Name: Beoordeling van agrochemisch risico voor gepaarde honingbijenkoninginnen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-03T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Leer een laboratoriummethode om agrochemische risico's voor honingbijenkoninginnen te beoordelen met behulp van het Queen Monitoring Cage-systeem. Dit protocol maakt gecontroleerde blootstelling aan imidacloprid mogelijk en monitort de effecten op eiproductie en larvenontwikkeling.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dank aan Dr. Amy Cash-Ahmed, Nathanael J. Beach en Alison L. Sankey voor hun hulp bij het uitvoeren van dit werk. Vermelding van handelsnamen of commerciële producten in deze publicatie is uitsluitend bedoeld om specifieke informatie te verstrekken en impliceert geen aanbeveling of goedkeuring door het Amerikaanse ministerie van Landbouw. USDA is een aanbieder van gelijke kansen en werkgever. Dit onderzoek werd ondersteund door een subsidie van het Defense Advanced Research Projects Agency # HR0011-16-2-0019 aan Gene E. Robinson en Huimin Zhao, USDA-project 2030-21000-001-00-D, en de Fenotypische Plasticiteitsonderzoekservaring voor Community College-studenten aan de Universiteit van Illinois in Urbana Champaign.

1. QMC assemblage
<ol><li>Monteer MGM's uit onderdelen(figuur 1A)met een enkele eierlegplaat (ELP) ingevoegd zoals weergegeven in figuur 1B. Voeg geen voedingsbuizen toe totdat de werknemers aan de kooi zijn toegevoegd. Bedek de 4 feedergaten tijdelijk met tape van laboratoriumkwaliteit.</li>
	<li>Plaats de koninginnenuitsluiter en de deur van de voerkamer boven de voederkamer om te voorkomen dat de koningin de voederkamer binnengaat en contact maakt met het behandelde dieet. Zie Fine et al.32 voor verdere montagedetails.</li>
	<li>Verzamel de waskamframes met het afgedekte werksterbroed uit honingbijenkolonies 24 uur vóór volwassen eclosie en plaats ze in een incubator (34,5 °C) in een broedkast. Borstel 24 uur later de gesloten bijen van de frames en in een open container die is bekleed met een insectenbarrièreverf (bijv. Fluon) om te voorkomen dat de bijen eruit kruipen.</li>
	<li>Voeg ten minste 50 bijen in gewicht (5 g ≈ 50 bijen44,45) toe aan de legkamer van elke QMC. Om ervoor te zorgen dat een diverse genetische pool van werknemers in het experiment wordt vertegenwoordigd, moet u een ongeveer gelijk aantal werkbijen uit ten minste drie kolonies verkrijgen en deze mengen voordat u ze aan de MGM's toevoegt. OPMERKING: Nieuw gesloten werkbijen van minder dan 1 dag oud kunnen niet vliegen of steken vanwege hun onderontwikkelde vluchtspieren en ongeharde cuticula. Als ze op deze leeftijd worden toegevoegd, is het niet nodig om ze te verdoven voordat ze worden behandeld. Ze kunnen worden gewogen door bijen voorzichtig uit de container te scheppen met behulp van een kleine maatbeker van 1/4 kopje volume en ze in een tweede container te plaatsen (bekleed met insectenbarrièreverf, bijvoorbeeld Fluon) die op een weegschaal is geteerd. De oppervlakte van de frames bedekt met afgedekt broed moet ongeveer gelijk zijn om ervoor te zorgen dat bronkolonies gelijkelijk vertegenwoordigd zijn in de QMC-arbeiderspopulaties. Homogenisatie van werkbijen kan worden bereikt door nieuw gesloten bijen uit frames uit alle kolonies in dezelfde container te borstelen en ze 5 minuten te laten mengen voordat ze aan MQMC's worden toegevoegd.</li>
	<li>Voeg de feeders toe die sucrose-oplossing, water en stuifmeelsupplement bevatten (zie rubriek 2).</li>
	<li>Stel de individuele gepaarde koninginnen bloot aan CO2-gas om het leggen van eieren46 te stimuleren en de overdracht naar QMC te vergemakkelijken.<ol>
