Name: Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-02-28T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Leer een geoptimaliseerde galweg-TNBS-infusietechniek voor chronische pancreatitis bij muizen. Dit model helpt onderzoekers neuropathische pijn en pancreasfibrose bestuderen voor betere behandelingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Deze studie werd ondersteund door het Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536) en het National Institute of Health grants # 1R01DK105183, DK120394 en DK118529 aan HW. We bedanken Dr. Hongju Wu voor het delen van technische ervaring.

Alle procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van de Institutional Animal Care and Use Committees aan de Medical University of South Carolina en het Ralph H. Johnson Medical Center. C57BL/6J mannelijke muizen tussen de 8-10 weken oud werden gebruikt in deze studie. Muizen werden gehuisvest onder een standaard 12 licht / 12 donkere cyclus met ad libitumtoegang tot voedsel en water.
1. Bereiding van TNBS oplossing voor injectie
<ol><li>Bereid 10% ethanol in 0,9% zoutoplossing. Los voorraad TNBS (zie Tabel met materialen) op in 10% ethanol tot een eindconcentratie van 7,5 mM door 7,5 μL TNBS toe te voegen aan 1 ml 10% ethanol. LET OP: TNBS vormt een chemisch gevaar. Bereid de oplossing in een zuurkast en gebruik persoonlijke beschermingsmiddelen zoals handschoenen, brillen en een laboratoriumjas om direct contact met TNBS te voorkomen.</li>
	<li>Laad 50 μL 0,75% TNBS-oplossing in een insulinespuit met een naald van 31 gauge. Laad 50 μL 10% ethanol in zoutoplossing in een spuit van dezelfde grootte als de voertuigbesturing. Plaats de spuiten op ijs en bescherm ze tegen licht totdat ze nodig zijn.</li>
</ol>2. Muisvoorbereiding en chirurgie
<ol><li>Scheer het haar van de abdominale operatieruimte.</li>
	<li>Injecteer één preventieve dosis van het pijnstillend (bijv. buprenorfine 0,1 mg/kg i.p.) vóór de operatie.</li>
	<li>Induceer en onderhoud de muis onder algemene anesthesie met 1,5-2% isofluraan en 1 l/min zuurstof. Bevestig de verdoving door in de tenen te knijpen en het dier te observeren op een gebrek aan reflex.</li>
	<li>Plaats de muis tijdens de operatie op een verwarmde chirurgische pad. Breng veterinaire zalf aan op elk oog wanneer de muis onder narcose is.</li>
	<li>Desinfecteer de operatieplaats door het operatiegebied 3x af te vegen met 2% jodium, gevolgd door 70% alcohol(Tabel met materialen).</li>
	<li>Voer een laparotomie uit met een microschaar om een incisie van 0,5-1 cm te genereren.</li>
	<li>Leg de twaalfvingerige darm voorzichtig bloot en lokaliseer het gemeenschappelijke galkanaal met behulp van wattenstaafjes(Tabel met materialen).</li>
	<li>Plaats een rechte micro hemoclip(Materiaaltabel)over het proximale gemeenschappelijke kanaal om de stroom van TNBS of voertuigoplossingen in de lever en de galblaas te voorkomen(Figuur 1A,B).</li>
	<li>Leg de twaalfvingerige darm voorzichtig bloot en steek de naald in het pancreaskanaal via de papilla van Vater.</li>
	<li>Zodra de naald zich in het kanaal bevindt, plaatst u een gebogen microhemoclip(Materialentabel)over de twaalfvingerige darm rond de naald(figuur 1A)om de naald op zijn plaats te houden en te voorkomen dat de geïnjecteerde oplossing in de twaalfvingerige darm terechtkomt.</li>
