Name: Isolatie en functionele beoordeling van menselijke borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Leer de isolatie en functionele beoordeling van borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters. Deze methode biedt hoge viabiliteit en zuiverheid voor in vitro en in vivo assays.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We bedanken de leden van ons laboratorium voor hun nuttige discussies en steun. Ons onderzoek naar borstkankerstamcellen en de tumormicro-omgeving wordt gefinancierd door subsidies van het Canadian Cancer Research Society Research Institute en het U.S. Army Department of Defense Breast Cancer Program (Grant # BC160912). V.B. wordt ondersteund door een Western Postdoctoral Fellowship (Western University), en zowel A.L.A. als V.B. worden ondersteund door de Breast Cancer Society of Canada. C.L. wordt ondersteund door een Vanier Canada Graduate Scholarship van de Canadese overheid.

De auteurs hebben niets te onthullen.

Borstkankermetastase en resistentie tegen therapie zijn wereldwijd belangrijke doodsoorzaken bij vrouwen geworden. Het bestaan van een subpopulatie van borstkankerstamcellen (BCSC's) draagt bij aan verbeterde metastase 26,43,44,45,46 en therapieresistentie 21,47,48. ...

Het begrijpen van de cellulaire en moleculaire mechanismen van menselijke borstkankerstamcellen (BCSC's) is cruciaal voor het aanpakken van de uitdagingen die worden ondervonden bij de behandeling van borstkanker. De opkomst van het BCSC-concept dateert uit het begin van de21e eeuw, waar een kleine populatie CD44 + CD24- / lage borstkankercellen in staat bleek te zijn om heterogene tumoren bij muizen te genereren 1,2. Vervolgens werd waargenomen dat menselijke borstkankercellen met een hoge enzymatische activiteit van aldehydedehydrogenase (ALDHhoog) ook vergelijkbare stamcelachtige eigenschappen vertoonden3. Deze BCSC's vertegenwoordigen een kleine populatie cellen die in staat zijn tot zelfvernieuwing en differentiatie, wat bijdraagt aan de heterogene aard van bulktumoren 1,2,3. Accumulerend bewijs suggereert dat veranderingen in evolutionair geconserveerde signaalroutes bcsc-overleving en -onderhoud stimuleren 4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 . Bovendien is aangetoond dat de extrinsieke micro-omgeving van de cel een cruciale rol speelt bij het dicteren van verschillende BCSC-functies 15,16,17. Deze moleculaire routes en de externe factoren die de BCSC-functie reguleren, dragen bij aan de terugval van borstkanker, metastase18 en de ontwikkeling van resistentie tegen therapieën 19,20,21, waarbij het resterende bestaan van BCSC's na de behandeling een grote uitdaging vormt voor de algehele overleving van borstkankerpatiënten 22,23 . Preklinische evaluatie van deze factoren is daarom erg belangrijk voor het identificeren van BCSC-gerichte therapieën die gunstig kunnen zijn voor het bereiken van betere behandelingsresultaten en een verbeterde algehele overleving bij borstkankerpatiënten.
Verschillende in vitro menselijke borstkanker cellijnmodellen en in vivo menselijke xenograftmodellen zijn gebruikt om BCSC's 24,25,26,27,28,29 te karakteriseren. Het vermogen van cellijnen om continu opnieuw te bevolken na elke opeenvolgende passage maakt deze een ideaal modelsysteem om op omics gebaseerde en farmacogenomische studies uit te voeren. Cellijnen slagen er echter vaak niet in om de heterogeniteit die in patiëntenmonsters wordt waargenomen, samen te vatten. Daarom is het belangrijk om cellijngegevens aan te vullen met patiënt-afgeleide monsters. Isolatie van BCSC's in hun zuiverste vorm is belangrijk voor het mogelijk maken van gedetailleerde karakterisering van BCSC's. Het bereiken van deze zuiverheid hangt af van de selectie van fenotypische markers die specifiek zijn voor BCSC's. Momenteel wordt het ALDHhogeCD44 + CD24-celfenotype het meest gebruikt om menselijke BCSC's te onderscheiden en te isoleren van bulk borstkankercelpopulaties met behulp van fluorescentie geactiveerde celsortering (FACS) voor maximale zuiverheid 1, 3,26. Bovendien kunnen de eigenschappen van geïsoleerde BCSC's zoals zelfvernieuwing, proliferatie en differentiatie worden geëvalueerd met behulp van in vitro en in vivo technieken.
In vitro kolonievormende assays kunnen bijvoorbeeld worden gebruikt om het vermogen van een enkele cel om zichzelf te vernieuwen te beoordelen om een kolonie van 50 cellen of meer te vormen in aanwezigheid van verschillende behandelingsomstandigheden30. Mammosfeertests kunnen ook worden gebruikt om het zelfvernieuwingspotentieel van borstkankercellen onder verankeringsonafhankelijke omstandigheden te beoordelen. Deze test meet het vermogen van afzonderlijke cellen om te genereren en te groeien als bollen (mengsel van BCSC's en niet-BCSC's) bij elke opeenvolgende passage in serumvrije niet-adherente kweekomstandigheden31. Bovendien kunnen 3-dimensionale (3D) cultuurmodellen worden gebruikt om de BCSC-functie te beoordelen, inclusief cel-cel- en celmatrixinteracties die de in vivo micro-omgeving nauw samenvatten en onderzoek naar de activiteit van potentiële BCSC-gerichte therapieën mogelijk maken32. Ondanks de uiteenlopende toepassingen van in vitro modellen, is het moeilijk om de complexiteit van in vivo condities te modelleren met alleen in vitro assays. Deze uitdaging kan worden overwonnen door gebruik te maken van xenograftmodellen van muizen om BCSC-gedrag in vivo te evalueren. Dergelijke modellen dienen met name als een ideaal systeem voor het beoordelen van borstkankermetastase33, het onderzoeken van interacties met de micro-omgeving tijdens ziekteprogressie34, in vivo beeldvorming35, en voor het voorspellen van patiëntspecifieke toxiciteit en werkzaamheid van antitumormiddelen34.
Dit protocol geeft een gedetailleerde beschrijving voor de isolatie van menselijke ALDHhogeCD44 +CD24- BCSC's met maximale zuiverheid uit bulkpopulaties van heterogene borstkankercellen. We geven ook een gedetailleerde beschrijving van drie in vitro technieken (kolonievormende assay, mammosfeertest en 3D-cultuurmodel) en een in vivo tumor xenograft-assay die kan worden gebruikt om verschillende functies van BCSC's te beoordelen. Deze methoden zouden geschikt zijn voor gebruik door onderzoekers die geïnteresseerd zijn in het isoleren en karakteriseren van BCSC's van menselijke borstkankercellijnen of van primaire patiënten afgeleide borstkankercellen en tumorweefsel met het oog op het begrijpen van BCSC-biologie en / of het onderzoeken van nieuwe BCSC-gerichte therapieën.