<li>Gebruik koninginnen gekocht bij een commerciële fokker binnen 48 uur na ontvangst. Terwijl de koningin nog in de verzendkooi zit, plaats je hem in een doorzichtige plastic zak. Plaats het ene uiteinde van een plastic buis die is aangesloten op een CO2-gasbus in de zak en open voorzichtig de klep van de bus om het CO2-gas te laten stromen.</li>
		<li>Wanneer de zak is opgeblazen met gas, sluit u tegelijkertijd de busklep en houdt u de zak gesloten om het gas binnenin op te vangen. Houd de zak gesloten gedurende 30 s of totdat de koningin is gestopt met bewegen. Verwijder de koningin en open de verzendkooi zodra wordt waargenomen dat ze bewusteloos is.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Open gedeeltelijk de deur naar de eierlegkamer, plaats de bewusteloze koningin voorzichtig naar binnen en sluit het deksel, zorg ervoor dat de koningin of werksters binnenin niet worden verpletterd. Voeg de tweede legplaat toe aan elke QMC zoals weergegeven in figuur 1C. Plaats een stuk laboratoriumtape over de bovenkant van de twee ELPs om te voorkomen dat ze zich van het QMC-frame scheiden en voorkomen dat werknemers de kooi verlaten.</li>
	<li>Plaats de kooien in een donkere incubator met stabiele omgevingsomstandigheden van 34 ± 0,5 °C en 60% ± 10% relatieve vochtigheid, zoals de omstandigheden in een normale kolonie.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62316/62316fig01.jpg"> Figuur 1. A: Gedemonteerde QMC. B: Gedeeltelijk geassembleerde QMC met 1 ELP geplaatst. C: Volledig geassembleerde QMC met 2 ELPs. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62316/62316fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
2. Het bereiden en toedienen van diëten doorspekt met agrochemicaliën
<ol><li>Om 1000 g 50% (g/g) sucrose-oplossing te bereiden, plaatst u een roerstaaf in de bodem van een schone glazen reagensfles van 1 L. Voeg 500 g sucrose en 500 ml gedeïoniseerd water toe. Schroef het deksel van de fles los en gebruik een verwarmde roerplaat op laag vuur om de oplossing te mengen totdat alle sucrose is opgelost. Laat de oplossing afkoelen tot kamertemperatuur voordat u de agrochemische stamoplossingen toevoegt.</li>
	<li>Bereid de stamoplossingen van agrochemicaliën in een geschikt oplosmiddel, zoals aceton, in een concentratie die aan het dieet kan worden toegevoegd om de gewenste eindconcentratie van de landbouwchemische stof van belang te bereiken. OPMERKING: Bij het gebruik van aceton als oplosmiddel voor voertuigen bepalen de richtlijnen van de Organisatie voor Economische Samenwerking en Ontwikkeling (OESO) dat de uiteindelijke concentratie aceton in de voeding moet worden ≤ 5% voor chronische orale toxiciteitstests op volwassen honingbijen47. Sommige oplosmiddelen zoals n-methyl-2-pyrrolidon5,31 en dimethylsulfoxide25 kunnen echter toxische effecten onder deze concentratie uitoefenen, dus het wordt aanbevolen om de oplosmiddelconcentraties zo laag mogelijk te houden in het behandelingsdieet. Afhankelijk van het volume en het type oplosmiddel dat wordt gebruikt, kan het nodig zijn om zowel een oplosmiddelcontrolegroep als een negatieve controlegroep op te nemen om ervoor te zorgen dat mogelijke effecten als gevolg van oplosmiddeltoxiciteit worden gedetecteerd. Bij het gebruik van geformuleerde producten moet de hoeveelheid van het gebruikte product worden aangepast op basis van de concentratie die in de formulering aanwezig is. Afhankelijk van de stabiliteit van de landbouwchemische stof die van belang is in het oplosmiddel, kunnen stamoplossingen tot 2 weken bij -20 °C worden bewaard.</li>
