Vruchtbaarheidsbehoud bij patiënten met ernstige ovariële disfunctie

Het doel van deze film is om de procedure van onze nieuwe benadering van patiënten met eierstokdisfunctie te demonstreren. Ovariële functie neemt geleidelijk af tijdens veroudering en sommige pathofysiologische aandoeningen, waaronder karyotypeafwijkingen, auto-immuunziekten, chemo- en bestralingstherapieën en eierstokoperaties. De meeste vrouwen van middelbare leeftijd met een lage ovariële reserve vertoonden een slechte ovariële respons op ovariële stimulatie voor het leveren van volwassen oöcyten.

Bovendien vertoonden jonge patiënten met een laag aantal antrale follikels ook een slechte ovariële respons op de ovariële stimulatie. Het behoud van de vruchtbaarheid is belangrijk om het potentiële OCS voor toekomstige zwangerschap te bewaren. Voor vruchtbaarheidsbehoud, werd de cryopreservatie van de oöcyt gevestigd.

Deze patiënten met een slechte ovariële respons konden echter een zeer beperkt aantal oöcyten ophalen, zelfs na een goede ovariële stimulatie, wat leidde tot de vereiste van herhaalde dure procedures om een voldoende aantal oöcyten te garanderen om één baby te garanderen. Om deze problemen op te lossen, hebben we onlangs de in vitro activerings-, IVA-procedure ontwikkeld, die ons in staat stelt om het vroege stadium van ovariële follikels te stimuleren om zich te ontwikkelen tot pre-antrale follikelfase. De oorspronkelijke IVA-procedure kan primordiale, primaire en secundaire follikelgroei bevorderen door fragmentatie van de eierstokschors, wat leidt tot verstoring van de hipposignalering.

Dit wordt gevolgd door twee dagen cultiveren met Akt-signaalstimulator. Deze procedure is geschikt voor POI-patiënten met weinig resterende follikels. Deze procedure is echter een overmatige behandeling voor patiënten met meerdere secundaire follikels.

Voor de patiënten die enkele resterende secundaire follikels hebben, hebben we de methode genaamd medicijnvrije IVA vastgesteld en hebben we al de mogelijkheid getest om secundaire follikelgroei te bevorderen door alleen de nijlpaardsignaleringsroute te verstoren. We hebben ook een aantal succesvolle gevallen van levering door drugsvrije IVA gehad. We hebben al de chirurgische procedure van de geneesmiddelvrije IVA en het protocol voor het volgen van eierstokstimulatie gepubliceerd.

In deze video presenteren we de details van laboratoriummethoden die nodig zijn voor medicijnvrije IVA. We rekruteerden de patiënten voor medicijnvrije IVA op basis van de Bologna-criteria. De patiënten kunnen meerdere secundaire follikels hebben.

In eerste instantie werd een deel van de cortex verwijderd uit een of beide eierstokken door laparoscopie. POR-patiënten zijn degenen die middelgrote eierstokken hadden. Bij de meeste patiënten haalden we slechts een deel van de corticale weefsels uit de eierstokken aan één of beide zijden.

Geëxtraheerde kritieke weefsels werden onmiddellijk overgebracht naar een kweekschaal met kweekmedium met HEPES-buffer en ontleedden dit kleine weefsel in kleine blokjes voor verstoring van de nijlpaardsignalering. Details van de procedure worden in deze video getoond. Hippo signaleringsroute is essentieel om een optimale orgaangrootte te behouden.

Dit traject bestaat uit verschillende negatieve groeiregulatoren. Zodra de nijlpaardsignalering is verstoord, worden de fosforyleringsniveaus van YAP, een van de negatieve groeiregulatoren die in een kinasecascade werken, verlaagd en worden de nucleaire niveaus van YAP verhoogd. YAP werkt samen met TEAD transcriptiefactoren om de downstream CCN-groeifactor te verhogen.

Aan de andere kant is actinepolymerisatie van bolvormig acteren, G-actine, tot de filamenteuze vorm, F-actine, belangrijk voor het onderhoud en de voortbeweging van de celvorm. Eerder gemelde inductie van F-actinevorming verstoort nijlpaardsignalering en veroorzaakt overgroei in menselijke HeLa-cellen. We meldden eerder dat ovariële fragmentatie de vorming van F-actine verhoogt, en het leidt tot de afname van het fosforyleringsniveau van YAP.

Het leidt tot een verhoogde expressie van ccn groeifactor. Na het snijden worden deze kubussen geënt in de resterende eierstok. Deze procedure kan de resterende secundaire follikelgroei bevorderen en leiden tot een verhoogd aantal gerijpte oöcyt.

Drugsvrije IVA bestaat uit vier stappen. We hebben de chirurgische procedure voor medicijnvrije IVA al gepubliceerd. Raadpleeg die literatuur voor ovariële cortexextractie en auto-enting.

Hier laten we de gedetailleerde procedures zien van laboratoriummethoden die nodig zijn voor medicijnvrije IVA. In stap één laten we zien hoe eierstokschorsfragmentatie wordt uitgevoerd. In stap twee laten we zien hoe we de eierstok corticale kubussen in het apparaat kunnen laden voor transplantatie, Hier zal ik fragmentatie van de eierstokschors laten zien.

