Name: Een Murine Staart Lymfoedeem Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 38 s
Description: Leer een chronisch murijn staart lymfoedeem model opzetten met chirurgische excisie en weefsel nanotransfectie technologie. Dit model ondersteunt onderzoek naar lymfatische disfunctie en genetische therapieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidiefinanciering van de American Association of Plastic Surgeons Academic Scholarship en het Ministerie van Defensie W81XWH2110135   aan AHH. Aesthetic Surgery Education and Research Foundation subsidie aan MS. NIH U01DK119099, R01NS042617 en R01DK125835 aan CKS.

Het protocol volgt de richtlijnen van de ethische commissie voor dieronderzoek van de instelling. Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Indiana University School of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee. Dieren werden gehuisvest onder een 12-uur durende licht-donker cyclus met voedsel en water ad libitum.
1. Chirurgische verstoring van de lymfevaten van de muizenstaart
<ol><li>Gebruik acht weken oude C57BL/6 muizen met een gelijke geslachtsverdeling.</li>
	<li>Plaats een muis onder algemene anesthesie in een inductiekamer met 3-4% isofluraan in 100% zuurstof gevolgd door onderhoudssedatie bij 1-3% tijdens de procedure.</li>
	<li>Dien 0,5 mg/kg buprenorfine subcutaan met aanhoudende afgifte (SR) toe voor pijnbestrijding. OPMERKING: Aanvullende pijnstillende geneesmiddelen die post-op worden toegediend: Carprofen eenmaal per 24 uur gedurende ten minste 48 uur en Bupivacaïne eenmaal nadat de incisie is gemaakt of vóór het sluiten van de incisie, aangebracht door op huidranden te druppelen (duurt maximaal 4 - 6 uur).</li>
	<li>Plaats de muis dorsaal en prep de staart met 70% isopropylalcohol.</li>
	<li>Meet de staartdiameter voorafgaand aan de procedure in stappen van 5 mm vanaf 20 mm vanaf de basis van de staart met behulp van een remklauw. Deze metingen zullen worden gebruikt om het volume te berekenen met behulp van de afgeknotte kegelvergelijking37.</li>
	<li>Markeer een omtrekexcisie van 3 mm op de staart op 20 mm van de basis.</li>
	<li>Voer een zorgvuldige huidexcisie van 3 mm uit met een steriel chirurgisch mes (maat 15), waarbij alle onderliggende vasculatuur intact blijft onder chirurgische microscopische vergroting. Insneden het superieure omtrekmerk (20 mm vanaf de staartbasis) eerst door de dermis, gevolgd door een omtrekkende incisie van volledige dikte 3 mm uit de verbinding tot de eerste incisie.<ol>
<li>Maak een loodrechte verticale incisie van volledige dikte om de twee incisies met elkaar te verbinden. Gebruik een getande fijne pick-up om een voorrand vast te pakken en gebruik microscisors om zorgvuldig diep in het avasculaire vlak naar de dermis en oppervlakkig naar de ader adventitia te ontleden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Injecteer 0,1 ml isosulfanblauw (1%) subcutaan proximaal tot de punt van de staart.</li>
	<li>Identificeer de twee lymfekanalen naast de laterale staartaderen onder de chirurgische microscoop. De lymfevaten zullen blauw lijken vanwege isosulfan injectie. Transect de lymfevaten met behulp van een rechte microchirurgische schaar. Gebruik de schaar om zorgvuldig een vlak tussen de laterale ader en de lymfe te ontleden. Passeer vervolgens de punt van een schaarblad tussen het lymfevat en de laterale ader en sluit de messen om het lymfevat te transecteren.</li>
	<li>Kleed de staartwond aan met een steriel hechtend helder verband. Controleer post-op incisies dagelijks om ervoor te zorgen dat ze niet geïnfecteerd of bloedend zijn en bied wondverzorging gedurende 2 weken.</li>
	<li>Huisvest de dieren afzonderlijk om verder letsel aan de staart te voorkomen en om te voorkomen dat de dieren elkaar bijten, wat zou leiden tot chirurgische complicaties.</li>
</ol>2. Staart vasculaire beoordeling met laser spikkel contrast beeldvorming
<ol><li>Verdoof de muis zoals in stap 1.2.</li>
	<li>Als u laserspikkelcontrastafbeeldingen wilt gebruiken om de vasculariteit van de staart te visualiseren, stelt u de breedte in op 0,8 cm, de hoogte op 1,8 cm, de puntdichtheid op hoog, de framesnelheid op 44 afbeeldingen / seconde, de tijd op 30 seconden en de kleurenfoto op 1 per 10 seconden.</li>
	<li>Evalueer de veneuze en arteriële perfusie op doorgankelijkheid. Kwalitatief moet de continuïteit van de stroom worden gevisualiseerd.</li>
</ol>3. Functionele lymfatische evaluatie met nabij-infrarood laserangiografie
<ol><li>Verdoving het dier zoals in stap 1.2</li>
	<li>Reconstitueer indocyaninegroen (ICG) (25 mg/10 ml) en dien 0,1 ml subcutaan toe in de distale muizenstaart in de buurt van de punt.</li>
	<li>Dim de kamerverlichting. Plaats nabij-infrarood laserangiografie in buffering-instelling gevolgd door live-opname.</li>
</ol>4. Focale levering van nucleïnezuurlading aan muizenstaart met TNT
<ol><li>Verdoven van het dier zoals in stap 1.2.</li>
	<li>Exfolieer de muizenstaart met behulp van actuele huid exfoliatie crème.</li>
	<li>Dompel de muizenstaart gedurende 5 minuten onder in collagenase-oplossing (10 mg/ml) bij 37 °C.</li>
	<li>Laad DNA in het TNT2.0 chipreservoir35.</li>
	<li>Plaats het TNT2.0 siliconen chipapparaat over de gewenste brandpuntsplaats van levering op de staart met nanonedles in contact met de staart.</li>
	<li>Plaats een positieve elektrische sonde in het reservoir. Bevestig de negatieve sonde aan een naald van 30 G en steek de naald subcutaan in de staart op de plaats van levering.</li>
	<li>Pas elektrische stimulatie van de blokgolfpuls toe (pulsen van 10 x 10 ms, 250 V, 10 mA).</li>
</ol>

