Name: Een fibrine-verrijkt en tPA-gevoelig fototrombotisch beroertemodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-04T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Leer een gemodificeerd fototrombotisch beroertemodel met fibrineverrijkte bloedstolsels die gevoelig zijn voor tPA-gemedieerde trombolyse. Deze methode biedt een betrouwbaar platform voor preklinisch beroerteonderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de NIH-subsidies (NS108763, NS100419, NS095064 en HD080429 aan C.Y.K.; en NS106592 aan Y.Y.S.).

Dit protocol is goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de Universiteit van Virginia en volgt de National Institutes of Health Guideline for Care and Use of Laboratory Animals. Figuur 1A schetst de volgorde van chirurgische ingrepen van dit protocol.
1. Operatie instellen
<ol><li>Plaats ten minste 15 minuten voor de operatie een verwarmingskussen met een temperatuur van 37 °C op de adapter voor kleine dieren. Bereid een neusklemrol voor adapter voor waarmee de kop van het dier kan draaien. Bereid de anesthetica voor Ketamine (60 mg/kg)/ Xylazine (10 mg/kg).</li>
	<li>Steriliseer de chirurgische instrumenten, waaronder scharen, tangen, micronaaldhouders, hemostaten, wattenstaafjes en hechtingen met autoclaaf (121 °C bij 15 psi gedurende 60 minuten). Bereid weefsellijm en oogzalf voor. Bereid de 532 nm laserbeschermingsbril voor chirurgen voor. OPMERKING: Dit protocol beschrijft een belangrijke overlevingsoperatie en moet worden uitgevoerd met behulp van aseptische technieken.</li>
	<li>Stel het verlichtingssysteem in met een laserbron van 532 nm. Bereid een tandartsboor voor.</li>
	<li>Bereid de Bengaalse rozenoplossing in zoutoplossing (10 mg/ml). Plaats een aliquoot boviene trombine (0,1 E/μL) op een ijsemmer.</li>
	<li>Injecteer Ketoprofen (4,0 mg/kg) subcutaan in de muis als analgesie 30 minuten voor de operatie of gebruik het pijnstillende regime dat wordt aanbevolen door de lokale institutionele richtlijnen.</li>
</ol>2. Ligatie van de ipsilaterale gemeenschappelijke halsslagader
<ol><li>Verdoof mannelijke C57BL/6NCrl-muizen van 10-14 weken oud met een gewicht van 22 tot 30 g door intramusculaire injectie van ketamine (60 mg/kg) en xylazine (10 mg/kg). OPMERKING: De hele chirurgische ingreep, die de ligatie van de ipsilaterale gemeenschappelijke halsslagader omvat door middel van het bewaken van de cerebrale bloedstroom, zal naar verwachting ~120 minuten duren. Het anesthesieregime zal doorgaans gedurende deze hele duur effectief zijn, maar de anesthesiediepte moet ten minste elke 15 minuten opnieuw worden beoordeeld. Tijdens het leren van deze procedures kan het nodig zijn om de anesthesie opnieuw te doseren.</li>
	<li>Knijp in de tenen om ervoor te zorgen dat het dier volledig verdoofd is. Verwijder het haar in de linker nek voor CCA-ligatie en het hoofd voor het dunner worden van de schedel met de ontharingscrème.</li>
	<li>Plaats de muis op de adapter voor kleine dieren in rugligging. Steriliseer het operatiegebied door de huid af te vegen met drie afwisselende vegen povidonjodium en 70% ethanol.</li>
	<li>Zet de muiskop vast met behulp van oorbalken. Maak onder een ontleedmicroscoop een incisie van 0,5 cm in de linker cervicale hoek met behulp van een microschaar en een rechte pincet op ongeveer 0,2 cm lateraal van de middellijn.</li>
	<li>Gebruik een fijne gekartelde pincet om het zachte weefsel en de fascia uit elkaar te trekken om de linker gemeenschappelijke halsslagader (LCCA) bloot te leggen. Scheid voorzichtig de linker CCA van de nervus vagus met behulp van een fijne, gladde pincet.</li>
	<li>Plaats een permanente dubbele knoophechting rond de LCCA met behulp van 5-0 zijdehechting die in segmenten van 20 mm is gesneden, en sluit vervolgens de wond met steriele wondclips.</li>
</ol>3. Schedel dunner worden boven de MCA-tak en fotoactivering
<ol><li>Draai de muis in buikligging op de adapter voor kleine dieren. Draai de neusklemrol 15°. Steriliseer het operatiegebied door de huid af te vegen met drie afwisselende vegen betadine en 70% ethanol.</li>
	<li>Maak een incisie van 0,8 cm in de hoofdhuid met behulp van een microschaar en een rechte pincet langs het linkeroog en -oor om de temporalis-spier, die zich tussen het oog en het oor bevindt, bloot te leggen (Figuur 1B).</li>
	<li>Maak onder de ontleedmicroscoop een incisie van 0,5 cm langs de rand van de temporalis-spier op het linker pariëtale bot met een fijne gekartelde pincet. Maak een tweede verticale incisie van 0,3 cm op de temporalis-spier met een microschaar. Trek de temporale spier terug om de rand van het pariëtale bot en het squamosale bot bloot te leggen. Zorg ervoor dat u het herkenningspunt van de coronale hechting tussen de frontale en de pariëtale botten visualiseert (Figuur 1B,C).</li>
	<li>Bevochtig de schedel door steriele zoutoplossing aan te brengen om de linker MCA te onthullen. Markeer de proximale MCA-tak op het squamosale bot met een markeerstift. Teken voorzichtig een cirkel met een diameter van ongeveer 1 mm rond het gemarkeerde gebied met de pneumatische tandartsboor (braamsnelheid ingesteld op 50% van de snelheidsregelaar) en verdun vervolgens de schedel ongeveer 0.2 mm diep zonder de onderliggende dura aan te raken. Stop met boren totdat er een heel dun laagje bot overblijft.</li>
	<li>Meng de trombine (T, 0,1 E/μL, 80 E/kg) en Rose bengal (RB, 10 mg/ml, 50 mg/kg) oplossing op basis van het lichaamsgewicht van de muis. Meng bijvoorbeeld voor een muis met een lichaamsgewicht van 25 g 20 μL trombine (0,1 E/μL) en 125 μL RB (10 mg/ml).</li>
	<li>Injecteer langzaam T+RB-oplossing (145 μl per 25 g lichaamsgewicht) in de retroorbitale sinus met een insulinespuit (#31G naald). OPMERKING: In pilotexperimenten werd het sterftecijfer van toenemende doses trombine vermengd met de standaarddosis RB-kleurstof (50 mg/kg) onderzocht op fotoactivering. De mortaliteit was 0% voor 80 E/kg trombine (n=13), 43% voor 120 E/kg trombine (n=7) en 100% voor zowel 160 E/kg (n=5) als 200 E/kg trombine (n=5). Voor dit model is daarom gekozen voor een dosis van 80 E/kg trombine. Beeldvorming met laserspikkelcontract werd ook gebruikt om de mogelijkheid van ongebreidelde bloedstolling in de buurt van de orbitale holte uit te sluiten na retro-orbitale sinusinjectie van T+RB (aanvullende figuur 1), evenals wijdverspreide fibrineafzetting in de contralaterale hemisfeer die niet werd onderworpen aan laserverlichting (aanvullende figuur 2).</li>
