Name: Subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer een chirurgische techniek voor subretinale transplantatie van menselijke stamcel-afgeleide retinaal weefsel in een katachtig model. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapie voor retinale degeneratieve ziekten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door NEI Fast-track SBIR-subsidie R44-EY027654-01A1 en SBIR-subsidie 3 R44 EY 027654 - 02 S1 (I.O.N., Lineage Cell Therapeutics; Dr. Petersen-Jones is een co-PI). De auteurs willen mevrouw Janice Querubin (MSU RATTS) bedanken voor haar hulp bij anesthesie en algemene zorg voor de dieren die in deze studie zijn opgenomen, evenals hulp bij chirurgische instelling en voorbereiding / sterilisatie van instrumenten. De auteurs willen Dr. Paige Winkler bedanken voor de hulp bij het ontvangen van de organoïden en het plaatsen ervan in media op de dag voorafgaand aan de implantatie en voor de hulp op de dag van de implantatie. De auteurs zijn ook de heer Randy Garchar (LCTX) dankbaar voor het ijverig verzenden van retinale organoïden, het assembleren van de verzender en het downloaden van temperatuur- en G-stress-records na elke zending. Dit werk werd uitgevoerd terwijl auteur Igor Nasonkin in dienst was van Biotime (nu Lineage).

Ratnesh K. Singh, Ph.D., Francois Binette, Ph.D., en Igor O. Nasonkin Ph.D. zijn werknemers van Lineage Cell Therapeutics, Inc. De auteurs verklaren geen belangenverstrengeling.

Implantatie van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (retinale organoïden) in de subretinale ruimte is een veelbelovende experimentele benadering voor het herstellen van het gezichtsvermogen voor retinale degeneratieve ziekten in een laat stadium veroorzaakt door PR-celdood (ernstige of terminale blindheid). De gepresenteerde aanpak bouwt voort op een eerder ontwikkelde en met succes geteste experimentele therapie op basis van subretinale transplantatie van een stuk menselijk foetaal netvliesweefsel23,24,25</...

