Name: Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Leer oöcyt vitrificatie voor vruchtbaarheidsbehoud met effectieve klinische en laboratoriumprotocollen. Deze methode maximaliseert de effectiviteit en veiligheid van cryopreservatiebehandelingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Work-up en klinische counseling
OPMERKING: In het geval van patiënten die om oncologische redenen vruchtbaarheidsbehoud nodig hebben, zorg er dan voor dat er geen wachtlijst is voor het plannen van overleg en dat de afspraak zo snel mogelijk wordt verstrekt.
<ol><li>Bekijk de medische geschiedenis en eerdere documentatie en beoordeel de algemene gezondheidstoestand van de patiënt.</li>
	<li>Noteer alle informatie (inclusief de toestemming van de oncoloog om eierstokstimulatie te ondergaan in geval van kankerpatiënten) in een relationele database.</li>
	<li>Geef de patiënt specifieke begeleiding over de haalbaarheid van de procedure. Leg de stappen van de procedure uit (ovariële stimulatie, oöcytopvraging, oöcyt vitrificatie) en informeer haar over de realistische kansen op succes (voornamelijk afhankelijk van de leeftijd van de moeder en het verwachte aantal MII-oöcyten op het moment van het ophalen van oöcyt), evenals de kosten en beperkingen van de procedure.</li>
	<li>Voer transvaginale echografie uit om informatie te verkrijgen over de eierstokreserve (d.w.z. AFC) en om de toegankelijkheid van de eierstokken voor het verzamelen van eieren te beoordelen.</li>
	<li>Vraag bloedonderzoek aan om de bloedgroep en rhesusfactor, stollingsscreening (bloedtelling, protrombine, tromboplastine, fibrinogeen, eiwit C, eiwit S, anti-trombine III, homocysteïne) en infectieziekten (hepatitis B, hepatitis C, HIV, onderzoekslaboratorium voor geslachtsziekten/Treponema pallidum Hemagglutinatietest) te beoordelen. OPMERKING: In het geval van patiënten die om niet-dringende medische redenen toegang hebben tot een vruchtbaarheidsbehoudsprogramma, kan een uitgebreidere beoordeling basaal follikelstimulerend hormoon (FSH), luteïniserend hormoon (LH), estradiol, AMH, borstonderzoek, Papanicolaou-test, genetische screening van stolling (factor V van Leiden en protrombine) en TORCH-screening (toxoplasmose, rubella, cytomegalovirus) omvatten.</li>
	<li>Vraag een cardiologische evaluatie aan (elektrocardiogram).</li>
	<li>Beveel psychologische counseling aan.</li>
</ol>2. Gecontroleerde eierstokstimulatieprotocollen voor vruchtbaarheidsbehoud
OPMERKING: Wanneer de beschikbare tijd voor het starten van de kankerbehandeling beperkt is, wordt het random-start protocol (d.w.z. het starten van eierstokstimulatie op elk moment tijdens de menstruatiecyclus) aanbevolen voor de ovariële stimulatie bij oncologische patiënten die kandidaat zijn voor vruchtbaarheidsbehoud. In een vruchtbaarheidsbehoudsprogramma om niet-dringende medische redenen of sociale redenen heeft conventionele stimulatie die begint in de vroege folliculaire fase de voorkeur en wordt eierstokstimulatie gestart op basis van de menstruatiecyclus. Gecontroleerde ovariële stimulatie (COS) moet worden uitgevoerd volgens de recente richtlijnen van de European Society of Human Reproduction and Embryology (ESHRE)24.

