Name: Natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij C57BL/6 muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Leer een protocol voor het induceren van ernstige acute biliaire pancreatitis bij C57BL/6 muizen met retrograde infusie van natrium taurocholaat. Deze methode maakt vroegtijdige studie van inflammatoire processen en weefselveranderingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs dankzij het Post Graduation Program in de medische kliniek van de Universiteit van São Paulo; Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) en University of São Paulo Medical School (FMUSP).

Dit protocol werd goedgekeurd door de Ethische Commissie voor het gebruik van dieren van de USP Medicine School, Num. Project: 1343/2019-CEUA: FMUSP. Voor dit protocol werden C57BL/6 muizen van 6 weken oud met een gewicht van 20 ± 2 g gebruikt (n = 9/groep).
1. Laparotomie
<ol><li>Verdoof dieren met xylazine (10 mg/kg) en ketamine-oplossing (80 mg/kg), subcutaan (0,1 ml/10 g lichaamsgewicht) met behulp van een spuit van 1 ml en een naald van 13x0,45 mm 26G 1/2. Controleer op voldoende anesthesiediepte door in de teen te knijpen. Regel de lichaamstemperatuur met behulp van verwarmde pads. Zorg ervoor dat alle chirurgische materialen steriel zijn.</li>
	<li>Reinig de buikstreek met 5% povidon-jodiumoplossing en gebruik een trimmer om het haar tussen de borst en de onderbuik (ongeveer 2 cm2) te verwijderen. Reinig het operatiegebied met 70% alcohol.</li>
	<li>Immobiliseer het dier op de chirurgische plaat met behulp van chirurgische tape. Gebruik een schaar om 5 mm van de huid horizontaal te knippen, op het bovenste deel van de buik en 1 cm onder het xiphoid-proces. Herhaal de snede op het peritoneum. Dit zal resulteren in een laparotomie met minimale blootstelling van de holte.</li>
</ol>2. Lokaliseren en blootstellen van de alvleesklier
<ol><li>Trek met behulp van een retractor de lever naar het hoofd van de muis, ~ 1 cm van de darm.</li>
	<li>Zoek het gebied van de alvleesklier dat zal worden geïnjecteerd met natrium taurocholaat (pancreaskop). Lokaliseer de twaalfvingerige darm met betrekking tot de lever- onder de lever, aan de rechterkant (aan de linkerkant als de muis wordt bekeken). De twaalfvingerige darm is het eerste deel van de dunne darm en is verbonden met het laatste deel van de maag.</li>
	<li>Til met behulp van een tang de lever op naar het hoofd van het dier en trek voorzichtig aan het dunne darmgedeelte. Fixeer de twee laterale uiteinden van de dunne darm met een 6-0 polypropyleen hechtdraad om het distale gedeelte van de gemeenschappelijke galwegen beter te kunnen bekijken.</li>
</ol>3. Ernstige acute pancreatitis inductie
<ol><li>Sluit het proximale gemeenschappelijke galkanaal tijdelijk af met een microvesselclip om te voorkomen dat retrograde infusie in de lever lekt. Het gemeenschappelijke galkanaal is te zien aan de leverzijde van de twaalfvingerige darm en de kruising met de twaalfvingerige darm zal wit lijken. Stel het orgaan bloot uit de buikholte.</li>
	<li>Prik het periampullaire gebied (witachtig deel van de wand van de dunne darm) om toegang te krijgen tot het gemeenschappelijke galkanaal met een naald van 0,4 mm aangesloten op een polyethyleenbuis van 0,54 mm.</li>
	<li>Maak een tijdelijke occlusie van de distale gemeenschappelijke galwegen met 8-0 hechtdraad om te voorkomen dat de natrium taurocholaatoplossing in de twaalfvingerige darm lekt.</li>
	<li>Start de infusiepomp en programmeer een infusie met 2,5% natrium taurocholaatoplossing (verdund in 0,9% zoutoplossing) met een constante snelheid van 10 μL/10 g lichaamsgewicht gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Verwijder na de infusie de microvesselclip, de tijdelijke 8-0 hechting en de injectienaald uit de gal pancreatische ductus om de fysiologische stroom van de gal te reconstitueren.</li>
