Name: Accumulatie en distributie van fluorescerende microplastics in de vroege levensfasen van zebravissen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Leer hoe fluorescerende microplastics zich ophopen en verspreiden in zebravisembryo's en larven. Deze methode maakt visuele kwantificering van bioaccumulatie mogelijk voor ecotoxicologisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (21777145, 22076170) en het Program for Changjiang Scholars and Innovative Research Team in University (IRT_17R97).

Volwassen zebravissen zijn afkomstig van het China Zebrafish Resource Center (Wuhan, China). De experimenten zijn uitgevoerd in overeenstemming met de nationale gids "Laboratory Animal Guideline for Ethical Review of Animal Welfare (GB/T35892-2018).
1. Embryo's verzamelen
<ol><li>Houd vissen in glazen tanks van 20 L met recirculerend koolstofgefilterd leidingwatersysteem (pH 7,0 ± 0,2) bij een constante temperatuur (28 ± 0,5 °C) op een fotoperiode van 14:10 uur licht: donker.</li>
	<li>Voer vis tweemaal daags met Artemia nauplii. Het wordt aanbevolen dat het voedsel wordt gegeven met maximaal 3% visgewicht per dag en moet binnen 5 minuten per keer worden gegeten14.</li>
	<li>Breng goed ontwikkelde volwassen zebravissen (met een lichaamslengte van 3-4 cm) over in de paaitank in een verhouding van één mannetje tot twee vrouwtjes de nacht voor de fokkerij. OPMERKING: De volgende ochtend beginnen de vissen te spawnen na het begin van de lichtcyclus.</li>
	<li>Verzamel eieren met een Pasteur pipet. Spoel meerdere keren met de oplossing van 10% Hank en controleer vervolgens met een microscoop op bevruchting. Bevruchte eieren ondergaan de decolletéperiode na ongeveer 2 uur na de bevruchting (hpf) en kunnen duidelijk worden geïdentificeerd15.</li>
	<li>Incubeer de bevruchte embryo's in een bekerglas van 500 ml met 200 ml 10% Hanks oplossing met 1% methyleenblauw voor desinfectie bij 28 °C. Beladingssnelheid van 1 embryo/2 ml oplossing niet overschrijden. OPMERKING: 10% Hank's oplossing bestaat uit 137 mM NaCl, 5,4 mM KCl, 0,25 mM Na2HPO4,0,44 mM KH2PO4,1,3 mM CaCl2,1,0 mM MgSO4 en 4,2 mM NaHCO3.</li>
</ol>2. Bereiding van microplastic suspensussingen
<ol><li>Soniceer de stamoplossing van groene fluorescerend gelabelde polystyreenparels (10 mg/ml) met een nominale diameter van 500 nm (excitatie/emissie: 460/500 nm) gedurende 10 minuten.</li>
	<li>Verdun de stamoplossing met de oplossing van 10% Hank om de gewenste belichtingsoplossingen (0,1, 1 en 10 mg/L) te produceren.</li>
	<li>Bereid altijd de belichtingsoplossingen van microplastics voor op de blootstelling. OPMERKING: Voorzichtigheid is geboden bij het beoordelen van de toxische effecten van microplastics, omdat de aanwezigheid van conserveermiddelen, zoals natrium azide, in de commerciële deeltjesformuleringen giftig kan zijn voor verschillende organismen 16. Daarom moeten deze additieven worden verwijderd of verantwoord in de controles voordat een toxiciteitsexperiment wordt uitgevoerd.</li>
</ol>3. Blootstelling aan microplastics
<ol><li>Selecteer willekeurig 6 nieuw bevruchte embryo's (4 hpf) en breng vervolgens over in elke put van 6-putplaat met 5 ml microplastic-oplossingen met verschillende concentraties. Neem de controlegroepen op die de oplossing van 10% Hank bevatten.<ol>
<li>Gebruik drievoudputten (met in totaal 18 embryo's) voor elke behandeling.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Incubeer de embryo's onder hetzelfde licht: donkere cyclus en temperatuur als volwassenen (zie 1.2) en observeer elke 12 uur. Verwijder de doden onmiddellijk.</li>
	<li>Vernieuw de microplastic oplossingen 90% om de 24 uur. Tijdens de blootstellingsperiode worden de vissen niet gevoerd. OPMERKING: Over het algemeen begint het uitkomen van embryo bij 48 hpf en voltooit het bij ongeveer 72 hpf.</li>
</ol>4. Beoordeling van de verdeling van microplastics
<ol><li>Selecteer bij 24, 48, 72, 96 en 120 uur na de bevruchting willekeurig de embryo's/larven (één van de drie replica's) en spoel met 10% Hanks oplossing.</li>
	<li>Breng de larven over in een petrischaal en stel bloot aan 0,016% tricaine voor anesthesie.<ol>
<li>Bereid de stamoplossing van tricaïne: 4 mg tricaïnepoeder wordt opgelost in 100 ml dubbel gedestilleerd water en stel de pH in op 7,0 met Tris-HCl (pH 9,0). Bewaar de voorraadoplossing in de vriezer.</li>
		<li>Bereid de werkoplossing voor. Verdun de stamoplossing tot de gewenste concentratie (0,016%) met 10% Hank's oplossing bijkamertemperatuur 14.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Schik de embryo's/larven en bereid je voor op observatie.</li>
	<li>Observeer de vis met een fluorescentiemicroscoop en beeld met beeldvormingssoftware.</li>
	<li>Kwantificeer de fluorescentie-intensiteit bij vissen met ImageJ.</li>
</ol>