<table><tbody><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7AAD)</td><td>BD</td><td>51-68981E</td><td>suggested: 0.25 &micro;g/1x106 cells</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Fisher</td><td>A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Aldehyde dehydrogenase (ALDH) substraat</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>Verkocht commercieel als onderdeel van de ALDEFLOUR Assay kit; volg de instructies van de fabrikant voor de bereiding van ALDH substraat</td></tr><tr><td>Basement membrane extract (BME)</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Verkocht onder de commerciële naam Matrigel</td></tr><tr><td>Celcultuur platen: 6 wel</td><td>Corning</td><td>877218</td><td></td></tr><tr><td>Celcultuur platen: 60mm</td><td>Corning</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>Celcultuur platen: 96-wel ultra low attachment</td><td>Corning</td><td>3474</td><td></td></tr><tr><td>Cel zeef: 40 micron</td><td>BD</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Collagene</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7001</td><td>Bereid 1:30 verdunning van 3 mg/mL collageen in PBS</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Sigma</td><td>11088807001</td><td>1x</td></tr><tr><td>Conische buizen: 50 mL</td><td>Fisher scientific</td><td>05-539-7</td><td></td></tr><tr><td>Kristal violet</td><td>Sigma</td><td>C6158</td><td>Gebruik 0.05% kristal violet oplossing in water voor kleuring</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7913</td><td>5U/mL</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, Met L-glutamine en 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>DNAse</td><td>Sigma</td><td>D5052</td><td>0.1 mg/mL uiteindelijke concentratie</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Avantor Seradigm Lifescience</td><td>97068-085</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Flow buizen: 5ml</td><td>BD</td><td>352063</td><td>Polypropyleen ronde bodem buizen</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher</td><td>84124</td><td></td></tr><tr><td>muis anti-Human CD24 antilichaam</td><td>BD</td><td>561646</td><td>R-fycoerytrine en Cyanine kleurstof geconjugeerd Clone: ML5</td></tr><tr><td>muis anti-Human CD44 antilichaam</td><td>BD</td><td>555479</td><td>R-fycoerytrine geconjugeerd, Clone: G44-26</td></tr><tr><td>N,N-diethylaminobenzaldehyde (DEAB)</td><td>Stemcell Technologies</td><td>1700</td><td>Verkocht commercieel als onderdeel van de ALDEFLOUR Assay kit; volg de instructies van de fabrikant voor DEAB bereiding</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent Inc</td><td>311-425-CL</td><td>1x, Zonder calcium en magnesium</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mammosphere Media Samenstelling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>bFGF</td><td>Sigma</td><td>F2006</td><td>10 ng/mL</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Bioshop</td><td>ALB003</td><td>04%</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, Met L-glutamine en 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma</td><td>16634</td><td>5 &micro;g/mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3D Organoid Media Samenstelling</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A8301</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504-44</td><td>1x</td></tr><tr><td>DMEM:F12</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td>1x, Met L-glutamine en 15 mM HEPES</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma</td><td>E9644</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF10</td><td>Peprotech</td><td>100-26</td><td>20 ng/mL</td></tr><tr><td>FGF7</td><td>Peprotech</td><td>100-19</td><td>5 ng/mL</td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td>1x</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>N-acetylcysteïne</td><td>Sigma</td><td>A9165</td><td>1.25 mM</td></tr><tr><td>Neuregulin &beta;1</td><td>Peprotech</td><td>100-03</td><td>5 nM</td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma</td><td>N0636</td><td>5 mM</td></tr><tr><td>Noggin</td><td>Peprotech</td><td>120-10C</td><td>100 ng/mL</td></tr><tr><td>R-spondin3</td><td>R&amp;D</td><td>3500</td><td>250 ng/mL</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Sigma</td><td>S7067</td><td>500 nM</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tocris</td><td>1254</td><td>5 &micro;M</td></tr></tbody></table>

