Isolatie van levensvatbare vetcellen en stromale vasculaire fractie uit menselijk visceraal vetweefsel geschikt voor RNA-analyse en macrofaagfenotypering

4.7K weergaven

Geciteerd door 4

06:22 min

27 oktober 2020

10.3791/61884-v

27 oktober 2020

4.7K weergaven

Guadalupe Estrada-Gutierrez¹ , Eyerahi Bravo-Flores² , Veronica Ortega-Castillo³ , Veronica Flores-Rueda⁴ , Ismael Mancilla-Herrera⁵ , Salvador Espino Y Sosa⁶ , Maribel Sánchez-Martínez² , Otilia Perichart-Perera⁷ , Mario Solis-Paredes⁸

¹Research Division, Instituto Nacional de Perinatologia, ²Department of Immunobiochemistry, Instituto Nacional de Perinatologia, ³Department of Obstetrics, Instituto Nacional de Perinatologia, ⁴Department of Academic Programs and Continuing Education, Instituto Nacional de Perinatologia, ⁵Department of Infectology and Immunology, Instituto Nacional de Perinatologia, ⁶Clinical Research Branch, Instituto Nacional de Perinatologia, ⁷Department of Nutrition and Bioprogramming, Instituto Nacional de Perinatologia, ⁸Department of Human Genetics and Genomics, Instituto Nacional de Perinatologia, Mexico City, Mexico

Dit protocol biedt een efficiënte collagenase-verteringsmethode voor isolatie van levensvatbare adipocyten en stromale vasculaire fractie-SVF-cellen uit menselijk visceraal vet in één enkel proces, inclusief methodologie om hoogwaardig RNA uit adipocyten te verkrijgen en fenotypificatie van SVF-macrofagen door kleuring van meerdere membraangebonden markers voor analyse door middel van flowcytometrie.

Meer video's verkennen

Isolatie van vetweefsel

mature adipocyten

collagenase digestie

celviabiliteitsassay

centrifugatieprotocol

menselijk visceraal vet

Chapters in this video

0:00

Introduction

0:46

Visceral Adipose Tissue Collection and Enzymatic Digestion

2:10

RNA Extraction from Mature Adipocytes and microRNA Quantification Assay

3:16

Characterization of Macrophage Subsets from Stromal Vascular Fraction

4:42

Results: Identification of Macrophages from Visceral Adipose Tissue

6:02

Conclusion