<ol><li>SAPEA (Science Advice for Policy by European Academies). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22A+Scientific+Perspective+on+Microplastics+in+Nature+and+Society%22">A Scientific Perspective on Microplastics in Nature and Society</a>. , SAPEA. Berlin. (2019).</li>
<li>Plastics Europe. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Plastics-the+facts+2019%22">Plastics-the facts 2019</a>. , Plastics Europe. Brussels. (2019).</li>
<li>Andrady, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Marine+Pollution+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the marine environment.</a> Marine Pollution Bulletin. 62, 1596-1605 (2011).</li>
<li>Arthur, C., Baker, J., Bamford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proceedings+of+the+International+Research+Workshop+on+the+Occurrence%2C+Effects+and+Fate+of+Microplastic+Marine+Debris%5BTitle%5D)+AND+%22National+Oceanic+and+Atmospheric+Administration+Technical+Memorandum%22%5BJournal%5D)">Proceedings of the International Research Workshop on the Occurrence, Effects and Fate of Microplastic Marine Debris.</a> National Oceanic and Atmospheric Administration Technical Memorandum. , (2009).</li>
<li>Ivleva, N. P., Wiesheu, A. C., Niessner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastic+in+aquatic+ecosystems%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Microplastic in aquatic ecosystems.</a> Angewandte Chemie International Edition. 56, 1720-1739 (2017).</li>
<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pollutant+toxicology+with+respect+to+microalgae+and+cyanobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Environmental+Sciences%22%5BJournal%5D)">Pollutant toxicology with respect to microalgae and cyanobacteria.</a> Journal of Environmental Sciences. 99, 175-186 (2021).</li>
<li>Huang, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+microplastics+impairs+digestive+performance%2C+stimulates+immune+response+and+induces+microbiota+dysbiosis+in+the+gut+of+juvenile+guppy+%28Poecilia+reticulata%29%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Exposure to microplastics impairs digestive performance, stimulates immune response and induces microbiota dysbiosis in the gut of juvenile guppy (Poecilia reticulata).</a> Science of the Total Environment. 733, 138929(2020).</li>
<li>Prüst, M., Meijer, J., Westerink, R. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plastic+brain%3A+neurotoxicity+of+micro-+and+nanoplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+and+Fibre+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The plastic brain: neurotoxicity of micro- and nanoplastics.</a> Particle and Fibre Toxicology. 17, 24(2020).</li>
<li>Jakubowska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+chronic+exposure+to+microplastics+of+different+polymer+types+on+early+life+stages+of+sea+trout+Salmo+trutta%5BTitle%5D)+AND+%22Science+of+the+Total+Environment%22%5BJournal%5D)">Effects of chronic exposure to microplastics of different polymer types on early life stages of sea trout Salmo trutta.</a> Science of the Total Environment. 740, 139922(2020).</li>
<li>Qiang, L., Cheng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+polystyrene+microplastics+impairs+gonads+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Exposure to polystyrene microplastics impairs gonads of zebrafish (Danio rerio).</a> Chemosphere. 263, 128161(2021).</li>