	<li>Injecteer de oplossing (TNBS of vehikel) geleidelijk in de ductus pancreatische buiging in de loop van een minuut. OPMERKING: TNBS moet langzaam worden toegediend gedurende een minuut tijd, en het is gemakkelijk om de infusiesnelheid te regelen wanneer de alvleesklier wordt doordrenkt met een insulinespuit met een 5/16 inch en 31G naald. Houd de hand zo stabiel mogelijk om te voorkomen dat je in de galwegen prikt. Als TNBS met succes wordt geïnjecteerd, kan de gele kleur zichtbaar zijn in de alvleesklier.</li>
	<li>Verwijder na infusie voorzichtig de microklem in de buurt van de lever en verwijder vervolgens de microklem die de naald en de twaalfvingerige darm vasthoudt.</li>
	<li>Breng de twaalfvingerige darm voorzichtig terug naar zijn oorspronkelijke positie.</li>
	<li>Laat 0,5 ml warme steriele zoutoplossing (36-37 °C) in de buikholte voor sluiting, om de twaalfvingerige darm te helpen terugkeren naar zijn oorspronkelijke positie en te helpen bij het herstel van de peristaltiek.</li>
	<li>Sluit de incisie in de spierlaag met behulp van een continue hechting met een 5-0 steek. Sluit de huid met een onderbroken hechting met een 4-0 hechting.</li>
	<li>Plaats de kooi met muizen op een verwarmingskussen om herstel van de anesthesie mogelijk te maken.</li>
	<li>Bevestig dat de muizen warm zijn en in staat tot spontane beweging voordat u ze terugbrengt naar de wachtkamer.</li>
	<li>Blijf elke 12 uur een pijnstillend zuur (bijv. buprenorfine 0,1 mg / kg i.p.) en aanvullende warmte gedurende 48 uur na de operatie.</li>
</ol>3. Het gedrag van muizen controleren
<ol><li>Verwijder hechtingen op dag 7 na de operatie.</li>
	<li>Controleer de gezondheid en het gedrag van muizen dagelijks tijdens de eerste week na de operatie. Let op tekenen van nood, zoals vocaliseren, gebogen rughouding of verminderde voortbeweging. Meet het lichaamsgewicht om de dag.</li>
	<li>Gebruik Von Frey monofilamenten (VFF's) om abdominale mechanische overgevoeligheid vóór en 2, 3 weken na de operatie te meten zoals beschreven9,14.<ol>
<li>Breng VFF's van verschillende toegepaste krachten in oplopende volgorde 10x elke 1-2 s aan op de bovenste buikstreek. Beschouw het opheffen, intrekken of likken van de buik (ontwenningsreactie) als een positieve reactie.</li>
		<li>Pas een sterkere stimulus toe als er geen positieve respons wordt waargenomen en een zwakkere stimulus als een positieve respons wordt waargenomen. De opnamedrempel is de kracht waarmee de muis 50% van de tijd reageert.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Verzameling en histologische analyse van pancreasweefsel
<ol><li>Offer de muizen op onder anesthesie door cervicale dislocatie en ontleed de alvleesklier zorgvuldig uit de darm en andere organen.</li>
	<li>Fixeer de alvleesklier gedurende 24 uur in 10% paraformaldehyde, sluit ze in paraffine, snijd weefselsecties van 5 μm dikte en plaats ze op glazen dia's voor kleuring.</li>
	<li>Voer hematoxyline-eosine en Masson's trichrome kleuring uit met behulp van standaardmethoden zoals eerder gemeld4.</li>
</ol>