	<li>Breng oogzalf aan op beide ogen om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Breng de verlichting aan met een laserlicht van 532 nm (met een energie van 0.5 mW) op de geboorde locatie met een afstand van 2 inch gedurende 20 minuten. Visualiseer de verlichting op de proximale tak van MCA door middel van een laserbeschermingsbril (Figuur 1C,D). OPMERKING: De MCA met 532 nm verlichting toont rode fluorescentie onder de bril. De distale MCA verdwijnt na 10 minuten verlichting. Sluit het dier uit als de distale MCA-stroom na 20 minuten verlichting nog steeds aanwezig is.</li>
	<li>Stop de laserverlichting na 20 min. Sluit de wond af met steriele wondclips.</li>
</ol>4. Intravitale beeldvorming (optioneel)
OPMERKING: Om de trombusvorming in vivo te karakteriseren, gebruikt u intravirale beeldvorming door een spin-schijf confocaal met fotoactiveringssysteem23.
<ol><li>Maak een schedelvenster met een diameter van ~ 3 mm op het pariëtale bot van de schedel.</li>
	<li>Plaats een dekglas op het schedelraam en plaats de distale MCA (~50 μm in diameter) onder een 20x water-onderdompelingsobjectief.</li>
	<li>Label de circulerende bloedplaatjes door middel van staartaderinjectie van DyLight488-geconjugeerd anti-GPIbβ-antilichaam (0,1 mg/kg) 5 minuten vóór beeldvorming.</li>
	<li>Injecteer de mengseloplossing van trombine (80 E/kg) en Bengaalse roos (50 mg/kg) via retro-orbitaal 5 minuten voor de beeldvorming.</li>
	<li>Fotoactiveer de MCA met behulp van een 561 nm lasersysteem met een laserstraal met een diameter van 10 μm en neem het beeld op tot de trombusvorming.</li>
</ol>5. tPA-toediening
<ol><li>Leg het verdoofde dier op een warm kussen van 37 °C. Maak op het geselecteerde tijdstip na de fotoactivering een gaasje nat met ~45 °C warm water en wikkel het gedurende 1 minuut om de staart.</li>
	<li>Injecteer recombinant humaan tPA (10 mg/kg) via de staartader met een bolus van 50% en 50% gedurende 30 minuten met een infuuspomp. OPMERKING: Hoewel de klinische dosis recombinant humaan tPA voor de behandeling van acute ischemische beroerte 0,9 mg/kg is, wordt bij knaagdieren vaak een hogere dosis (10 mg/kg) gebruikt om de verminderde tPA-reactiviteit tussen soorten te compenseren. We volgden ook het standaardprotocol van tPA-toediening in preklinische beroertemodellen, waarbij 50% als bolus werd gebruikt en 50% via de staartader werd toegediend gedurende 30 minuten.24</li>
</ol>6. Controle van de cerebrale bloedstroom (CBF)
OPMERKING: Om CBF-herstel na tPA-behandeling te bevestigen, gebruikt u een tweedimensionaal laserspikkelcontrastbeeldvormingssysteem15 en registreert u onmiddellijk na fototrombose (stap 3.9) of 24 uur na tPA-behandeling.
<ol><li>Plaats het verdoofde dier in buikligging en maak een incisie in de middellijn op de hoofdhuid met de schedel bloot.</li>
	<li>Bevochtig de schedel met steriele zoutoplossing en breng de ultrasone gel voorzichtig aan op de schedel. Vermijd haren en luchtbellen in de gel, die het CBF-signaal verstoren.</li>
	<li>Bewaak CBF in beide hersenhelften onder laserspikkelcontrastbeeldcamera gedurende 10 minuten.</li>
	<li>Sluit na het opnemen van het CBF-beeld de hoofdhuid met weefsellijm en breng het dier terug naar de kooi.</li>
	<li>Analyseer CBF in de geselecteerde regio's en bereken het CBF-herstelpercentage in vergelijking met de contralaterale regio.</li>
	<li>Plaats het dier vervolgens terug in een warme kooi om te herstellen. Houd de muizen 5-10 minuten in de gaten totdat ze herstellen van de anesthesie. Plaats nat voer in de kooi en breng het terug naar de dierenopvang. OPMERKING: Zorg voor postoperatieve analgesie zoals aanbevolen door de lokale institutionele richtlijnen.</li>
</ol>7. Meting van het infarctvolume door trifenyltetrazoliumchloride (TTC)-kleuring
<ol><li>Vierentwintig uur na fototrombose, het dier diep verdoven volgens de lokale institutionele richtlijnen voor niet-overlevingschirurgie. OPMERKING: We dienen tribroomethanol (avertin) 250 mg/kg toe via intraperitoneale (IP) injectie.</li>
	<li>Voer transcardiale perfusie uit met PBS, verzamel verse hersenen en sluit ze in 3% agar-gel in.</li>
	<li>Snijd de hersenplak met een dikte van 1 mm in delen door middel van vibratoom en incubeer gedurende 10 minuten in 2% TTC-oplossing.</li>
	<li>Kwantificeer het totale infarctvolume van 6 hersenplakjes als het absolute volume door ImageJ-software. OPMERKING: Hersenoedeem werd om twee redenen niet gebruikt als uitkomstmaat. Ten eerste meet de TTC-kleuring de levensvatbaarheid van het weefsel (via de mitochondriale reductieactiviteit), wat een ernstiger gevolg is dan oedeem. Ten tweede, naarmate het infarct vordert, treden zowel vasogeen als cytotoxisch oedeem op en kunnen ze niet gemakkelijk worden onderscheiden door de standaard meetmethoden voor hersenoedeem. We hebben echter anti-immunoglobine (IgG)-etikettering gebruikt om de integriteit van de bloed-hersenbarrière (BBB) te beoordelen, en vonden vergelijkbare IgG-extravasatie 6 uur na fotoactivering in zowel RB- als T+RB-beroertemodellen (aanvullende figuur 3).</li>
</ol>8. Meting van trombusvorming
OPMERKING: Om de trombusvorming te meten, verzamelt u de hersenen 1 uur en 2 uur na fototrombose voor trombusmeting in MCA door immunochemie (IHC) en voor fibrinemeting in hersenhelft door immunoblot, respectievelijk.
<ol><li>Voer de IHC uit voor de karakterisering van de samenstelling van stolsels. Fixeer de hersenen 's nachts met 4% paraformaldehyde en dehydrateer de hersenen vervolgens met 30% sucrose voor de OCT-inbedding.</li>
	<li>Doorsnijd de hersenen met sagittale oriëntatie in 20 μm dikte en voer de IHC uit met specifieke antilichamen tegen fibrinogeen, bloedplaatjes (glycoproteïne IIb), rode bloedcellen (TER119) en bloedvaten (isolectine GS-IB4).</li>
	<li>Voer de meting van fibrine in de hersenhelft uit door middel van een immunoblot met een antilichaam tegen fibrinogeen.</li>
</ol>

