Name: Registratie van elektrische stromen over het plasmamembraan van zaadcellen van zoogdieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Leer de patch-clamp techniek voor het registreren van ionkanaalactiviteit in zoogdierspermacellen. Deze methode maakt gedetailleerde elektrofysiologische metingen mogelijk om spermafysiologie en vruchtbaarheidsdefecten te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>IX71 met DIC-optics</td><td>Olympus Inc</td><td>IX71</td><td>Nikon TiU-microscoop kan ook worden gebruikt</td></tr><tr><td>UplanSApo 60x</td><td>Olympus Inc</td><td></td><td>water-immersieobjectief</td></tr><tr><td>Vibratiedemping luchttafel</td><td>Newport Inc</td><td></td><td>TMC luchttafels of soortgelijke kunnen worden gebruikt</td></tr><tr><td>Axopatch&trade; 200B versterker</td><td>Axon&trade;&nbsp; /Molecular Devices</td><td></td><td>Sutter IPA&reg;/Double IPA&reg; Geïntegreerd patch clamp systeem is ook een uitstekende versterker</td></tr><tr><td>Axon Digidata analoog naar digitaal converter</td><td>Axon&trade;&nbsp; /Molecular Devices</td><td>1440 of 1550</td><td>kan ook worden gebruikt</td></tr><tr><td>Vapordruk osmometer</td><td>Wescor</td><td>model 5600</td><td></td></tr><tr><td>MPC 385 micromanipulator</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>MPC 385</td><td>De Eppendorf micromanipulator TransferMan-serie kan ook worden gebruikt</td></tr><tr><td>Micropipet-trekker</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>P1000</td><td>P97 kan worden gebruikt</td></tr><tr><td>MicroForge</td><td>Narishige</td><td>MF-830</td><td>Moet zijn uitgerust met Nikon MPlan 100/0.80 ELWD 210/0 objectief</td></tr><tr><td>Faraday kooi</td><td>Zelfgemaakt</td><td></td><td>om de opstelling te beschermen tegen elektrische interferentie uit de omgeving</td></tr><tr><td>&nbsp;5 mm glazen dekglas</td><td>WPI</td><td>&nbsp;#502040</td><td></td></tr><tr><td>Perfusiekamer</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>&nbsp;RC-24E</td><td></td></tr><tr><td>Borosilicaatglas capillair</td><td>Sutter Instruments, Novato CA</td><td>BF 150-85-7.5</td><td>buitendiameter 1,5 mm, binnendiameter 0,86 mm en een intern filament</td></tr><tr><td>Teflon manifold MP-8</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>64-0211</td><td>Teflon 8-posities perfusie manifold</td></tr><tr><td>Nunc 4-putjesplaat</td><td>Nunc</td><td>#179820</td><td></td></tr><tr><td>1 X HTF buffer</td><td>EmbryoMax</td><td>MR-070-D</td><td>capacitatieoplossing</td></tr><tr><td>SA-Oly/2 stages adapter</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>voor series 20 platforms</td><td>alleen voor Olympus microscoop</td></tr><tr><td>Magnetische verwarmde platform</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>PM-1 of soortgelijke serie</td><td>om RC-24E kamer vast te houden</td></tr><tr><td>MAG-1 magnetische klem</td><td>Warner Instruments, Inc</td><td>#64-0358</td><td></td></tr><tr><td>Micro-elektrodehouder met 2 mm Ag/AgCl pellet</td><td>WPI</td><td>MEH3F4515</td><td></td></tr><tr><td>Stopkraan met Luer-aansluitingen; 4-weg; mannelijke vergrendeling</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-30600&ndash;09</td><td></td></tr><tr><td>vrouwelijke luer slangaansluiting, 1/16&rdquo;</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-45508&ndash;00</td><td></td></tr><tr><td>Polytetrafluorethyleen (PTFE) perfusieslang</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06417&ndash;21</td><td>(Microbore PTFE slang, 0,022&rdquo; ID &times; 0,042&rdquo; OD)</td></tr><tr><td>Silicone verbindingsslang (platina-gecureerde siliconen slang, 1/32&rdquo; ID &times; 3/32&rdquo; OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-95802&ndash;01</td><td></td></tr><tr><td>Manifold verbindingsslang (PTFE slang, 1/32&rdquo; ID &times; 1/16&rdquo; OD)</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>EW-06407&ndash;41</td><td></td></tr><tr><td>mannelijke Luer-serie slangaansluiting, 1/16&rdquo;</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45518&ndash;00</td><td></td></tr><tr><td>Mannelijke Luer integrale vergrendelingsadapter 1/8&rdquo;</td><td>Cole-Parmer, Inc</td><td>45-503-04</td><td></td></tr><tr><td>Silicone verbindingsslang</td><td>Dow Silicone Corporation;&nbsp; MI</td><td>#508-008</td><td></td></tr><tr><td>Spuiten</td><td>Fisher Scientific of VWR</td><td>Air-Tite, Norm-Ject Luer</td><td>1 mL, 3mL, en 20 mL</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60216</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 x 7.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 x 2.H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21097</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523-250G</td><td></td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Natriumlactaat (60% w/w)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7900</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBG2421V</td><td></td></tr><tr><td>CsMeSO3</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1426</td><td>Cesium methaansulfonaat</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BCBF5871V</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Quality Biological</td><td>315-006-721</td><td>1 M oplossing van vergelijkbaar</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td></td></tr><tr><td>CsOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>232041</td><td></td></tr><tr><td>Embryomax Human Tubal Fluid-medium:</td><td>Millipore</td><td>MR-070-D</td><td>capacitatiemedium voor muisspermacellen</td></tr><tr><td>(Embryomax-HTF)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieren</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mannelijke Wistar-ratten</td><td>Wistar</td><td>Harlan Laboratories (Livermore, CA)</td><td>volwassen ratten</td></tr><tr><td>Mannelijke C57BL/6 muizen</td><td>C57BL/6 muizen</td><td>Harlan Laboratories (Livermore, CA)</td><td>3-6 maanden oud</td></tr></tbody></table>

registratie van elektrische stromen over het plasmamembraan van zaadcellen van zoogdieren