<ol><li>Kataru, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrosis+and+secondary+lymphedema%3A+chicken+or+egg%5BTitle%5D)+AND+%22Translation+Research%22%5BJournal%5D)">Fibrosis and secondary lymphedema: chicken or egg.</a> Translation Research. 209, 68-76 (2019).</li>
<li>Brayton, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+prevalence+and+treatment+benefits+in+cancer%3A+impact+of+a+therapeutic+intervention+on+health+outcomes+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lymphedema prevalence and treatment benefits in cancer: impact of a therapeutic intervention on health outcomes and costs.</a> PLoS One. 9 (12), 114597(2014).</li>
<li>Mendoza, N., Li, A., Gill, A., Tyring, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filariasis%3A+diagnosis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Filariasis: diagnosis and treatment.</a> Dermatology and Therapy. 22 (6), 475-490 (2009).</li>
<li>Rockson, S. G., Rivera, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+the+population+burden+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Estimating the population burden of lymphedema.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 147-154 (2008).</li>
<li>Soran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-related+lymphedema--what+are+the+significant+predictors+and+how+they+affect+the+severity+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Journal%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-related lymphedema--what are the significant predictors and how they affect the severity of lymphedema.</a> Breast Journal. 12 (6), 536-543 (2006).</li>
<li>Hayes, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper-body+morbidity+after+breast+cancer%3A+incidence+and+evidence+for+evaluation%2C+prevention%2C+and+management+within+a+prospective+surveillance+model+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Upper-body morbidity after breast cancer: incidence and evidence for evaluation, prevention, and management within a prospective surveillance model of care.</a> Cancer. 118, 8 Suppl 2237-2249 (2012).</li>
<li>Carl, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Review+of+the+Surgical+Treatment+of+Extremity+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Reconstructive+Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Systematic Review of the Surgical Treatment of Extremity Lymphedema.</a> Journal of Reconstructive Microsurgery. 33 (6), 412-425 (2017).</li>
<li>Garza, R., Skoracki, R., Hock, K., Povoski, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive+overview+on+the+surgical+management+of+secondary+lymphedema+of+the+upper+and+lower+extremities+related+to+prior+oncologic+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A comprehensive overview on the surgical management of secondary lymphedema of the upper and lower extremities related to prior oncologic therapies.</a> BMC Cancer. 17 (1), 468(2017).</li>
<li>Hassanein, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+Inferior+Epigastric+Artery+Vascularized+Lymph+Node+Transfer%3A+A+Simple+and+Safe+Option+for+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Plastic%2C+Reconstructive%2C+Aesthetic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Deep Inferior Epigastric Artery Vascularized Lymph Node Transfer: A Simple and Safe Option for Lymphedema.</a> Journal of Plastic, Reconstructive, Aesthetic Surgery. 73 (10), 1897-1916 (2020).</li>
<li>Hassanein, A. H., Sacks, J. M., Cooney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+perioperative+lymphatic-venous+anastomosis+localization+using+transcutaneous+vein+illumination%2C+isosulfan+blue%2C+and+indocyanine+green+lymphangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Optimizing perioperative lymphatic-venous anastomosis localization using transcutaneous vein illumination, isosulfan blue, and indocyanine green lymphangiography.</a> Microsurgery. 37 (8), 956-957 (2017).</li>
<li>Chang, D. W., Masia, J., Garza, R., Skoracki, R., Neligan, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%3A+Surgical+and+Medical+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema: Surgical and Medical Therapy.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 138, 3 Suppl 209-218 (2016).</li>
<li>Gould, D. J., Mehrara, B. J., Neligan, P., Cheng, M. H., Patel, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+transplantation+for+the+treatment+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Lymph node transplantation for the treatment of lymphedema.</a> Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 736-742 (2018).</li>
<li>Cook, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immediate+Lymphatic+Reconstruction+after+Axillary+Lymphadenectomy%3A+A+Single-Institution+Early+Experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Immediate Lymphatic Reconstruction after Axillary Lymphadenectomy: A Single-Institution Early Experience.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Cook, J. A., Hassanein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ASO+Author+Reflections%3A+Immediate+Lymphatic+Reconstruction%3A+A+Proactive+Approach+to+Breast+Cancer-Related+Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgical+Oncology%22%5BJournal%5D)">ASO Author Reflections: Immediate Lymphatic Reconstruction: A Proactive Approach to Breast Cancer-Related Lymphedema.</a> Annals of Surgical Oncology. , (2020).</li>
<li>Johansson, K., Branje, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arm+lymphoedema+in+a+cohort+of+breast+cancer+survivors+10+years+after+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncologica%22%5BJournal%5D)">Arm lymphoedema in a cohort of breast cancer survivors 10 years after diagnosis.</a> Acta Oncologica. 49 (2), 166-173 (2010).</li>
<li>Johnson, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+Incidence+After+Axillary+Lymph+Node+Dissection%3A+Quantifying+the+Impact+of+Radiation+and+the+Lymphatic+Microsurgical+Preventive+Healing+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Plastic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema Incidence After Axillary Lymph Node Dissection: Quantifying the Impact of Radiation and the Lymphatic Microsurgical Preventive Healing Approach.</a> Annals of Plastic Surgery. 82, 4S Suppl 3 234-241 (2019).</li>
<li>Gartner, R., Mejdahl, M. K., Andersen, K. G., Ewertz, M., Kroman, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+in+self-reported+arm-lymphedema+in+Danish+women+treated+for+early-stage+breast+cancer+in+2005+and+2006--a+nationwide+follow-up+study%5BTitle%5D)+AND+%22Breast%22%5BJournal%5D)">Development in self-reported arm-lymphedema in Danish women treated for early-stage breast cancer in 2005 and 2006--a nationwide follow-up study.</a> Breast. 23 (4), 445-452 (2014).</li>
<li>Shin, W. S., Rockson, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+the+molecular+and+mechanistic+study+of+lymphatic+biology+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+the+New+York+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Animal models for the molecular and mechanistic study of lymphatic biology and disease.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1131, 50-74 (2008).</li>
<li>Tobbia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema+development+and+lymphatic+function+following+lymph+node+excision+in+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Lymphedema development and lymphatic function following lymph node excision in sheep.</a> Journal of Vascular Research. 46 (5), 426-434 (2009).</li>