<ol><li>Lyden, P. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLyden%2C+PD+%22Thrombolytic+Therapy+for+Acute+Stroke.+3%2Fe%22">Thrombolytic Therapy for Acute Stroke. 3/e</a>. , Springer. (2015).</li>
<li>Linfante, I., Cipolla, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+reperfusion+therapies+in+the+era+of+mechanical+thrombectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Improving reperfusion therapies in the era of mechanical thrombectomy.</a> Translational Stroke Research. 7 (4), 294-302 (2016).</li>
<li>Campbell, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+Therapy+for+Ischemic+stroke+with+perfusion-imaging+selection%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Endovascular Therapy for Ischemic stroke with perfusion-imaging selection.</a> The New England Journal of Medicine. 372 (11), 1009-1018 (2015).</li>
<li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia%3A+implications+for+translational+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17 (5), 497-504 (1985).</li>
<li>Watson, B. D., Prado, R., Veloso, A., Brunschwig, J. P., Dietrich, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+blood+flow+restoration+and+reperfusion+injury+after+ultraviolet+laser-facilitated+middle+cerebral+artery+recanalization+in+rat+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cerebral blood flow restoration and reperfusion injury after ultraviolet laser-facilitated middle cerebral artery recanalization in rat thrombotic stroke.</a> Stroke. 33 (2), 428-434 (2002).</li>
<li>Uzdensky, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photothrombotic+stroke+as+a+model+of+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Photothrombotic stroke as a model of ischemic stroke.</a> Translational Stroke Research. 9 (5), 437-451 (2018).</li>
<li>Karatas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombotic+distal+middle+cerebral+artery+occlusion+produced+by+topical+FeCl%283%29+application%3A+a+novel+model+suitable+for+intravital+microscopy+and+thrombolysis+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 31 (3), 1452-1460 (2011).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).</li>
<li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Alteplase+in+a+mouse+model+of+acute+ischemic+stroke%3A+A+retrospective+pooled+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Alteplase in a mouse model of acute ischemic stroke: A retrospective pooled analysis.</a> Stroke. 47 (5), 1312-1318 (2016).</li>
<li>Kudo, M., Aoyama, A., Ichimori, S., Fukunaga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+animal+model+of+cerebral+infarction.+Homologous+blood+clot+emboli+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">An animal model of cerebral infarction. Homologous blood clot emboli in rats.</a> Stroke. 13 (4), 505-508 (1982).</li>
<li>Busch, E., Kruger, K., Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+model+of+thromboembolic+stroke+and+rt-PA+induced+reperfusion+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Improved model of thromboembolic stroke and rt-PA induced reperfusion in the rat.</a> Brain Research. 778 (1), 16-24 (1997).</li>
<li>Lapchak, P. A., Araujo, D. M., Zivin, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Tenecteplase+with+Alteplase+on+clinical+rating+scores+following+small+clot+embolic+strokes+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Comparison of Tenecteplase with Alteplase on clinical rating scores following small clot embolic strokes in rabbits.</a> Experimental Neurology. 185 (1), 154-159 (2004).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+combined+tPA-Edaravone+therapy+in+experimental+thrombotic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synergy of combined tPA-Edaravone therapy in experimental thrombotic stroke.</a> PLoS One. 9 (6), 98807(2014).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prophylactic+Edaravone+prevents+transient+hypoxic-ischemic+brain+injury%3A+Implications+for+perioperative+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Prophylactic Edaravone prevents transient hypoxic-ischemic brain injury: Implications for perioperative neuroprotection.</a> Stroke. 46 (7), 1947-1955 (2015).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sickle+mice+are+sensitive+to+hypoxia%2Fischemia-induced+stroke+but+respond+to+tissue-type+plasminogen+activator+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Sickle mice are sensitive to hypoxia/ischemia-induced stroke but respond to tissue-type plasminogen activator treatment.</a> Stroke. 48 (12), 3347-3355 (2017).</li>
<li>Sun, Y. Y., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thrombotic+stroke+model+based+on+transient+cerebral+hypoxia-ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxia-ischemia.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52978(2015).</li>
<li>Pena-Martinez, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+modulation+of+neutrophil+extracellular+traps+reverses+thrombotic+stroke+tPA+%28tissue-type+plasminogen+activator%29+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Pharmacological modulation of neutrophil extracellular traps reverses thrombotic stroke tPA (tissue-type plasminogen activator) resistance.</a> Stroke. 50 (11), 3228-3237 (2019).</li>
<li>Denorme, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS13-mediated+thrombolysis+of+t-PA-resistant+occlusions+in+ischemic+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">ADAMTS13-mediated thrombolysis of t-PA-resistant occlusions in ischemic stroke in mice.</a> Blood. 127 (19), 2337-2345 (2016).</li>
<li>Marder, V. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+thrombi+retrieved+from+cerebral+arteries+of+patients+with+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Analysis of thrombi retrieved from cerebral arteries of patients with acute ischemic stroke.</a> Stroke. 37 (8), 2086-2093 (2006).</li>
<li>Bacigaluppi, M., Semerano, A., Gullotta, G. S., Strambo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+thrombi+retrieved+in+stroke+due+to+large+vessel+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Insights from thrombi retrieved in stroke due to large vessel occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 39 (8), 1433-1451 (2019).</li>
<li>Sun, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+photothrombotic+stroke+model+with+an+increased+fibrin+content+and+improved+responses+to+tPA-lytic+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">A murine photothrombotic stroke model with an increased fibrin content and improved responses to tPA-lytic treatment.</a> Blood Advances. 4 (7), 1222-1231 (2020).</li>
<li>Su, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+PDGF-CC+by+tissue+plasminogen+activator+impairs+blood-brain+barrier+integrity+during+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Activation of PDGF-CC by tissue plasminogen activator impairs blood-brain barrier integrity during ischemic stroke.</a> Nature Medicine. 14 (7), 731-737 (2008).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+gelsolin+in+acute+pulmonary+thromboembolism+and+thrombosis+in+the+carotid+artery+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective effects of gelsolin in acute pulmonary thromboembolism and thrombosis in the carotid artery of mice.</a> PLoS One. 14 (4), 0215717(2019).</li>
<li>Carroll, B. J., Piazza, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercoagulable+states+in+arterial+and+venous+thrombosis%3A+When%2C+how%2C+and+who+to+test%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypercoagulable states in arterial and venous thrombosis: When, how, and who to test.</a> Vascular Medicine. 23 (4), 388-399 (2018).</li>
<li>Coutts, S. B., Berge, E., Campbell, B. C., Muir, K. W., Parsons, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tenecteplase+for+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke%3A+A+review+of+completed+and+ongoing+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Tenecteplase for the treatment of acute ischemic stroke: A review of completed and ongoing randomized controlled trials.</a> International Journal of Stroke. 13 (9), 885-892 (2018).</li>
<li>McFadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+and+future+antiplatelet+therapies%3A+emphasis+on+preserving+haemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Current and future antiplatelet therapies: emphasis on preserving haemostasis.</a> Nature Reviews Cardiology. 15 (3), 181-191 (2018).</li>
<li>Bang, O. Y., Goyal, M., Liebeskind, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+crculation+in+ischemic+stroke%3A+Assessment+tools+and+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Collateral crculation in ischemic stroke: Assessment tools and therapeutic strategies.</a> Stroke. 46 (11), 3302-3309 (2015).</li>
<li>Faber, J. E., Chilian, W. M., Deindl, E., van Royen, N., Simons, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+etymology+of+the+collateral+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombsis%2C+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">A brief etymology of the collateral circulation.</a> Arteriosclerosis, Thrombsis, Vascular Biology. 34 (9), 1854-1859 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De traditionele RB fototrombotische beroerte, geïntroduceerd in 1985, is een aantrekkelijk model van focale cerebrale ischemie voor eenvoudige chirurgische ingrepen, lage mortaliteit en hoge reproduceerbaarheid van herseninfarct. 5 In dit model activeert de fotodynamische kleurstof RB snel bloedplaatjes bij lichtexcitatie, wat leidt tot dichte aggregaten die het bloedvat afsluiten 5,8,23. De kleine hoevee...