<ol><li>Klauss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+induced+vs.+classical+animal+models+of+chronic+pancreatitis%3A+a+critical+comparison%5BTitle%5D)+AND+%22The+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology+Journal%22%5BJournal%5D)">Genetically induced vs. classical animal models of chronic pancreatitis: a critical comparison.</a> The Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 32, 5778-5792 (2018).</li>
<li>Liao, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+2+is+involved+in+%C2%B5-opioid+receptor+suppression+in+the+spinal+dorsal+horn+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase 2 is involved in µ-opioid receptor suppression in the spinal dorsal horn in a rat model of chronic pancreatitis pain.</a> Molecular Medicine Reports. 17 (2), 2803-2810 (2018).</li>
<li>Gui, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin+activity+governs+increased+susceptibility+to+pancreatitis+in+mice+expressing+human+PRSS1R122H%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Trypsin activity governs increased susceptibility to pancreatitis in mice expressing human PRSS1R122H.</a> The Journal of Clinical Investigation. 130 (1), 189-202 (2020).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+Stem+Cell+Therapy+Mitigates+Chronic+Pancreatitis+via+Differentiation+into+Acinar-like+Cells+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adipose Stem Cell Therapy Mitigates Chronic Pancreatitis via Differentiation into Acinar-like Cells in Mice.</a> Molecular Therapy. 25 (11), 2490-2501 (2017).</li>
<li>Aghdassi, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+investigating+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Fibrogenesis+and+Tissue+Repair%22%5BJournal%5D)">Animal models for investigating chronic pancreatitis.</a> Fibrogenesis and Tissue Repair. 4 (1), 26(2011).</li>
<li>Scoggins, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53-dependent+acinar+cell+apoptosis+triggers+epithelial+proliferation+in+duct-ligated+murine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">p53-dependent acinar cell apoptosis triggers epithelial proliferation in duct-ligated murine pancreas.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 279 (4), 827-836 (2000).</li>
<li>Bradley, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+pressure+in+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct pressure in chronic pancreatitis.</a> The American Journal of Surgery. 144 (3), 313-316 (1982).</li>
<li>Zhao, J. B., Liao, D. H., Nissen, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+pancreatitis%3A+can+it+be+translated+to+human+pain+study%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Animal models of pancreatitis: can it be translated to human pain study.</a> World Journal of Gastroenterology. 19 (42), 7222-7230 (2013).</li>
<li>Winston, J. H., He, Z. J., Shenoy, M., Xiao, S. Y., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+behavioral+changes+in+nociception+in+a+novel+rat+model+of+chronic+pancreatitis+for+the+study+of+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Molecular and behavioral changes in nociception in a novel rat model of chronic pancreatitis for the study of pain.</a> Pain. 117 (1-2), 214-222 (2005).</li>
<li>Cattaruzza, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+ankyrin+1+mediates+chronic+pancreatitis+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential ankyrin 1 mediates chronic pancreatitis pain in mice.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 304 (11), 1002-1012 (2013).</li>
<li>Bai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterior+insular+cortex+mediates+hyperalgesia+induced+by+chronic+pancreatitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Anterior insular cortex mediates hyperalgesia induced by chronic pancreatitis in rats.</a> Molecular Brain. 12 (1), 76(2019).</li>
<li>Puig-Diví, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PAX4+Gene+Transfer+Induces+alpha-to-beta+Cell+Phenotypic+Conversion+and+Confers+Therapeutic+Benefits+for+Diabetes+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">PAX4 Gene Transfer Induces alpha-to-beta Cell Phenotypic Conversion and Confers Therapeutic Benefits for Diabetes Treatment.</a> Molecular Therapy. 24 (2), 251-260 (2016).</li>
<li>Ceppa, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+proteases+mediate+inflammatory+pain+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Serine proteases mediate inflammatory pain in acute pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (6), 1033-1042 (2011).</li>
<li>Puig-Divi, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+chronic+pancreatic+disease+by+trinitrobenzene+sulfonic+acid+infusion+into+rat+pancreatic+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreas%22%5BJournal%5D)">Induction of chronic pancreatic disease by trinitrobenzene sulfonic acid infusion into rat pancreatic ducts.</a> Pancreas. 13 (4), 417-424 (1996).</li>
<li>Xu, G. Y., Winston, J. H., Shenoy, M., Yin, H., Pasricha, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitability+and+suppression+of+A-type+K%2B+current+of+pancreas-specific+afferent+neurons+in+a+rat+model+of+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Gastrointestinal+and+Liver+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitability and suppression of A-type K+ current of pancreas-specific afferent neurons in a rat model of chronic pancreatitis.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 291 (3), 424-431 (2006).</li>
<li>Drewes, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+in+chronic+pancreatitis%3A+the+role+of+neuropathic+pain+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Pain in chronic pancreatitis: the role of neuropathic pain mechanisms.</a> Gut. 57 (11), 1616-1627 (2008).</li>
</ol>