<li>Hamed, M., Soliman, H. A. M., Osman, A. G. M., Sayed, A. E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidants+and+molecular+damage+in+Nile+Tilapia+%28Oreochromis+niloticus%29+after+exposure+to+microplastics%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+and+Pollution+Research%22%5BJournal%5D)">Antioxidants and molecular damage in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) after exposure to microplastics.</a> Environmental Science and Pollution Research. 27, 14581-14588 (2020).</li>
<li>Burns, E. E., Boxall, A. B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+the+aquatic+environment%3A+Evidence+for+or+against+adverse+impacts+and+major+knowledge+gaps%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Toxicology+and+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microplastics in the aquatic environment: Evidence for or against adverse impacts and major knowledge gaps.</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 37, 2776-2796 (2018).</li>
<li>Ma, H., Pu, S., Liu, S., Bai, Y., Mandal, S., Xing, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microplastics+in+aquatic+environments%3A+Toxicity+to+trigger+ecological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Pollution%22%5BJournal%5D)">Microplastics in aquatic environments: Toxicity to trigger ecological consequences.</a> Environmental Pollution. 261, 114089(2020).</li>
<li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book%3A+A+Guide+for+the+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+reio%29.+4th+ed%22">The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio reio). 4th ed</a>. , University of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Pikuda, O., Xu, E. G., Berk, D., Tufenkji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxicity+assessments+of+micro-+and+nanoplastics+can+be+confounded+by+preservatives+in+commercial+formulations%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+Science+%26+Technology+Letters%22%5BJournal%5D)">Toxicity assessments of micro- and nanoplastics can be confounded by preservatives in commercial formulations.</a> Environmental Science & Technology Letters. 6, 21-25 (2019).</li>
<li>Lidster, K., Readman, G. D., Prescott, M. J., Owen, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+survey+on+the+use+and+welfare+of+zebrafish+Danio+rerio+in+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">International survey on the use and welfare of zebrafish Danio rerio in research.</a> Journal of Fish Biology. 90, 1891-1905 (2017).</li>
<li>Pitt, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake%2C+tissue+distribution%2C+and+toxicity+of+polystyrene+nanoparticles+in+developing+zebrafish+%28Danio+rerio%29%5BTitle%5D)+AND+%22Aquatic+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Uptake, tissue distribution, and toxicity of polystyrene nanoparticles in developing zebrafish (Danio rerio).</a> Aquatic Toxicology. 194, 185-194 (2018).</li>
<li>Lin, S. J., Zhao, Y., Nel, A. E., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+An+in+vivo+model+for+nano+EHS+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: An in vivo model for nano EHS studies.</a> Small. 9, 1608-1618 (2013).</li>
</ol>

