Amputatie voorspellen met behulp van lokale circulerende mononucleaire voorlopercellen bij met Angioplastie behandelde patiënten met kritieke ledemaatischemie

Hoewel angioplastiek de bloedstroom bij kritieke ledemisschemie verbetert, zal bij sommige patiënten toch een ledemaat geamputeerd moeten worden. In vergelijking met prognoses op basis van traditionele risicofactoren en intrinsieke vasculaire kenmerken, kan het aantal lokale MPC's beter voorspellend zijn voor het klinische resultaat, met betrekking tot endotheeldisfunctie en ledemaat amputatie. Het aantal lokale MPC's vertegenwoordigt een veelbelovende indicator voor de prognose van vasculaire gebeurtenissen, zoals ischemische hartziekten en ledemisschemie, met potentiële toepassing in risicostratificatie en preventie-handhaving.

De procedures zullen worden gedemonstreerd door Eduardo Vera-Gomez, Alejandro Hernandez-Patricio, Carolina Aranda-Rodriguez, Juan Ariel Gutierrez-Buendia, Atzin Sua Ruiz-Hernandez, Mario Antonio Tellez-Gonzalez en Gabrielle Alexandra Dominguez-Perez. PhD's uit de laboratoria voor experimentele metabolisme en weefselregeneratie, evenals Gabrielle Hernandez-De Rubin en Oscar Antonio Loman-Zuniga. En deze van het departement vaatchirurgie.

Om de pre- en post-angioplastiek FMD te bepalen, gebruik een vasculaire lineaire transducer om de diameter van de arteria brachialis van de patiënt te meten. Plaats vervolgens de manchet van een sphygmomanometer boven de meetplaats in de onderarm en blaas de manchet 50 millimeter kwik boven de systolische bloeddruk op gedurende vijf minuten voordat deze wordt afgepompt. Binnen 60 seconden na het afpompen, meet u de diameter van de arteria brachialis opnieuw en gebruikt u de vergelijking om de FMD te schatten.

Om de klinische ernst van ledemisschemie te evalueren, plaatst u volgens de Rutherford-classificatie een naald met een diameter van 18 gauge in het bloedvat op de geselecteerde liesstreek en plaatst u een introduceerder over de naald. Breng een flexibele gidsdraad in de introduceerder en vervang de gids door een introduceerder van zes Frans. Gebruik fluoroscopische begeleiding om contrastmiddel te injecteren om de arteriële traject en geblokkeerde vasculaire locaties te identificeren.

Breng twee, 0,014 Franse navigatie gidsdraden en twee, 0,014 Franse ondersteunende gidsdraden in het vat en breng de gidsdraden naar de geblokkeerde plaats. Introduceer vervolgens één vijf Franse katheter en vervolgens één drie Franse katheter en verzamel 10 milliliter bloed van de plaats dichtst bij de vasculaire obstructie. Plaats de monster op ijs en breng opnieuw een gidsdraad aan.

Wanneer de gidsdraad op zijn plaats is, introduceert u een angioplastiekballonkatheter, die een opblaasbaar ballon bevat dat zich aan het uiteinde van de katheter bevindt, en brengt u de angioplastiekballonkatheter naar de plaats van de laesie. Blaas de ballon op tegen de blokkerende plaque, gelegen aan de vaatwand, en verifieer de herstel van de bloedstroom. 30 minuten na het uitvoeren van de angioplastiek, brengt u een katheter naar de plaats dichtst bij de vaatblokkade en verzamelt u 10 milliliter bloed.

Verwijder vervolgens alle gidsdraden en zorg voor de juiste postoperatieve zorg. Twee weken na de angioplastiek, evalueert u de klinische ernst van de ledemisschemie, de verminderende rustpijn, lagere ischemische en functionele voetbehoud, volgens de Rutherford-classificatie, en identificeert u de gevallen die een grote amputatie vereisen vanwege een ongunstig resultaat. Binnen een uur na verzameling, brengt u zes milliliter van elk verzamelde bloedmonster over in nieuwe 15 milliliter buisjes en verdunt u de monsters in een verhouding van één op één in PBS.

Voeg twee milliliter dichtheidsgradiëntmedium toe aan elk van de drie testbuisjes en voeg drie gelijke volume aliquoten van het verdunde bloed toe aan elke buis tot maximaal drie kwart vol. Scheid de bloedcellen door middel van dichtheidsgradiëntcentrifugering en gebruik een pipette om de cellen van het grensvlak van de resulterende lagen te verzamelen. Trek de cellen uit elk monster in een enkele 15 milliliter buis en was elk monster zes keer, met twee milliliter PBS per wasbeurt.

Na de laatste wasbeurt, hervat u de MPC-bevattende pellets in één milliliter PBS per monster voor het tellen en voegt u één maal 10 tot zes cellen per buis toe aan het juiste aantal vijf milliliter flowcytometriebuisjes per monster. Pellet de cellen door centrifugatie en hervat u elk cellenmonster in 100 microliter van het cocktail van antilichamen van belang gedurende 10 seconden, voordat u de cellen gedurende 20 minuten bij vier graden Celsius incubeert, beschermd tegen licht. Aan het einde van de incubatie, gebruikt u isotype-gematchte controle-antilichamen om de juiste forward en side scatter gates voor analyse in te stellen en gebruikt u een buis met een hoog aantal CD45 en CD34 positieve cellen om de NPCs te gaten.

Om dubbel positieve immunofenotypen te selecteren, maakt u nieuwe plots en gate-identificeert u de KDR, CD133 en CD184 positieve, CD34 positieve, CD45 positieve cellen, dan gate om de belangrijkste MPC subpopulaties te identificeren. Het aantal MPC's kan vervolgens worden gecorreleerd met de baseline FMD-waarde en post angioplastiek delta van FMD, en de proportie van patiënten die een grote amputatie van het onderste lidmaat vereisen. In deze representatieve analyse, 30 dagen na onderste ledemaat angioplastiek, correleerde het baseline aantal CD45 positieve, CD34 positieve, KDR positieve MPC's negatief met de FMD.

Terwijl de verandering in CD45 positieve, CD34 positieve, CD133 positieve, CD184 positieve MPC's, na angioplastiek, significant correleerde met FMD-verbetering. Een verhoogd baseline aantal MPC's CD45 positieve, CD34 positieve, KDR positieve subpopulaties, evenals post angioplastiek reductie in de MPC CD45 positieve, CD34 positieve, CD133 positieve, CD184 positieve cellen, werd ook waargenomen bij patiënten die evolueerden naar ledemaat amputatie. Tijdens de vaatbenadering, zorg ervoor dat u het bloed verzamelt van de plaats dichtst bij de vasculaire obstructie.