	<li>Selecteer subletale doses op basis van de resultaten van OESO-test nr. 245: Honingbij (Apis mellifera L.),Chronische orale toxiciteitstest (10-daagse voeding)47en identificeer de relevante literatuur door de Ecotox-kennisbank48te doorzoeken .</li>
	<li>Dien de agrochemische behandelingen toe in een sucrose-oplossing, een commercieel pollensupplement (indien beschikbaar als poeder), of beide. Bereid het experimentele dieet voor gebruik dezelfde dag door een geschikte hoeveelheid bouillonoplossing toe te voegen aan gekoelde / kamertemperatuur 50% sucrose-oplossing (w / w). Meng grondig door te vortexen of met een roerstaaf op gemiddelde snelheid. Voeg voor pollensupplementen de agrochemische geregen sucrose-oplossing toe aan het poedervormige supplement in plaats van de siroop volgens de protocollen van de fabrikant, en zorg ervoor dat het volume van de gebruikte voorraadoplossing wordt aangepast aan het uiteindelijke gewicht van het pollendieet. Zie tabel 1 voor bijvoorbeeld berekeningen.</li>
	<li>Bereid de voedingsbuizen voor uit microcentrifugebuizen van 2 ml.<ol>
<li>Voor vloeibare dieetvoeders verwarmt u de punt van een naald van 20 gauge op een kookplaat / kookplaat en prikt u de bodem van de buis twee keer door. Sluit het deksel van de buis en pipetteer ongeveer 1,5 ml sucrose-oplossing of water door een van de prikgaten. Zet de buis naar beneden met de doorboorde kant naar boven totdat deze aan de QMC is toegevoegd.</li>
		<li>Gebruik voor pollensupplementen een scheermesje om de bodem van de buis af te snijden. Sluit het deksel en duw een bolletje stuifmeelsupplement van 1-2 g in de tube totdat het het deksel raakt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Noteer de gewichten van de feeder voordat u ze in de MGM's plaatst. Houd ongebruikt dieet niet langer dan 48 uur op 4 °C.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Gewenste concentratie</td>
			<td>Gewenste concentratie van oplosmiddelvoertuigen</td>
			<td>Gewenste uiteindelijke hoeveelheid/massa sacharoseoplossing</td>
			<td>Garantie van voorraadoplossing</td>
			<td>Imidacloprid in voorraad oplossing</td>
			<td>Aanbevolen recept voor voorraadoplossing</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sucrose oplossing</td>
			<td>10 ppb (met w/w)</td>
			<td>0,05% (v/v)</td>
			<td>81,45 ml/100 g*</td>
			<td>40,7 μL</td>
			<td>0,001 mg/40,7 μL</td>
			<td>0,02 mg/814 μL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Pollen supplement</td>
			<td>10 ppb (met w/w)</td>
			<td></td>
			<td>10 g**</td>
			<td>4,07 μL</td>
			<td>0,0001 mg/4,07 μL</td>
			<td>0,02 mg/814 μL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sucrose oplossing</td>
			<td>50 ppb (w/w)</td>
			<td>0,05% (v/v)</td>
			<td>78,5 ml/100 g*</td>
			<td>40,7 μL</td>
			<td>0,005 mg/40,7 μL</td>
			<td>0,1 mg/814 μL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Pollen supplement</td>
			<td>50 ppb (w/w)</td>
			<td></td>
			<td>10 g**</td>
			<td>4,07 μL</td>
			<td>0,0005 mg/4,07 μL</td>
			<td>0,1 mg/814 μL</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: Voorbeeldrecepten voor behandelde sucrose-oplossing, pollensupplement en stamoplossing. *Volume gebaseerd op de dichtheid van 50% (w/w) sucrose-oplossing (1,228 g/ml). ** De dichtheid van het pollensupplement zal variëren afhankelijk van het product dat wordt gebruikt, maar als dit oplosmiddelvolume wordt gebruikt, zal de uiteindelijke oplosmiddelconcentratie in het pollensupplement binnen het gewenste bereik van ≤ 5 volumeprocent liggen.