Miljoenen mensen over de hele wereld worden beïnvloed door retinale degeneratie (RD) met als gevolg een visuele beperking of blindheid geassocieerd met verlies van de lichtgevoelige fotoreceptoren (PR's). Leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD) is een belangrijke oorzaak van blindheid als gevolg van een combinatie van genetische risicofactoren en omgevings- / levensstijlfactoren. Daarnaast is gebleken dat meer dan 200 genen en loci erfelijke RD (IRD)1 veroorzaken. Retinitis pigmentosa (RP), de meest voorkomende IRD, is genetisch heterogeen met meer dan 3.000 genetische mutaties in ongeveer 70 genen die 2,3,4 worden gerapporteerd. Leber Congenitale Amaurosis (LCA), die blindheid in de kindertijd veroorzaakt, is ook genetisch heterogeen 5,6. Genaugmentatietherapie is ontwikkeld en bevindt zich in klinische onderzoeken voor de behandeling van een klein aantal IRD's 3,7. Er moet echter een afzonderlijke therapie worden ontwikkeld voor de behandeling van elke afzonderlijke genetische vorm van IRD en daarbij slechts een kleine subgroep van patiënten behandelen. Bovendien is genvergroting afhankelijk van de aanwezigheid van een populatie van te redden fotoreceptoren en is daarom niet van toepassing op gevorderde degeneratie.
Er is daarom een dringende en nog onvervulde klinische behoefte aan de ontwikkeling van therapieën die geavanceerde RD's en diepgaande tot terminale blindheid aanpakken en behandelen. In de afgelopen 2 decennia zijn neuroprothetische implantaten ontwikkeld en getest in grote diermodellen, zoals de kat, voorafgaand aan menselijk gebruik 8,9,10,11,12,13,14. Evenzo zijn in de afgelopen 20 jaar retinale vervangingstherapieën met behulp van vellen embryonaal of zelfs volwassen netvlies van zoogdieren die subretinaal zijn getransplanteerd, ontwikkeld 15,16,17,18,19,20,21,22 en zelfs met succes getest bij RD-patiënten 23,24,25. Beide benaderingen maken gebruik van het idee om nieuwe sensoren (fotovoltaïsche siliciumfotodiodes in het geval van neuroprothetische apparaten26,27, en gezonde mutatievrije fotoreceptoren georganiseerd in vellen, in het geval van retinale plaatimplantatie) in het netvlies te introduceren met gedegenereerde PR's. Recente studies hebben het gebruik van op stamcellen gebaseerde benaderingen onderzocht, zoals transplantatie van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC)-afgeleide retinale voorlopers28,29, hPSC-fotoreceptoren 30 en hPSC-retinale organoïden31,32,33. Retinale organoïden maken de vorming van netvliesweefsel in een schaal mogelijk en afleiding van fotoreceptorvellen met duizenden mutatievrije PR's, die lijken op de fotoreceptorlaag in het zich ontwikkelende menselijke foetale netvlies 34,35,36,37,38,39,40 . Het transplanteren van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van patiënten met RD-aandoeningen is een van de nieuwe en veelbelovende benaderingen voor experimentele celtherapie, die wordt nagestreefd door een aantal teams31,32,41,42. Vergeleken met transplantatie van de celsuspensie (van jonge fotoreceptoren of retinale voorlopercellen), werd aangetoond dat getransplanteerde vellen foetale fotoreceptoren resulteerden in verbeteringen in het gezichtsvermogen in klinische onderzoeken23,24.
Het hier gepresenteerde protocol beschrijft in detail een transplantatieprocedure voor subretinale toediening van de gehele retinale organoïden (in plaats van organoïde randen33,41) als een potentieel betere manier om intacte retinale vellen met PR's te introduceren, om de overleving van het transplantaat te vergroten en de bladconservering te verbeteren. Hoewel procedures voor het introduceren van een plat stuk menselijk netvlies en ook RPE-pleisters zijn ontwikkeld43,44,45, is transplantatie van grotere 3D-grafts niet onderzocht. Van stamcellen afgeleide retinale organoïden bieden een onuitputtelijke bron van fotoreceptorbladen voor het ontwikkelen van technologieën voor het herstel van het gezichtsvermogen, zijn vrij van ethische beperkingen en worden beschouwd als een uitstekende bron van menselijk netvliesweefsel voor therapieën gericht op de behandeling van gevorderde RD en terminale blindheid46. De ontwikkeling van chirurgische methoden voor nauwkeurige subretinale implantatie van retinale organoïden met minimaal letsel aan de retinale niche van de gastheer (neuraal netvlies, retinaal pigmentepitheel en retinale en choroïdale vasculatuur) is een van de kritieke stappen voor het bevorderen van dergelijke therapie in de richting van klinische toepassingen31,32. Grote diermodellen zoals katten, honden, varkens en apen hebben bewezen goede modellen te zijn voor het onderzoeken van chirurgische toedieningsmethoden en om de veiligheid van geïmplanteerde vellen weefsel (retinale pigmentepitheel (RPE) cellen) aan te tonen en het gebruik van organoïden te onderzoeken 41,44,45,47,48,49,50 . Het grote dierlijke oog heeft een vergelijkbare bolgrootte als de mens en een vergelijkbare anatomie, waaronder de aanwezigheid van een gebied met een hoge fotoreceptordichtheid, inclusief kegeltjes (het centrale gebied), dat lijkt op de menselijke macula 6,51,52.
In dit manuscript wordt een techniek beschreven voor de implantatie van hPSC-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van katachtige grote diermodellen (zowel wild-type als CrxRdy / + katten), die, samen met veelbelovende werkzaamheidsresultaten32,53, een basis vormt voor verdere ontwikkeling van dergelijke onderzoekstherapie in de richting van klinische toepassingen om RD-aandoeningen te behandelen.