<li>Olszewski, W., Machowski, Z., Sokolowski, J., Nielubowicz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+lymphedema+in+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Experimental lymphedema in dogs.</a> Journal of Cardiovascular Surgery. 9 (2), 178-183 (1968).</li>
<li>Rutkowski, J. M., Moya, M., Johannes, J., Goldman, J., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+lymphedema+in+the+mouse+tail%3A+Lymphatic+hyperplasia%2C+VEGF-C+upregulation%2C+and+the+protective+role+of+MMP-9%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">Secondary lymphedema in the mouse tail: Lymphatic hyperplasia, VEGF-C upregulation, and the protective role of MMP-9.</a> Microvascular Research. 72 (3), 161-171 (2006).</li>
<li>Tabibiazar, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+manifestations+of+experimental+lymphatic+insufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Inflammatory manifestations of experimental lymphatic insufficiency.</a> PLoS Medicine. 3 (7), 254(2006).</li>
<li>Slavin, S. A., Van den Abbeele, A. D., Losken, A., Swartz, M. A., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+of+lymphatic+function+after+flap+transfer+for+acute+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Return of lymphatic function after flap transfer for acute lymphedema.</a> Annals of Surgery. 229 (3), 421-427 (1999).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+deficiency+worsens+inflammation+and+lymphedema+after+lymphatic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor deficiency worsens inflammation and lymphedema after lymphatic injury.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 302 (4), 709-719 (2012).</li>
<li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> JCI Insight. 1 (15), 84095(2016).</li>
<li>Weiler, M. J., Cribb, M. T., Nepiyushchikh, Z., Nelson, T. S., Dixon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+tail+lymphedema+model+for+observing+lymphatic+pump+failure+during+lymphedema+development%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A novel mouse tail lymphedema model for observing lymphatic pump failure during lymphedema development.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10405(2019).</li>
<li>Avraham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2+differentiation+is+necessary+for+soft+tissue+fibrosis+and+lymphatic+dysfunction+resulting+from+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Th2 differentiation is necessary for soft tissue fibrosis and lymphatic dysfunction resulting from lymphedema.</a> FASEB J. 27 (3), 1114-1126 (2013).</li>
<li>Zampell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%28%2B%29+cells+regulate+fibrosis+and+lymphangiogenesis+in+response+to+lymphatic+fluid+stasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">CD4(+) cells regulate fibrosis and lymphangiogenesis in response to lymphatic fluid stasis.</a> PLoS One. 7 (11), 49940(2012).</li>
<li>Arruda, G., Ariga, S., de Lima, T. M., Souza, H. P., Andrade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+mouse-tail+lymphedema+model%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphology%22%5BJournal%5D)">A modified mouse-tail lymphedema model.</a> Lymphology. 53 (1), 29-37 (2020).</li>
<li>Jun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+Mouse+Models+of+Chronic+Secondary+Lymphedema%3A+Tail+and+Hind+Limb+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Vascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Modified Mouse Models of Chronic Secondary Lymphedema: Tail and Hind Limb Models.</a> Annals of Vascular Surgery. 43, 288-295 (2017).</li>
<li>Karkkainen, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+gene+therapy+of+human+hereditary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for gene therapy of human hereditary lymphedema.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (22), 12677-12682 (2001).</li>
<li>Yoon, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VEGF-C+gene+therapy+augments+postnatal+lymphangiogenesis+and+ameliorates+secondary+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">VEGF-C gene therapy augments postnatal lymphangiogenesis and ameliorates secondary lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation. 111 (5), 717-725 (2003).</li>
<li>Gallego-Perez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+tissue+nano-transfection+mediates+non-viral+stroma+reprogramming+and+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Topical tissue nano-transfection mediates non-viral stroma reprogramming and rescue.</a> Nature Nanotechnology. 12 (10), 974-979 (2017).</li>
<li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanochannel-Based+Poration+Drives+Benign+and+Effective+Nonviral+Gene+Delivery+to+Peripheral+Nerve+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Biosystems%22%5BJournal%5D)">Nanochannel-Based Poration Drives Benign and Effective Nonviral Gene Delivery to Peripheral Nerve Tissue.</a> Advanced Biosystems. , 2000157(2020).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-Mediated+Crosstalk+between+Keratinocytes+and+Macrophages+in+Cutaneous+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Exosome-Mediated Crosstalk between Keratinocytes and Macrophages in Cutaneous Wound Healing.</a> ACS Nano. 14 (10), 12732-12748 (2020).</li>
<li>Roy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenic+tissue+nanotransfection+in+the+management+of+cutaneous+diabetic+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Neurogenic tissue nanotransfection in the management of cutaneous diabetic polyneuropathy.</a> Nanomedicine. 28, 102220(2020).</li>
<li>Sitzia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+measurement+in+lymphoedema+treatment%3A+examination+of+formulae%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer+Care%22%5BJournal%5D)">Volume measurement in lymphoedema treatment: examination of formulae.</a> European Journal of Cancer Care. 4 (1), 11-16 (1995).</li>
<li>Smeltzer, D. M., Stickler, G. B., Schirger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+lymphedema+in+children+and+adolescents%3A+a+follow-up+study+and+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Primary lymphedema in children and adolescents: a follow-up study and review.</a> Pediatrics. 76 (2), 206-218 (1985).</li>
<li>Maclellan, R. A., Greene, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Pediatric+Surgery%22%5BJournal%5D)">Lymphedema.</a> Seminars in Pediatric Surgery. 23 (4), 191-197 (2014).</li>
<li>Clavin, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-beta1+is+a+negative+regulator+of+lymphatic+regeneration+during+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%3A+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">TGF-beta1 is a negative regulator of lymphatic regeneration during wound repair.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 295 (5), 2113-2127 (2008).</li>
<li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retooling+Laser+Speckle+Contrast+Analysis+Algorithm+to+Enhance+Non-Invasive+High+Resolution+Laser+Speckle+Functional+Imaging+of+Cutaneous+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Retooling Laser Speckle Contrast Analysis Algorithm to Enhance Non-Invasive High Resolution Laser Speckle Functional Imaging of Cutaneous Microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048(2017).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende belangenconflicten.