3. Monitoring - Eierproductiesnelheid
<ol><li>Kwantificeer de ei leg 1 tot 2 keer per dag in de ochtend en/of avond. Begin met het verwijderen van MCC's uit de broedmachine om te controleren op eieren. OPMERKING: In een succesvol experiment zal de eiproductie in de meeste controle-MFC's binnen 3 dagen na de eerste kooiassemblage beginnen. Haal slechts zoveel MCC's tegelijk uit de couveuse die binnen 10 minuten gecontroleerd en gevoed kunnen worden. Langere perioden buiten de incubator kunnen de eiproductie verstoren.</li>
	<li>Onderzoek de achterkanten van de duidelijke ELPs voor eieren. Als er eieren aanwezig zijn, verwijder dan het deurpaneel voor de plaat van belang. Verwijder de tape van over de ELPs en schuif het deurpaneel voorzichtig tussen de ELP en de bijen in de QMC, zorg ervoor dat u geen bijen verplettert die de cellen in de ELPs reinigen.</li>
	<li>Verwijder het ELP met het deurpaneel op zijn plaats en tel en registreer het aantal eieren in de ELP-cellen. Verwijder de eieren door op de rand van de ELP te tikken, open celzijde naar beneden, op een hard oppervlak (zoals de lip van een afvalcontainer). Zodra de eieren eruit vallen, vervangt u de lege ELP in de QMC. Verwijder en vervang voorzichtig het deurpaneel achter de ELP aan de buitenkant van de QMC. Herhaal dit indien nodig met de tweede ELP en vervang de tape over de QMC wanneer u klaar bent. OPMERKING: De eiproductie neemt over het algemeen af en de mortaliteit neemt toe in MQMC's na 2 weken32,33, daarom wordt aanbevolen om experimenten na 14 dagen af te sluiten.</li>
</ol>4. Monitoring - Voedselconsumptie
<ol><li>Vervang al het voedsel dat overblijft in QMC-feeders door vers bereid dieet om de twee dagen. Bereid nieuwe voedingsbuizen (inclusief water) voor en weeg ze voordat u MQMCs uit de incubator verwijdert voor monitoring. Verwissel alle oude buizen met nieuwe en weeg oude buizen voordat u niet-geconsumeerde voeding weggooit. Vergelijk het uiteindelijke gewicht van de voedingsbuis en het niet-geconsumeerde dieet met het gewicht van dezelfde voedingsbuis voordat u deze in de QMC plaatst om de dieetconsumptie te schatten.</li>
	<li>Tussen de dagen dat feeders worden gepland om te worden vervangen, controleert u de dieetconsumptie eenmaal per dag (op hetzelfde moment dat MQMC's worden gecontroleerd op eierproductie) om ervoor te zorgen dat feeders nooit leeg zijn. Als een voedingsbuis leeg of bijna leeg is, verwijder deze dan, vul deze bij, noteer het gewicht van de buis voor en na en voeg het verschil toe aan het totaal van de 2-daagse dieetconsumptie voor de QMC.</li>
</ol>5. Monitoring - Embryo levensvatbaarheid
<ol><li>Verwijder op een geselecteerd punt tijdens een QMC-experiment ELPs met vers gelegde eieren uit de QMC volgens stap 3,maar verwijder geen eieren uit de ELP.</li>
	<li>Dek de ELP af met een universeel microplaatdeksel en plaats het in een exsiccator met een verzadigde K2SO4-oplossing (150 g K2SO4 in 1 L water, bewaard in een ondiepe schaal). OPMERKING: Sommige zout moet zichtbaar zijn op de bodem van het gerecht nadat het mengsel op temperatuur is gekomen in de incubator.</li>