Endovasculaire trombectomie en tPA-gemedieerde trombolyse zijn de enige twee door de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) goedgekeurde therapieën van acute ischemische beroerte, die jaarlijks ~700.000 patiënten in deVerenigde Staten treft. Omdat de toepassing van trombectomie beperkt is tot occlusie van grote bloedvaten (LVO), terwijl tPA-trombolyse occlusies van kleine bloedvaten kan verlichten, zijn beide waardevolle therapieën voor acute ischemische beroerte2. Bovendien verbetert de combinatie van beide therapieën (bijv. start van tPA-trombolyse binnen 4,5 uur na het begin van de beroerte, gevolgd door trombectomie) de reperfusie en defunctionele uitkomsten. Het optimaliseren van trombolyse blijft dus een belangrijk doel voor onderzoek naar beroertes, zelfs in het tijdperk van trombectomie.
Trombo-embolische modellen zijn een essentieel hulpmiddel voor preklinisch onderzoek naar beroertes dat gericht is op het verbeteren van trombolytische therapieën. Dit komt omdat mechanische vasculaire occlusiemodellen (bijv. intraluminale hechting MCA-occlusie) geen bloedstolsels produceren en het snelle herstel van de cerebrale bloedstroom na het verwijderen van mechanische occlusie overdreven geïdealiseerd is 4,5. Tot op heden omvatten de belangrijkste trombo-embolische modellen fototrombose 6,7,8, topisch ijzerchloride (FeCl3) toepassing9, micro-injectie van trombine in de MCA-tak 10,11, injectie van ex vivo (micro)embolie in de MCA of gemeenschappelijke halsslagader (CCA)12,13,14 en voorbijgaande hypoxie-ischemie (tHI)15,16, 17,18. Deze beroertemodellen verschillen in de histologische samenstelling van de resulterende stolsels en de gevoeligheid voor tPA-gemedieerde lytische therapieën (tabel 1). Ze variëren ook in de chirurgische vereiste van craniotomie (nodig voor in situ trombine-injectie en plaatselijke toepassing van FeCl3), de consistentie van de grootte en locatie van het infarct (bijv. CCA-infusie van micro-embolieën levert zeer variabele uitkomsten op) en globale effecten op het cardiovasculaire systeem (bijv. tHI verhoogt de hartslag en het hartminuutvolume om hypoxie-geïnduceerde perifere vasodilatatie te compenseren).
Het op RB-kleurstof gebaseerde fototrombotische beroerte (PTS)-model heeft veel aantrekkelijke kenmerken, waaronder eenvoudige craniotomievrije chirurgische ingrepen, lage mortaliteit (meestal < 5%) en een voorspelbare grootte en locatie van het infarct (in het MCA-leverende gebied), maar het heeft twee belangrijke beperkingen. 8 Het eerste voorbehoud is een zwakke tot nihil-respons op tPA-gemedieerde trombolytische behandeling, wat ook een nadeel is van het FeCl3-model 7,19,20. Het tweede voorbehoud van PTS- en FeCl3-beroertemodellen is dat de daaruit voortvloeiende trombi bestaan uit dicht opeengepakte bloedplaatjesaggregaten met een kleine hoeveelheid fibrine, wat niet alleen leidt tot de veerkracht tegen tPA-lytische therapie, maar ook afwijkt van het patroon van gemengde bloedplaatjes:fibrinetrombi bij patiënten met een acute ischemische beroerte21,22. Het in situ trombine-micro-injectiemodel daarentegen bestaat voornamelijk uit gepolymeriseerd fibrine en een onzeker gehalte aan bloedplaatjes10.
Gezien de bovenstaande redenering veronderstelden we dat vermenging van RB en een subtrombotische dosis trombine voor MCA-gerichte fotoactivering door verdunde schedel de fibrinecomponent in de resulterende trombi kan verhogen en de gevoeligheid voor tPA-gemedieerde lytische behandeling kan verhogen. We hebben deze hypothese bevestigd,23 en hierin beschrijven we gedetailleerde procedures van het gemodificeerde (T+RB) fototrombotische beroertemodel.