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m pore syringe filter with PES membrane</td><td>Cameo</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>23G subretinal injector met uitbreidbare 41 G cannula</td><td>DORC</td><td>1270.EXT</td><td></td></tr><tr><td>250 &micro;L hamilton gas tight luer lock syringe</td><td>Hamilton</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>6-0 Silk suture</td><td>Ethicon</td><td>707G</td><td></td></tr><tr><td>6-0/7-0 polyglactin suture</td><td>Ethicon</td><td>J570G</td><td></td></tr><tr><td>Acepromazine maleate 500mg/5mL (Aceproject)</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Buprenorphine 0.3 mg/mL</td><td>Par Pharmaceutical</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>cSLO + SD-OCT</td><td>Heidelberg Engineering</td><td>Spectralis HRA+ OCT</td><td></td></tr><tr><td>Cyclosporine</td><td>Novartis</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Dexamethasone 2mg/mL (Azium)</td><td>Vetone</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Doxycyline 25mg/5mL</td><td>Cipla</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Fatal Plus oplossing (pentobarbital oplossing)</td><td>Vortech</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Gentamicin 20mg/2mL</td><td>Hospira</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Glass capillary (Thin-Wall Single-Barrel Standard Borosilicate (Schott Duran) Glass Tubing</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW150-4</td><td></td></tr><tr><td>Methylprednisolone actetate 40 mg/mL</td><td>Pfizer</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>OCT medium (Tissue-Tek O.C.T. Compound)</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Olympic Vac-Pac Size 23</td><td>Natus</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde 16% oplossing</td><td>EMS</td><td>15719</td><td></td></tr><tr><td>Phenylephrine Hydrochloride 10% Ophthalmic Solution</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Prednisolone 15mg/5mL</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Propofol 500mg/50mL (10 mg/mL) (PropoFlo28)</td><td>Zoetis</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>RetCam II video fundus camera</td><td>Clarity Medical Systems</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Triamcinolone 400mg/10 mL (Kenalog-40)</td><td>Bristol -Myers Squibb Company</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Tropicamide 1% oogdruppeloplossing</td><td>Akorn</td><td>NA</td><td>kan worden gevonden via verschillende leveranciers</td></tr><tr><td>Vitrectomy 23G port</td><td>Alcon</td><td>Accurus systemen</td><td></td></tr><tr><td>Vitrectomy machine</td><td>Alcon</td><td>Accurus systemen</td><td></td></tr><tr><td>Vitreo-retinaal verticaal 80&deg; schaar met knevelgreep</td><td>Frimen</td><td>FT170206T</td><td></td></tr></tbody></table>

subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Retinale degeneratieve (RD) aandoeningen geassocieerd met fotoreceptorverlies zoals leeftijdsgebonden maculaire degeneratie (AMD), retinitis pigmentosa (RP) en Leber Congenitale Amaurosis (LCA) veroorzaken progressief en slopend verlies van het gezichtsvermogen. Er is een onvervulde behoefte aan therapieën die het gezichtsvermogen kunnen herstellen zodra fotoreceptoren verloren zijn gegaan. Transplantatie van menselijke pluripotente stamcel (hPSC)-afgeleid retinaal weefsel (organoïden) in de subretinale ruimte van een oog met geavanceerde RD brengt retinale weefselvellen met duizenden gezonde mutatievrije fotoreceptoren en heeft een potentieel om de meeste / alle blinderende ziekten geassocieerd met fotoreceptordegeneratie te behandelen met één goedgekeurd protocol. Transplantatie van foetaal netvliesweefsel in de subretinale ruimte van diermodellen en mensen met gevorderde RD is met succes ontwikkeld, maar kan niet worden gebruikt als een routinetherapie vanwege ethische problemen en beperkte weefseltoevoer. Grote oog erfelijke retinale degeneratie (IRD) diermodellen zijn waardevol voor het ontwikkelen van gezichtshersteltherapieën met behulp van geavanceerde chirurgische benaderingen om retinale cellen / weefsel in de subretinale ruimte te transplanteren. De overeenkomsten in bolgrootte en fotoreceptordistributie (bijv. Aanwezigheid van macula-achtige regiogebiedcentralisten) en beschikbaarheid van IRD-modellen die de menselijke IRD nauw samenvatten, zouden een snelle vertaling van een veelbelovende therapie naar de kliniek vergemakkelijken. Hier wordt een chirurgische techniek gepresenteerd voor het transplanteren van hPSC-afgeleid netvliesweefsel in de subretinale ruimte van een groot diermodel waarmee deze veelbelovende aanpak in diermodellen kan worden beoordeeld.

Deze procedure maakt de succesvolle en reproduceerbare implantatie van hPSC-afgeleide retinale organoïden mogelijk in de subretinale ruimte van een groot oogdiermodel (hier gedemonstreerd aan de hand van 2 voorbeelden: wild-type katten met gezonde fotoreceptoren (PR's) en CrxRdy / + katten met degenererende PR's en netvlies). Bereid met behulp van de stappen in figuur 1 de van hPSC afgeleide retinale organoïden voor en laad deze in de borosilicaatglazen canule va...