Alle auteurs verklaren dat ze geen belangenverstrengeling hebben.

Galweginfusie van TNBS om chronische pancreatitis te induceren is technisch uitdagend bij muizen, omdat tot 22,5% van de muizen binnen 3-4 dagen na medicijninfusie kan sterven10. Hier verfijnde dit rapport de procedure op basis van eerdere studies en verminderde de vroege muizensterfte tot <10%. Het verhoogde medicijnvolume (van 35 μL tot 50μL) kan er bijvoorbeeld voor zorgen dat de medicijnen de hele alvleesklier bereiken. Het gebruik van een insulinespuit en een kleinere naaldgrootte (31G) vermi...

Chronische pancreatitis (CP) is een chronische ontstekingsziekte die wordt gekenmerkt door de atrofie van de alvleesklier, fibrose, buikpijn en uiteindelijk verlies van zowel exocriene als endocriene functies1. De huidige medische en chirurgische behandelingen zijn niet curatief, maar worden uitgevoerd om symptomen te verlichten die het gevolg zijn van de ziekte: refractaire buikpijn, endocriene en exocriene disfunctie. Daarom zijn effectievere behandelingen dringend nodig2. Diermodellen bieden een essentieel hulpmiddel voor het ontwikkelen van een beter begrip van de ziekte en het onderzoeken van potentiële therapieën3. Er zijn meerdere muismodellen voor CP ontwikkeld, waarvan ceruleïne- en/of alcoholmodellen veel worden gebruikt. Van ceruleïne, een oligopeptide dat de secretie van de alvleesklier stimuleert, is aangetoond dat het reproduceerbaar een CP-model induceert met pancreasatrofie, fibrose, onder andere4. Een ander veel voorkomend model maakt gebruik van seriële injecties van L-arginine, die exocriene insufficiëntie produceert die vergelijkbaar is met die waargenomen bij menselijke patiënten5. CP kan ook worden geïnduceerd door volledige of gedeeltelijke ligatie van de ductus pancreatischeul,- en pancreaskanaalhypertensie6,7. Ondanks de verscheidenheid aan diermodellen die beschikbaar zijn voor CP, reproduceert geen van deze modellen effectief de buikpijn die wordt ervaren door CP-patiënten8.
Eerdere studies toonden aan dat lokale pancreasinjectie van 2,4,6-trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS) de aanhoudende pijn repliceert die wordt ervaren door CP-patiënten9,10,11. Met TNBS behandelde muizen vertoonden abdominale overgevoeligheid en verhoogd pijngerelateerd gedrag, evenals een "gegeneraliseerde overgevoeligheid" voor pijnlijke stimuli, een fenomeen dat is waargenomen bij CP-patiënten10. Naast het nauwkeurig nabootsen van CP-pijn, repliceert het TNBS-model ook andere pathologische kenmerken van de menselijke conditie, zoals fibrose, mononucleaire celinfiltratie en vervanging van acinaire cellen door vetweefsel10,12. TNBS-infusie via galwegen is echter een technisch uitdagende procedure bij muizen die de dood kan veroorzaken. Voor onze weten is er geen visueel protocol om aan te tonen hoe galweginfusie wordt uitgevoerd. In dit artikel demonstreren we de procedure van de gal-duction infusie van TNBS om een CP-muismodel te genereren. Deze procedure zal helpen bij het genereren van waardevolle diermodellen voor de studie van CP en andere pancreasziekten en kan worden gebruikt om andere materialen (bijv. Virus, cellen) in de pancreas te injecteren13.

<table><tbody><tr><td>10% Neutral buffered formalin v/v</td><td>Fisher Scientific</td><td>23426796</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol prep pads, steriel</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Animal Anesthesia systeem</td><td>VetEquip, Inc.</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfine hydrochloride, injectie</td><td>Par Sterile Products, LLC</td><td>NDC 42023-179-05</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge tubes, 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>0553859A</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol, absoluut (200 proof), moleculaire biologie kwaliteit</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818500</td><td></td></tr><tr><td>Extra fijne micro dissectiescharen 4&rdquo; rechte scherpe</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Graefe pincet 4&rdquo; extra delicate tip</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5136</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmd kussen</td><td>Amazon</td><td>B07HMKMBKM</td><td></td></tr><tr><td>Hegar-Baumgartner Naaldhouder 5.25&rdquo;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-7850</td><td></td></tr><tr><td>Insuline spuit met 31-gauge naald</td><td>BD</td><td>324909</td><td></td></tr><tr><td>Jodium prep pads</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027048</td><td></td></tr><tr><td>Isofluraan</td><td>Piramal Critical Care</td><td>NDC 66794-017-25</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip aanbrengforceps 5.5&rdquo;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5410</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, recht, sterk gebogen 1x6mm</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5433</td><td></td></tr><tr><td>Micro clip, recht, 0.75mm clipbreedte</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.</td><td>RS-5420</td><td></td></tr><tr><td>Picrylsulfonzuur oplossing, TNBS, 1M in H2O</td><td>Millipore Sigma</td><td>92822-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen Naad 4-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8683</td><td></td></tr><tr><td>Polypropyleen Naad 5-0</td><td>Med-Vet International</td><td>MV-8661</td><td></td></tr><tr><td>Natriumchloride, 0.9% intraveneuze oplossing</td><td>VWR</td><td>2B1322Q</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgisch doek, steriel</td><td>Med-Vet International</td><td>DR1826</td><td></td></tr><tr><td>Weefsel cassette</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-272416</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey filamenten</td><td>Bioseb</td><td>EB2-VFF</td><td></td></tr></tbody></table>