De auteur verklaart geen concurrerende of financiële belangen.

Volgens het richtsnoer voor de bescherming van dieren die voor wetenschappelijke doeleinden worden gebruikt, zoals EU-richtlijn 2010/63/EU, is toestemming voor dierethiek niet verplicht voor een experiment met vroege levensfasen van zebravissen totdat het stadium van onafhankelijke voeding mogelijk is (5 dagen na bevruchting)17. Beste welzijnspraktijken zijn echter belangrijk voor het optimaliseren van het gebruik van zebravissen, en bijvoorbeeld de humane methoden van anesthesie en euthanasie moe...

Sinds de eerste synthetiseren in de jaren 1900, kunststoffen worden veel gebruikt op verschillende gebieden, wat resulteert in een snelle groei van de wereldwijde productie1. In 2018 werd wereldwijd ongeveer 360 miljoen ton kunststoffen geproduceerd2. De kunststoffen in de natuurlijke omgeving zullen afbreken tot fijne deeltjes als gevolg van chemische, fysische of biologische processen3. Over het algemeen worden fijne plastic deeltjes <5 mm groot gedefinieerd als microplastics4. Microplastics zijn ook ontworpen voor specifieke toepassingen, zoals microbeads uit cosmetische producten5. Als bijna permanente verontreinigingen worden microplastics opgehoopt in het milieu en hebben ze steeds meer aandacht getrokken van wetenschappers, beleidsmakers en het publiek1,6. Eerdere studies documenteerden dat microplastics nadelige effecten bij vissen kunnen veroorzaken, zoals gastro-intestinale schade7, neurotoxiciteit8, hormoonontregeling9, oxidatieve stress10 en DNA-schade11. De toxiciteit van microplastics is tot nu toe echter niet volledig aangetoond12,13.
Zebravisembryo's bieden veel experimentele voordelen, waaronder kleine afmetingen, externe bevruchting, optische transparantie en grote koppelingen, en worden beschouwd als een ideaal modelorganisme voor het in vivo bestuderen van de effecten van verontreinigende stoffen op vissen in vroege levensfasen. Bovendien zijn slechts beperkte hoeveelheden teststoffen nodig voor de evaluatie van biologische reacties. Hier worden zebravisembryo's gedurende 5 dagen blootgesteld aan verschillende concentraties microplastics (0,1, 1, 10 mg/L) en worden de bioaccumulatie en distributie van microplastics in zebravisembryo's/larven geëvalueerd. Dit resultaat zal ons begrip over de toxiciteit van microplastics voor vissen bevorderen, en de hier beschreven methode kan mogelijk worden gealdaliseerd om de accumulatie en distributie van andere soorten fluorescerende materialen in de vroege levensfasen van zebravissen te bepalen.

<table><tbody><tr><td>Fluorescente microscoop</td><td>Nikon, Japan</td><td>Eclipse Ti-S</td><td></td></tr><tr><td>Groen fluorescent gelabelde polystyreen kralen</td><td>Phosphorex, USA</td><td>2103A</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>A5040</td><td></td></tr></tbody></table>

accumulatie en distributie van fluorescerende microplastics in de vroege levensfasen van zebravissen

Accumulation and Distribution of Fluorescent Microplastics in the Early Life Stages of Zebrafish

Als nieuw type milieuverontreinigende stof is microplastic op grote schaal aangetroffen in het aquatisch milieu en vormt het een grote bedreiging voor in het water levende organismen. De bioaccumulatie van microplastics speelt een sleutelrol in hun toxische effecten; als deeltjes verschillen hun bioaccumulaties echter van veel andere verontreinigende stoffen. Hier beschreven is een haalbare methode om de accumulatie en distributie van microplastics in zebravisembryo's of larven visueel te bepalen met behulp van fluorescerende microplastics. Embryo's worden gedurende 120 uur blootgesteld aan verschillende concentraties (0,1, 1 en 10 mg/L) fluorescerende microplastics met een diameter van 500 nm. In de resultaten is aangetoond dat microplastics op een concentratieafhankelijke manier kunnen bioaccumuleren in zebravisembryo's/larven. Vóór het uitkomen wordt sterke fluorescentie gevonden rond het embryonale koraal; terwijl in zebravislarven de dooierzak, het pericard en het maagdarmkanaal de belangrijkste geaccumuleerde locaties van microplastics zijn. De resultaten tonen de opname en internalisering van microplastics in zebravissen in vroege levensfasen aan, wat de basis zal vormen voor een beter begrip van de impact van microplastics op waterdieren.