Hier wordt een chirurgische techniek gepresenteerd voor het transplanteren van van menselijke pluripotente stamcellen (hPSC) afgeleid netvliesweefsel in de subretinale ruimte van een groot diermodel.

Subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

Het huidige protocol toont in detail subretinale toediening van de gehele retinale organoïden in een groot diermodel, gericht op het ontwikkelen van celtherapiebenaderingen voor retinale degeneratie. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het organoïden rechtstreeks aan het doelweefsel, het netvlies, kan afleveren. De techniek is gericht op de behandeling van geavanceerde blinderende retinale degeneratieve aandoeningen, zoals leeftijdsgebonden maculaire degeneratie, retinitis pigmentosa of leber congenitale amaurosis.De procedure wordt gedemonstreerd door Dr.Peterson Jones. Voor subretinale implantatie van de organoïden, gebruik Stevens Tenotomy Scissors om een 0,5 tot 1 centimeter laterale canthotomie uit te voeren bij een vier maanden oude 's nachts nuchtere verdoofde kat, en plaats een barraquer ooglid speculum van de juiste grootte in de incisie om de oogleden open te houden met een chirurgische assistent die regelmatig het hoornvlies irrigeert met BSS tijdens de procedure. Gebruik 0,5 Castroviejo corneale bindtang en een kleine mug hemostat om het bulbaire bindvlies naast de limbus voorzichtig vast te pakken.Plaats twee 6-0 zijden hechtingen in het bindvlies direct naast de limbus op de posities 4 en 8 uur om het oog in de primaire blik te houden en het derde ooglid in te trekken. Klem de uiteinden van de hechtingen vast met kleine muggenhemostaten om hun manipulatie te helpen en plaats een andere hechting op de positie van 12 uur op de limbus gedeeltelijk door de dikte van de limbus, waarbij ervoor wordt gezorgd dat het oog niet binnendringt. Knoop de hechtdraad losjes vast, knip het uiteinde kort en plaats een hechting in het bindvlies direct naast de limbus op de positie van 4 uur om het oog en de primaire blik vast te houden.Reflecteer het bulbaire bindvlies tussen 10 en 2 uur en gebruik een tenotomieschar om het bindvlies twee tot drie millimeter van de limbus in te snijden. Ondermijn het bindvlies en maak de capsule van de Tenon vrij om de sclera bloot te leggen op de twee en 10 uur vitrectomiepoortplaatsen op drie tot vijf millimeter van de limbus. Gebruik remklauwen om de plaatsen voor sclerotomie te identificeren en vermijd de belangrijkste sclerale vaten die prominent in de kat kunnen zijn.Planning voor een gebied van drie millimeter op de instrumentpoort van 10 uur voor een rechtshandige chirurg, plaats 6-0 of 7-0 polyglactine kruispatroonnaden zonder te binden op de plaatsen van de voorgestelde sclerotomieën. Zodra de hechtingen op hun plaats zijn, laat de assistent de 12 uur durende hechtingen vastpakken om de bol in positie te houden en gebruik je een Castroviejo-tang van 0,12 millimeter om het weefsel naast de sclerotomieplaats te houden. Gebruikt een trocar om een 23 gauge vitrectomiepoort door de sclera te introduceren op zowel de 2 als 10 uur posities schuin naar de oogzenuw om contact met de lens te voorkomen, en gebruik bindtangen om de irrigatiepoort voorzichtig te duwen om te bepalen of de tips in het glasvocht kunnen worden gevisualiseerd.Laat de assistent een Machemer vergrotende irrigerende vitrectomielens op het hoornvlies plaatsen om visualisatie van het achterste segment van het oog mogelijk te maken, en een 23 gauge vitrectomiesondesapper door de instrumentpoort om een gedeeltelijke kernvitrectomie uit te voeren. Breng vervolgens de naald van een spuit van één milliliter met één milliliter triamcinolonoplossing in de instrumentpoort en injecteer 250 tot 500 microliter van de kristalsuspensie. Wanneer de oplossing is afgeleverd, verplaatst u de vitrectomiesonde door de instrumentpoort