<ol><li>Pas COS aan op basis van de kenmerken van de patiënt en ovariële reservemarkers, voornamelijk maternale leeftijd, FSH, AMH en AFC.</li>
	<li>Start COS op dag 5 van de menstruatiecyclus met recombinant of urinaire FSH met een vaste dosis van 150-300 IE/dag (antagonistprotocol). OPMERKING: In een specifieke patiëntenpopulatie met LH-deficiëntie of slechte suboptimale respons kan extra LH 75/150 IE/dag worden toegediend op basis van de ovariële respons, LH-niveaus en het oordeel van de gynaecoloog.</li>
	<li>Bij patiënten met oestrogeengevoelige ziekten, omvatten gonadotropins geassocieerd met aromataseremmers (letrozol) vanaf dag 1 van stimulatie tot dag 7 na het ophalen van oöcyt.</li>
	<li>Dien gedurende 4 dagen een vaste dosis gonadotropins toe.</li>
	<li>Monitor folliculaire groei op dag 5 en vervolgens om de 2-3 dagen; uiteindelijk, pas de gonadotropin dosering.</li>
	<li>Zodra ten minste 3 follikels een diameter van 17-18 mm hebben bereikt, dient u de trigger toe te dienen voor de uiteindelijke rijping van de oöcyt met een enkele subcutane bolus gnrh-agonist in de dosis van 0,5 ml.</li>
</ol>3. Oöcyt ophalen
<ol><li>Voorbereiden op het ophalen van oöcyten<ol>
<li>Voor benodigde materialen, raadpleeg de tabel met materialen,en houd klaar laboratorium schoeisel en outfit, chirurgisch gezichtsmasker, haarbedekking, chirurgische handschoenen, een permanente niet-toxische marker, pincet, steriele kleine gaasjes, wegwerp of herbruikbaar speculum, vaginale chirurgie apparatuur en oppervlaktedesinfectiemiddel. Zorg voor de beschikbaarheid van reanimatieapparatuur, verdovingsmedicijnen voor omkering, een kit die is voorbereid voor de behandeling van anafylactische shock en zuurstof in de operatiekamer.</li>
		<li>Voer de procedure voor het ophalen van oöcyten uit volgens de aanbevelingen van de ESHRE-werkgroep echografie in ondersteunde reproductietechnologieën (ART)25.<ol>
<li>Dien sedatie of algemene anesthesie toe, en antibiotica voor profylaxe. OPMERKING: In dit protocol werd diepe sedatie bereikt door propofol (waarvan de dosering is aangepast aan het gewicht van de patiënt) en 50-100 μg fentanyl, 1000 mg paracetamol en geassisteerde maskerventilatie met zuurstof te administreren.</li>
			<li>Voer het ophalen van oöcyten uit met behulp van een aspiratie-eenheid bestaande uit een vacuümpomp, een opvangbuis die is aangesloten op een naald van 17 G met één lumen en een oöcytopvangbuis. Overschrijd tijdens het verzamelen geen druk van ~ 120 mmHg om het risico van schade aan de oöcyten te voorkomen, zoals het verwijderen van de cumuluscellen of het breken van de zona pellucida.</li>
			<li>Kalibreer de temperatuur van het werkoppervlak om 37 °C in de kweekmedia te garanderen. Minimaliseer tijdens de hele procedure de blootstelling aan oöcyt aan zelfs voorbijgaande temperaturen die hun ontwikkelingscompetentie kunnen beïnvloeden.</li>
			<li>Aan het einde van het ophalen van de oöcyt, observeer de patiënt gedurende 3-4 uur voor ontslag.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>Operatie theater<ol>
<li>Voordat u de operatiekamer betreedt, identificeert u de patiënt en bevestigt u het tijdstip van de ovulatietrigger.</li>
		<li>Laat de patiënt op de operatietafel liggen in een gynaecologische positie.</li>
		<li>Reinig de vagina/baarmoederhals voordat de oöcyt wordt opgehaald om bacteriële besmetting te minimaliseren.</li>
		<li>Voer een voorlopige transvaginale echografie uit om de positie van de eierstokken en de anatomische relaties met de verschillende organen en bloedvaten te beoordelen.</li>
		<li>Steek onder echografie een naald met één lumen door de vaginale wand en in een eierstokfollikel, waarbij u ervoor zorgt dat de organen of bloedvaten tussen de vaginale wand en de eierstok niet worden verwond.</li>
		<li>Begin aspiratie vanaf de dichtstbijzijnde follikel en ga verder met de meest distale.</li>
		<li>Prik alle follikels met een diameter groter dan 11-12 mm door en voer "draaiende bewegingen" van de naald uit om de hele folliculaire vloeistof te aspireren, die vervolgens wordt vrijgegeven in een steriele buis (ronde bodem 14 ml) voorverwarmd in de blokverwarming van de operatiekamer.</li>
		<li>Onmiddellijk na het ophalen verzegelt en labelt u de tube met details van de identiteit van de patiënt.</li>
		<li>Zorg ervoor dat de verpleegkundige de buis naar het laboratorium brengt, waar deze onmiddellijk wordt gescreend op de aanwezigheid van cumulus-oöcytcomplexen (COC's).</li>
		<li>Instrueer de embryologen om de clinicus te informeren over het totale aantal opgehaalde COC's.</li>
		<li>Zodra de procedure voor de eerste eierstok is voltooid, spoelt u de naald met een schoon medium en gaat u verder met de tweede eierstok met dezelfde procedure.</li>
		<li>Evalueer na het ophalen van oöcyten eventuele bloedingen uit de eierstokken of bloedvaten van het parametrium en vrije vloeistof in de zak van Douglas. OPMERKING: Om de effectiviteit van de traceerbaarheid van gameten en embryo's op klinisch niveau te automatiseren en te verbeteren, werd in het centrum26een elektronisch getuigensysteem (EWS) geïmplementeerd. In dit protocol wordt echter geen melding gemaakt van het EWS om de reproduceerbaarheid van het protocol in elk IVF-laboratorium te waarborgen. Toch moet u van mening zijn dat voor alle stappen van de procedure een tweede exploitant (d.w.z. een getuige) nodig is om de traceerbaarheid van gameten en embryo's te waarborgen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. IVF laboratorium
<ol><li>De dag voor de oöcytophaalprocedure<ol>
<li>Bereid oöcytopvangbuizen voor (zie de tabel met materialen).<ol>
<li>Doseer 1 ml IVF-medium (zie de materiaaltabel)in elke oöcytinzamelingsbuis (ronde bodem, 5 ml) en dek af met 0,2 ml minerale olie (zie de materiaaltabel)voor embryokweek. OPMERKING: Het aantal buizen wordt bepaald op basis van het aantal follikels dat naar verwachting zal worden opgehaald. Elke buis kan maximaal 4 COC's bevatten.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sluit de buizen af met de dop (eerste druk op de foto). Etiket de buizen met details van het type medium en de datum van bereiding. Incubeer de buizen 's nachts bij 37 °C in een gecontroleerde atmosfeer (6% CO2, 5% 02).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Op de dag van het ophalen van de oöcyt<ol>
<li>Verwarm de plastic voorraden voor op 37 °C (steriele kweekschalen en Pasteurpipetten).</li>
		<li>Vraag de patiënten om hun identiteit (volledige naam en geboortedatum) en het tijdstip van ovulatie te bevestigen. Noteer op het laboratoriumblad dat de identificatieprocedure (ID) is voltooid en dat het tijdstip van de ovulatietrigger is bevestigd.</li>
		<li>Haal de oöcyt opvangbuizen van de incubator (vlak voordat de procedure begint) en duw de dop naar beneden om een strakke sluiting te garanderen. Etiketteer de oöcytinzamelbuizen met de informatie van de patiënt. Plaats de oöcyt opvangbuizen in de blokverwarming op 37 °C.</li>
		<li>Onderzoek de folliculaire vloeistof in de voorverwarmde steriele kweekschotels en identificeer COC's. Zodra een of meer COC's zijn geïdentificeerd, spoelt u ze twee keer in twee druppels medium om de folliculaire vloeistof en bloedverontreiniging te verwijderen.</li>
		<li>Breng de COC's over naar de oöcytopvangbuizen en maak aantekeningen bij het aantal COC's op de buis. Maak de doppen van de middelgrote buizen los en incubeer ze onmiddellijk bij 37 °C in een atmosfeer van 6% CO2, 5% O2.</li>
		<li>Herhaal stap 7 tot en met 9 op basis van het aantal opgehaalde oöcyten. Werk het laboratoriumblad bij. OPMERKING: Zorg ervoor dat een getuige controleert of alle buisopwarmingsblokken (inclusief die in de operatiekamer) leeg zijn en de sluiting van de procedure op het laboratoriumblad ondertekent.</li>