isolatie en functionele beoordeling van menselijke borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters

Isolation and Functional Assessment of Human Breast Cancer Stem Cells from Cell and Tissue Samples

Borstkankerstamcellen (BCSC's) zijn kankercellen met erfelijke of verworven stamcelachtige kenmerken. Ondanks hun lage frequentie leveren ze een belangrijke bijdrage aan borstkankerinitiatie, terugval, metastase en therapieresistentie. Het is noodzakelijk om de biologie van borstkankerstamcellen te begrijpen om nieuwe therapeutische doelen te identificeren voor de behandeling van borstkanker. Borstkankerstamcellen worden geïsoleerd en gekarakteriseerd op basis van expressie van unieke celoppervlakmarkers zoals CD44, CD24 en enzymatische activiteit van aldehydedehydrogenase (ALDH). Deze ALDHhogeCD44+CD24-cellen vormen de BCSC-populatie en kunnen worden geïsoleerd door fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) voor downstream functionele studies. Afhankelijk van de wetenschappelijke vraag kunnen verschillende in vitro en in vivo methoden worden gebruikt om de functionele kenmerken van BCSC's te beoordelen. Hier bieden we een gedetailleerd experimenteel protocol voor isolatie van menselijke BCSC's uit zowel heterogene populaties van borstkankercellen als primair tumorweefsel verkregen van borstkankerpatiënten. Daarnaast belichten we downstream in vitro en in vivo functionele assays, waaronder kolonievormende assays, mammosfeer assays, 3D-kweekmodellen en tumor xenograft assays die kunnen worden gebruikt om de BCSC-functie te beoordelen.

Het beschreven protocol maakt isolatie van menselijke BCSC's mogelijk van een heterogene populatie van borstkankercellen, hetzij uit cellijnen of uit gedissocieerd tumorweefsel. Voor een bepaalde cellijn of weefselmonster is het van cruciaal belang om een uniforme eencellige suspensie te genereren om BCSC's met maximale zuiverheid te isoleren, aangezien het besmetten van niet-BCSC-populaties kan leiden tot variabele cellulaire reacties, vooral als het onderzoek tot doel heeft de werkzaamheid van therapeutische middelen g...