De verdeling en accumulatie van fluorescerende microplastics zijn weergegeven in figuur 1 en tabel 1. Er wordt geen zichtbare fluorescentie waargenomen in de onbelichte groep (controle). Er wordt echter een opeenhoping van fluorescentie gevonden rond het koraal na blootstelling aan verschillende concentraties microplastics (24 hpf). Groene fluorescentie wordt ook gedetecteerd bij larven en de fluorescentieniveaus lijken op een concentratie- en tijdsafhankelijke manier toe te...

Zebravisembryo's/larven ontwikkelen zich extern en zijn optisch transparant. De bioaccumulatie van microplastics in vissen in vroege levensfasen wordt gemakkelijk beoordeeld met fluorescerend gelabelde microbeads.

Accumulatie en distributie van fluorescerende microplastics in de vroege levensfasen van zebravissen

As a new type of environmental pollutant, microplastic has been widely found in the aquatic environment and poses a high threat to aquatic organisms. The ...

Accumulatie en distributie van fluorescerende microplastics in de vroege levensfasen van zebravissen. Introductie. De bioaccumulatie van microplastics speelt een belangrijke rol in hun toxische effecten. Als deeltjes verschillen hun bioaccumulaties echter van veel andere verontreinigende stoffen.Hier beschreven is een haalbare methode om de accumulatie en distributie van microplastics in zebravisembryo's of larven visueel te bepalen met behulp van fluorescerende microplastics. De experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de nationale gids Laboratoriumdierrichtlijn voor ethische toetsing van dierenwelzijn. Eén, embryoverzameling.Volwassen zebravissen zijn afkomstig van het China Zebrafish Resource Center. Vissen worden onderhouden in glazen tanks van 20 liter met recirculerend houtskoolgefilterd leidingwatersysteem bij een constante temperatuur, namelijk 28 Graden Celsius, op een fotoperiode van 14 en 10 uur, licht: donker. Vissen worden tweemaal daags gevoerd met Artemia nauplii.Het wordt aanbevolen dat het voedsel maximaal 3% visgewicht per dag krijgt en elke keer binnen vijf minuten moet worden gegeten. Goed ontwikkelde volwassen zebravissen worden de avond voor het fokken in de paaitank overgebracht met een verhouding van één mannetje tot twee vrouwtjes. De volgende ochtend beginnen de vissen te spawnen na het begin van de lichtcyclus.Eieren worden verzameld met behulp van een Pasteur pipet, meerdere keren gespoeld met de oplossing van 10% Hank en vervolgens gecontroleerd op bevruchting met behulp van een microscoop. Bevruchte eieren ondergaan de decolletéperiode na ongeveer twee uur na de bevruchting en kunnen duidelijk worden geïdentificeerd. De bevruchte embryo's worden geïncubeerd in een bekerglas van 500 milliliter met 200 milliliter 10%Hank's oplossing met 1% methyleenblauw voor desinfectie bij 28 Graden Celsius.De laadsnelheid bedraagt niet meer dan één embryo in elke oplossing van 2 milliliter. Twee, bereiding van microplastic suspensuspensingen. De stamoplossing van groene fluorescerend gelabelde polystyreenparels met een nominale diameter van 500 nanometer wordt gedurende 10 minuten gesoniceerd.Verdun de voorraadoplossing met de oplossing van 10% Hank om de gewenste belichtingsoplossingen te produceren, namelijk 0,1, 1 en 10 milligram per liter. De belichtingsoplossingen van microplastics worden altijd vers bereid voor blootstelling. Drie, microplastic blootstelling.Zes nieuw bevruchte embryo's worden willekeurig geselecteerd en vervolgens overgebracht naar elke put van zes putplaten met vijf milliliter microplastic-oplossingen met verschillende concentraties. De