Deze studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van ons instituut en alle procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Ethische Code van de World Medical Association. Fragmentatie van de eierstokschors. De volgende gereedschappen die nodig zijn voor deze stap: een schaal, steriel gaas, fijne schaar, fijne tang en scalpel.

We gebruiken meestal dit type schaal en steriel gaas, maar andere producten zoals plastic petrischaal, glazen schaal, enzovoort, kunnen ook geschikt zijn voor deze procedure, en elk type steriel gaas is ook geschikt. We raden echter ten zeerste het gebruik van deze vorm van tang en scalpel aan. Gebruik bovendien de hete plaat voor het handhaven van de temperatuur van de gerechten die weefsels bevatten Plaats onder het steriele laken.

Corticale weefsels worden onmiddellijk overgebracht naar de schaal met mHTF. Maak een foto met de naam van de patiënt om te correleren met de gegevens van de patiënt. Noteer de grootte, dikte en conditie van het weefsel.

Verwijder restpapier van medulla. Verwijder vóór weefselfragmentatie het medullaweefsel. Leg de cortex op het steriele gaas.

Zoals te zien is in de video, wordt het gaas bevochtigd met medium. Breng tijdens deze procedure medium aan met een wegwerppipet voordat het oppervlak van de cortex is uitgedroogd. Verwijder restweefsels met een microschaar tot de dikte één tot twee millimeter bereikt.

Bij POR-patiënten bevinden secundaire follikels zich dieper dan een millimeter van het cortexoppervlak, dus maak de weefsels niet minder dan een millimeter dik. Snijd één kant van de cortex van elk weefsel in een strook van één bij vijf millimeter voor histologische analyse om de aanwezigheid van resterende follikels te bepalen. Doe deze strip in een buis van 1,5 milliliter met kweekmedium en houd deze tot het bevestigen op vier graden Celsius.

Bereiding van eierstok corticale kubussen. Na verwijdering van medullaweefsel is eierstokschors gefragmenteerd voor verstoring van de nijlpaardsignalering. Snijd eerst de cortex één voor één in stroken van 10 millimeter met scalpel.

Snijd deze stroken vervolgens in kleine blokjes van één millimeter. In het medium is het weefsel glad en moeilijk te snijden. Voor eenvoudig snijden snijdt u de stroken door op de scalpel te drukken in plaats van eraan te trekken.

Tel na het snijden het aantal kubussen en bereid het automatisch enten voor. Om de veranderingen van osmotische druk in het medium te voorkomen, voegt u het medium met mate toe voordat u het weefsel automatisch ent. Voor eierstok auto-enting, het gebruik van een canule-vormige apparaat zorgt voor gemakkelijker laden.

Deze stap bevat twee stappen. Voorheen werden eierstokfragmenten één voor één getransplanteerd met behulp van een tang onder laparoscopie. Het duurde echter ongeveer drie tot vier uur voordat de operatie was voltooid.

In deze procedure gebruiken we een cannulair apparaat gemaakt van een binnenspuit en een buitencilinder. Dit is een eenvoudige vorm en lichtgewicht. Bovendien heeft de punt van dit apparaat een ronde vorm.

Er zijn geen scherpe punten die schade aan de transplantatieplaats voorkomen. Met dit type apparaat kunnen tot 20 tot 30 kubussen tegelijk naar de implantatieplaats worden gebracht. Dit leidt tot een efficiënte transplantatie en verkorting van de operatietijd.

Het laden van ovariële corticale fragmenten. Bereiding van IVA canule. Bereid de IVA canule voor en was dit apparaat in mHTF.

Herhaal aspirate en lossing medium meerdere malen. Vul de punt van een cannulair door ongeveer 100 microliter van het medium te aspireren. Dit om te voorkomen dat de kubussen eruit trekken tijdens het laden van weefselfragmenten.

Corticale kubussen laden. Pluk een kubus met een fijne tang en doe deze in de punt van de cannul. Het aantal automatisch geënt kubussen hangt af van de grootte van de transplantatieplaats.

Herhaal het één voor één laden van de kubussen totdat u het doelnummer hebt bereikt. Geef de canule na het laden van de kubussen zorgvuldig door aan de chirurg. Als de entplaats nog niet klaar is, moet het deel van de cannul dat ovariële kubussen bevat, door vingers worden vastgehouden om een daling van de temperatuur van kubussen te voorkomen.

We hebben de klinische resultaten van geneesmiddelvrije IVA al gerapporteerd. Raadpleeg het gepubliceerde artikel over klinische resultaten. Dit laboratoriumprotocol vereiste 30 tot 50 minuten voor één patiënt.

De gemiddelde tijd is voor 10 tot 20 minuten voor fragmentatie van de eierstokschors en 20 tot 30 minuten voor het laden van deze fragmenten op IVA-canule. Dit hangt af van de weefselgrootte, maar bijna alle patiënten kunnen in deze gemiddelde tijd worden voltooid. Conclusies. Geneesmiddelvrije IVA is een nieuwe benadering van onvruchtbaarheidsbehandeling voor POR-patiënten met een afnemende ovariële reserve.

Dit laboratoriumprotocol leidt tot een vermindering van zowel de tijd die nodig is voor een operatie als het verlies van fragmenten tijdens de transplantatie. De laboratoriumtechniek van geneesmiddelvrije IVA zou de basis kunnen worden voor toekomstige toepassing van eierstokweefselkweek om volwassen oöcyten te verkrijgen zonder te enten.