Lymfoedeem wordt gecategoriseerd als een primaire (aangeboren) of secundaire (iatrogene lymfatische) verwonding38,39. Secundair lymfoedeem omvat 99% van de gevallen39. Secundair lymfoedeem wordt meestal veroorzaakt door infectie (filariasis) of post-oncologische behandeling met lymfadenectomie of straling4,39. Een translationeel diermodel is een uitdaging voor secundair lymfoedeem,...

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. De aangedane ledemaat vergroot door de ophoping van vocht, vet en fibrose1. Lymfoedeem treft wereldwijd 250 miljoen mensen2,3,4. Geschat wordt dat 20-40% van de patiënten die een behandeling ondergaan voor solide maligniteiten, zoals borstkanker, melanoom, gynaecologische / urologische tumoren of sarcomen, lymfoedeem ontwikkelen2,4,5. Morbiditeit van lymfoedeem omvat terugkerende infecties, pijn en misvorming6. Er is geen remedie voor deze progressieve, levenslange ziekte. De huidige therapieën zijn variaby effectief7 en omvatten compressie, volledige decongestieve therapie door fysiotherapeuten, excisieprocedures en microchirurgische operaties, waaronder gevasculariseerde lymfeklieroverdracht en lymfooveneuze bypass7,8,9,10,11,12,13,14. De ideale behandeling voor lymfoedeem moet nog worden ontdekt.
Het bestuderen van het mechanisme en de therapie van lymfoedeem is beperkt. Er is een gemiddeld vertraagd begin van een jaar na het lymfeletsel15,16 en de meeste personen die iatrogene belediging ervaren met bestraling en chirurgie ontwikkelen geen lymfoedeem4,6,17. Hoewel grote diermodellen, waaronder honden, schapen en varkens, zijn beschreven18,19,20,is het muisstaartmodel het meest toegepast vanwege gemak, kosten en reproduceerbaarheid. Muismodellen voor het onderzoeken van lymfoedeem omvatten een staartmodel, diptheria-toxine gemedieerde lymfatische ablatie en okselachtige of popliteale lymfeklierdissectie21,22,23,24,25,26. De meeste staartmodellen gebruiken een focale, volledige dikte huidexcisie met lymfatische kanaalknipsel die wordt uitgevoerd in de buurt van de basis van destaart 22, wat resulteert in staartzwelling en histologische kenmerken vergelijkbaar met menselijk lymfoedeem24,27,28,29. Het standaard muizenstaartmodel verdwijnt echter meestal spontaan in slechts 20 dagen en gaat gepaard met periodieke staartnecrose30. Het lymfoedeem muisstaartmodel verlengt een aanhoudend lymfoedeem na 15 weken, toont bevestigde arteriële en veneuze doorgankelijkheid en maakt functionele lymfatische disfunctiebeoordeling mogelijk.
Een muizenstaartmodel van lymfoedeem maakt het mogelijk om nieuwe therapieën te evalueren om lymfoedeem te behandelen. Gengebaseerde strategieën zijn gebruikt in het muismodel gemedieerd door virale vectoren31,32. We gebruiken ook een nieuwe weefsel nanotransfectietechnologie (TNT) voor genetische ladingafgifte aan de lymfoedemateuze muizenstaart. TNT faciliteert directe, transcutane genafgifte met behulp van een chip met nanokanalen in een snel gericht elektrisch veld33,34,35,36. Het model omvat het gebruik van TNT2.0 om focale genafgifte van potentiële gengebaseerde therapeutica aan de lymfatische verwondingsplaats van de muizenstaart mogelijk te maken35.