		<li>Veeg de werkfase af na voltooiing van de procedure.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Oöcyt denudatie
<ol><li>Prewarm 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonzuur (HEPES)-gebufferd medium en hyaluronidase (zie de materiaaltabel) bij 37 °C ten minste 1 uur voor aanvang.</li>
	<li>Bereid een 4-put IVF-plaat (zie de materialentabel)met 0,6 ml/put van voorverwarmd HEPES-gebufferd medium (aangevuld met 5% humaan serumalbumine [HSA]) bedekt met 0,3 ml minerale olie voor embryokweek en warm bij 37 °C gedurende ten minste 30 minuten.</li>
	<li>Label de oöcyt denudatieplaat met details van de identiteit van de patiënt.</li>
	<li>Voeg onmiddellijk voor het starten van de procedure hyaluronidase toe aan de eerste put om een eindconcentratie van ongeveer 20 IE/ml te verkrijgen.</li>
	<li>Plaats een beperkt aantal COC's (tot 6) in de eerste put die het enzym bevat om de cumuluscellen te dispergeren.</li>
	<li>Om de enzymatische verwijdering van de cumulus- en coronacellen te verbeteren, voert u het strippen van cumuluscellen uit door de oöcyten herhaaldelijk door een Pasteur-pipet met een binnendiameter van ongeveer 250 μm voor maximaal 30 s te pipeten. Nadat de initiële celdissociatie is waargenomen, breng de oöcyten over naar de tweede put die alleen HEPES-gebufferd medium bevat, waarbij ervoor wordt gezorgd dat een minimale hoeveelheid van het enzym wordt overgedragen.</li>
	<li>Voer verdere denudatie uit om de coronacellen te verwijderen met behulp van denuding pipetten met afnemende binnendiameters (170-145 μm). Gebruik lagere diameters (135μm) alleen als dit strikt noodzakelijk is.</li>
	<li>Was de gedenudeerde oöcyten zorgvuldig om het enzym uit te wassen.</li>
	<li>Onderzoek na de denudatie de oöcyten onder een omgekeerde microscoop om hun integriteit en rijpingsstadium te beoordelen. Scheid MII-oöcyten van de onrijpe (kiemblaasje en metafase-I).</li>
	<li>Verplaats de MII-oöcyten naar het vitrificatiegebied om onmiddellijk cryopreservatie uit te voeren. Werk het laboratoriumblad bij.</li>
</ol>6. Oöcyt vitrificatie
OPMERKING: Voer oöcyt vitrificatie bij voorkeur uit binnen 38 uur na het ophalen van oöcyt en onmiddellijk na de denudatie. De hier beschreven vitrificatieprocedure moet worden uitgevoerd bij kamertemperatuur (RT) en door het gebruik van een stripperpipet met een binnendiameter van 170 μm om oöcyten tijdens manipulatie niet te beschadigen.
<ol><li>Breng ongeveer 30 minuten voor de procedure de equilibratieoplossing (ES) en de vitrificatieoplossing (VS) naar RT (25-27 °C).</li>
	<li>Label de cryodevices correct met de naam en ID van de patiënt, behandelings-ID, datum van invriezen, aantal oöcyten en cryobarcode.</li>
	<li>Vul een wegwerpkoelrek tot aan de bovenkant met verse vloeibare stikstof en start het sterilisatieproces.</li>
	<li>Label de vitrificatieplaat (zie de materialentabel)met de naam en ID van de patiënt. Vraag een getuige om de juiste ID van de cryodevices te controleren.</li>
	<li>Keer elke flacon twee keer voorzichtig om om de inhoud ervan voor gebruik te mengen en bereid het deksel van een petrischaal van 6 mm met één druppel van 30 μL HEPES-gebufferd medium (met 5% HSA) en één aangrenzende druppel van 30 μL ES. OPMERKING: Plaats druppels vlak voor gebruik om de gemiddelde verdamping te beperken.</li>
	<li>Plaats de oöcyten (tot 9) in de eerste druppel met een zo klein mogelijk volume medium met een stripperpipet met een diameter van 170 μm. Maak met behulp van de stripperpipet een brug van medium tussen de druppel n.1 en n.2 om een geleidelijke verhoging van de concentratie van de CPA's te verkrijgen (figuur 1A).</li>
	<li>Incubeer de oöcyten in de eerste druppel gedurende 3 minuten. Voeg een derde druppel van 30 μL ES (n.3) toe. Breng na 3 minuten de oöcyten over in de tweede druppel ES en creëer een gemiddelde brug tussen druppels n.3 en n.2 (figuur 1B). Incubeer de oöcyten in druppel n.3 gedurende 3 minuten.</li>
	<li>Voeg tijdens de incubatie één druppel ES van 30 μL toe voor elke cryodevice die zal worden gebruikt (als 9 oöcyten cryopreserved moeten worden, plaats dan 3 druppels ES met 3 oöcyten in elke druppel ES). Verplaats de oöcyten in pure ES-oplossing en laat ze 6-9 minuten staan (totdat ze hun oorspronkelijke grootte na krimp herstellen) (figuur 1C).</li>
	<li>Bereid een centrale putschaal (60 x 15 mm) met 1 ml VS. Breng aan het einde van de eerste 6 minuten de oöcyten over om cryopreserved in de VS-oplossing te worden geserveerd, waarbij zo min mogelijk medium wordt vrijgegeven. Laat de oöcyten 1 minuut in VS staan en was ze zorgvuldig door ze van de bodem naar de bovenkant van de schaal te verplaatsen om het teveel aan ES te verwijderen.</li>
	<li>Plaats de cryodevice ongeveer 10 s voor het einde van de incubatieminuut onder de microscoop en pas de focus op de zwarte markering (d.w.z. de punt van de cryodevice) aan. Plaats de oöcyten op de cryodevice naast de zwarte markering met de minimale hoeveelheid VS (figuur 2A).</li>
	<li>Beweeg de stripperpipet uit de buurt van de oöcyten en verwijder het teveel aan VS-medium (figuur 2B) zodat de oöcyten bedekt blijven met een dunne laag medium (figuur 2C).</li>
	<li>Dompel de cryodevice snel in vloeibare stikstof en schud hem snel om luchtbellen van het oppervlak te verwijderen. Houd de beschermkap van de cryodevice vast met een pincet en vul deze met vloeibare stikstof; steek vervolgens de cryodevice erin terwijl u de propyleenstroken in vloeibare stikstof houdt.</li>
	<li>Bewaar de cryodevice in een visiotube die eerder is gelabeld met de informatie van de patiënt. Werk het laboratoriumblad bij.</li>
</ol>7. Oöcyt opwarming
<ol><li>Verwarm ongeveer 30 minuten voor de procedure de ontdooioplossing (TS), verdunningsoplossing (DS) en wasoplossing (WS) tot RT (25-27 °C). Keer elke flacon twee keer voorzichtig om om de inhoud ervan te mengen. Plaats 1 ml TS in een centrale petrischaal en verwarm deze ten minste 1 uur op 37 °C voordat u met de procedure begint.</li>
	<li>Label alle plastic benodigdheden met de naam en ID van de patiënt en het type oplossing. Vraag een getuige om de informatie van de patiënt over de cryodevice te bevestigen.</li>
	<li>Bereid voor elke cryodevice die moet worden opgewarmd een 6-putplaat voor met 200 μL DS in de eerste put en een gelijke hoeveelheid WS in de tweede en derde (respectievelijk WS1 en WS2). Voeg fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) of steriel water toe in het gebied buiten de putten om verdamping te voorkomen.</li>
	<li>Haal de TS-schotel uit de incubator en leg deze onder de microscoop. Pas de focus van de microscoop aan op het midden van de Petrischaal.</li>
	<li>Draai en verwijder voorzichtig de beschermkap van de cryodevice, terwijl u de propyleenstroken in vloeibare stikstof houdt. Breng de cryodevice van vloeibare stikstof zo snel mogelijk over in de TS om het risico van devitrificatie te voorkomen en start het aftellen (1 min).</li>
	<li>Lokaliseer de oöcyten door te focussen op de punt van de cryodevice (d.w.z. de zwarte markering). Laat met behulp van een stripperpipet de oöcyten los uit de cryodevice. OPMERKING: Probeer de oöcyten uit de cryodevice niet te aspireren; laat voorzichtig wat media los totdat ze in de TS komen.</li>
	<li>Breng de oöcyten met een kleine hoeveelheid TS over naar DS met behulp van een stripperpipet met een diameter van 170 μm (om een gradiënt te creëren) en laat ze 3 minuten in de DS staan. Verplaats de oöcyten op dezelfde manier naar WS1 en laat ze 5 minuten staan. Breng ten slotte de oöcyten gedurende 1 minuut over naar WS2.</li>
	<li>Breng de oöcyten over in een geschikt pre-geëquilibreerd IVF-kweekmedium en incubeer ze gedurende 1 uur voordat u doorgaat met intracytoplasmatische sperma-injectie (ICSI). Werk het laboratoriumblad bij.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets bekend te maken.