	<li>Hecht aan het einde de buik met 6-0 niet-absorberende monofilament polypropyleen hechtdraad. De tijd tussen de laparotomie en de eindnaad moet maximaal 30 minuten zijn (zie figuur 1).</li>
	<li>Na de operatie huisvest je de dieren in polyethyleen dozen bekleed met houtkrullen en water en voedsel ad libitum.</li>
	<li>Behandel controlemuizen op dezelfde manier als de experimentele muizen, maar zorg ervoor dat het infusaat alleen uit zoutoplossing bestaat. Voer de chirurgische procedure en de infusie van zoutoplossing (10 ml / min, gedurende 3 minuten) uit in een controlegroep (SHAM) om de inflammatoire vertekening veroorzaakt door chirurgie en cannulatie te elimineren.</li>
	<li>Gebruik tramadol 12,5 mg/kg subcutaan elke 8 uur, te beginnen na postoperatief herstel.</li>
</ol>4. Analysemethoden
<ol><li>Verdoof de dieren na 12 uur na AP-inductie met xylazine (10 mg / kg) en ketamine (80 mg / kg) om ongeveer 250 μL bloed via de orbitale plexus te verzamelen.<ol>
<li>Houd de huid voorzichtig op de rug, bevordert een licht uitsteeksel van de oogbol en plaats deze met het oog naar boven gericht.</li>
		<li>Breng een druppel oogzalf met lokale verdoving in het oog van het dier.</li>
		<li>Plaats het uiteinde van de capillaire buis in de mediale ooghoek en breng deze voorzichtig onder de oogbol in, met een hoek van ~ 30 ° -45 °. Draai de capillaire buis totdat de bloedstroom begint. Vergeet niet dat het niet nodig is om geweld te gebruiken voor de procedure.</li>
		<li>Zodra de verzameling voorbij is, zorg dan voor homeostase door de oogleden gesloten te houden door lichte compressie met het gaas. Gooi de capillaire buis weg in de naaldencontainer19.</li>
		<li>Centrifugeer het serum (700 x g, 15 min) en bewaar het supernatant voor amylase en IL-6 dosering (stap 4.7 en 4.8).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Euthanaseer muizen door CO2-verstikking .</li>
	<li>Gebruik een naald van 27 G om 4 ml ijskoude 1x PBS in de peritoneale holte te injecteren. Gespannen de buikhuid en zorg ervoor dat de naald langzaam in het peritoneum wordt geduwd om geen organen te doorboren. Masseer na de injectie het peritoneum gedurende 10 s voorzichtig om cellen te verwijderen die aan het peritoneum zijn gehecht.</li>
	<li>Maak met een schaar en pincet een kleine snede (0,5 cm) op de binnenhuid en het spierstelsel om de buikholte bloot te leggen. Plaats een bolpipet in het peritoneum en vang de vloeistof op. Pas op dat u geen vetweefsel of andere organen opzuigt.</li>
	<li>Verzamel zoveel mogelijk vocht en deponeer de verzamelde celsuspensie in buizen die op ijs worden gehouden. Gooi de bolpipet weg in de naaldencontainer20. Centrifugeer de peritoneale vloeistof (250 x g, 5 min) en bewaar het supernatant voor IL-6 dosering (stap 4.9).</li>
	<li>Verzamel het pancreasgebied grenzend aan de twaalfvingerige darm (<5 mm).</li>
	<li>Verwerk de alvleesklier door te fixeren in 10% formaline en neem het op in paraffine.<ol>
<li>Kleur de dia's met hematoxyline en eosine voor histopathologische analyses onder lichtmicroscopie. Gebruik Schmidt's protocol21 (pancreasoedeem, acinaire cel, letsel / necrose, pancreasontsteking) om de omvang van AP te beoordelen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Meet amylase (U/dL) met behulp van in de handel verkrijgbare kits volgens de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	<li>Meet IL-6 door Luminex-assays met behulp van commerciële kits volgens de aanbevelingen van de fabrikant.</li>
	<li>Bewaar het serum en het bovennatuurmiddel van de peritoneale vloeistof die in de stappen 4.1 en 4.4 zijn verkregen, indien nodig in een vriezer bij -80 °C.</li>
</ol>