controlegroepen met de oplossing van 10% Hank zijn inbegrepen. Drievoudsputten, met in totaal 18 embryo's, worden voor elke behandeling gebruikt.De embryo's worden geïncubeerd onder dezelfde licht-donker cyclus en temperatuur als volwassenen, en worden elke 12 uur waargenomen. De doden worden onmiddellijk verwijderd. De microplastic oplossingen worden elke 24 uur voor 90% vernieuwd.Tijdens de blootstellingsperiode worden de vissen niet gevoerd. Over het algemeen begint het uitkomen van embryo's na 48 uur na de bevruchting en voltooit het ongeveer 72 uur na de bevruchting. Vier, beoordeling van de verdeling van microplastics.Op 24-48-72-96-en 120-uur na de bevruchting worden de embryo's en larven, één van elk van de drie replica's, willekeurig geselecteerd en gespoeld met de oplossing van 10%Hank. De embryo's en larven worden gerangschikt en voorbereid voor observatie. Vooraf worden de larven overgebracht in een petrischaal en blootgesteld aan 0,016% tricaine voor anesthesie.De vissen worden waargenomen met fluorescentiemicroscoop en afgebeeld met beeldvormingssoftware. De fluorescentie-intensiteit bij vissen wordt verder gekwantificeerd met ImageJ NIH. Representatieve resultaten.In de resultaten is te zien dat microplastics op een concentratieafhankelijke manier kunnen bioaccumuleren in zebravisembryo's en larven. Vóór het uitkomen wordt sterke fluorescentie gevonden rond het embryonale koraal; terwijl bij zebravislarven de dooierzak, het pericard en het maagdarmkanaal de belangrijkste geaccumuleerde locaties van microplastics zijn. discussie. Dit resultaat zal ons begrip over de toxiciteit van microplastics voor vissen bevorderen, en de hier beschreven methode kan mogelijk worden gealdaliseerd om de accumulatie en distributie van andere soorten fluorescerende materialen in de vroege levensfasen van zebravissen te bepalen.Aangezien het chorion zal fungeren als een effectieve barrière tegen de deeltjes met grote afmetingen, kan het dechorionatieproces vóór blootstelling nodig zijn. Het embryo met koraal intact wordt echter meer aanbevolen om de ecotoxiciteit van verontreinigende stoffen te beoordelen bij het overwegen van de blootstellingstoestand in de echte wereld. Het gedrag van microplastics in de oplossing is ook van cruciaal belang voor de biologische beschikbaarheid.De fysisch-chemische kenmerken van microplastics moeten gedurende de blootstellingsduur worden gevolgd.

accumulation-distribution-fluorescent-microplastics-early-life-stages

Research

JoVE Journal

Environment

Milieu

Wij presenteren een nieuwe methode voor microgavage van zebravislarven met gebruik van standaardapparatuur voor embryo-microinjectie en stereomicroscopie. We tonen aan dat microgavage een veilige en efficiënte techniek is die nuttig is voor het toedienen van gecontroleerde hoeveelheden uiteenlopende materialen specifiek in het lumen van de darm van de zebravislarve.

Microgavage van zebravis Larven

Source: Zhang, X., et al. A Zebrafish Embryo Model for In Vivo Visualization and Intravital Analysis of Biomaterial-associated Staphylococcus aureus Infection. J. Vis. Exp. (2019)This video demonstrates fluorescence imaging of zebrafish embryos injected with Staphylococcus aureus, enabling quantification of infection progression and bacterial distribution to assess the impact of biomaterial microspheres on host-pathogen interactions in vivo.

 Fluorescence Imaging of Biomaterial-Associated Bacterial Infection in Zebrafish Embryos

Hier beschreven is een protocol voor de semi-geautomatiseerde beeldvorming van weefsel-specifieke fluorescentie in zebravis embryo's.