Klinische overwegingen 
Hoewel de opkomende strategieën, zoals ovariële weefsel cryopreservatie en in vitro rijping zijn onderzocht, is oöcyt vitrification na COS de gouden standaardtechniek voor vruchtbaarheidsbehoud. In dit scenario moet het aantal teruggewonnen oöcyten en cryopreserved in de kortst mogelijke tijd worden gemaximaliseerd, omdat de meeste kankerpatiënten slechts baat kunnen hebben bij één eierstokcyclus voordat ze met hun kankerbehandeling(en) moeten beginnen....

De ontwikkeling en implementatie van een efficiënt cryopreservatieprogramma voor menselijke oöcyten is een belangrijke doorbraak geweest in de reproductieve geneeskunde. Volgens recent bewijs is vitrificatie de meest effectieve strategie om cryopreserve metaphase II (MII) oöcyten te cryopreserve, omdat het resulteert in statistisch hogere overlevingspercentages in vergelijking met langzaam bevriezen, onafhankelijk van de patiëntenpopulatie (onvruchtbare patiënten of oöcytdonatieprogramma)1,2,3. De opmerkelijke verwezenlijkingen van oöcyt vitrification leidden de Praktijkcommissies van de Amerikaanse Maatschappij voor Reproductieve Geneeskunde (ASRM) en de Maatschappij voor Geassisteerde Reproductieve Technologie (SART) om deze techniek uit te spreken om het meest efficiënt voor electieve vruchtbaarheidsbehoud in postpubertal vrouwen, voor zowel medische als niet-medische aanwijzingen4,5,6uit te spreken . Medische indicaties voor vruchtbaarheidsbehoud omvatten (i) kanker en auto-immuunziekten die therapieën7 vereisen, zoals radiotherapie, cytotoxische chemotherapie en endocriene therapie (waarvan het schadelijke effect op de eierstokreserve geassocieerd is met de leeftijd van de moeder, evenals het type en de dosis van de behandeling); ii) eierstokaandoeningen waarvoor herhaalde of radicale chirurgie nodig is (zoals endometriose)8; en iii) genetische aandoeningen (bijv. X-fragile) of voortijdig eierstokfalen. Bovendien is vruchtbaarheidsbehoud een waardevolle optie geworden voor alle vrouwen die hun ouderlijke doelstelling om niet-medische redenen (ook bekend als sociale bevriezing) niet hebben bereikt.
Ongeacht de indicatie voor vruchtbaarheidsbehoud en volgens de belangrijkste internationale richtlijnen voor vruchtbaarheidsbehoud, moeten alle patiënten die bereid zijn hun oöcyten te vitriferen, passende begeleiding krijgen om te worden geïnformeerd over hun realistische kans op succes, de kosten, risico's en beperkingen van de procedure9,10,11,12,13. Het belangrijkste is dat het duidelijk moet zijn dat het vitrificeren van een cohort MII-oöcyten geen zwangerschap garandeert, maar dat het een grotere kans van slagen biedt voor toekomstige in-vitrofertilisatiebehandeling (IVF), indien nodig14. In dit opzicht is de leeftijd van de vrouw op het moment van oöcyt vitrificatie zeker de belangrijkste beperkende factor15, aangezien gevorderde moederleeftijd (AMA; >35 jaar) de belangrijkste oorzaak is van vrouwelijke onvruchtbaarheid16. Naast een progressieve vermindering van de ovariële reserve, ama wordt geassocieerd met een aantasting van oöcyt competentie als gevolg van defecte fysiologische paden zoals metabolisme, epigenetische regulatie, celcyclus checkpoints, en meiotische segregatie17. Daarom hangt het redelijke aantal eieren tot vitrify voornamelijk af van de leeftijd van de moeder. Bij vrouwen jonger dan 36 jaar zijn ten minste 8-10 MII-oöcyten18 nodig om de kans op succes te maximaliseren. Over het algemeen geldt: hoe hoger het aantal verglaasde oöcyten, hoe groter de kans op succes. Daarom is het aanpassen van ovariële stimulatie op basis van ovariële reservemarkers zoals anti-Mülleriaanse hormoonspiegels (AMH) of antrale follikeltelling (AFC) cruciaal om de ovariële reserve in de kortst mogelijke tijd volledig te benutten.
De veiligheid van de gehele procedure is het andere belangrijke punt bij het inschrijven van patiënten voor vruchtbaarheidsbehoud. Clinici moeten de beste strategieën gebruiken om de risico's te minimaliseren en (i)ovariële hyperstimulatiesyndroom (OHSS) te voorkomen door veilige benaderingen te gebruiken, zoals het gonadotrofine-releasing hormone (GnRH) antagonistprotocol gevolgd door een GnRH-agonist trigger19 en (ii) het afgelegen, maar mogelijk, risico op peritoneale bloedingen, letsel aan de bekkenstructuren (ureter, darm, appendix, zenuwen) of bekkeninfectie tijdens het ophalen van oöcyten. Ten slotte worden (iii) traditionele stimulatieschema's geassocieerd met suprafysiologisch serumestradiol en worden daarom niet aanbevolen bij oestrogeengevoelige ziekten zoals borstkanker. Protocollen met aromataseremmers (zoals letrozol of tamoxifen) zijn in deze gevallen geschikter20,21. In de laboratoriumomgeving is het meest wijdverspreide protocol voor oöcyt vitrificatie nog steeds het protocol dat voor het eerst werd beschreven door Kuwayama en collega's2,23, dat bestaat uit een stapsgewijze procedure waarbij cryoprotectiva (CPA's) geleidelijk worden toegevoegd. In de eerste fase (evenwicht/uitdroging) worden oöcyten blootgesteld in een CPA-oplossing die 7,5% v/v ethyleenglycol en 7,5% v/v dimethylsulfoxide (DMSO) bevat, terwijl in de tweede fase oöcyten worden verplaatst naar een vitrificatieoplossing met 15% v/v ethyleenglycol en 15% v/v DMSO, plus 0,5 mol/L-sucrose. Na een korte incubatie in het medium vitrificatie kunnen de oöcyten in speciaal ontworpen, open cryodevicen worden geplaatst en uiteindelijk in vloeibare stikstof bij -196 °C worden gedompeld om tot gebruik te worden opgeslagen.
Hier is het gehele klinische en laboratoriumwerk van een vruchtbaarheidsbehoudsbehandeling beschreven door (i) aanbevelingen voor objectieve en evidence-based counseling, (ii) gericht op de kosteneffectiviteit van de procedure, en (iii) het beschrijven van de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zullen worden gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren. Aangezien er andere protocollen of aanpassingen van dit protocol in de literatuur bestaan, zijn de representatieve resultaten en de discussiesecties van dit manuscript alleen van toepassing op deze procedure.