<ol><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significantly+different+clinical+features+between+hypertriglyceridemia+and+biliary+acute+pancreatitis%3A+A+retrospective+study+of+730+patients+from+a+tertiary+center%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center.</a> BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).</li>
<li>Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+antioxidant+mechanisms+in+lung+during+experimental+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Induction of antioxidant mechanisms in lung during experimental pancreatitis in rats.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 58 (5), 297-305 (2020).</li>
<li>T, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraductal+infusion+of+taurocholate+followed+by+distal+common+bile+duct+ligation+leads+to+a+severe+necrotic+model+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Intraductal infusion of taurocholate followed by distal common bile duct ligation leads to a severe necrotic model of pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 44 (3), (2015).</li>
<li>Botoi, G., Andercou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+17-prognostic+marker+of+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Chirurgia%22%5BJournal%5D)">Interleukin 17-prognostic marker of severe acute pancreatitis.</a> Chirurgia. 104 (4), 431-438 (2009).</li>
<li>Li, D., Li, J., Wang, L., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+IL-1beta%2C+IL-8%2C+and+IL-10+polymorphisms+and+risk+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics+and+Molecular+Research%22%5BJournal%5D)">Association between IL-1beta, IL-8, and IL-10 polymorphisms and risk of acute pancreatitis.</a> Genetics and Molecular Research. 14 (2), 6635-6641 (2015).</li>
<li>Feng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+peritoneal+lavage+with+ulinastatin+on+the+expression+of+NF-kappaB+and+TNF-alpha+in+multiple+organs+of+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of peritoneal lavage with ulinastatin on the expression of NF-kappaB and TNF-alpha in multiple organs of rats with severe acute pancreatitis.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 10 (6), 2029-2034 (2015).</li>
<li>Fang, D. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+sildenafil+on+inflammatory+injury+of+the+lung+in+sodium+taurocholate-induced+severe+acute+pancreatitis+rats%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Effects of sildenafil on inflammatory injury of the lung in sodium taurocholate-induced severe acute pancreatitis rats.</a> International Immunopharmacology. 80, (2020).</li>
<li>Ceranowicz, P., Cieszkowski, J., Warzecha, Z., Dembinski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Post%C4%99py+Higieny+i+Medycyny+Do%C5%9Bwiadczalnej%28Online%29%22%5BJournal%5D)">Experimental models of acute pancreatitis.</a> Postępy Higieny i Medycyny Doświadczalnej(Online). 69, 264-269 (2015).</li>
<li>Wan, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+experimental+animal+models+of+biliary+acute+pancreatitis+and+recent+advances+in+basic+research%5BTitle%5D)+AND+%22HPB+%28Oxford%29%22%5BJournal%5D)">Review of experimental animal models of biliary acute pancreatitis and recent advances in basic research.</a> HPB (Oxford). 14 (2), 73-81 (2012).</li>
<li>Mayerle, J., Sendler, M., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretagogue+%28Caerulein%29+induced+pancreatitis+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreapedia%3A+The+Exocrine+Pancreas+Knowledge+Base%22%5BJournal%5D)">Secretagogue (Caerulein) induced pancreatitis in rodents.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2013).</li>
<li>Wang, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+protects+against+L-arginine-induced+acute+necrotizing+pancreatitis+in+mice+by+enhancing+SIRT1-mediated+deacetylation+of+p53+and+heat+shock+factor+1%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Resveratrol protects against L-arginine-induced acute necrotizing pancreatitis in mice by enhancing SIRT1-mediated deacetylation of p53 and heat shock factor 1.</a> International Journal of Molecular Medicine. 40 (2), 427-437 (2017).</li>
<li>Ma, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+resveratrol+on+peritoneal+macrophages+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of resveratrol on peritoneal macrophages in rats with severe acute pancreatitis.</a> Inflammation Research. 54 (12), 522-527 (2005).</li>
<li>Souza, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+effects+of+peritoneal+lavage+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory effects of peritoneal lavage in acute pancreatitis.</a> Pancreas. 39 (8), 1180-1184 (2010).</li>
<li>Perides, G., Acker, G. J. v, Laukkarinen, J. M., Steer, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+biliary+pancreatitis+induced+by+retrograde+infusion+of+bile+acids+into+the+mouse+pancreatic+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Experimental acute biliary pancreatitis induced by retrograde infusion of bile acids into the mouse pancreatic duct.</a> Nature Protocols. 5 (2), 335-341 (2010).</li>
<li>Wittel, U. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taurocholate-induced+pancreatitis%3A+a+model+of+severe+necrotizing+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Taurocholate-induced pancreatitis: a model of severe necrotizing pancreatitis in mice.</a> Pancreas. 36 (2), 9-21 (2008).</li>
<li>Tao, L., Reese, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+mouse+models+that+reflect+human+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunology%22%5BJournal%5D)">Making mouse models that reflect human immune responses.</a> Trends Immunology. 38 (3), 181-193 (2017).</li>