<table><tbody><tr><td>2,3,5-trifenyltetrazoliumboorchloride (TTC)</td><td>Sigma</td><td>T8877</td><td>infarct</td></tr><tr><td>4-0 Nylon monofilament naald</td><td>LOOK</td><td>766B</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>5-0 zijdenaad</td><td>Harvard Apparatus</td><td>624143</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>543nm laserstraal</td><td>Melles Griot</td><td>25-LGP-193-249</td><td>fototrombose</td></tr><tr><td>volwassen mannelijke muizen</td><td>Charles River</td><td>C57BL/6</td><td>10~14 weken oud (22~30 g)</td></tr><tr><td>Anesthesiebar voor muisadapter</td><td>machine werkplaats, UVA</td><td></td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>Avertin (2, 2, 2-Tribroomethanol)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>euthanasie</td></tr><tr><td>Tandartsboor</td><td>Dentamerica</td><td>Rotex 782</td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>Digitaal microscoop</td><td>Dino-Lite</td><td>AM2111</td><td>hersenbeeldvorming</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Olympus</td><td>SZ40</td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>Fijne gebogen pincetten (gekarteld)</td><td>FST</td><td>11370-31</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Fijne gebogen pincetten (glad)</td><td>FST</td><td>11373-12</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>geit anti-konijn Alexa Fluro 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>immunohistochemie</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito hemostaten</td><td>FST</td><td>13008-12</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>Warmtepomp met verwarmingskussen</td><td>Gaymar</td><td>TP700</td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>infusiepomp</td><td>KD Scientific</td><td>200</td><td>trombolytische behandeling</td></tr><tr><td>Insuline-syringe met 31G naald</td><td>BD</td><td>328291</td><td>fototrombose</td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>anesthesie</td></tr><tr><td>Laser beschermende bril 532nm</td><td>Thorlabs</td><td>LG3</td><td>fototrombose</td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>NSAID analgesie</td></tr><tr><td>micro naaldhouders</td><td>FST</td><td>12060-01</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>micro schaar</td><td>FST</td><td>15000-03</td><td>chirurgisch instrument</td></tr><tr><td>MoorFLPI-2 bloedstroombeeldvormer</td><td>Moor</td><td>780-nm laserbron</td><td>Laser Speckle Contrast Imaging</td></tr><tr><td>Muisadapter</td><td>RWD</td><td>68014</td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>Puralube Vet zalf</td><td>Fisher</td><td>NC0138063</td><td>oogdroogte preventie</td></tr><tr><td>Retractor tips</td><td>Kent Scientific</td><td>Surgi-5014-2</td><td>chirurgische setup</td></tr><tr><td>Rose Bengal</td><td>Sigma</td><td>198250</td><td>fototrombose</td></tr><tr><td>Trombine</td><td>Sigma</td><td>T7513</td><td>fototrombose</td></tr><tr><td>Weefsel lijm</td><td>Abbott Laboratories</td><td>NC9855218</td><td>chirurgische benodigdheden</td></tr><tr><td>tPA</td><td>Genetech</td><td>Cathflo activase 2mg</td><td>trombolytische behandeling</td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Stoelting</td><td>51425</td><td>TTC infarct</td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>CCM, UVA</td><td></td><td>anesthesie</td></tr></tbody></table>