	<li>Bewaar de exsiccator in een incubator die is ingesteld op 34,5 °C, wat resulteert in een relatieve vochtigheid van 95% in de exsiccator, vergelijkbaar met de omstandigheden die Collins49gebruikt. OPMERKING: Bijna alle eieren komen uit binnen 72 ± 6 uur nadat ze zijn gelegd49, vandaar dat de broedsnelheden al 78 uur nadat de ELPs uit de QMC zijn verwijderd, kunnen worden beoordeeld. Een "C" -vormige larve in de bodem van de cel is indicatief voor een succesvolle uitkomst. Enige variatie in deze timing is mogelijk als de eieren bijvoorbeeld drones zijn en geen werknemers50.</li>
</ol>6. Steekproef van werknemers
<ol><li>Als de MGM's zijn bevolkt met overtollige werknemers, bemonster dan de werkbijen op een geselecteerd tijdstip tijdens het experiment voor beoordeling van door de behandeling veroorzaakte veranderingen in hun fysiologie. Voer de verzamelingen uit in combinatie met dagelijkse voedings- en eiertelactiviteiten om de tijd te minimaliseren waarvoor de MQMCs zich buiten de incubator bevinden.</li>
	<li>Plaats voor de bemonstering een deurpaneel tussen een ELP en de binnenkant van de QMC en verwijder de ELP. Til het deurpaneel voorzichtig op ongeveer 0,5 cm van de basis van de kooi en verwijder een werkbij uit de QMC met een vederlicht pincet. Om te voorkomen dat bijen ontsnappen, bedekt u delen van de opening van 0,5 cm indien nodig met een gehandschoende vinger of een stuk katoen.</li>
	<li>Bewaar de verzamelde bij voor vervolganalyse en herhaal dit proces totdat het gewenste aantal monsters is verzameld. Voor genexpressieanalyse wordt het sterk aanbevolen om bijen in vloeibare stikstof te bevriezen en onmiddellijk te bewaren bij -80 °C51.</li>
</ol>7. Sterfte van werknemers
<ol><li>Beoordeel de sterfte van werknemers tijdens het experiment door het aantal dode bijen op de bodem van de voederkamer en de legkamer van eieren te tellen. Voer deze beoordeling uit in combinatie met dagelijkse kwantificering van het leggen van eieren.</li>
	<li>Verwijder met een tang voorzichtig de dode bijen door de feedergaten en bedek het gat met een gehandschoende vinger of een stuk katoen terwijl de tang niet wordt ingebracht.</li>
	<li>Verwijder de dode bijen uit de eierlegkamer door het deurpaneel voorzichtig op ongeveer 0,5 cm van de basis van de kooi te tillen en een tang in te brengen. Om te voorkomen dat bijen ontsnappen, bedekt u delen van de opening van 0,5 cm indien nodig met een gehandschoende vinger of een stuk katoen.</li>
	<li>Beoordeel de sterfte van de werknemer aan het einde van het experiment door alle dode bijen uit de MGM's te verwijderen en te tellen met behulp van de eerder beschreven methoden voordat de resterende bijen worden geëuthanaseerd. OPMERKING: Bij afwezigheid van werkbijen zullen koninginnen geen eieren produceren en binnen 24 uur verhongeren. Daarom, als alle werknemers in een QMC worden waargenomen dat ze dood zijn, moet de QMC uit het experiment worden verwijderd. Evenzo, als een koningin sterft tijdens het experiment, moet de QMC worden verwijderd en moeten de gegevens op de juiste manier worden gecensureerd.</li>
</ol>

De auteurs hebben geen belangenconflicten te melden.

De vruchtbaarheid van vrouwelijke solitaire insecten en koninginnen in eusociale insectenkolonies kan worden beïnvloed door abiotische stressoren zoals agrochemicaliën25,28,29,30,33. Bij honingbijen kunnen de effecten van agrochemicaliën op koninginnen indirect zijn, omdat ze kunnen optreden via veranderingen in hun verzorging en voeding door werkbijen. Onze r...