Dit experimentele protocol beschrijft de isolatie van BCSC's uit borstkankercel- en weefselmonsters, evenals de in vitro en in vivo assays die kunnen worden gebruikt om bcsc-fenotype en -functie te beoordelen.

Isolatie en functionele beoordeling van menselijke borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters

Breast cancer stem cells (BCSCs) are cancer cells with inherited or acquired stem cell-like characteristics. Despite their low frequency, they are major ...

Deze techniek zal onderzoekers in staat stellen borstkanker stamcellen te isoleren met maximale zuiverheid en levensvatbaarheid voor de uitvoering van zowel in vitro als in vivo functionele karakteriseringstests. Geïsoleerde borstkanker stamcellen kunnen ook worden gebruikt om de moleculaire gebeurtenissen die tumorigeniciteit en metastase regelen te helpen verduidelijken, en om therapeutische strategieën te ontwerpen om deze cellen aan te pakken. Met kleine aanpassingen specifiek voor de cel- en weefseltypen van belang, kan deze methode ook worden toegepast op andere systemen.Om een ​​enkele celsuspensie uit een celcultuur te genereren, was een 80% confluente borstkankercelcultuur met PBS en behandel de cellen gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur met een geschikte celdissociatie-oplossing. Zodra de cellen zijn losgelaten, voeg je vijf milliliter kweekmedium toe om de celdissociatie-oplossing te neutraliseren en breng je de cellen over naar een 50 milliliter conische buis voor centrifugatie. Breng het pellet opnieuw op in vijf milliliter PBS om te tellen.Na het tellen, centrifugeer je de cellen opnieuw en breng je de cellen in suspensie bij een keer 10 tot zes cellen per milliliter ALDH substraatbuffer. Om een ​​enkele celsuspensie uit een weefselmonster te genereren, gebruik je chirurgische messen in een kruistechniek om het tumorweefsel in stukjes van ongeveer één millimeter te snijden. Plaats de stukjes in een 50 milliliter conische buis met 10 milliliter dissociatiebuffer.Versluit de buis met parafilm voor een 40 minuten incubatie bij 37 graden Celsius in een shaker en sedimenteer de verteerde weefselstukken door centrifugatie. Breng het pellet opnieuw op in vijf milliliter trypsine met behulp van een vijf milliliter pipet en incubeer het weefsel gedurende vijf minuten in een 37 graden waterbad. Aan het einde van de incubatie, pipet je het weefsel krachtig meerdere keren om enkele cellen vrij te maken en voeg je voldoende DMEM/F-12 medium toe om het totale volume in de buis tot 25 milliliter te brengen.Verzamel de cellen door centrifugatie, breng het pellet opnieuw op in één milliliter Displace DNAse en incubeer het gedurende vijf minuten in een 37 graden Celsius waterbad. Aan het einde van de incubatie, breng je het totale volume tot 10 milliliter met PBS. Meng de cellen door te pipetten en passeer ze door een 40 micron celzeef in een 50 milliliter buis.Na centrifugatie, breng je de cellen opnieuw op in vijf milliliter vers PBS om te tellen. Om een ​​kolonievormingstest uit te voeren, breng je de cellen na het sorteren opnieuw in suspensie in compleet medium en voeg je het juiste aantal borstkanker stamcellen toe aan elk van de drie buizen met twee milliliter medium per buis, gelabeld één keer 10 tot de tweede, twee keer 10 tot de tweede of vijf keer 10 tot de tweede cellen. Pipet vijf keer op en neer om de celsuspensie grondig te mengen en breng de cellen aan in afzonderlijke putjes van een zesputjesplaat.Zwiep voorzichtig met de plaat om een ​​uniforme celverdeling te verkrijgen en plaats de plaat in de celkweekincubator totdat kolonies verschijnen. Aan het einde van de incubatie, was je de cellen met één milliliter PBS per putje en kleuren je de cellen met 500 microliter 0,05% kristallen violet oplossing per putje gedurende 30 seconden. Aan het einde van de incubatie, was je de putjes twee keer met twee milliliter water per putje om de overtollige kleurstof te verwijderen, en tel en noteer je het totale aantal kolonies per putje door lichtmicroscopie bij een vier of 10 keer vergroting.Om een ​​mammosfeertest uit te voeren, breng je de cellen na het sorteren opnieuw in suspensie in compleet mammosfeermedium en plateer je ze met een zitdichtheid van vijf keer 10 van de tweede cellen per vierkante centimeter gebied per putje in een 96 putjes ultra-lage aanhechting celkweekplaat. Plaats de plaat voor het tellen van het aantal mammosferen per putje door lichtmicroscopie gedurende vijf tot 10 dagen in de celkweekincubator. Om een ​​3D-kweekmodel op te zetten, voeg je voorzichtig 50 microliter basement membrane extract toe aan elke put van een 96 putjesplaat zonder bellen en plaats je de plaat gedurende één uur op 37 graden Celsius om de oplossing te laten polymeriseren.Voeg na 10 minuten 100 microliter PBS toe om uitdroging van de gellaag te voorkomen. Aan het einde van de incubatie, breng je de gesorteerd cellen in suspensie tot vijf tot 50 keer 10 tot de derde cellen per 200 microliter van 3D kweekmediumconcentratie en vervang je het PBS in elke put van de 96 putjesplaat door 200 microliter medium met cellen. Plaats vervolgens de plaat gedurende 10 tot 14 dagen in de celkweekincubator voordat je de culturen beoordeelt op organoïdvorming.Menselijk borstkankercellen die verhoogde ALDH enzymatische activiteit vertonen, tonen hoge niveaus van CD44 en lage tot negatieve expressieniveaus van CD24 en kunnen worden geclassificeerd als borstkanker stamcellen. De verhouding van borstkanker stamcellen binnen de bulkpopulatie kan variëren tussen cellijnen of patiënten en hangt vaak af van het ziektestadium, waarbij agressievere borstkanker doorgaans een hoger percentage borstkanker stamcellen vertoont. Het vermogen van een enkele borstkankercel om zichzelf te vernieuwen en kolonies van 50 cellen te genereren kan worden beoordeeld door kolonievormingstests.Het vermogen van borstkanker stamcellen om zichzelf te vernieuwen onder verankeringsonafhankelijke experimentele omstandigheden kan worden beoordeeld door mammosfeertests. Het kweken van borstkankercellen en basement membrane extract maakt het mogelijk voor borstkanker stamcellen om 3D structuren te vormen die de in vivo omstandigheden nabootsen. Bovendien kunnen in vivo muis xenograft modellen worden gebruikt om de verschillen in groei, zelfvernieuwing, differentiatie en/of het tumorinitiërende vermogen van borstkanker stamcellen te begrijpen in vergelijking met niet-borstkanker stamcellen of bulkcelpopulaties.Volgens deze procedure kunnen de geïsoleerde borstkanker stamcellen worden gebruikt in transcriptomische, kinomische en metabolische studies. Deze methode biedt onderzoekers de mogelijkheid om de rol van borstkan