<table><tbody><tr><td>Collectie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>IVF TECH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lab Markers</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A luchtstroom</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Thermometer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Testbuis verwarmer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tri-gas incubator</td><td>Panasonic</td><td>MCO-5M-PE</td><td>02/CO2</td></tr><tr><td>Vacuumpomp</td><td>Cook</td><td>K-MAR-5200</td><td></td></tr><tr><td>Verbruiksartikelen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CSCM (Complete enkele kweekset) medium</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90165</td><td>IVF kweekmedium gesupplementeerd met HSA</td></tr><tr><td>Mineralolie voor embryocultuur</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>Ovum aspiratienet (Single lumen)</td><td>Cook</td><td>K-OSN-1730-B-60</td><td></td></tr><tr><td>Primaria Dish</td><td>Corning</td><td>353803</td><td>Corning Primaria Dish 100x20 mm stijl standaard celkweekbakje</td></tr><tr><td>Buisjes met ronde bodem</td><td>Falcon</td><td>352001</td><td>Falcon 14ml Ronde Bodem Polystyreen Testbuis met snap-kap</td></tr><tr><td>Buisjes met ronde bodem</td><td>Falcon</td><td>352003</td><td>Oocyte verzamelbuisjes/ Falcon 5ml 12x75 Ronde Bodem Polipropileen Testbuis met snap-kap</td></tr><tr><td>Rubberen bulb</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z111589-12EA</td><td></td></tr><tr><td>Steriele glazen Pasteur pipetten</td><td>Hunter Scientific</td><td>PPB150-100PL</td><td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td></tr><tr><td>Denudatie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 incubator</td><td>Eppendorf</td><td>Galaxy 14S</td><td></td></tr><tr><td>Flexipet instelbare handgreep set</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td>Stripper&nbsp; houder</td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>66003</td><td>p20</td></tr><tr><td>k-System Incubator</td><td>Coopersurgical</td><td>G210Invicell</td><td></td></tr><tr><td>Lab Markers</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A luchtstroom</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Verbruiksartikelen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS Rack</td><td>Eppendorf</td><td>30075331</td><td>Micropipetten epTIPS Biopur 2-200 &micro;l</td></tr><tr><td>Human Serum Albumine</td><td>thermoFisher Scietific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td>80 IU/mL van hyaluronidase enzym in HEPES-gebufferd HTF</td></tr><tr><td>IVF kweekbakje (60 x 15mm)</td><td>Corning</td><td>353802</td><td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standaard celkweekbakje</td></tr><tr><td>IVF bakje 4-kamerplaat met schuifdeksel</td><td>ThermoFisher Scietific</td><td>176740</td><td>Multidishes 4 putjes (Nunc)</td></tr><tr><td>IVF éénkamerbakje</td><td>Falcon</td><td>353653</td><td>Falcon 60 x 15 mm TC behandeld centrum-wel IVF</td></tr><tr><td>Mineralolie voor embryocultuur</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9305</td><td></td></tr><tr><td>Gemodificeerd HTF Medium</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>HEPES-Buffered medium</td></tr><tr><td>Rubberen bulb</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z111589-12EA</td><td>1 mL voor Pasteur pipetten</td></tr><tr><td>Steriele glazen Pasteur pipetten</td><td>Hunter Scientific</td><td>PPB150-100PL</td><td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td></tr><tr><td>stripping pipette tips (140 &micro;m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-6</td><td>PIPETTE FLEXIPETS VOOR DENUDATIE</td></tr><tr><td>stripping pipette tips (130 &micro;m )</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1130-10BS-7</td><td>PIPETTE FLEXIPETS VOOR DENUDATIE</td></tr><tr><td>stripping pipette tips (170 &micro;m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>PIPETTE FLEXIPETS VOOR DENUDATIE</td></tr><tr><td>Vitrificatie</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Apparatuur</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektronische timer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet instelbare handgreep set</td><td>Cook</td><td>G18674</td><td>Stripper&nbsp; houder</td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td>p200</td></tr><tr><td>Lab Markers</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laminar Flow Hood</td><td>IVF TECH</td><td></td><td>Grade A luchtstroom</td></tr><tr><td>RVS container voor koelrek</td><td>Kitazato</td><td></td><td>Vloeibare stikstof container voor vitrificatie</td></tr><tr><td>Stereomicroscoop</td><td>Leica</td><td>Leica M80</td><td></td></tr><tr><td>Verbruiksartikelen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biopur epTIPS Rack</td><td>Eppendorf</td><td>30075331</td><td>Micropipetten epTIPS Biopur 2-200 &micro;L</td></tr><tr><td>Human Serum Albumine</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>9988</td><td></td></tr><tr><td>IVF kweekbakje (60 x 15 mm)</td><td>Corning</td><td>353802</td><td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standaard celkweekbakje</td></tr><tr><td>IVF bakje 6-kamer</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-SW02</td><td>OOSAFE&nbsp; 6 KAMERBAKJE MET STRAW HOUDER</td></tr><tr><td>Gemodificeerd HTF Medium</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90126</td><td>HEPES-Buffered medium</td></tr><tr><td>stripping pipette tips (170 &micro;m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td>PIPETTE FLEXIPETS VOOR DENUDATIE</td></tr><tr><td>Vitrificatie Bevriezing kit</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-so</td><td>2 Vialen van ES (Equilibratie Oplossing, 2 x 1 mL) en 2 Vialen van VS (Vitrificatie Oplossing, 2 x 1 mL)</td></tr><tr><td>Vitrifit</td><td>Coopersurgical Origio</td><td>42782001A</td><td>VitriFit&nbsp; Box</td></tr><tr><td>Opwarming</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><strong

vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Het behoud van de vruchtbaarheid van vrouwen is cruciaal in een multifunctioneel gezondheidszorgsysteem dat zorgt voor de toekomstige kwaliteit van leven van patiënten. Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen, voor zowel medische als niet-medische indicaties. De belangrijkste medische indicaties zijn oncologische ziekten, gynaecologische ziekten zoals ernstige endometriose, systemische ziekten die de eierstokreserve in gevaar brengen en genetische aandoeningen met voortijdige menopauze. Dit document beschrijft het gehele klinische en laboratoriumwerk van een behandeling van het vruchtbaarheidsbehoud door aanbevelingen voor objectieve en bewijsmateriaal-gebaseerde begeleiding te beschrijven. Bovendien richt het zich op de effectiviteit van de procedure en beschrijft het de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zijn gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren.

Overzicht van het vruchtbaarheidsbehoudsprogramma in het centrum
Over een periode van 12 jaar (2008-2020) ondergingen 285 vrouwen ten minste één oöcytterugwinning die de vitrificatie van het hele cohort van verzamelde volwassen eieren met zich meebracht. De meeste van deze vrouwen (n =250) ondergingen een enkele retrieval, en 35 ondergingen meerdere retrievals. De redenen voor het ophalen van oöcyten voor eier vitrificatie zijn samengevat in 4 categorieën: medisch (behalve kan...

Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen. De aangewezen klinische en laboratoriumstrategieën verzekeren maximumeffectiviteit, efficiency, en veiligheid van vruchtbaarheidsbehoudsbehandelingen.

Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

De oöcyt vitrificatie en de opwarmingsprocedures zijn essentieel voor vruchtbaarheidsbehoud. Door dit protocol te volgen zoals aangetoond, kan een gebruiker de effectiviteit van deze procedures maximaliseren. Vruchtbaarheidsbehoud voor oöcyt vitrificatie is vandaag een gevestigde en ethisch aanvaardbare aanpak.Het maakt het mogelijk om effectieve en consistente klinische resultaten te bereiken en de morele en wettelijke beperking in verband met embryo cryopreservatie te overwinnen. Om vaardigheid met het vitrificatieproces te bereiken, is het belangrijk om vertrouwd te raken met alle kritieke punten van het protocol, met bijzondere aandacht voor de blootstellingstijd van de monsters aan de cryoprotectiva. Binnen 38 uur na het ophalen en onmiddellijk na de denudatie, label alle plastic benodigdheden met de naam, ID en het type oplossing van de patiënt en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen.Wanneer alle benodigdheden zijn geëtiketteerd, moet u elke flacon met oöcyten meerdere keren voorzichtig omkeren om een 30 microliter druppel HEPES-buffermedium aangevuld met menselijk serumalbumine en een aangrenzende druppel equilibratieoplossing van 30 microliter op een petrischaaltje te mengen en te plaatsen. Gebruik de stripperpipet om de oöcyten in de eerste druppel te plaatsen en een brug van medium naar een 30 microliter druppel equilibratieoplossing te creëren om een geleidelijke toename van de concentratie van de cryoprotectanten te verkrijgen. Voeg na drie minuten een tweede druppel van 30 microliter equilibratieoplossing toe aan de plaat en gebruik de pipet om een middelgrote brug tussen de druppels oplossing te creëren.Terwijl de oöcyten op elkaar zijn, voegt u één druppel equilibratieoplossing van 30 microliter toe voor elk cryo-apparaat dat op de plaat moet worden gebruikt. Verplaats de oöcyten na drie minuten gedurende zes tot negen minuten in de pure equilibratieoplossing, zodat de oöcyten weer op hun oorspronkelijke grootte kunnen terugkeren. Wanneer de oöcyten zijn hersteld, bereidt u een centrale ivf-schotel met één milliliter vitrificatieoplossing.Breng de oöcyten in zo min mogelijk medium over op de schaal en verplaats ze voorzichtig om eventuele overtollige equilibratieoplossing te verwijderen. Plaats ongeveer 10 seconden voor het einde van de incubatie een cryo-apparaat met het etiket met de informatie van de patiënt onder de microscoop en pas de focus op de punt van het cryo-apparaat aan. Plaats de oöcyten op het cryo-apparaat naast de punt in de minimale hoeveelheid vitrificatieoplossing en verplaats de stripperpipet uit de buurt van de oöcyten om overtollige vitrificatieoplossing te verwijderen, waardoor de oöcyten bedekt blijven met een dunne laag medium.Dompel het cryo-apparaat snel in vloeibare stikstof en schud het apparaat snel om eventuele luchtbellen van het oppervlak te verwijderen. Houd de beschermkap van het cryo-apparaat vast met een pincet en vul de dop met vloeibare stikstof voordat u het apparaat in de dop steekt terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt. Bewaar het cryo-apparaat vervolgens in een visotube met de informatie van de patiënt en werk het laboratoriumblad bij.Voor het opwarmen van oöcyten, draai elke flacon ontdooi-, verdunnings- en wasoplossing voorzichtig om die op kamertemperatuur is opgewarmd en voeg een milliliter ontdooioplossing toe aan de centrale put van een petrischaal gedurende een incubatietijd van ten minste een uur bij 37 graden Celsius. Label alle plastic benodigdheden met de naam en ID van de patiënt en het type oplossing en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen. Voeg voor elk te verwarmen apparaat 200 microliter verdunningsoplossing toe aan de eerste put van een plaat met zes putten en voeg een gelijk volume wasoplossing toe aan de tweede en derde put van de plaat.Voeg PBS toe aan het gebied aan de buitenkant van de putten om verdamping van de oplossing te voorkomen. Plaats de schotel van ontdooioplossing onder de stereomicroscoop en stel de scherpstelling in op het midden van de schotel. Draai voorzichtig om de beschermkap van een cryo-apparaat te verwijderen terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt en breng het cryo-apparaat zo snel mogelijk van de vloeibare stikstof in de ontdooioplossing over om het risico van devitrificatie te voorkomen.Concentreer je na één minuut op de punt van het cryo-apparaat om de oöcyten te lokaliseren en gebruik uiteindelijk een stripperpipet om de oöcyten voorzichtig van het apparaat los te maken. Gebruik een stripperpipet met een diameter van 170 micron om de oöcyten en een klein volume ontdooioplossing over te brengen in de verdunningsoplossing in de eerste put van de zes putplaat. Na drie minuten verplaatst u de oöcyten gedurende vijf minuten in de eerste wasput.Breng aan het einde van de incubatie de oöcyten over naar de tweede wasput en incubeer gedurende één minuut bij 37 graden Celsius voordat u de oöcyten gedurende een uur in een geschikt volume van het voorgeëlibreerde IVF-kweekmedium brengt en het laboratoriumblad bijwerkt. Gedurende een periode van 12 jaar ondergingen 285 vrouwen ten minste één oöcytterugwinning die de vitrificatie van het hele cohort van verzamelde volwassen eieren met zich meebracht. De meeste van deze vrouwen ondergingen een enkele terugwinning.35 ondergingen meerdere retrievals. De redenen voor het ondergaan van oöcyt ophalen voor ei vitrification werden over het algemeen gekenmerkt als medisch anders dan kanker, kanker, niet-medisch, en andere. Patiënten met een medische reden voor ei vitrificatie en patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergaan vanwege kanker waren jonger en vertoonden hogere antrale folliculaire tellingen dan patiënten met niet-medische of andere redenen.Aangezien de gemiddelde rijpingspercentages echter iets lager waren in de medische redenen patiënten, was het aantal oöcyten dat gemiddeld werd gesyreerd vergelijkbaar tussen de groepen. Ongeveer de helft van de patiënten met andere medische redenen dan kanker, en de meerderheid van de patiënten met andere redenen voor eier vitrificatie daadwerkelijk teruggekeerd voor opwarming. Omgekeerd gebruikten zeer weinig patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergingen voor kanker of niet-medische redenen hun verglaasde oöcyten voor IVF.Ondanks verschillen in de verstreken tijd tussen vitrificatie en opwarming, was de overlevingskans van de oöcyten vergelijkbaar tussen patiëntengroepen, wat de werkzaamheid en veiligheid van de oöcyt vitrificatie en opwarmingsprotocollen bevestigde. Bovendien was de overlevingskans onafhankelijk van de ervaring van de vitrificatie- en opwarmingsoperator. De meest cruciale stappen die de consistentie van de resultaten kunnen beïnvloeden, zijn die met betrekking tot opwarming.Daarom is het erg belangrijk om het volume en de temperatuur van de ontdooioplossingen zorgvuldig te regelen. Ovariële weefsel cryopreservatie de enige strategie die momenteel wordt onderzocht als een optie voor pre-puberale patiënten. Hoewel veelbelovend, heeft deze aanpak een belangrijke beperking die de toepassing ervan beperkt.