Vanwege de toegenomen wereldwijde vraag naar landbouwproducten vereisen moderne landbouwpraktijken vaak het gebruik van agrochemicaliën om tal van plagen te bestrijden waarvan bekend is dat ze de gewasopbrengsten verminderen of schaden1. Tegelijkertijd vertrouwen de telers van veel fruit-, groente- en notengewassen op de bestuivingsdiensten van commerciële honingbijenkolonies om overvloedige gewasopbrengsten te garanderen2. Deze praktijken kunnen ertoe leiden dat bestuivers, waaronder honingbijen (Apis mellifera), worden blootgesteld aan schadelijke niveaus van residuen van bestrijdingsmiddelen3. Tegelijkertijd vereist de wijdverspreide aanwezigheid van parasitaire Varroa destructor-mijtbesmettingen in honingbijenkolonies vaak dat imkers hun bijenkorven behandelen met miticiden, wat ook negatieve effecten kan hebben op de gezondheid en levensduur van de kolonie4,5 ,6. Om schadelijke effecten van agrochemische producten te verminderen en te beperken, is het noodzakelijk om hun veiligheid voor honingbijen volledig te evalueren voordat ze worden geïmplementeerd, zodat aanbevelingen voor het gebruik ervan kunnen worden gedaan om nuttige insecten te beschermen.
Momenteel vertrouwt het Environmental Protection Agency (EPA) op een gelaagde risicobeoordelingsstrategie voor blootstelling aan honingbijenbestrijdingsmiddelen, die laboratoriumtests op volwassen bijen en soms honingbijlarven omvat7. Indien laboratoriumtests van een lager niveau de bezorgdheid over toxiciteit niet wegnemen, kunnen veld- en semi-veldtests van een hoger niveau worden aanbevolen. Hoewel deze laboratoriumtests waardevol inzicht bieden in de mogelijke effecten van agrochemicaliën op de levensduur van werknemers, zijn ze niet noodzakelijkerwijs voorspellend voor hun effecten op koninginnen, die biologisch aanzienlijk verschillen van werknemers8 en gedragsmatig9. Bovendien zijn er tal van potentiële effecten van agrochemicaliën op insecten voorbij de mortaliteit, die aanzienlijke gevolgen kunnen hebben voor sociale insecten die afhankelijk zijn van gecoördineerd gedrag om te functioneren als een kolonie-eenheid10,11.
Hoewel sterfte het meest overwogen effect is van agrochemische pesticiden12, kunnen deze producten een breed scala aan effecten hebben op zowel doel- als niet-doel geleedpotigen, waaronder veranderd gedrag13,14,15,16,afstoting of aantrekkingskracht17,18,19,veranderingen in voedingspatronen20,21,22 , en verhoogde of verminderde vruchtbaarheid20,21,22,23,24,25. Voor sociale insecten kunnen deze effecten systemisch kolonie-interacties en -functies verstoren11. Van deze functies kan reproductie, die sterk afhankelijk is van een enkele eierleggende koningin ondersteund door de rest van de kolonie-eenheid9, bijzonder kwetsbaar zijn voor verstoring als gevolg van blootstelling aan pesticiden.
Studies uitgevoerd op onvolwassen koninginnen hebben aangetoond dat ontwikkelingsblootstelling aan miticiden het gedrag, de fysiologie en de overleving van volwassen koninginnen kan beïnvloeden26,27. Evenzo hebben studies met volledige of kleinere kolonies aangetoond dat agrochemicaliën volwassen honingbijenkoninginnen kunnen beïnvloeden door het paringssucces28te verminderen, de ovipositie29te verminderen en de levensvatbaarheid van de geproduceerde eieren te verminderen25,30,31. Deze verschijnselen waren voorheen moeilijk waar te nemen zonder het gebruik van hele kolonies, grotendeels te wijten aan een gebrek aan beschikbare laboratoriummethoden. Een methode om de ovipositie van koninginnen onder streng gecontroleerde laboratoriumomstandigheden te bestuderen met behulp van Queen Monitoring Cages (QMC)32 is onlangs echter aangepast om de effecten van agrochemicaliën op de vruchtbaarheid van koninginnen te onderzoeken33. Hier worden deze technieken in detail beschreven, samen met aanvullende methoden om de consumptie van het dieet van werknemers in MFC's te meten en te volgen.