<table><tbody><tr><td>Tegaderm Film</td><td></td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch Microscoop</td><td>Leica, Wetzlar, Duitsland</td><td>MSV266</td><td></td></tr><tr><td>Adherent Dressing (Tegaderm)</td><td>3M, St. Paul, Minn.</td><td>1626W</td><td></td></tr><tr><td>Laser speckle (Pericam PSI System )</td><td>Perimed AB, Stockholm, Zweden</td><td>PSIZ</td><td></td></tr><tr><td>Near-infrared laser (LUNA)</td><td>Stryker (voorheen Novadaq Technologies, Toronto, Canada)</td><td>LU3000</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 muizen</td><td>Jackson Laboratories</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps - 1x2 Teeth</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>11019-12</td><td></td></tr><tr><td>V-Hook</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>18052-12</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel SS NO15</td><td>Fischer Scientific</td><td>29556</td><td></td></tr><tr><td>Vuilnisnaald 30GX1</td><td>Fischer Scientific</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>Operatie schaar</td><td>Fischer Scientific</td><td>12-460-796</td><td></td></tr><tr><td>Surgi-Or Juwelierstang, Sklar 4-1/2 inch</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-118-4255</td><td></td></tr><tr><td>Spring Scissors - Straight/Sharp-Sharp/8mm snijrand</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc.</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Cardiogreen</td><td>Sigma</td><td>I2633-25MG</td><td></td></tr><tr><td>IsosulfanBlue (Lymphazurin)&nbsp; 50 mg/5ml</td><td>Mylan</td><td>67457-220-05</td><td></td></tr></tbody></table>