Recording Electrical Currents across the Plasma Membrane of Mammalian Sperm Cells

Registratie van elektrische stromen over het plasmamembraan van zaadcellen van zoogdieren

Recording of the electrical activity from one of the smallest cells of a mammalian organism- a sperm cell- has been a challenging task for ...

recording-electrical-currents-across-plasma-membrane-mammalian-sperm

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Technieken voor Imaging Ca 2 + Signalering in Human Sperm

Meten Intracellulaire Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Veranderingen in Human Sperm behulp Vier Technieken: Conventionele fluorometrie, Gestopt Flow fluorometrie, flowcytometrie en Single cell imaging

We hebben een intacte hersenen ruggenmerg voorbereiding voor het vastleggen en bewaken elektrische activiteit via patch clamp opname van de Mauthner neuronen en andere reticulospinal cellen in de zebravis embryo's ontwikkeld. Zo zijn wij in staat om prikkelende en remmende synaptische stromen, voltage-gated kanaal activiteit en actiepotentialen opnemen van belangrijke neuronen in een zich ontwikkelende embryo.

Patch Clamp Recordings van embryonale zebravis Mauthner Cells

Wij presenteren een protocol dat celisolatie en volledige cilinder patch-clamp opname combineert om de elektrische eigenschappen van de primaire gedissocieerde epitheelcellen van de rat cauda epididymiden te meten. Dit protocol maakt het mogelijk om de functionele eigenschappen van primaire epididymale epitheelcellen te onderzoeken om de fysiologische rol van de epididymis verder te verduidelijken.

Hele-cel patch-klem opnames van geïsoleerde primaire epitheliale cellen uit de epididymis

Hier presenteren we methodologieën voor evaluatie van spermatozoan membraan integriteit, een cellulaire functie sperma bevruchting bevoegdheid is gekoppeld. We beschrijven drie technieken voor de beoordeling van de fluorimetrische van sperma membranen: gelijktijdige kleuring met specifieke fluorescerende sondes, fluorescentie microscopie en geavanceerde sperma-dedicated stroom cytometry. Voorbeelden van het combineren van de methoden worden ook gepresenteerd.

Fluorimetrische technieken voor de beoordeling van sperma membranen

Hier, twee medium-throughput assays voor de beoordeling van effecten op Ca2 +-signalering en Acrosoom reactie in het menselijk sperma worden beschreven. Deze tests kunnen worden gebruikt om te sluiten snel en eenvoudig grote hoeveelheden compounds voor effecten op Ca2 +-signalering en Acrosoom reactie in het menselijk sperma.

Medium-throughput Screening tests voor de beoordeling van effecten op Ca2 +-signalering en Acrosoom reactie in het menselijk sperma

We beschrijven de toepassing van een extracellulaire flux-Analyzer om real-time veranderingen in de glycolyse en oxidatieve fosforylering tijdens het gebruik van muis sperma te bewaken.

Met behulp van een extracellulaire flux Analyzer om veranderingen in glycolyse en oxidatieve fosforylering te meten tijdens het gebruik van muis sperma

Het AcroSensE-muismodel en de hier beschreven beeldvormingsmethoden voor levende cellen bieden een nieuwe benadering voor het bestuderen van de calciumdynamiek in het subcellulaire compartiment van het sperma-acrosoom en hoe deze tussenstappen reguleren die leiden tot membraanfusie en acrosoomexocytose.

Real-time beeldvorming van acrosomale calciumdynamiek en exocytose in levend muizensperma

Extern elektrisch veld induceert een spanning op het membraan van een cel, de zogenoemde geïnduceerde membraan spanning (ΔΦ). Door het gebruik van de potentiometrische kleurstof di-8-ANEPPS, is het mogelijk om de ΔΦ niet-invasief te meten. Deze video toont het protocol voor het meten van ΔΦ met behulp van di-8-ANEPPS.

Het meten van de Induced Membraan Voltage met Di-8-ANEPPS

Dit protocol beschrijft een snelle techniek om de translocatie van GLUT4 kwantificeren van het cytoplasma naar de plasmamembraan van de cellen door flowcytometrie.

Kwantitatieve meting van GLUT4 translocatie naar de plasmamembraan door middel van flowcytometrie

Leer de patch-clamp techniek voor het registreren van ionkanaalactiviteit in zoogdierspermacellen. Deze methode maakt gedetailleerde elektrofysiologische metingen mogelijk om spermafysiologie en vruchtbaarheidsdefecten te bestuderen.

Registratie van elektrische stromen over het plasmamembraan van zaadcellen van zoogdieren

Meer video's verkennen