Murine Excisional Wound Healing Model en Histological Morphometric Wound Analysis

Dit protocol maakt gebruik van histologische analyse om robuuste morfometrische metingen van muizenexcisional wonden te verkrijgen. Met behulp van deze techniek kunnen we de hele wond analyseren met behulp van een subset van seriële secties, waardoor we defecten die anders zouden kunnen worden gemist nauwkeuriger kunnen detecteren. Het aantonen van de procedure zal Lindsey Rhea zijn, een onderzoeksmedewerker van mijn laboratorium.

Na bevestiging van een gebrek aan reactie op pedaalreflex bij een verdoofde volwassen muis, breng zalf aan op de ogen van het dier en gebruik een elektrische scheermesklipper in een caudal-rostral beweging om de vacht op de achterkant van de muis op schouderniveau te verwijderen. Gebruik een scheermesje gehouden op een hoek van 20 graden van de rug in een rostral-caudal beweging om alle resterende haren te verwijderen uit de blootgestelde huid, dan reinigen van de huid met een povidon jodium en een 70% isopropyl alcohol prep pad veeg. Voor wondinductie, draperen een schone papieren handdoek op een vlakke ondergrond bedekt met tandwas en plaats de muis op de handdoek in de liggende positie.

Knijp de huid van de muis tussen de schouderbladen langs de rug middellijn en trek de ingeklemde huid vouw uit de buurt van het lichaam. Schakel de muis in een zijwaarts liggende positie, plaats een biopsie punch van de gewenste wondgrootte zo dicht mogelijk bij het lichaam en laat de huid om te ontspannen. Druk op de punch met behulp van een schommelende beweging om alle lagen van de huid te doorboren en verwijder de punch biopsieën uit de wond met behulp van steriele schaar en pincet om de punch te bevrijden van de omliggende huid als dat nodig is.

Laat de muis vervolgens herstellen met monitoring en analgesie. Open voor morfometrische analyse van het wondbed een digitaal gekleurd wondbeeld. Als u de schaal- en meetvoorkeuren wilt instellen, selecteert u onder Schaal analyseren de optie Schaal instellen en voert u de afstand in pixels, de bekende afstand en de lengte-eenheid in.

Selecteer Globaal en OK om de schaal voor elke geopende afbeelding gelijk te houden en selecteer Analyseren en Metingen instellen om te bevestigen dat het gebiedvak is ingeschakeld. Om de wondlengte te meten, selecteert u uit de vrije hand en gebruikt u het gereedschap om langs de huid-epidermale verbinding te traceren, vanaf de laatste haarzakje van het niet-gewonde weefsel aan de ene kant van de wond tot de eerste haarzakje van het niet-gewonde weefsel aan de andere kant. Als de opperhuid niet de gehele wond bedekt, volg dan de huid-epidermale verbinding aan de ene kant van de wond waar de migrerende tong eindigt en ga door met het superieure aspect van het granulatieweefsel of de kruising tussen het granulatieweefsel en de korst totdat de migrerende tong en de eerste haarzakje van het niet gewonde weefsel aan de andere kant van de wond zijn bereikt.

Klik vervolgens op Analyseren en meten. De lengte van de meting wordt weergegeven in dezelfde eenheden als in de schaal. Als de opperhuid niet de gehele wond bedekt, meet dan de afstand tussen elke epidermale voorrand volgens het superieure aspect van het granulatieweefsel of de kruising tussen het granulatieweefsel en de korst tot de eerste haarzakje.

Om het wondgebied te meten, gebruikt u het gereedschap uit de vrije hand om het superieure aspect van de opperhuid of het superieure aspect van het granulatieweefsel te traceren vanaf de laatste haarzakje van het niet-gewonde weefsel aan de ene kant van de wond tot de eerste haarzakje van het niet-gewonde weefsel aan de andere kant. Blijf verticaal langs de haarzakje in het granulatieweefsel traceren. Zodra de tegenovergestelde haarzakje en vetweefsel of spier zijn bereikt, volg de inferieure rand van de granulatie weefsel aan de andere kant van de wond en sluit het startpunt langs het haarzakje om het gebied te sluiten.

Als de wond niet volledig epitheel is, traceer dan het superieure aspect van de opperhuid tot aan de voorrand en keer terug naar het beginpunt na de huid-epidermale kruising. Zoals geïllustreerd, bij het nemen van 2D-metingen gedurende de gehele wond, waren we in staat om parameters te berekenen die niet mogelijk zijn met 2D-analyse op het midden van de wond alleen, wat een veelgebruikte methode in het veld is. In dit experiment werden 2D-metingen van het wondgebied gebruikt en gemiddeld over de gehele wond of een middelste subset van de wond en bleek geen significant verschil tussen experimentele groepen of de analysemethoden.

Het berekende wondvolume verschilde echter aanzienlijk tussen de experimentele groepen, wat het belang aantoonde van een diepgaande histologische analyse van wondgenezingsparameters. Het genereren van consequent formaat wonden voor histologische analyse en het uitvoeren van rigoureuze seriële secties zijn van cruciaal belang voor een nauwkeurige morfometrische analyse. Onbevlekte secties kunnen worden gebruikt voor immunofluorescentie of Masson's trichrome kleuring om andere aspecten van wondgenezing te meten, terwijl flitsvroestende wonden kunnen worden gebruikt naast morfometrie voor kwantitatieve eiwitanalyse.