een murine staart lymfoedeem model

A Murine Tail Lymphedema Model

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. De aangedane ledemaat vergroot door ophoping van vocht, vetweefsel en fibrose. Er is geen remedie voor deze ziekte. Een muisstaartmodel dat een focale huidexcisie van volledige dikte gebruikt in de buurt van de basis van de staart, resulterend in staartzwelling, is gebruikt om lymfoedeem te bestuderen. Dit model kan echter resulteren in vasculaire omvattende en daaruit voortvloeiende staartnecrose en vroege staartzwelling, waardoor de klinische vertaalbaarheid ervan wordt beperkt. Het chronische murinestaartlymfedeemmodel induceert aanhoudend lymfoedeem gedurende 15 weken en een betrouwbare perfusie aan de staart. Verbeteringen van het traditionele murinestaartlymfedeemmodel omvatten 1) nauwkeurige excisie van volledige dikte en lymfatisch knippen met behulp van een chirurgische microscoop, 2) bevestiging van postoperatieve arteriële en veneuze perfusie met behulp van laserspikkel met hoge resolutie, en 3) functionele beoordeling met behulp van indocyaninegroene nabij-infraroodlaserlymfangiografie. We gebruiken ook weefsel nanotransfectietechnologie (TNT) voor nieuwe niet-virale, transcutane, focale levering van genetische lading aan de muizenstaart vasculatuur.

De techniek voor het muizenstaartmodel voor aanhoudend lymfoedeem is weergegeven in figuur 1. De figuur toont de relevante anatomie van het muisstaartmodel. Figuur 2 toont de progressieve zwelling en aanhoudend persistant lymfoedeem in de muizenstaart na lymfoedeeminductie. Het muisstaartvolume, zoals berekend door de afgeknotte kegelvergelijking, piekt in week 4 en plateaus naar week 6 gevolgd door een geleidelijke verbetering d...

