volwassen hersenen met goed bewaard gebleven morfologie.

Een eenvoudige één stap Dissection protocol voor Whole-mount voorbereiding van Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

Dit protocol beschrijft de dissectie en immunokleuring van volwassen Drosophila melanogaster brain weefsels. Dit protocol benadrukt in het bijzonder het gebruik van Drosophila paddestoel lichaam en fotoreceptor neuronen als voorbeeld neuronale subsets kunt weergeven die nauwkeurig kunnen worden gebruikt voor het ontdekken van de algemene beginselen die ten grondslag liggen aan vele aspecten van neuronale ontwikkeling.

Dissectie en immunefluorescentie kleuring van Mushroom lichaam en fotoreceptor neuronen in de hersenen van de volwassen Drosophila melanogaster

Dit document stelt een chirurgische methode voor het ontleden van Drosophila pop netvlies samen met de protocollen voor de verwerking van weefsels voor RNA-extractie, immunohistochemistry en westelijke analyse.

Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie

Deze studie presenteert een vereenvoudigd protocol voor weefselverwerking met onthoofding, fixatie, cryosectie, fluorescentiekleuring, immunokleuring en beeldvorming, dat kan worden uitgebreid tot confocale en multifotonbeeldvorming. De methode behoudt een werkzaamheid die vergelijkbaar is met complexe dissecties, waarbij de noodzaak van geavanceerde motorische vaardigheden wordt omzeild. Kwantitatieve beeldanalyse biedt een uitgebreid onderzoekspotentieel.

Directe cryosectie van Drosophila-koppen voor verbeterde kleuring en immunokleuring van de hersenen

Leer de dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben. Deze methode verbetert beeldkwaliteit door optimale oriëntatiestrategieën.

Dissectie, immunohistochemie en montage van larvale en volwassen Drosophila-hersenen voor visualisatie van optische kwabben

Meer video's verkennen