een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg tnbs-infusie

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronische pancreatitis (CP) is een complexe ziekte waarbij alvleesklierontsteking en fibrose, glandulaire atrofie, buikpijn en andere symptomen betrokken zijn. Verschillende knaagdiermodellen zijn ontwikkeld om CP te bestuderen, waarvan het galkanaal 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS) infusiemodel de kenmerken van neuropathische pijn repliceert die bij CP worden gezien. Galweg medicijninfusie bij muizen is echter technisch uitdagend. Dit protocol demonstreert de procedure van galweg TNBS-infusie voor het genereren van een CP-muismodel. TNBS werd toegediend in de alvleesklier via het ampulla van Vater in de twaalfvingerige darm. Dit protocol optimaliseerde het medicijnvolume, chirurgische technieken en medicijnbehandeling tijdens de procedure. Met TNBS behandelde muizen vertoonden kenmerken van CP zoals weerspiegeld door gewichtsverminderingen van het lichaamsgewicht en de alvleesklier, veranderingen in pijngerelateerd gedrag en abnormale pancreasmorfologie. Met deze verbeteringen was de mortaliteit geassocieerd met TNBS-injectie minimaal. Deze procedure is niet alleen van cruciaal belang bij het genereren van pancreasziektemodellen, maar is ook nuttig bij de lokale toediening van pancreasgeneesmiddelen.

De galweginfusieprocedures werden geoptimaliseerd om de sterfte bij muizen geassocieerd met deze procedure te verminderen10. TNBS werd eerst gegeven in een totaal volume van 35 μL of 50 μL. Injectie van TNBS in een volume van 50 μL kan de hele alvleesklier bereiken en een homogener ziektefenotype induceren(figuur 1B). Bovendien kan injectie van TNBS met behulp van insulinespuit met 31G-naald de infusiesnelheid beter regelen in vergelijking met gewone spuiten en naaldf...

Chronische pancreatitis (CP) is een ziekte die wordt gekenmerkt door ontsteking en fibrose van de alvleesklier, vaak geassocieerd met hardnekkige buikpijn. Dit artikel richt zich op het verfijnen van de techniek om een muismodel van CP te genereren via galweginfusie met 2,4,6 -trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS).

Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Chronische pancreatitis is een complexe ziekte waarbij alvleesklierontsteking, fibrose, buikpijn en andere symptomen betrokken zijn. Het galweg TNBS-infusiemodel repliceert de neuropathische pijn die wordt waargenomen bij chronische pancreatitispatiënten. Dit galkanaal TNBS-infusieprotocol is geoptimaliseerd om de generatie van een chronisch pancreatitismodel bij muizen te induceren.Omdat galwegmedicijnfusie bij muizen technisch uitdagend is, zal de visualisatie ervan nuttig zijn voor onderzoekers die nieuw zijn in de methode. Gebruik voor en twee en drie weken na de operatie Von Frey monofilamenten om verschillende niveaus van kracht in oplopende volgorde toe te passen op de bovenste buikstreek van een acht tot 10 weken oude, C57 zwarte zes muis, 10 keer gedurende één tot twee seconden per toepassing. Overweeg het verhogen van het terugtrekken of likken van de buik als een positieve reactie.Laad vervolgens een insulinespuit uitgerust met een naald van 31 gauge met 50 microliter van een vers bereide 0,75 procent TNBS-oplossing. Laad een tweede spuit met 50 microliter 10 procent ethanol in zoutoplossing als voertuigcontrole en plaats beide spuiten op ijs beschermd tegen licht. Na he

a-mouse-model-for-chronic-pancreatitis-via-bile-duct-tnbs-infusion

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

This video describes the procedure for the generation of a mouse model with acute biliary pancreatitis via pancreatic infusion of sodium taurocholate. This model helps study pathophysiological changes induced by sodium taurocholate in the pancreas.