Deze methoden zijn voordeliger dan experimenten die kolonies van volledige grootte vereisen, omdat ze de toediening van precieze doses agrochemicaliën mogelijk maken aan een sterk verminderd aantal werknemers in vergelijking met de tienduizenden die meestal aanwezig zijn in een kolonie34, die vervolgens de koningin leveren. Deze belichtingstechniek weerspiegelt de tweedehands blootstelling die koninginnen in reële scenario's zouden ervaren, omdat koninginnen binnen een kolonie zichzelf niet voeden en vertrouwen op werknemers om hen van dieet te voorzien9. Evenzo verlaten koninginnen over het algemeen de korf niet, behalve tijdens koloniereproductie (zwermen) voor paringsvluchten35. Gedekte honingbijenkoninginnen kunnen worden gekocht bij commerciële koninginnenfokkers en 's nachts worden verzonden. Meestal verkopen koninginnenfokkers koninginnen direct nadat ze hebben bevestigd dat ze zijn begonnen met het leggen van eieren, wat wordt beschouwd als een indicatie van succesvolle paring. Als meer precieze informatie over de leeftijd of verwantschap van de koningin nodig is, kunnen onderzoekers de koninginnenfokker raadplegen voordat ze een bestelling plaatsen.
MFC's maken nauwkeurige observatie en kwantificering van de ovipositie van honingbijenkoninginnen en het uitkomen van eieren32,33mogelijk, wat waardevolle gegevens oplevert met betrekking tot de effecten van agrochemische blootstelling op de vruchtbaarheid van koninginnen. De representatieve resultaten die hier worden gepresenteerd, beschrijven een experiment dat de ovipositie, dieetconsumptie en embryo-levensvatbaarheid in MGM's kwantificeert bij chronische blootstelling aan veldrelevante concentraties van het systemische neurotoxische neonicotinoïde pesticide imidacloprid36. Eenmaal aangebracht, verplaatst imidacloprid zich naarplantenweefsels 37, en residuen zijn gedetecteerd het stuifmeel en nectar van talrijke bijen bestoven planten38,39,40. Blootstelling aan imidacloprid kan een breed scala aan schadelijke effecten hebben op honingbijen, waaronder verminderde foerageerprestaties16,verminderde immuunfunctie41en verminderde kolonie-uitbreiding en overleving42,43. Hier werd imidacloprid geselecteerd voor gebruik als teststof omdat veldexperimenten hebben aangetoond dat het de ovipositie van honingbijenkoningin29 kan beïnvloeden

<table><tbody><tr><td>Fluon</td><td>BioQuip, Rancho Dominguez, CA</td><td>2871A</td><td></td></tr><tr><td>Honey bee queens</td><td>Olivarez Honey Bees, Orland, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imidacloprid</td><td>Sigma-Aldritch, St. Louis, MO</td><td>37894</td><td></td></tr><tr><td>MegaBee Powder</td><td>MegaBee, San Dieago, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes 2 mL</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA</td><td>02-682-004</td><td></td></tr><tr><td>Needles 20 gauge</td><td>W. W. Grainger, Lake Forest, IL</td><td>5FVK4</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Sulfate</td><td>Sigma-Aldritch, St. Louis, MO</td><td>P0772</td><td></td></tr><tr><td>Queen Monitoring Cages</td><td>University of Illinois Urbana-Champaign</td><td></td><td>Patentaanvraagnummer: 20190350175</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldritch, St. Louis, MO</td><td>S8501</td><td></td></tr><tr><td>Universal Microplate Lids</td><td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA</td><td>5500</td><td></td></tr></tbody></table>

beoordeling van agrochemisch risico voor gepaarde honingbijenkoninginnen

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