<li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacy+and+Bioallied+Science%22%5BJournal%5D)">Use of rodents as models of human diseases.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Science. 6 (1), 2-9 (2014).</li>
<li>Song, H. K., Hwang, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+C57BL%2F6N+mice+on+the+variety+of+immunological+researches%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Research%22%5BJournal%5D)">Use of C57BL/6N mice on the variety of immunological researches.</a> Laboratory Animal Research. 33 (2), 119-123 (2017).</li>
<li>Bogdanske, J. J., Stelle, S. H. -V., Riley, M. V., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBogdanske%2C+JJ+%22Suturing+Principles+and+Techniques+in+Laboratory+Animal+Surgery.+1st+edition%22">Suturing Principles and Techniques in Laboratory Animal Surgery. 1st edition</a>. (1), CRC Press. (2010).</li>
<li>Ray, A., Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+peritoneal+cavity+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse peritoneal cavity cells.</a> Journal of Visualized Experiments. (35), e1488(2010).</li>
<li>Schmidt, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+better+model+of+acute+pancreatitis+for+evaluating+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A better model of acute pancreatitis for evaluating therapy.</a> Annals of Surgery. 215 (1), 44-56 (1992).</li>
<li>Liu, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+improves+the+therapeutic+efficacy+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+rats+with+severe+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Resveratrol improves the therapeutic efficacy of bone marrow-derived mesenchymal stem cells in rats with severe acute pancreatitis.</a> International Immunopharmacology. 80, 106128(2020).</li>
<li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 125 (12), 110024(2020).</li>
<li>Yang, X. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chaiqin+chengqi+decoction+alleviates+severe+acute+pancreatitis+associated+acute+kidney+injury+by+inhibiting+endoplasmic+reticulum+stress+and+subsequent+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Chaiqin chengqi decoction alleviates severe acute pancreatitis associated acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress and subsequent apoptosis.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 125, 110024(2020).</li>
<li>Venglovecz, V., Z, R., Hegyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+bile+acids+on+pancreatic+ductal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreapedia%3A+The+Exocrine+Pancreas+Knowledge+Base%22%5BJournal%5D)">The effects of bile acids on pancreatic ductal cells.</a> Pancreapedia: The Exocrine Pancreas Knowledge Base. (1), (2019).</li>
<li>Roberts, S. E., Akbari, A., Thorne, K., Atkinson, M., Evans, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+acute+pancreatitis%3A+impact+of+social+deprivation%2C+alcohol+consumption%2C+seasonal+and+demographic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Alimentary+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The incidence of acute pancreatitis: impact of social deprivation, alcohol consumption, seasonal and demographic factors.</a> Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 38 (5), 539-548 (2013).</li>
<li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+acute+and+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Models of acute and chronic pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li>
<li>Nakamura, K., Fukatsu, K., Sasayama, A., Yamaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+immune-modulating+formula+comprising+whey+peptides+and+fermented+milk+improves+inflammation-related+remote+organ+injuries+in+diet-induced+acute+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Microbiota+Food+Health%22%5BJournal%5D)">An immune-modulating formula comprising whey peptides and fermented milk improves inflammation-related remote organ injuries in diet-induced acute pancreatitis in mice.</a> Biosci Microbiota Food Health. 37 (1), 1-8 (2018).</li>
<li>Kui, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+methodolgy+of+L-Arginine-induced+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">New insights into the methodolgy of L-Arginine-induced acute pancreatitis.</a> PLoS One. 10 (2), 011758(2015).</li>
<li>Xue, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternatively+activated+macrophages+promote+pancreatic+fibrosis+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communication%22%5BJournal%5D)">Alternatively activated macrophages promote pancreatic fibrosis in chronic pancreatitis.</a> Nature Communication. 6, 7158(2015).</li>
<li>Lesina, M., Wormann, S. M., Neuhofer, P., Song, L., Algul, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6+in+inflammatory+and+malignant+diseases+of+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6 in inflammatory and malignant diseases of the pancreas.</a> Seminars in Immunology. 26 (1), 80-87 (2014).</li>
<li>Rao, S. A., Kunte, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-6%3A+An+early+predictive+marker+for+severity+of+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Interleukin-6: An early predictive marker for severity of acute pancreatitis.</a> Indian Journal of Critical Care Medicine. 21 (7), 424-428 (2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De methode voor het induceren van acute pancreatitis door retrograde natrium taurocholaatinfusie is al aangetoond bij ratten22,23,24. Drie soortgelijke werken, gepubliceerd in 2008, 2010 en 2015, dienden als referentie voor het protocol3,14,15. In dit werk vermelden we alle kritieke stappen voor het reproduceren van deze methode in C57B...