isolation-functional-assessment-human-breast-cancer-stem-cells-from

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Kankerstamcellen (CSCs) zijn geïdentificeerd in een aantal maligniteiten. In dit protocol beschrijven we een flowcytometrische methode waarbij aldehyde dehydrogenase activiteit en CD44 en CD24 expressie CSCs isoleren van menselijke pancreas adenocarcinoom xenotransplantaten. Deze levensvatbare cellen kunnen vervolgens worden gebruikt in functionele en analytische studies.

Isolatie van stamcellen uit menselijke pancreaskanker xenotransplantaten

De identificatie van hersentumor initiëren cellen (BTICs), de zeldzame cellen binnen een heterogene tumor bezit stamcel eigenschappen, geeft nieuwe inzichten in de menselijke hersenen tumor pathogenese. We hebben verfijnd specifieke kweekomstandigheden te verrijken voor BTICs, en we routinematig gebruik van flowcytometrie om verder te verrijken deze populaties. Zelfvernieuwing en assays transcript analyse door eencellige RT-PCR kan vervolgens worden uitgevoerd op deze geïsoleerde cellen.

Verwerking van primaire hersentumor Weefsel voor Stem Cell Testen en Flow sorteren

De isolatie van kankerstamcellen (KSC) rechtstreeks van menselijke weefsels is voorwaarde voor hun biologische karakterisering. Dit manuscript beschrijft een methode voor de isolatie van prostaat CSC van menselijk weefsel, terwijl ook het verstrekken van tips over het oplossen van moeilijke stappen.