fertility-preservation-through-oocyte-vitrification-clinical

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

MicroSecure Vitrification werd ontwikkeld als een niet-commercieel, aseptisch gesloten vitrificatieapparaatsysteem dat voldoet aan de FDA-normen voor goede fabricage- en weefselverwerkingspraktijken. Vanwege de terugtrekking van hydrofobe embryo-strohalmen met pluggen uit de industrie, werd de vitrificatieprocedure aangepast om een binnenste afdichting op te nemen vóór de standaard interne katoenen plug.

Gewijzigd MicroSecure Vitrificatie: Een veilige, eenvoudige en zeer effectieve cryopreservatie Procedure for Human Blastocysten

Dit manuscript beschrijft een protocol voor de minimale volume vitrification van onrijpe katoocyten met laboratorium-gemaakte media op commerciële steunen. Het dekt elke stap van eicelisolatie van ex vivo gonaden tot vitrificatie en opwarming.

Minimale volume vitrificatie van onvolwassen feline oocyten

We presenteren details over laboratoriumprocedures voor geneesmiddelvrije in-vitroactivatie (IVA) van ovariële follikels voor patiënten met ernstige ovariële disfunctie. Deze methode zou het aantal opvraagbare oöcyten per ovariële hyperstimulatie kunnen verhogen en het vruchtbaarheidsbehoud voor die patiënten ten goede komen.

Vruchtbaarheidsbehoud bij patiënten met ernstige ovariële disfunctie

Het protocol is gericht op het bieden van een standaardmethode voor de vitrificatie van volwassen en juveniele schapenoöcyten. Het omvat alle stappen van de bereiding van de in vitro rijpingsmedia tot de post-opwarmingscultuur. Oöcyten worden in het MII-stadium ge verglaasd met behulp van Cryotop om het minimale essentiële volume te garanderen.

Vitrificatie van in vitro gerijpte oöcyten verzameld uit volwassen en prepubertale eierstokken bij schapen

Een protocol voor de vitrificatie van eierstokweefsel, als een alternatieve cryopreservatiemethode voor het veelgebruikte langzame invriesprotocol, wordt gepresenteerd.

Verglazing van het weefsel van de eierstokschors om een glazige staat van aggregatie te bereiken

Dit protocol schetst gestandaardiseerde methoden om follikelvloeistof, somatische cellen en onrijpe eicellen te isoleren en te verwerken uit IVF-procedures, waardoor moleculaire en cellulaire analyses van hoge kwaliteit mogelijk zijn. Deze benaderingen ondersteunen translationeel onderzoek naar vruchtbaarheid, reproductieve veroudering en ovariële disfunctie met behulp van materialen die doorgaans in de klinische zorg worden weggegooid.

Verzameling van menselijke follikelvloeistof, follikelsomatische cellen en onrijpe eicellen van personen die in-vitrofertilisatie ondergaan

Dit protocol wordt gebruikt om ruimtelijke en temporele loopvariabelen van neurologische/orthopedische patiënten en oudere personen te evalueren door middel van een onlangs geïntroduceerd op de vloer gebaseerd fotocelsysteem.

Clinical Assessment van Spatiotemporal gangbeeld bij patiënten en oudere volwassenen

We beschrijven een werkwijze voor ex vivo machine perfusie van menselijke lever transplantaten bij subnormothermic temperatuur (21 ° C).

Functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van Subnormothermic Machine perfusie

Hier beschrijven we de techniek van sputum inductie. Dit protocol legt ook uit het sputum verwerking voor het uitvoeren van een telling van de differentiële cel en voor het verzamelen van sputum supernatant en cellen voor verdere analyse.

Methodologie voor Sputum inductie en laboratorium Processing

Hier presenteren we een protocol voor het uitvoeren van een intracapsular rotary-cut procedure (IRCP), een gewijzigde laparoscopische intracapsular myomectomie dat behoud van de vruchtbaarheid bevordert.

Invoering van Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A bewerkt Hysteromyomectomy Procedures vergemakkelijken van behoud van de vruchtbaarheid

Leer oöcyt vitrificatie voor vruchtbaarheidsbehoud met effectieve klinische en laboratoriumprotocollen. Deze methode maximaliseert de effectiviteit en veiligheid van cryopreservatiebehandelingen.

Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

Meer video's verkennen