Bij mensen is de aanwezigheid van galstenen de meest voorkomende oorzaak van pancreatitis als gevolg van de obstructie van het terminale deel van de choledochal, waardoor de stroom van pancreassecreties wordt onderbroken en een intens ontstekingsproces in de pancreas wordt veroorzaakt, met een toename van de concentratie van spijsverteringsenzymen in het serum en ontstekingsmediatoren1,2.
Er zijn twee verschillende theorieën voorgesteld om de ontwikkeling van acute pancreatitis (AP) te verklaren. De "common channel" -theorie suggereert dat de stenen die in de galblaas aanwezig zijn, het distale gemeenschappelijke galkanaalsysteem belemmeren, waardoor galsecretie retrograde in de pancreaskanalen kan stromen. De tweede theorie (de "kanaalobstructie" -theorie) suggereert dat de obstructie van het pancreaskanaal door overtollige galstenen een blokkade veroorzaakt in de stroom van pancreassecretie naar de twaalfvingerige darm, waardoor ductale hypertensie3 ontstaat. Hoewel de mechanismen die leiden tot acute gal pancreatitis niet volledig worden begrepen, is het resultaat een intens ontstekingsproces. Spijsverteringsenzymuitbarsting en zelfvertering van de alvleesklier leiden tot histopathologische veranderingen, een toename van inflammatoire cytokines (IL-1β, IL-6, TNF-α) in ascitisch vocht en serum, en een toename van acute fase-eiwitten4,5,6.
Ernstige acute pancreatitis is een aandoening die klinische aandacht verdient vanwege de betrokkenheid van meerdere organen en een hoog sterfterisico. Diermodellen voor de reproductie van acute pancreatitis (AP) zijn belangrijk omdat deze de pathofysiologische mechanismen van de ziekte verklaren en helpen bij het volgen van de evolutie van ontstekingsgebeurtenissen, te beginnen met de beginfasen van de ziekte. Dit is meestal niet mogelijk in de klinieken2,7. Bovendien is de toegang tot pancreasweefsels gemakkelijk in preklinische studies, wat de opheldering van veranderingen in verband met klinische omstandigheden8 bevordert, samen met de mogelijkheid om met isogene soorten te werken, ongewenste variabelen te elimineren en klinische gelijkenis te weerspiegelen met de uitkomsten waargenomen in de menselijke conditie9.
Gal- en niet-galmodellen voor de inductie van acute pancreatitis bij ratten en muizensoorten zijn vaak bestudeerd in de wetenschappelijke literatuur. Niet-galwegmethoden voor inductie omvatten toediening van supramaximale stimulerende doses van de cholecystokinine secretagogue of zijn analoge cerulein10; toediening van bijna dodelijke doses L-arginine; of toediening van een choline-deficiënt dieet aangevuld met ethionine11. Hoewel deze methoden gemakkelijk te reproduceren zijn en resulteren in pancreasontsteking, repliceren ze niet de mechanismen die in theorie AP veroorzaken (d.w.z. de reflux van galsecretie in de pancreaskanalen). De techniek die het galmodel aanpakt, is gebaseerd op de retrograde infusie van galzuren in de pancreaskanalen en vereist goed opgeleide onderzoekers om dit protocol uit te voeren. Er zijn verschillende studies gepubliceerd met behulp van deze methode bij ratten (blijkbaar om technische redenen, aangezien deze experimenten chirurgische ingrepen omvatten)12,13. De aanpak bij muizen kan echter interessantere uitkomsten bieden in de studie van ontsteking3,14,15. In deze studie zullen we een checklist laten zien van de stappen die moeten worden gevolgd voor de reproductie van ernstige acute pancreatitis door infusie van natrium taurocholaat bij C57BL/6 verdoofde muizen.
Voor werken die de noodzaak van experimenten met antilichamen en analyse van de gen- en eiwitexpressie met zich meebrengen, heeft het gebruik van muizen de voorkeur vanwege het grotere arsenaal aan materialen voor deze dieren en de mogelijkheid om te werken met isogene en knock-out soorten, onder andere die relevant kunnen worden gebruikt voor studies16. Muizen C57BL/6 is een inteelt muizenstam die oorspronkelijk is ontwikkeld voor de studie van antitumoractiviteit en immunologie. Deze stam krijgt steeds meer de voorkeur van onderzoekers omdat het isogeen is, waardoor een grotere reproduceerbaarheid van de resultaten mogelijk is, wat het gebruik van een kleiner aantal dieren in een experiment en minder variabiliteit van de resultaten tussen dezelfde groep kan impliceren17,18.
Perides et al. (2010)14 publiceerden een protocol voor AP-inductie bij muizen door natrium taurocholaatinfusie. Hier werken we dit model bij met behulp van een hogere natrium taurocholaatconcentratie (2,5%) in C57BL/6 muizen, met een gedefinieerd volume en snelheid van infusie (figuur 1). Het maximale niveau van ernst wordt bereikt binnen 12 uur na inductie bij muizen. De verhoging van de concentratie van IL-6, zowel in het serum als in de peritoneale holte, is gecorreleerd met de progressie van AP. Met de praktijk is de totale geschatte tijd vanaf de inductie van anesthesie tot de voltooiing van de infusie 25 minuten per dier. Het is essentieel dat een getrainde onderzoeker dit experiment uitvoert. Om ervoor te zorgen dat de oplossing op de juiste manier in het gemeenschappelijke galkanaal wordt geïnjecteerd, voert u verschillende pilotentrainingen uit met methyleenblauw in plaats van natrium taurocholaat.

