Dubbele directe bloedinjectie in de Cisterna Magna als model van subarachnoïdale bloeding

Het algemene doel van deze huidige video is om het protocol van een dubbele directe injectie van bloed in de cisterna magna uit te leggen als een model van subarachnoïdale bloeding. De fysiologie van de subarachnoïdale bloeding is vaak te wijten aan een breuk van een aneurysma. En we doen eerst de extravasatie van bloed in het compartiment tussen de hersenen en het weefsel dat de hersenen bedekt.

Dit compartiment is de subarachnoïdale ruimte. Subarachnoïdale bloeding is goed voor maximaal 7% van alle stakingszaken. Mortaliteit varieert tussen 30 tot 50% in bevolkingsgerichte studies en subarachnoïdale bloeding overlevenden ervaren vaak cognitieve sequelae als geheugen tekorten, asthenie, of stemmingsstoornissen.

De belangrijkste oorzaak in de hoge prevalentie van slechte uitkomst is wat is cerebrale ischemie. Studies maakten een verband tussen het optreden van ischemie in de vasoconstrictie van de grote cerebrale slagaders, genaamd microscopisch vavosaat dat kan worden gedetecteerd bij een meerderheid van de patiënten tussen de vierde en de vijftiende dag na de eerste opgeblazen gevoel gebeurtenis. Vanwege de inefficiëntie van de huidige therapeutische opties, is er een duidelijke medische behoefte aan een beter begrip van pathologische gebeurtenissen.

Begeleidende subarachnoïdale bloeding en nieuwe therapeutische doelen moeten worden getest, maar dit vereist gevarieerde en gestandaardiseerde diermodellen. De breuk van intercranial aneurysma meestal verantwoordelijk voor subarachnoïdale bloeding bij de mens is waarschijnlijk moeilijk te maken preklinische en menselijke modellen. Bij dieren liggen de belangrijkste problemen bij de controle-incidentie van bloeding en bloedverdeling, maar recente studies richten zich op de ontwikkeling van meer redicive modellen van modellen van subarachnoïdale bloeding.

Hier vertegenwoordigen een gestandaardiseerde muis model van twee opeenvolgende injecties van autoloog arteriële bloed van onze twee dagen in de cisterna magna. De belangrijkste voordelen van dit model zijn het reproduceerbaar beheersen van een niet-invasieve chirurgische ingreep, het aanpassen van de kwaliteit en kwantiteit van het geïnjecteerde bloed, en het versterken van de bloedingsgebeurtenis zonder de intracraniale druk drastisch te verhogen. Voor het begin van de operatie moet je nog een groot aantal glazen haarvaten plaatsen met behulp van een micropipettrekker.

De injecterende pipet moet een binnendiameter van 0,86 millimeter en een buitendiameter van 0,5 millimeter vertonen. Bereid de kunstmatige cerebrale spinale vloeistof voor sham conditie, zoals aangegeven in het geschreven protocol. U moet zich realiseren dat dit zuurstofrijk kunstmatige hersengenmergvocht met een filterapparaat van 0,22 micron.

De eerste stap van ons subarachnoïdale bloedingsmodel bestaat uit de isolatie van de halsslagader langs de luchtpijp en het verzamelen van het maximum aan bloed uit halsslagaderpunctie. Controleer na anesthesie door isoflurane het gebrek aan reflexen door een of twee achterpoten te klemmen om de instelling van de experimentele procedure mogelijk te maken. Code een spuit van een millimeter met Eprin met behulp van een 26-meter naald.

Dit voorkomt bloedstolling tijdens de volgende stappen. Weeg elke muis nauwkeurig af met een elektronische balans. In de huidige studie, muizen zou lichaamsgewicht hebben binnen het bereik van 20 tot 25 gram net voor de operatie.

Zoals eerder uitgelegd, geïnduceerde anesthesie van de bediende muis en vervolgens scheren de nek en de ruimte tussen elk oor door middel van een geschikte elektrische tondeuse. Controleer muis slaapt en muiskop is goed geblokkeerd. Injecteer onderhuids 100 microliter buprenorfine met 0,1 milligram per kilo met een 26-meter naald in de onderrug om pijn na het ontwaken te voorkomen.

Voorkom droge ogen met behulp van een beschermende vloeibare gel en handhaven intraductale temperatuur van 37 graden met behulp van een auto geregelde elektrische deken. Voordat het geschoren gebied met een antiseptische oplossing werd behandeld, zijn alle instrumenten die het weefsel raken gesteriliseerd en aseptisch behandeld. Snijd op de eerste dag een incisie van een centimeter in de achterste nek, gevolgd door de scheiding van spieren langs de middellijn, om toegang te krijgen tot de cisterna magna.