Acute Biliary Pancreatitis Model: A Method to Generate Acute Biliary Pancreatitis Mouse Model via Pancreatic Duct Infusion

Diermodellen voor ernstige acute pancreatitis maken de studie van pathofysiologische veranderingen in de beginfase mogelijk, waardoor de observatie van de evolutie van ontstekingsgebeurtenissen wordt vergemakkelijkt. Hier bieden we een protocol voor de inductie van ernstige acute gal pancreatitis door retrograde infusie van natrium taurocholaat in het pancreaskanaal van verdoofde C57BL / 6-muizen.

Natrium taurocholaat geïnduceerde ernstige acute pancreatitis bij C57BL/6 muizen

Een muismodel van ernstige acute pancreatitis wordt hierin beschreven. De hier gepresenteerde procedure is zeer snel, eenvoudig en toegankelijk, waardoor de studie van de moleculaire mechanismen en verschillende therapeutische interventies bij acute pancreatitis op een handige manier mogelijk is.

Vaststelling van een muis ernstig acuut pancreatitismodel met behulp van retrograde injectie van natrium taurocholaat in het biliopancreatische kanaal

We hebben een muismodel van chronische leverfibrose opgesteld, dat een geschikt diermodel biedt voor de virus-geïnduceerde leverfibrose mechanistische studie van galatresie (BA) en een platform voor toekomstige BA-behandelingen.

Een muismodel van chronische leverfibrose voor de studie van galatresie

Intraperitoneale toediening van geneesmiddelen is een veilige en effectieve niet-invasieve benadering voor het induceren van pancreasletsel. Deze studie vergeleek vijf verschillende intraperitoneale injectieprotocollen bij muizen om verschillende gradaties van pancreasletsel te induceren en stelde een model van ernstig pancreasletsel vast om de pathologische veranderingen en behandelingsstrategieën voor ernstige acute pancreatitis (SAP) te onderzoeken.

Het voorbereiden van een muizenmodel van ernstige acute pancreatitis via een combinatie van caeruleïne en lipopolysaccharide intraperitoneale injectie

Het huidige protocol beschrijft een nieuwe benadering voor het modelleren van chronische obstructieve pancreatitis, waarbij visualisatie van de pancreasbuis en elektrocoagulatie van de pancreasbuis betrokken zijn om obstructie van de pancreasbuis te veroorzaken.

Een obstructief chronisch pancreatitismodel tot stand gebracht door middel van elektrocoagulatie

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Werkwijze voor visualiseren en kwantificeren van de 3-dimensionale structuur van muis poortader of intrahepatische galgang beschreven. Deze hars gegoten techniek kan ook worden toegepast op andere ductale of vasculaire systemen en...

3-Dimensionale kunstharsproducten en beeldvorming van de muis Portal Vein of Intrahepatische Bile Duct System

Een protocol voor chronische infusie van glucose en Intralipid bij ratten beschreven. Dit model kan worden gebruikt om het effect van nutriënten overmaat van orgaanfunctie en fysiologische parameters bestuderen.

Een model van Chronisch Nutrient Infusion in het Rat

Chronische oculaire hypertensie wordt opgewekt met behulp van laserfotocoagulatie van de trabekelnetwerk in muis ogen. De intraoculaire druk (IOP) wordt verhoogd tot verscheidene maanden na laserbehandeling. De daling van de gezichtsscherpte en contrastgevoeligheid proefdieren worden gecontroleerd met behulp van de optomotor-test.

Een laser-induced Mouse Model van chronische oculaire hypertensie aan Visual Gebreken karakteriseren

Leer een geoptimaliseerde galweg-TNBS-infusietechniek voor chronische pancreatitis bij muizen. Dit model helpt onderzoekers neuropathische pijn en pancreasfibrose bestuderen voor betere behandelingen.

Een muismodel voor chronische pancreatitis via galweg TNBS-infusie

Meer video's verkennen