Lymfoedeem is zwelling van de extremiteit veroorzaakt door lymfatische disfunctie. We beschrijven een chronisch muizenstaartmodel van lymfoedeem en het nieuwe gebruik van weefselnanotransfectietechnologie (TNT) voor genetische ladingafgifte aan de staart.

Een Murine Staart Lymfoedeem Model

Lymphedema is extremity swelling caused by lymphatic dysfunction. The affected limb enlarges because of accumulation of fluid, adipose, and fibrosis. ...

Lymfoedeem is een chronische aandoening zonder genezing. Het treft een derde van de patiënten die een oksellymfeklieroperatie en bestraling hebben gehad bij de behandeling van borstkanker. Het hebben van een geldig diermodel vergemakkelijkt het begrijpen van het mechanisme en de ontwikkeling van nieuwe behandelingsstrategieën.Het muisstaartmodel van lymfoedeem is betrouwbaar en reproduceerbaar met het snelle begin. Het vertoont histologische veranderingen die consistent zijn met menselijk lymfoedeem. De procedure wordt gedemonstreerd door Dr. Ganesh Mohan, een postdoctoraal van mijn laboratorium.Plaats om te beginnen de acht weken oude verdoofde muis sternaal en maak de staart voor met 70% isopropylalcohol. Gebruik een remklauw om de staartdiameter te meten in stappen van vijf millimeter vanaf 20 millimeter vanaf de basis van de staart. Markeer een drie millimeter omtrekkende excisie op de staart op 20 millimeter van de basis.Voer onder chirurgische microscopische vergroting een nauwgezette huidexcisie van drie millimeter volledige dikte uit, waarbij alle onderliggende vasculatuur intact blijft. Inciseer het superieure omtrekmerk eerst door de dermis, gevolgd door een omtrekkende incisie van volledige dikte drie millimeter distale tot de eerste incisie. Maak een loodrechte verticale incisie van volledige dikte om de twee incisies te verbinden, gebruik vervolgens een getande fijne pick-up om een voorrand vast te pakken en ontleed diep in het avasculaire vlak naar de dermis en oppervlakkig naar de ader adventitia met een microschaar.Injecteer 0,1 milliliter van 1% isosulfanblauw subcutaan proximaal tot aan de punt van de staart. Identificeer de twee lymfekanalen die blauw lijken als gevolg van de injectie naast de laterale staartaderen. Transect de lymfevaten zorgvuldig en ontleed een vlak tussen de laterale ader en de lymfe met een rechte microchirurgische schaar.Passeer de punt van een schaarblad tussen het lymfevat en de laterale ader en sluit de messen om het lymfevat te transecteren. Als je klaar bent, kleed je de staartwond aan met een steriele aanhang duidelijke adressering. Dien indocyaninegroen 0,1 milliliter subcutaan toe in de distale muizenstaart bij de punt.Dim de kamerverlichting en plaats vervolgens nabij-infraroodlaserangiografie in bufferende instelling en voer live beeldvorming uit. Na toediening van isosulfanblauw in de staartpunt vertoonden de lymfevaten een blauwe kleur. De lymfevaten werden verstoord terwijl aangrenzende laterale aderen bewaard bleven.De progressieve zwelling en aanhoudend aanhoudend lymfoedeem in de muizenstaart na lymfoedeeminductie wordt hier getoond. Het muizenstaartvolume, zoals berekend door een afgeknotte kegelvergelijking, piekte in week vier en plateaude naar week zes, gevolgd door een geleidelijke verbetering die werd voortgezet tot week 15. Hoge resolutie laser spikkelcontrast beeldvorming werd gedaan om muisstaartperfusie te bevestigen in het lymfoedeemstaartmodel met gewonde laterale aderen en intacte laterale aderen voor beoordeling van de staartvasculatuurdoorgankelijkheid.Nabij-infraroodlaserlymfangiografie toonde preoperatieve intacte lymfevaten en geen ICG-transit voorbij de chirurgische plaats postoperatief, waardoor werd bevestigd dat zwelling werd veroorzaakt door lymfatische disfunctie. De efficiëntie van genetische ladingafgifte met behulp van weefselnanotransfectietechnologie werd aangetoond door fluoresceïne-amidiet gelabeld DNA aan de muizenstaart af te leveren. Het gebruik van aanpassingen voor het muisstaartlymfedeemmodel en ICG nabij-infraroodlaserangiografie is een klinisch vertaalbaar en opwindend diermodel met behandelingsimplicaties.