om dicht bij de oogzenuwkop te komen met de poort weg van het netvliesoppervlak.Gebruik een hoog vacuüm om het vitreale gezicht van het netvlies los te maken, steek de injector door de instrumentpoort naar het netvliesoppervlak en extrudeer de canulepunt. Druk zachtjes op de punt van het netvliesoppervlak en laat de assistent een lichte snelle druk geven op de zuiger van de spuit om de netvliesloslating te starten, waarbij de injectiedruk wordt verlaagd om een langzame toename van de netvliesloslating mogelijk te maken totdat de gewenste grootte is bereikt. Gebruik een canule van 41 gauge van de injector om de loslating iets te vergroten totdat een netvliesschaar kan worden ingebracht en verwijder de sclerale poort van 10 uur.Gebruik vervolgens een recht 2.850 millimeter spleetmes gericht op de oogzenuw om te voorkomen dat u de lens aanraakt om de sclerotomie op deze plaats te vergroten. Maak de retiotomie op de bleb weg van de oogzenuw om te voorkomen dat de netvlieszenuwvezels afkomstig uit het getransplanteerde gebied worden beschadigd en vermijd het snijden van grote retinale vaten om het risico op bloeding te verminderen. Om de organoïden te implanteren, plaatst u een glazen capillair geladen met organoïden door de vergrote sclerotomie naar de retinotomieplaats en gebruikt u de punt van het capillair om de retinomie enigszins te openen om toegang te krijgen tot de subretinale blebopening.Laat de assistent de zuiger van de injector opnieuw langzaam indrukken om de organoïden in de subretinale bleb te injecteren. BSS moet doorgaan met organoïden, de organen, en spoel de retiotomie open. Wanneer alle organoïden zijn afgeleverd, laat u het glazen capillair een paar seconden op zijn plaats voordat u het capillair langzaam uit het oog verwijdert, waarbij u ervoor zorgt dat er geen plotselinge afgifte van vloeistof plaatsvindt.Wanneer het capillair is verwijderd, sluit u de sclerotomie met behulp van de vooraf geplaatste hechting in een kruispatroon. Laat de assistent de infuuspoort verwijderen en snel de sclerotomiehechting binden en de peritomie sluiten met de polyglictine-hechtingen in een eenvoudig continu patroon. Sluit de laterale canthotomie met een 6-0 polyglactine-hechting en figuur-acht huidnaden om de laterale canthus uit te voeren en gebruik eenvoudige onderbroken huidnaden om de rest van de wond te sluiten.Dien vervolgens de juiste postoperatieve steroïde en antibiotische cocktail toe. Menselijke pluripotente stamcel-afgeleide retinale organoïde belasting kan worden bevestigd in de glazen canule van het injectieapparaat en tijdens de operatie door directe visualisatie. De aanwezigheid van de organoïden in de subretinale ruimte kan postoperatief worden bevestigd door oogheelkundig onderzoek en fundusbeeldvorming.Voorafgaand aan euthanasie kunnen confocale scanning laser oftalmoscopie en spectrale domein optische coherentie tomografie beeldvorming ook worden uitgevoerd om de positie van de organoïden te beoordelen. Deze technieken kunnen worden gebruikt om de persistentie van retinale organoïden in de subretinale ruimte tussen het neurale netvlies en het retinale pigmentepitheel van het ontvangende oog aan te tonen. Histologische en immunohistochemische analyses kunnen worden gebruikt om de overleving van de xenogene grafieken in de subretinale ruimte van een groot oog in een immunosuppressief dier te illustreren.Alleen degenen die bekwaam zijn in vitreoretinale chirurgie, zoals opgeleide veterinaire oogartsen of vitreoretinale chirurgen die bekend zijn met de soortverschillen in het kattenoog in vergelijking met het menselijk oog, moeten deze procedure uitvoeren. De techniek die in deze video wordt gepresenteerd, moet van toepassing zijn op andere grote diermodellen die worden gebruikt voor het vertalen van vitreoretinale chirurgische technieken naar de klinieken.