Semi-geautomatiseerde beeldvorming van Tissue-specifieke fluorescentie in zebravis embryo&#39;s

De zebravis is een populaire tool voor het modelleren chronische nierziekte (CKD). Echter, hun kleine formaat maakt het onmogelijk om de nierfunctie te evalueren met behulp van traditionele methoden. We beschrijven een fluorescerende kleurstof nier speling assay 1 dat kwantitatieve analyse van de zebravis nierfunctie bij CKD maakt.

Evaluatie van de zebravis Kidney Functie Met behulp van een TL-Ontruiming Assay

De zebravis is een uitstekend modelsysteem voor genetische en ontwikkelingsstudies. Het implanteren van kralen is een waardevolle techniek voor weefselmanipulatie die kan worden gebruikt om ontwikkelingsmechanismen te onderzoeken door veranderingen in lokale cellulaire omgevingen te introduceren. Dit protocol beschrijft hoe microkralenimplantatie in de zebravis-embryo moet worden uitgevoerd.

Microkraal Implantatie in de zebravis embryo

Zebravissen ontwikkelen zich tot een waardevol model voor de verwerking van voedingslipiden en metabole ziekten. Beschreven worden protocollen van lipide-rijke larvale voeders, live beeldvorming van voedingsfluorescente lipide-analoga en kwantificering van voedselinname. Deze technieken kunnen worden toegepast op een verscheidenheid aan screenings-, beeldvormings- en hypothesegestuurde onderzoekstechnieken.

Vetrijke Feeding Paradigm voor larvale zebravis: Voeden, Live Imaging, en kwantificering van voedselinname

Het doel van dit protocol is voor het meten van de transittijd van fluorescently geëtiketteerde voedsel door de darm van larvale zebrafish in een hoge doorvoersnelheid mode.

High-throughput meting van darm transittijd met behulp van larvale zebravis

Aanwezig is een gedetailleerd protocol voor het gebruik van zebravis embryo's Tg (vtg1: mCherry) voor de detectie van oestrogene effecten. Het protocol heeft betrekking op de voortplanting van de vis en de behandeling van embryo's, en benadrukt de detectie, documentatie en de evaluatie van fluorescerende signalen veroorzaakt door hormoonontregelende verbindingen (EDC).

Met behulp van Tg (Vtg1:mcherry) Zebrafish Embryo's om de oestrogene effecten van endocriene verstorende verbindingen te testen

Een gedetailleerd experimenteel protocol wordt gepresenteerd in dit document voor de evaluatie van neurobehavioral toxiciteit van milieuverontreinigende stoffen met behulp van een zebravis larven model, met inbegrip van het blootstellingsproces en tests voor neurobehavioral indicatoren.

Neurobehavioral Effecten van milieuverontreinigende stoffen op zebravissenlarven bestuderen

We demonstreren een methode die gebruik maakt van snelle confocale scanscopie om live beeldvorming uit te voeren van microgliacellen in het zich ontwikkelende optische tectum van zebravissen, waardoor de dynamiek van deze cellen in vivo kan worden geanalyseerd.

Live beeldvorming en karakterisering van de dynamiek van microglia in het zebravisembryo

Dit protocol beschrijft een screeningprocedure voor geneesmiddelen bij zebravislarven 3-7 dagen na de bevruchting, gevolgd door morfologische beoordeling.

Screening van kleine moleculen en toxiciteitstesten bij zebravislarven in een vroeg stadium

Leer hoe fluorescerende microplastics zich ophopen en verspreiden in zebravisembryo's en larven. Deze methode maakt visuele kwantificering van bioaccumulatie mogelijk voor ecotoxicologisch onderzoek.

Accumulatie en distributie van fluorescerende microplastics in de vroege levensfasen van zebravissen

Meer video's verkennen