<table><tbody><tr><td>0.4 mm naald</td><td>INTRAG MEDICAL TECH</td><td>90183210</td><td>30G</td></tr><tr><td>&nbsp;0.54 mm polyethyleen buis</td><td>Tygon</td><td>730010</td><td>-</td></tr><tr><td>Styrofoam blok</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Masking tape voor het monteren van de muis</td><td>Missner</td><td>1236</td><td>-</td></tr><tr><td>Infusiepomp ingesteld op 10&micro;L / min.</td><td>Havard apparaat-Peristaltische Pomp Serie</td><td>MA1 55-7766</td><td>&nbsp;Model 66 Kleine Peristaltische</td></tr><tr><td>Schaar en pincetten</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antiseptisch providine jodium</td><td>Pfizer</td><td>12086OR</td><td>antisepsis</td></tr><tr><td>70% ethanol</td><td>SIGMA</td><td>459836</td><td>Meng 700 mL 100% ethanol met 300 mL dH2O</td></tr><tr><td>Schermesje</td><td>Lord</td><td>bdk9a1ghk6</td><td>Voor trichotomie</td></tr><tr><td>Natrium taurocholaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>86339- 1G</td><td>CAS NUMMER- 345909-26-4</td></tr><tr><td>Microvat clip</td><td>Medicon Surgical</td><td>56.87.35</td><td>Approximator, opening 4.0 mm, sluitdruk 30 -&nbsp;40 g</td></tr><tr><td>6-0 proleen</td><td>Bioline</td><td>5162</td><td>Hechtdraad</td></tr><tr><td>Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL</td><td>Crist&aacute;lia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 2%</td><td>Syntec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriele zoutoplossing (0.9% (wt/vol) zout)</td><td>Farmace</td><td>105851</td><td></td></tr><tr><td>Methylblauw</td><td>Sigma-Aldrich Chemicals</td><td>M5528</td><td></td></tr><tr><td>MILLIPLEX&nbsp;MAP&nbsp;Muis Cytokine/Chemokine Magnetische Kralen Paneel - Immunologie Multiplex Assay</td><td>MERCK</td><td>MCYTOMAG-70K</td><td>Analyseer tegelijkertijd meerdere cytokine en chemokine biomarkers met Bead-Based Multiplex Assays met behulp van de Luminex-technologie, in muis serum, plasma en celcultuur monsters.</td></tr><tr><td>Amylase Assay</td><td>Labtest</td><td>11</td><td></td></tr><tr><td>Desmarres retractor 13-mm breedte</td><td>ROBOZ</td><td>RS-6672</td><td></td></tr></tbody></table>

natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij c57bl/6 muizen

Sodium Taurocholate Induced Severe Acute Pancreatitis in C57BL/6 Mice

Biliaire acute pancreatitis inductie door natrium taurocholaat infusie is op grote schaal gebruikt door de wetenschappelijke gemeenschap als gevolg van de representatie van de menselijke klinische conditie en reproductie van inflammatoire gebeurtenissen die overeenkomen met het begin van klinische gal pancreatitis. De ernst van pancreasschade kan worden beoordeeld door de concentratie, snelheid en het volume van het geïnfundeerde galzuur te meten. Deze studie biedt een bijgewerkte checklist van de materialen en methoden die worden gebruikt in de protocolreproductie en toont de belangrijkste resultaten van dit acute pancreatitis (AP) -model. De meeste eerdere publicaties hebben zich beperkt tot het reproduceren van dit model bij ratten. We hebben deze methode toegepast bij muizen, wat extra voordelen biedt (d.w.z. de beschikbaarheid van een arsenaal aan reagentia en antilichamen voor deze dieren, samen met de mogelijkheid om te werken met genetisch gemodificeerde muizenstammen) die relevant kunnen zijn voor de studie. Voor acute pancreatitis-inductie bij muizen presenteren we een systematisch protocol, met een gedefinieerde dosis van 2,5% natrium taurocholaat bij een infusiesnelheid van 10 μL / min gedurende 3 minuten bij C57BL / 6-muizen die zijn maximale ernstniveau bereikt binnen 12 uur na inductie en de resultaten markeren met resultaten die de methode valideren. Met oefening en techniek is de totale geschatte tijd, van de inductie van anesthesie tot de voltooiing van de infusie, 25 minuten per dier.

De ernst van pancreatitis werd gescoord tussen 0-3 volgens de schaal21 van Schmidt, waarbij nul overeenkomt met de afwezigheid, 1 overeenkomt met een milde aanwezigheid (<25%), 2 overeenkomt met een matige aanwezigheid (tussen 25 en 50%) en 3 overeenkomt met een intense aanwezigheid (> 50%) (tabel 1). De uitgevoerde metingen waren plasma amylase activiteit, pancreasoedeem, acinar cel, letsel/necrose, pancreasontsteking (door histologische analyse v...

Diermodellen voor ernstige acute pancreatitis maken de studie van pathofysiologische veranderingen in de beginfase mogelijk, waardoor de observatie van de evolutie van ontstekingsgebeurtenissen wordt vergemakkelijkt. Hier bieden we een protocol voor de inductie van ernstige acute gal pancreatitis door retrograde infusie van natrium taurocholaat in het pancreaskanaal van verdoofde C57BL / 6-muizen.

Natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij C57BL/6 muizen

Biliary acute pancreatitis induction by sodium taurocholate infusion has been widely used by the scientific community due to the representation of the ...

Deze methode kan worden gebruikt voor het reproduceren van de ontstekingsgebeurtenissen die optreden bij acute gal pancreatitis. Het is mogelijk om veranderingen in pancreasweefsel in de vroege stadia te bestuderen, wat over het algemeen niet mogelijk is in de kliniek. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat het snel en gemakkelijk te reproduceren is voor een getrainde onderzoeker, en het biedt vergelijkbare resultaten als acute pancreatitis bij mensen.De methode kan worden gebruikt om farmacologische immuunresponsen van geneesmiddelmoleculen en andere therapeutische interventies te bestuderen, omdat het de studie van ontstekingsbemiddelende cellen in de pancreas en aangrenzende organen mogelijk maakt. Bij het proberen van dit protocol is het lokaliseren van de organen en het vaststellen van het cannulatiegebied cruciaal. Onthoud de locatie van de organen en oefen de injectietoepassing eerst uit met behulp van een gekleurde oplossing zoals methyleenblauw.Na het controleren van de diepte van de anesthesie met een teen knijpen, reinigt u de buikstreek van een verdoofde muis met een 5% povidon jodiumoplossing. Verwijder met behulp van een trimmer het haar tussen de borst

sodium-taurocholate-induced-severe-acute-pancreatitis-in-c57bl6-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video describes the procedure for the generation of a mouse model with acute biliary pancreatitis via pancreatic infusion of sodium taurocholate. This model helps study pathophysiological changes induced by sodium taurocholate in the pancreas.

