Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

De oöcyt vitrificatie en de opwarmingsprocedures zijn essentieel voor vruchtbaarheidsbehoud. Door dit protocol te volgen zoals aangetoond, kan een gebruiker de effectiviteit van deze procedures maximaliseren. Vruchtbaarheidsbehoud voor oöcyt vitrificatie is vandaag een gevestigde en ethisch aanvaardbare aanpak.

Het maakt het mogelijk om effectieve en consistente klinische resultaten te bereiken en de morele en wettelijke beperking in verband met embryo cryopreservatie te overwinnen. Om vaardigheid met het vitrificatieproces te bereiken, is het belangrijk om vertrouwd te raken met alle kritieke punten van het protocol, met bijzondere aandacht voor de blootstellingstijd van de monsters aan de cryoprotectiva. Binnen 38 uur na het ophalen en onmiddellijk na de denudatie, label alle plastic benodigdheden met de naam, ID en het type oplossing van de patiënt en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen.

Wanneer alle benodigdheden zijn geëtiketteerd, moet u elke flacon met oöcyten meerdere keren voorzichtig omkeren om een 30 microliter druppel HEPES-buffermedium aangevuld met menselijk serumalbumine en een aangrenzende druppel equilibratieoplossing van 30 microliter op een petrischaaltje te mengen en te plaatsen. Gebruik de stripperpipet om de oöcyten in de eerste druppel te plaatsen en een brug van medium naar een 30 microliter druppel equilibratieoplossing te creëren om een geleidelijke toename van de concentratie van de cryoprotectanten te verkrijgen. Voeg na drie minuten een tweede druppel van 30 microliter equilibratieoplossing toe aan de plaat en gebruik de pipet om een middelgrote brug tussen de druppels oplossing te creëren.

Terwijl de oöcyten op elkaar zijn, voegt u één druppel equilibratieoplossing van 30 microliter toe voor elk cryo-apparaat dat op de plaat moet worden gebruikt. Verplaats de oöcyten na drie minuten gedurende zes tot negen minuten in de pure equilibratieoplossing, zodat de oöcyten weer op hun oorspronkelijke grootte kunnen terugkeren. Wanneer de oöcyten zijn hersteld, bereidt u een centrale ivf-schotel met één milliliter vitrificatieoplossing.

Breng de oöcyten in zo min mogelijk medium over op de schaal en verplaats ze voorzichtig om eventuele overtollige equilibratieoplossing te verwijderen. Plaats ongeveer 10 seconden voor het einde van de incubatie een cryo-apparaat met het etiket met de informatie van de patiënt onder de microscoop en pas de focus op de punt van het cryo-apparaat aan. Plaats de oöcyten op het cryo-apparaat naast de punt in de minimale hoeveelheid vitrificatieoplossing en verplaats de stripperpipet uit de buurt van de oöcyten om overtollige vitrificatieoplossing te verwijderen, waardoor de oöcyten bedekt blijven met een dunne laag medium.

Dompel het cryo-apparaat snel in vloeibare stikstof en schud het apparaat snel om eventuele luchtbellen van het oppervlak te verwijderen. Houd de beschermkap van het cryo-apparaat vast met een pincet en vul de dop met vloeibare stikstof voordat u het apparaat in de dop steekt terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt. Bewaar het cryo-apparaat vervolgens in een visotube met de informatie van de patiënt en werk het laboratoriumblad bij.

Voor het opwarmen van oöcyten, draai elke flacon ontdooi-, verdunnings- en wasoplossing voorzichtig om die op kamertemperatuur is opgewarmd en voeg een milliliter ontdooioplossing toe aan de centrale put van een petrischaal gedurende een incubatietijd van ten minste een uur bij 37 graden Celsius. Label alle plastic benodigdheden met de naam en ID van de patiënt en het type oplossing en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen. Voeg voor elk te verwarmen apparaat 200 microliter verdunningsoplossing toe aan de eerste put van een plaat met zes putten en voeg een gelijk volume wasoplossing toe aan de tweede en derde put van de plaat.

Voeg PBS toe aan het gebied aan de buitenkant van de putten om verdamping van de oplossing te voorkomen. Plaats de schotel van ontdooioplossing onder de stereomicroscoop en stel de scherpstelling in op het midden van de schotel. Draai voorzichtig om de beschermkap van een cryo-apparaat te verwijderen terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt en breng het cryo-apparaat zo snel mogelijk van de vloeibare stikstof in de ontdooioplossing over om het risico van devitrificatie te voorkomen.

Concentreer je na één minuut op de punt van het cryo-apparaat om de oöcyten te lokaliseren en gebruik uiteindelijk een stripperpipet om de oöcyten voorzichtig van het apparaat los te maken. Gebruik een stripperpipet met een diameter van 170 micron om de oöcyten en een klein volume ontdooioplossing over te brengen in de verdunningsoplossing in de eerste put van de zes putplaat. Na drie minuten verplaatst u de oöcyten gedurende vijf minuten in de eerste wasput.

Breng aan het einde van de incubatie de oöcyten over naar de tweede wasput en incubeer gedurende één minuut bij 37 graden Celsius voordat u de oöcyten gedurende een uur in een geschikt volume van het voorgeëlibreerde IVF-kweekmedium brengt en het laboratoriumblad bijwerkt. Gedurende een periode van 12 jaar ondergingen 285 vrouwen ten minste één oöcytterugwinning die de vitrificatie van het hele cohort van verzamelde volwassen eieren met zich meebracht. De meeste van deze vrouwen ondergingen een enkele terugwinning.

35 ondergingen meerdere retrievals. De redenen voor het ondergaan van oöcyt ophalen voor ei vitrification werden over het algemeen gekenmerkt als medisch anders dan kanker, kanker, niet-medisch, en andere. Patiënten met een medische reden voor ei vitrificatie en patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergaan vanwege kanker waren jonger en vertoonden hogere antrale folliculaire tellingen dan patiënten met niet-medische of andere redenen.

Aangezien de gemiddelde rijpingspercentages echter iets lager waren in de medische redenen patiënten, was het aantal oöcyten dat gemiddeld werd gesyreerd vergelijkbaar tussen de groepen. Ongeveer de helft van de patiënten met andere medische redenen dan kanker, en de meerderheid van de patiënten met andere redenen voor eier vitrificatie daadwerkelijk teruggekeerd voor opwarming. Omgekeerd gebruikten zeer weinig patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergingen voor kanker of niet-medische redenen hun verglaasde oöcyten voor IVF.

Ondanks verschillen in de verstreken tijd tussen vitrificatie en opwarming, was de overlevingskans van de oöcyten vergelijkbaar tussen patiëntengroepen, wat de werkzaamheid en veiligheid van de oöcyt vitrificatie en opwarmingsprotocollen bevestigde. Bovendien was de overlevingskans onafhankelijk van de ervaring van de vitrificatie- en opwarmingsoperator. De meest cruciale stappen die de consistentie van de resultaten kunnen beïnvloeden, zijn die met betrekking tot opwarming.

Daarom is het erg belangrijk om het volume en de temperatuur van de ontdooioplossingen zorgvuldig te regelen. Ovariële weefsel cryopreservatie de enige strategie die momenteel wordt onderzocht als een optie voor pre-puberale patiënten. Hoewel veelbelovend, heeft deze aanpak een belangrijke beperking die de toepassing ervan beperkt.