Isolatie van kanker stamcellen uit menselijke stalen van prostaatkanker

In vitro bollen-assays worden vaak gebruikt om kanker stamcellen te identificeren. Hier vergelijken we enkele met meercellen gebaseerde bollen-assays. De meer bewerkelijk enkele cel-gebaseerde assays of methylcellulose suppletie geven nauwkeurigere resultaten terwijl meercellen gebaseerde assays uitgevoerd in vloeibaar medium sterk kunnen worden beïnvloed door celdichtheid.

Evaluatie van Stem Cell Properties in Human ovariumcarcinoomcellen Met behulp van Multi en Single-Cell gebaseerde Spheres Testen

Drijvende mammosfeer-assays kunnen de subset van stamcel-achtige borstkankercellen onderzoeken die overleven in suspensie-omstandigheden en verhoogde tumorigenese vertonen wanneer ze in muizen worden geïmplanteerd. Dit protocol biedt een handige in vitro maatstaf voor sfeervormingsvermogen, een proxy voor in vivo tumorigenese, terwijl het de analyse van het stamcel-geassocieerde transcriptionele landschap vergemakkelijkt.

Mammosphere Formation Assay van menselijke borstkanker weefsels en cellijnen

De aanwezigheid van kanker stamcellen (CSC) in bot sarcomen Onlangs is gekoppeld aan de pathogenese. In dit artikel presenteren we de isolatie van CSCs van primaire celculturen verkregen uit humane biopten van conventionele osteosarcoom (OS) met de mogelijkheid van CSCs groeien onder hechtende omstandigheden.

Oprichting van Cancer Stem Cell Cultures van Human Conventionele Osteosarcoom

Het begrijpen van de rol van kanker-stamcel-achtige cellen bij tumorrecidieven en resistentie tegen therapieën is in het afgelopen decennium een onderwerp van groot belang geworden. Dit artikel beschrijft de isolatie en karakterisering van de subpopulatie van kanker-stamcel-achtige cellen uit hoofd-hals-plaveiselcelcarcinoom cellijnen (HNSCC).

Isolatie en karakterisering van een hoofd en de nek plaveiselcelcarcinoom subpopulatie hebben van Stem Cell Kenmerken

Deze procedure zal demonstreren hoe we de anti-NFκB en anti-kanker stamcel activiteit van een aspirine-fumaraat prodrug hebben gesynthetiseerd en gekarakteriseerd.

Synthese en karakterisering van een Aspirine-fumaraat Prodrug dat NFKB Activity and Breast Kanker stamcellen Remt

Het doel van deze methodologie is om kankercellen (CSC) te identificeren in kankercellijnen en primaire menselijke tumormonsters met het bolvormende protocol, op een robuuste manier, met behulp van functionele testen en fenotypische karakterisering met stroomcytometrie en westerse Vlek.

Het verkrijgen van kanker stamcelbollen van gynaecologische en borstkankertumoren

Met behulp van humane primaire prostaat Epitheelcellen, rapporteren we een nieuwe biomarker-vrije methode van functionele karakterisering van stam-achtige cellen door een spheroid-gebaseerde label-retentie test. Een stap-voor-stap protocol wordt beschreven voor BrdU, CFSE of far Red 2D Cell labeling; driedimensionale spheroid-formatie; Label-behoud stam-achtige celidentificatie door immunocytochemie; en isolatie door FACS.

Isolatie van stam-achtige cellen uit 3-dimensionale Spheroid-culturen

Dit protocol beschrijft de methode voor het opzetten van de mammosfeervormingstest om Apoptosis Inhibitor 5 (Api5)-geïnduceerde kankerstam in niet-tumorogene borstepitheelcellen te bestuderen. Lysaten die uit mammosferen van de primaire generatie worden verzameld, worden geanalyseerd op verschillende stammarkeringen om de inductie van stamcelachtige eigenschappen te beoordelen.

Mammosfeertest onthult Api5-geïnduceerde stamheid in niet-tumorogene borstepitheelcellijnen

Leer de isolatie en functionele beoordeling van borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters. Deze methode biedt hoge viabiliteit en zuiverheid voor in vitro en in vivo assays.

Isolatie en functionele beoordeling van menselijke borstkankerstamcellen uit cel- en weefselmonsters

Meer video's verkennen