Acute Biliary Pancreatitis Model: A Method to Generate Acute Biliary Pancreatitis Mouse Model via Pancreatic Duct Infusion

Chronische pancreatitis (CP) is een ziekte die wordt gekenmerkt door ontsteking en fibrose van de alvleesklier, vaak geassocieerd met hardnekkige buikpijn. Dit artikel richt zich op het verfijnen van de techniek om een muismodel van CP te genereren via galweginfusie met 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS).

Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie

Een muismodel van ernstige acute pancreatitis wordt hierin beschreven. De hier gepresenteerde procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, waardoor de studie van de moleculaire mechanismen en verschillende therapeutische interventies bij acute pancreatitis op een handige manier mogelijk is.

Vaststelling van een muis ernstig acuut pancreatitismodel met behulp van retrograde injectie van natrium taurocholaat in het biliopancreatische kanaal

Intraperitoneale toediening van geneesmiddelen is een veilige en effectieve niet-invasieve benadering voor het induceren van pancreasletsel. Deze studie vergeleek vijf verschillende intraperitoneale injectieprotocollen bij muizen om verschillende gradaties van pancreasletsel te induceren en stelde een model van ernstig pancreasletsel vast om de pathologische veranderingen en behandelingsstrategieën voor ernstige acute pancreatitis (SAP) te onderzoeken.

Het voorbereiden van een muizenmodel van ernstige acute pancreatitis via een combinatie van caeruleïne en lipopolysaccharide intraperitoneale injectie

Verlopen CO 2 Meting in geïntubeerde of spontaan ademende patiënten van de Spoedeisende Hulp

Een muismodel voor de ventilator geïnduceerde longschade is een belangrijk instrument om een ​​acute longbeschadiging...

Druk gecontroleerde ventilatie te Acute Lung Injury in Muizen Braken

We beschrijven modellen van matige en ernstige ischemie-reperfusie geïnduceerde nierschade waarin de muizen ondergaan unilaterale renale pedicle klemmen gevolgd door gelijktijdige of vertraagde contralaterale nefrectomie, respectievelijk. Deze modellen consequent aanleiding geven tot nierinsufficiëntie en na het letsel fibrose, maar letselernst en overleving afhankelijk zijn van de muis achtergrond, leeftijd en chirurgische apparatuur.

Ischemie-reperfusie model van Acute Kidney Injury en Post Letsel Fibrosis in Muizen

Acuut hersenletsel is een ernstige verwonding die geen adequate behandeling tot op heden. Multifoton microscopie maakt het bestuderen van lengterichting van het proces van acuut hersenletsel ontwikkeling en indringende therapeutische strategieën bij knaagdieren. Twee modellen van acuut hersentrauma bestudeerd met in vivo twee-foton beeldvorming van de hersenen worden gedemonstreerd in dit protocol.

Acute Brain Trauma in Muizen gevolgd door Longitudinale Twee-foton Imaging

De overdracht van bm12-lymfocyten naar een C57BL/6-ontvanger is een gevestigd model van systemische lupus erythematosus. Hier beschrijven we hoe de ziekte kan worden geïnitieerd met behulp van dit model en hoe T-folliculaire helpercellen, germinale centrum B-cellen en plasmacellen kunnen worden gekenmerkt door middel van flowcytometrie.

De bm12 Induceerbare model van systemische lupus erythematosus (SLE) in C57BL / 6 muizen

Lymfkliertest distale colostomie biedt een lymfkliertest model voor menselijke afleiding colitis, een overwegend lymfatische colitis in dikke darm segment van de fecale stream uitgesloten.

Lymfkliertest distale colostoma, een nieuw Model van afleiding Colitis in C57BL/6 muizen

Leer een protocol voor het induceren van ernstige acute biliaire pancreatitis bij C57BL/6 muizen met retrograde infusie van natrium taurocholaat. Deze methode maakt vroegtijdige studie van inflammatoire processen en weefselveranderingen mogelijk.

Natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij C57BL/6 muizen

Meer video's verkennen