een fibrine-verrijkt en tpa-gevoelig fototrombotisch beroertemodel

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

Een ideaal trombo-embolisch beroertemodel vereist bepaalde eigenschappen, waaronder relatief eenvoudige chirurgische ingrepen met een lage mortaliteit, een consistente infarctgrootte en -locatie, precipitatie van bloedplaatjes:fibrine vermengde bloedstolsels vergelijkbaar met die bij patiënten, en een adequate gevoeligheid voor fibrinolytische behandeling. Het op kleurstof gebaseerde fototrombotische beroertemodel van de bengaalse roos (RB) voldoet aan de eerste twee vereisten, maar is zeer ongevoelig voor tPA-gemedieerde lytische behandeling, vermoedelijk vanwege de bloedplaatjesrijke, maar fibrine-arme stolselsamenstelling. We redeneren dat een combinatie van RB-kleurstof (50 mg/kg) en een subtrombotische dosis trombine (80 E/kg) voor fotoactivatie gericht op de proximale tak van de middelste hersenslagader (MCA) fibrine-verrijkte en tPA-gevoelige stolsels kan produceren. Inderdaad, het trombine en RB (T+RB)-gecombineerde fototrombosemodel veroorzaakte gemengde bloedplaatjes:fibrine-bloedstolsels, zoals aangetoond door immunokleuring en immunoblots, en handhaafde consistente infarctgroottes en -locaties plus een lage mortaliteit. Bovendien verminderde intraveneuze injectie van tPA (Alteplase, 10 mg/kg) binnen 2 uur na fotoactivatie de infarctgrootte bij T+RB-fototrombose aanzienlijk. Het trombine-versterkte fototrombotische beroertemodel kan dus een nuttig experimenteel model zijn om nieuwe trombolytische therapieën te testen.

Eerst vergeleken we het fibrinegehalte in RB versus T+RB fototrombose-geïnduceerde bloedstolsels. Muizen werden opgeofferd door transcardiale perfusie van fixeermiddelen 2 uur na fotoactivering, en hersenen werden verwijderd voor immunofluorescentiekleuring van de MCA-tak in longitudinale en transversale vlakken. Bij RB-fototrombose was de MCA-tak dicht opeengepakt met CD41+-bloedplaatjes en weinig fibrine (Figuur 2A,C). Daarentegen werd de MCA-tak bij T+RB-fototr...

Traditionele modellen met fototrombotische beroerte (PTS) induceren voornamelijk dichte bloedplaatjesaggregaten met een hoge weerstand tegen weefselplasminogeenactivator (tPA)-lytische behandeling. Hier wordt een gemodificeerd muizen PTS-model geïntroduceerd door trombine en lichtgevoelige kleurstof samen te injecteren voor fotoactivering. Het trombine-versterkte PTS-model produceert gemengde bloedplaatjes:fibrinestolsels en is zeer gevoelig voor tPA-trombolyse.