Snijd de punt van de lege glazen pipet met een dunne schaar. Pas je vervolgens aan een spuit aan die is aangesloten op een flexibele siliciumconnector. Breng vervolgens 60 microliter bloed of kunstmatig hersengenmergvocht over in een buis van 0,5 milliliter met behulp van een precisiemicropipet Zuig in de glaspipet, de 60 microliter bloed voor de subarachnoïdale bloedingstoestand of 60 microliter kunst cerebrale spinale voor de schijnaandoening.

Voor injectie plaatst u de pipet op het stereotactische frame met behulp van bijvoorbeeld onze een ring of een en benader de pipetpunt langzaam naar het membraan op de interface met de cisterna magna. Steek de pipetpunt langzaam door het atlanto-occipitalmembraan in de cisterna magna met behulp van een micromanipulator van het stereotactische frame. Sluit de pipet aan op de spuit die eerder gevuld was, klaar voor drukinductie.

Injecteer door druk met een laag tarief van ongeveer 10 microliters per minuut om acute intracraniale hypertensie te voorkomen. Houd tijdens de injectie de ademhalingssnelheid en de rectale temperatuur nauwlettend in de gaten. Neem aan het einde van de injectie voorzichtig de pipet af met behulp van de micromanipulator en zorg visueel dat er geen lek is tijdens het uittrekken.

Bereik homeostase en voer twee hechtingen uit met gevlochten niet-absorberende hechtingsdraad. Onmiddellijk na de operatie, isoleren en positioneren van de muis in verval decubitus en bedek met een overlevingdeken in een open doos voor de duur van het herstel. Na 24 uur, induceren anesthesie opnieuw, installeer de muis op de stereotactische frame als de dag vóór en verwijder met zorg de hechtingen met micro-schaar.

Bereid als vóór aseptische van de atlanto-occipital membraan, door het aanbrengen op het geschoren gebied en aseptische oplossing met een katoenen staaf. Injecteer, zoals de dag ervoor, 30 microliter bloed of kunstmatige cerebrale spinale vloeistof in een laag tempo. Zoals reeds vermeld, controleer de ademhalingssnelheid en de rectale temperatuur.

Neem aan het einde van de injectie de pipet voorzichtig af en controleer de afwezigheid van bloedlek tijdens de terugtrekking. Bereik homeostase en voer twee hechtingen uit met een gevlochten absorbeerbare hechtdraad. Vanaf dag één na de operatie tot de dag van het offer, moet het lichaamsgewicht dagelijks worden beoordeeld als een gevoelige indicator voor algemeen welzijn.

Het toonde een aanzienlijke verminderde gewichtstoename in subarachnoïdale bloeding, in vergelijking met schijndieren, wat wijst op een langdurig herstelproces voor activiteiten en langdurige pathologische voorvallen, post subarachnoïdale bloeding. Waarom is sterfelijkheid niet in schijntoestand? Mortaliteit is bijna 30% op dag zeven in subarachnoïdale bloeding aandoening, met de meeste dieren sterven op de ene of dag vier na de operatie.

Onder humane eindpunten, een aanzienlijk gewichtsverlies superieur van 15% van het oorspronkelijke gewicht wordt opgemerkt. Een gebogen-rug"houding, langzame bewegingen, wonden, abnormale vocalisaties of significante agressie zijn ook tekenen dat het dier lijdt. Als een van deze tekens of een combinatie van tekens verschijnt, wordt het volgen van het dier versterkt binnen enkele uren die volgen op het uiterlijk.

Als de toestand van het dier verslechtert in het uur dat volgt of niet verbetert binnen 48 uur, zal worden aangenomen dat een niveau van ondraaglijk lijden wordt bereikt en het doden wordt uitgevoerd. In dit voorbeeld op dag één van de operatie, kan worden waargenomen uit een monster hersenen, bloedstolsels langs de grote slagaders van de Willis polygon in subarachnoïdale bloeding onderwerp. Op dag vijf na de operatie en voor het offer, intervasculaire Indiase inkt injectie maakt de detectie van macroscopische vasospasme die overeenkomt met vasoconstrictie van grote cerebellar slagaders, Coloration van de hersenen plakjes met hematoxylin en eosine maakt het mogelijk de meting van cerebrale vasospasme.

Hier, zoals geïllustreerd op deze foto micrografie, u observeren als een vasospasme van de basilaire slagader. In dit model van afleiden directe injectie van bloed in de cisterna magna, hebben we onlangs aangetoond cerebrale vasospasme van grote cerebrale slagaders, cerebrale vasculaire fibril afzetting, en cel apoptose, vergezeld van veranderde zintuiglijke, motorische, en cognitieve functies bij muizen. Zo maakt het dit model gevalideerd en gekenmerkt voor korte termijn en langdurige gebeurtenissen, post subarachnoïdale bloeding.

Het moet bij uitstek geschikt zijn voor toekomstige identificatie van nieuwe doelen en voor studies over efficiënte therapeutische strategieën tegen subarachnoïdale bloeding geassocieerde complicaties.