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Celtransplantatie vertegenwoordigt een strategie voor de behandeling van netvliesdegeneratie die wordt gekenmerkt door fotoreceptorverlies. Hier beschrijven we een methode voor verrijking van transplanteerbare fotoreceptoren en hun subretinale enting in volwassen muizen.

Subretinale transplantatie van MACS gezuiverde fotoreceptor precursor cellen in de volwassen muis retina

Hier presenteren we een door de gemeenschap geaccepteerd protocol in multimedia-formaat voor het subretinaal injecteren van een bolus RPE-cellen bij ratten en muizen. Deze aanpak kan worden gebruikt voor het bepalen van reddingspotentieel, veiligheidsprofielen en overlevingscapaciteiten van getransplanteerde RPE-cellen bij implantatie in diermodellen van retinale degeneratie.

Presterende Subretinal Injecties in Knaagdieren om retinale pigment epitheel cellen leveren in Suspension

Subretinal injectie is veel toegepast in preklinische studies van stamcel substitutietherapie voor leeftijdsgebonden maculaire degeneratie. In dit gevisualiseerde artikel beschrijven we een minder riskant, reproduceerbaar zijn en juist gewijzigd subretinal injectietechniek via de trans-scleral-benadering te leveren van cellen in de ogen van de rat.

Ontwikkeling van een verfijnde Protocol voor Trans-scleral Subretinal transplantatie van menselijke retinale Pigment epitheliale cellen in de ogen van de Rat

Retinale pigment epitheliale cellen kunnen dienen als een cel-vervangende therapie voor de geavanceerde vorm van droge leeftijdsgebonden Macula degeneratie. Dit protocol beschrijft de generatie van een grote-eyed model van geografische atrofie en subretinal transplantatie van menselijke embryonale stamcellen cel afkomstige retinale pigment epitheliale cellen in dit model van ziekte.

Subretinal transplantatie van menselijke embryonale stamcellen afgeleid-retinale Pigment epitheliale cellen in een grote-eyed Model van geografische atrofie

De niet-menselijke primaat (NHP) is een ideaal model voor het bestuderen van menselijke retinale cellulaire therapieën vanwege de anatomische en genetische overeenkomsten. Dit manuscript beschrijft een methode voor submaculaire transplantatie van retinale pigmentepitheelcellen in het NHP-oog en strategieën om intraoperatieve complicaties geassocieerd met maculaire manipulatie te voorkomen.

Retinale pigmentepitheeltransplantatie in een niet-humaan primaatmodel voor degeneratieve retinale ziekten

Dit protocol presenteert een transpupillaire zichtgeleide transsclerale benadering om veilig en nauwkeurig subretinale cellulaire transplantaten af te leveren, met een laag aantal chirurgische complicaties, bij muizenontvangers met of zonder retinale degeneratie.

Transpupilgeleide transsclerale transplantatie van subretinale transplantaten in een muismodel voor retinale degeneratie

We beschrijven een gedetailleerd protocol voor de bereiding van post-gecryopreserveerde hESC-afgeleide fotoreceptor-voorlopercellen en de subretinale afgifte van deze cellen in rd10-muizen .

Subretinale toediening van van menselijke embryonale stamcellen afgeleide fotoreceptorvoorlopercellen bij RD10-muizen

We hebben een protocol voor de inductie van neuroblasts rechtstreeks van pluripotente menselijke embryonale stamcellen gehouden onder bepaalde voorwaarden met kleine moleculen, die afleiding van een groot aanbod van menselijke neurale voorouders en neuronale celtypes in het ontwikkelen van CNS voor neurale reparatie mogelijk maakt.

Efficiënte Afleiding van de Mens Neuronale voorouders en neuronen van pluripotente menselijke embryonale stamcellen met op kleine moleculen Inductie

Isolatie van embryonale neurale lijst van de neurale buis vergemakkelijkt het gebruik...

Isolatie en Cultuur van neurale lijst cellen van embryonale Murine Neural Tube

Xenopus laevis een ideaal model voor het bestuderen cellen lot specificatie en fysiologische functie van individuele retinale cellen in primaire celkweek. Hier wordt een methode voor het ontleden retinale weefsels en genereren primaire celculturen die afgebeeld voor calcium activiteit en geanalyseerd door in situ hybridisatie.

Dissection, Cultuur en Analyse van<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embryonale netvliesweefsel

Leer een chirurgische techniek voor subretinale transplantatie van menselijke stamcel-afgeleide retinaal weefsel in een katachtig model. Deze methode ondersteunt onderzoek naar celtherapie voor retinale degeneratieve ziekten.

Subretinale transplantatie van menselijk embryonaal stamcel-afgeleid retinaal weefsel in een katachtig groot diermodel

Meer video's verkennen