Een fibrine-verrijkt en tPA-gevoelig fototrombotisch beroertemodel

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

We willen een beroertemodel maken dat bloedstolsels produceert die vergelijkbaar zijn met patiëntmonsters en reageren op de klinisch relevante trombolytische therapie. Daarom passen we het klassieke fototrombotische beroertemodel aan en mengen we trombine en de fotodynamische kleurstof roos bengaal voorafgaand aan de fotoactivering. We zijn blij dat deze procedure inderdaad bloedstolsels creëert die zeer gevoelig zijn voor tPA-gemedieerde trombolyse.Dit gemodificeerde fototrombotische beroertemodel maakt gebruik van zeer eenvoudige chirurgische ingrepen met een laag sterftecijfer en produceerde een zeer consistente infarctgrootte en -locatie. U produceert ook een fibrine en bloedplaatjes gemengd bloedstolsel dat vergelijkbaar is met dat bij de patiënt met een acute beroerte. Daarom denken we dat het heel nuttig is voor preklinisch onderzoek naar beroertes om effectievere trombolytische therapieën te ontwikkelen.We hopen dat meer mensen ons model gebruiken. De procedure zal worden gedemonstreerd door Dr.Yu-Yo Sun, onze onderzoeksassistent-professor in onze groep. Bereid de muis 30 minuten voor de operatie voor door een pijnstiller te injecteren.Nadat u de muis hebt verdoofd, knijpt u in de tenen om er zeker van te zijn dat deze volledig verdoofd is. Verwijder vervolgens het haar op de linker nek en het hoofd met ontharingscrème. Plaats de muis op de adapter voor kleine dieren in rugligging en steriliseer het chirurgische huidgebied door het af te vegen met drie afwisselende vegen povidonjodium en 70% ethanol.Maak onder een ontleedmicroscoop een incisie van 0,5 centimeter in de linker baarmoederhals met behulp van een microschaar en een rechte pincet op ongeveer 0,2 centimeter lateraal van de middellijn. Trek vervolgens met een fijne gekartelde tang het zachte weefsel en de fascia uit elkaar om de LCCA bloot te leggen. Scheid vervolgens met een fijne, gladde pincet voorzichtig de LCCA van de nervus vagus.Plaats een permanente dubbele knoophechting rond de LCCA met behulp van een 5-0 zijden hechtdraad. Draai de muis in buikligging en draai de neusklemrol 15 graden. Steriliseer vervolgens het operatiegebied door de huid af te vegen met drie afwisselende vegen Betadine en 70% ethanol.Maak een incisie van 0,8 centimeter in de hoofdhuid met behulp van een microschaar en een rechte pincet langs het linkeroog en -oor om de temporalis-spier bloot te leggen. Maak vervolgens een incisie van 0,5 centimeter langs de rand van de temporalis-spier op het linker pariëtale bot. Maak vervolgens een tweede verticale incisie van 0,3 centimeter op de temporalis-spier en trek de spier terug om de rand van het pariëtale bot en het squamosale bot bloot te leggen.Zorg ervoor dat u het oriëntatiepunt van de coronale hechting tussen de frontale en pariëtale botten visualiseert. Bevochtig vervolgens de schedel door steriele zoutoplossing aan te brengen om de linker MCA te onthullen en markeer de proximale MCA-tak op het squamosale bot met een stift. Teken voorzichtig een cirkel met een diameter van één millimeter rond dit gemarkeerde gebied met een pneumatische tandartsboor.Verdun vervolgens de schedel ongeveer 0,2 millimeter diep zonder de onderliggende dura aan te raken. Stop met boren als er een heel dun laagje bot overblijft. Meng vervolgens de trombine en de bengaalse rozenoplossing op basis van het lichaamsgewicht van de muis en injecteer het mengsel langzaam in de retro-orbitale sinus met een naald van 31 gauge.Breng oogzalf aan op beide ogen om uitdroging te voorkomen. Breng de illuminator met een laserlicht van 532 nanometer gedurende 20 minuten aan op de geboorde locatie binnen een afstand van twee inch. Visualiseer de verlichting aan de proximale tak van de MCA door middel van een laserprojectiebril.Stop na 20 minuten de laserverlichting. Maak een schedelvenster met een diameter van drie millimeter op het pariëtale bot van de schedel en plaats er een dekglas op. Plaats vervolgens de distale MCA onder een 20x objectieflens voor onderdompeling in water.Label de circulerende bloedplaatjes door middel van staartaderinjectie van DyLight 488 geconjugeerd anti-GP1b-bèta-antilichaam vijf minuten voor beeldvorming. Injecteer vervolgens retro-orbitaal het mengsel van trombine en roosbengaalse oplossing. Fotoactiveer de MCA met behulp van een lasersysteem van 532 nanometer met een laserstraal met een diameter van 10 micrometer en neem het beeld op tot trombusvorming.Voor tPA-toediening plaatst u het verdoofde dier op een warm kussen van 37 graden Celsius. Wikkel zijn staart gedurende één minuut in een warm nat gaasje van 45 graden Celsius op het geselecteerde tijdstip na fotoactivering. Injecteer vervolgens de recombinante humane tPA via de staartader.Injecteer 50% als bolus en breng de resterende 50% gedurende 30 minuten toe met behulp van een infuuspomp. Om de cerebrale bloedstroom te controleren, maakt u een incisie in de middellijn op de hoofdhuid met de schedel bloot. Bevochtig de schedel met steriele zoutoplossing en breng de ultrasone gel er voorzichtig op aan, zorg ervoor dat er geen haar- of luchtbellen in de gel komen.Bewaak de cerebrale bloedstroom in beide hersenhelften gedurende 10 minuten onder de laserspikkelcontrastimager. Immunofluorescentie-etikettering toont aan dat in de op rozenbengaalse gebaseerde fototrombose op basis van kleurstof, de MCA-tak dicht opeengepakt was met CD41-positieve bloedplaatjes en weinig fibrine. Daarentegen werd bij de trombine plus roos bengaalse fototrombose de MCA-tak afgesloten door willekeurig gemengde bloedplaatjes- en fibrinestolsels.De immunoblotting-analyse toonde een meer dan tweevoudige toename van fibrineafzetting in de ipsilaterale hemisfeer in de trombine plus rozenbengaalse fototrombose in vergelijking met alleen bengaalse roos. Confocale intravitale beeldvorming op basis van een microscoop toonde aan dat een intraveneuze trombine-injectie er niet in slaagde bloedplaatjesaggregaten te induceren, zelfs niet onder laserverlichting. Bloedplaatjes vormden homogene stolsels in het rozenbengaalse fototrombosemodel, maar ongelijke aggregaten met meerdere zwakke gebieden in het trombine plus roos bengaalse model.De CBF van dezelfde muis voor en 24 uur na tPA versus voertuigbehandeling werd gemeten door middel van laserbeeldvorming met spikkelcontrast en genormaliseerd naar de contralaterale hemisfeer. Bij de bengaalse rozenfototrombose leidde de tPA-behandeling tot een trend van CBF-herstel, met name in het ischemische grensgebied in vergelijking met met vehiculum behandelde muizen. Bij de bengaalse trombose van trombine plus roos was het herstel van CBF bij met tPA behandelde muizen prominenter en werden de proximale MCA-takken vaak na 24 uur zichtbaar.Bij bengaalse rozenfototrombose werd een vergelijkbare infarctgrootte gedetecteerd bij met vehiculum behandelde en met tPA behandelde muizen. Daarentegen verminderde de tPA-lytische behandeling bij bengaalse rozen bij trombine plus roos het infarct aanzienlijk na 0,5, één of twee uur, maar niet zes uur na fotoactivering in vergelijking met muizen die met een voertuig werden behandeld, trombine-gemedieerde fibrinegeneratie is cruciaal voor trombusvorming bij deze procedure. Deze methode kan worden gebruikt om de samenstelling van stolsels te onderzoeken en om trombolytische behandelingen verder te bestuderen.Na deze procedure kunnen andere methoden van trombolysetherapie worden toegepast en kan de latere werkzaamheid worden bepaald. Het toevoegen van trombine maakt het mogelijk om de samenstelling van het stolsel aan te passen van fibrinearm naar fibrinerijk, waardoor onderzoekers klinisch relevante therapeutische strategieën kunnen ontwikkelen.

