Kipembryo gebruiken als een krachtig hulpmiddel bij de beoordeling van ontwikkelingscarditoxiciteiten

Hallo allemaal. Ik ben Qixiao Jiang, universitair hoofddocent bij de afdeling Toxicologie, School of Public Health aan de Qingdao University. Namens mijn onderzoeksgroep ga ik de troeven presenteren van het gebruik van het kippenembryo bij de ontwikkeling van onze cardiotoxiciteitsbeoordeling.

Kippenembryo is een klassiek ontwikkelingsmodel dat meerdere voordelen heeft, zoals eenvoudige manipulatie, hoge toegankelijkheid, gesloten onafhankelijk systeem, enzovoort. Werken met meerdere milieuverontreinigende stoffen, zoals fenollootzuur. Dieseluitlaat, met name de materie op de koolstofnanobuizen.

We hebben een meervoudige blootstellingsmethode in het lab, maar voor grotere oorzaken worden de functionele beoordelingen ook routinematig uitgevoerd. In deze video laat ik je de details zien, van belichtingsmethoden en de morfologische functionele beoordelingsmethoden. Neem gerust contact met ons op als u geïnteresseerd bent.

Bedankt. Hier zijn onze belichtingsmethoden die ik u kan voorstellen. De eerste methode die ik ga introduceren is een luchtcelinjectie, waarbij je direct in de luchtcel injecteert.

Reinig het oppervlak van de eieren met polyjodideoplossing. Dit is in de handel verkrijgde polyjodideoplossing, verdund met gedeï gedeïdiseerd water, 1/5. En dan droog ik de eierschaal met tissuepapier, zonder te schrobben.

Het is belangrijk omdat schrobben hun beschermende laagcoating aan de buitenkant van de schaal zal breken. Reinigde alle eieren in de donkere kamer en markeer de luchtcel met een potlood. Sluit eieren met scheuren op de schaal uit.

Sluit ook eieren met luchtcellen aan de zijkant uit. Als dat een stompe punt heeft, is het zeer onwaarschijnlijk dat die normaal uitkomen. Reinig het luchtcelgebied en de metalen sonde met 75% alcohol.

Veeg ze droog en boor vervolgens een klein gaatje in het midden van het luchtcelgebied met de sonde. Steek de sonde niet diep in de luchtcel. Breek in plaats daarvan alleen de schaal met de punt van de sonde.

Als het gat nog steeds niet groot genoeg is, breekt u de schaal opnieuw in de buurt van het bestaande gat, totdat deze groot genoeg is om u de punt te laten inbrengen. Steek de pipetpunt in het gat met de punt die het binnenste membraan raakt. Injecteer het mengsel langzaam en houd het daar minstens 10 seconden vast.

Dit om de gedoseerde olie volledig te kunnen doseren. En verwijder dan de punt. Sluit het gat af met een borstel en een druppel gesmolten paraffine.

Pas op dat u gesmolten paraffine niet op het innerlijke geheugen druppelt. Eenmaal verzegeld, plaatst u eieren in de incubator totdat ze het gewenste embryonale stadium bereiken. De tweede methode die ik ga introduceren is de Micro injectie.

Allereerst moeten de eieren worden gereinigd en behandeld zoals beschreven in de luchtinjectiesectie. Deze procedure moet worden uitgevoerd in een gesteriliseerde kap. Steriliseer het luchtcelgebied en instrumenten met aceton.

Boor een klein gat in het midden van het luchtcelgebied met de metalen sonde. Steek de sonde niet diep in de luchtcel, anders kan het binnengeheugen beschadigd raken. Gebruik vervolgens hetzelfde proces om het gat voorzichtig te vergroten tot de diameter ongeveer twee millimeter is.

Dit kan de verhoudingsbevestiging van het innerlijke geheugen mogelijk maken. Laad vervolgens de oplossing in een micro-injector en steek de naald voorzichtig door het gat in het binnenste membraan gedurende ongeveer drie millimeter. Doseer de oplossing voorzichtig en verwijder vervolgens de naald.

Houd de naald zo loodrecht mogelijk. Sluit het gat dun af met een klein stukje tape. Bedek het gat volledig om uitdroging en dood van embryo's tijdens de daaropvolgende incubatie te voorkomen.

De derde methode die ik ga introduceren is de luchtcelinfusie. waar u een gasverontreiniging in de luchtcel inbrengen. Reinig en hanteer de eieren zoals beschreven in de luchtcelinjectiesectie.

En dan kun je eieren lezen tot embryonale dag 17. Behandel de eieren op embryonale dag 17 om het luchtcelgebied te markeren. Haal op de embryonale dag 18 eieren uit de incubator, steriliseer het luchtcelgebied en de instrumenten met aceton.

En boor dan voorzichtig twee kleine gaatjes aan twee kanten van de luchtcel. Een daarvan is voor injectie van gas of aerosol. De andere is voor het uitbreiden van onze lucht.