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Recent ontwikkelde beeldvormende technieken met behulp van nabij-infrarood fluorescentie (NIRF) kan helpen verduidelijken van de rol het lymfestelsel speelt in kanker metastase, immuunrespons, wondheling, en andere lymfatische-geassocieerde ziekten.

Niet-invasieve optische beeldvorming van de lymfatische vasculatuur van een muis

In this video, melanoma cells are intravenously injected through the tail vein in the mouse model. The melanoma cells further travel through the circulatory system, adapting to the distant microenvironment and causing metastasis in organs like lungs.

Experimental Metastatic Melanoma Mouse Model: A Platform to Study the Metastatic Potential of Melanoma Cells in the Lungs

This video describes an in vivo technique to generate murine tail lymphedema, an abnormal fluid accumulation in the interstitial tissue space leading to swelling in the tail. The model is applied to study mechanisms and therapy for lymphedema.

Murine Tail Lymphedema Model: An In Vivo Technique to Generate Sustained Lymphedema in Murine Tail

This video demonstrates the surgical isolation procedure of the inguinal draining lymph node from a mouse model. Incision of the abdominal region provides access to the inguinal lymph node, which is surgically harvested. The harvested translucent inguinal lymph node can be used for immunological studies.

Harvesting an Inguinal Draining Lymph Node from a Murine Model

Dit diermodel stelt onderzoekers in staat om statistisch significant secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen te induceren, met een minimumduur van 8 weken. Het model kan worden gebruikt om de pathofysiologie van lymfoedeem te bestuderen en nieuwe behandelingsopties te onderzoeken.

Een herziene methode voor het induceren van secundair lymfoedeem in het achterlijf van muizen

Een protocol om lymfestroom te blokkeren door chirurgische hechting van afferent lymfevaten wordt gepresenteerd.

Het blokkeren van lymfestroom door het hechten van Afferent Lymfatische bloedvaten in muizen

Hier presenteren we een effectieve en efficiënte methode voor injecties met knaagdierstaartaders met behulp van een uniek ontworpen opwarmings- / beperkingsapparaat. Door het stroomlijnen van de initiatie van vasodilatatie- en inperkingsprocessen, maakt dit protocol nauwkeurige en tijdige intraveneuze injecties van grote groepen dieren met minimale nood mogelijk.

Een eigentijds opwarmings-/inperkingsapparaat voor efficiënte staartaderinjecties in een murien schimmel sepsismodel

Melanoom is een zeer agressieve ziekte die zich snel verspreidt naar andere organen. Dit protocol beschrijft de toepassing van ultra-hoogfrequente echografie, gekoppeld aan 3D-rendering, om het volume van de inguinale lymfeklieren in het Braf / Pten-muismodel van gemetastaseerd melanoom te bewaken.

Analyse van het lymfekliervolume door ultra-hoogfrequente echografie in het Braf / Pten genetisch gemanipuleerde muismodel van melanoom

De hier gepresenteerde experimentele opzet biedt een bruikbaar voortplantingsmodel voor de studies van antigeenspecifieke CD8+ T-cellen tijdens lymfekliermetastase (LN), waarbij de verstoring van CD8+ T-cellen van omstanders wordt uitgesloten.

Drainerend lymfekliermetastasemodel voor het beoordelen van de dynamiek van antigeenspecifieke CD8+ T-cellen tijdens tumorigenese

Het protocol heeft tot doel een muismodel te beschrijven voor het genereren van recidieven van acute lymfatische leukemie, gebaseerd op de dynamiek van de respons op inductiechemotherapie.

Muismodel van leukemie Terugval naar inductiechemotherapie voor acute lymfoblastische leukemie

Leer een chronisch murijn staart lymfoedeem model opzetten met chirurgische excisie en weefsel nanotransfectie technologie. Dit model ondersteunt onderzoek naar lymfatische disfunctie en genetische therapieën.

Een Murine Staart Lymfoedeem Model

Meer video's verkennen