a-fibrin-enriched-and-tpa-sensitive-photothrombotic-stroke-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

This video demonstrates the procedure to generate photothrombotic stroke in a mouse model by laser illumination of an intact skull following administration of photosensitive dye.

Modeling Photothrombotic Stroke in Mouse Model: A Laser Illumination Technique Through Mouse Skull Following Photosensitive Dye Administration to Induce Photothrombosis

Photothrombosis is een snelle, minimaal-invasieve techniek voor het induceren van kleine en goed afgebakende infarct in gebieden die van belang zijn in zeer reproduceerbare wijze. Het is bijzonder geschikt voor het bestuderen van cellulaire en moleculaire respons onderliggende hersenplasticiteit in transgene muizen.

Fototrombotisch Ischemie: Een minimaal invasieve en Reproduceerbaar Fotochemisch corticale laesie Model voor Mouse Stroke Studies

Hier beschrijven we een semi-invasieve optische microscopiebenadering voor het induceren van een Rose Bengal fototrombotrotisch stolsel in de somatosensorische cortex van een muis in vivo. De technische aspecten van de beeldvormingsprocedure worden beschreven, van de inductie van een fototrombotrotisch evenement tot de toepassing en gegevensverzameling.

Rose Bengal Photothrombosis door confocale Optical Imaging<em&gt; In Vivo</em&gt;: Een model van de Single Vessel Stroke

Modellen voor trombo-embolische beroertes zijn essentiële hulpmiddelen voor het optimaliseren van de recanalisatietherapie. Hier beschrijven we een muismodel voor trombotische beroerte gebaseerd op een tijdelijk cerebraal hypoxisch-ischemisch (tHI) letsel, dat trombose en infarct veroorzaakt en gunstig reageert op weefselplasminogeenactivator (tPA)-gemedieerde fibrinolyse in een therapeutisch venster vergelijkbaar met dat bij beroertepatiënten.

Een Trombotische Stroke model op basis van Transient Cerebrale hypoxie-ischemie

Dit manuscript beschrijft een modellering techniek van kapselvorming infarct. Hier hebben we gebruik gemaakt van een gemodificeerde fototrombotisch techniek met een lage intensiteit van het licht na de pre-operatie doel mapping. Met behulp van deze techniek, hebben we een omgeschreven kapselvorming infarct model met aanhoudende motorische handicap.

Omgeschreven Capsular Infarct Modeling Met behulp van een fototrombotisch Techniek

Wij rapporteren een verfijnde procedure van de ijzerchloride (FeCl3) geïnduceerde trombose modellen op de halsslagader en mesenterica evenals ader, efficiënt gekarakteriseerd met behulp van intravitale microscopie tot tijd om trombi vorming occlusief bewaken.

IJzer-Chloride geïnduceerde Murine Trombose Models

Hier beschreven is het fototrombotische beroertemodel, waarbij een beroerte wordt geproduceerd door de intacte schedel door permanente microvasculaire occlusie op te wekken met behulp van laserverlichting na toediening van een lichtgevoelige kleurstof.

Modelleerslag bij muizen: focale corticale laesies door fototrombose

Met behulp van een volledig optische benadering wordt een ischemische beroerte geïnduceerd terwijl tegelijkertijd neuronaleCa 2+ -activiteit wordt geregistreerd met behulp van een fluorescerende biosensor in de opkomende beroertekern van een wakkere, zich gedragende muis.

Gelijktijdige fototrombose en vezelfotometrie om ischemische beroerte te induceren en te bewaken bij zich gedragende muizen

Om een trombo-embolische beroerte te simuleren, werden emboliën bereid uit heteroloog rattenbloed geïnjecteerd in de middenarteria cerebrale arterie, gevolgd door het toedienen van systemische trombolyse voor recanalisatie. Deze versie van het model is geoptimaliseerd voor gebruik in een multilaboratoriumnetwerk en ondersteunt het testen van meerdere kandidaat-therapieën.

Het Stroke Preclinical Assessment Network Multi-laboratoriummodel van trombo-embolische beroerte met trombolyse: TE-MCAo

Dit protocol biedt een geïntegreerde methode die virale aflevering, implantatie van optroden, fototrombotische inductie, gelijktijdige registratie van astrocyten- en neuronale activiteit, en optogenetische stimulatie van astrocyten omvat. Deze geïntegreerde methode heeft als doel gelijktijdig onderzoek te bieden naar de relatie tussen astrocyten en neuronen over de acute tot chronische stadia van ischemische beroerte.

Een geïntegreerde methode voor fototrombotische beroertemodellering en in vivo optroderegistratie van neuronale en astrocytische activiteit bij zich gedragende muizen

Leer een gemodificeerd fototrombotisch beroertemodel met fibrineverrijkte bloedstolsels die gevoelig zijn voor tPA-gemedieerde trombolyse. Deze methode biedt een betrouwbaar platform voor preklinisch beroerteonderzoek.

Een fibrine-verrijkt en tPA-gevoelig fototrombotisch beroertemodel

Meer video's verkennen