Controleer zorgvuldig de grootte van de gaten, zodat de zijkant van het injectiegat net genoeg is om de katheternaald in te steken, terwijl de diameter van het uitzetgat iets groter moet zijn. Ongeveer een millimeter in diameter. Dit is de monsterzak die we gebruiken om het doelgas of de aerosol vast te houden.

U kunt vervangen door elk apparaat dat u gebruikt. Giet voorzichtig 10 ml gas of aerosol in een spuit. En bevestig de spuit voorzichtig aan onze katheternaald met de binnenste naaldafstandsbediening, zodat deze zacht is.

Steek deze katheternaald voorzichtig in het infuusgat. Als het eenmaal binnen is, oefen je druk uit op de katheternaald. Dit om de lekkage van de injectieplaats te minimaliseren.

Een andere vinger kan worden rondgeplaatst met het verdrijvingsgat voor uw infusiebevestiging. Als u de infusie voorzichtig doet, moet de luchtstroom uit het verwijdergat gemakkelijk worden gevoeld. Dat is de oorspronkelijke lucht in de luchtcel die wordt verdreven.

Wanneer de infusie is voltooid, sluit u beide gaten onmiddellijk af. Deze tapes en de breng de eieren terug naar je couveuse. Ik kan ons eindpuntbeoordelingsproces introduceren.

Verdoof de dieren volledig met pentobarbital 33 mg/kg. IP-injectie getest door de openingen. Leg vervolgens kippen op de operatietafel.

Steriliseer het buikgebied en de elektroden met ethanol. Plaats vervolgens continu twee naaldelektroden van twee zijden van de buik. Zorg ervoor dat de naalden niet in de buikholte komen door de huid een beetje op te tillen.

En steek de naald vanaf daar. Eenmaal ingebracht, duwt u de naald voorzichtig naar voren totdat deze de zijkant van de borstholte bereikt. Zorg ervoor dat de naald niet diep in het lichaam gaat of uitsteekt van de huid.

Doe vervolgens de metingen met een elektrocardiografisch instrument. Andere seminarie-instrumenten die in staat zijn om ecg's te gebruiken, kunnen ook worden gebruikt. Dit is onze tweede eindpunt beoordelingsmethode is om in kaart te brengen voor Motrin.

Dit is de dwarsdoorsnede van het hart in de weg van HME. Dit is de juiste ventrikel waarmee we gaan meten. Om dit te doen, gebruiken we twee linialen.

Liniaal 1 en liniaal 2. Nu kopiëren we er gewoon een naar het scherm en passen we het formaat aan de juiste grootte aan en roteren dat vervolgens. En we verplaatsen het zodat de twee uiteinden van de horizontale lijn rusten op de 2 uiteinden van de 3 rechter ventrikelwanden.

En nu hebben we zeven meetlijnen die over onze drie rechter ventrikelwand gaan. Nu kopiëren we ook de secundaire liniaal naar de afbeelding. We wijzigen ook het formaat een beetje en roteren en vervangen dat zodat het op elkaar wordt geplaatst.

Deze horizontale lijn loopt parallel met de buitenwand van de rechter hartkamer. En de loodrechte zou over het punt gaan waar de witte stoflijnen van de liniaal de binnenmuur of de rechterventrikel ontmoeten. En dan maken we meetpunten zodat het later gemeten kan worden met afbeelding J.We herhalen dit proces 7 keer per monster, zodat onze representatieve meting van de rechterventrikel.

Ik zal je een samenvatting van de huidige resultaten laten zien. Dit is de PFOA-injectie in het ei vóór incubatie, en u kunt zien dat met het verhogen van die van de injectie de serumconcentratie LPF in serum effectief is toegenomen. Volgens de demonstratie, de effectiviteit, van de micro-injectie.

Je kunt zien dat A controle is, en de B, is waar de antivirus express in grote fluorescentie q-eiwit is geïnjecteerd. Je ziet een sterke fluorescentie. En dit is de demonstratie voor de effectiviteit van de epitheelinfusie.

Je kunt zien dat met de infusie dramatische glasvezelveranderingen zijn waargenomen in het myocardweefsel. Oké. En je kunt ook zien dat de R-R-intervallen van de broedkippen 0, 1 en 2 weken zijn. Het veranderde ook aanzienlijk na de infusie met dieseluitlaat.

Dit geeft aan dat u hiermee rekening houdt, deze methode. Hier kunt u ook zien dat de effectiviteit van de epitheelinfusie in dit voorbeeld. je kunt zien dat de rechter ventrikels van het hart effectief zijn toegenomen na aerosol doordrenkt met dieseluitlaat.

En natuurlijk gebruiken we hier de histomorfometrische methoden. We laten het je gewoon zien. Dit is heel effectief. Oké.

Dit zijn alle methoden die ik je ga presenteren. Ik hoop dat dit het werk van anderen met kippenembryo kan vergemakkelijken als een krachtig onderzoeksinstrument in de ontwikkelingstoxicologie. Fijne dag.