De huidige risicobeoordelingsstrategieën voor honingbijen zijn sterk afhankelijk van laboratoriumtests die worden uitgevoerd op volwassen of onvolwassen werkbijen, maar deze methoden kunnen de effecten van agrochemische blootstelling op honingbijenkoninginnen mogelijk niet nauwkeurig vastleggen. Als de enige producent van bevruchte eieren in een honingbijenkolonie, is de koningin misschien wel het belangrijkste afzonderlijke lid van een functionerende kolonie-eenheid. Daarom moet het begrijpen van hoe agrochemicaliën de gezondheid en productiviteit van koninginnen beïnvloeden, worden beschouwd als een cruciaal aspect van de risicobeoordeling van pesticiden. Hier wordt een aangepaste methode gepresenteerd om honingbijenkoninginnen en werkkoninginnen te blootstellen aan agrochemische stressoren toegediend via een werksterdieet, gevolgd door het volgen van de eiproductie in het laboratorium en het beoordelen van de eerste instar eclosie met behulp van een gespecialiseerde kooi, aangeduid als een Queen Monitoring Cage. Om het beoogde gebruik van de methode te illustreren, worden de resultaten beschreven van een experiment waarbij werksterverzorgers een dieet kregen met subletale doses imidacloprid en effecten op koninginnen werden gecontroleerd.

De productie van eieren werd gemonitord in MGM's die werden geassembleerd en onderhouden zoals hierboven beschreven met eenmaal daagse observaties van de eiproductie en 15 kooien per behandelingsgroep. Nieuw gedekte koninginnen van voornamelijk Carniolan-aandelen werden 's nachts gekocht en verzonden van een koninginnenkweker, en honingbijwerkers werden verkregen uit 3 kolonies die werden onderhouden volgens standaard commerciële methoden in The Bee Research Facility aan de Universiteit van Illinois Urbana-Champaign. Hie...

Dit protocol is ontwikkeld om het begrip te vergroten van hoe agrochemicaliën de reproductie van honingbijen(Apis mellifera)beïnvloeden door methoden vast te stellen om honingbijenkoninginnen en hun werkverzorgers bloot te stellen aan agrochemicaliën in een gecontroleerde, laboratoriumomgeving en zorgvuldig hun relevante reacties te volgen.

Beoordeling van agrochemisch risico voor gepaarde honingbijenkoninginnen

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Agrochemische blootstelling kan grote gevolgen hebben voor alle leden van een honingbijenkolonie, inclusief het belangrijkste lid, koninginnen. Maar tot voor kort waren er weinig hulpmiddelen beschikbaar om deze effecten te bestuderen. Met deze techniek kunnen onderzoekers koninginnen blootstellen aan agrochemicaliën onder gecontroleerde omstandigheden die omstandigheden simuleren die ze in het veld kunnen ervaren.Het is vrij eenvoudig om het leggedrag van honingbijkoninginnen te verstoren, dus het is belangrijk om voorzichtig te zijn bij het omgaan met werksters en koninginnen voor en tijdens het experiment. Amy Floyd en Eliza Litsey, laboratoriumtechnici bij de Invasive Species and Pollinator Health Research Unit, Honeybee Research Lab, demonstreren deze procedures. Om te beginnen, monteer koninginnenbewakingskooien of MQMC's door de deurpanelen in te brengen en plaats vervolgens de koningin-uitsluiter in de deur van de voerkamer boven de voederkamer, om te voorkomen dat de koningin het behandelde dieet binnengaat en contact maakt.Voeg één ELP in. Voeg geen aanvoerbuizen toe totdat de werknemers aan de kooi zijn toegevoegd en bedek de vier invoergaten tijdelijk met tape van labor

assessing-agrochemical-risk-to-mated-honey-bee-queens

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Hier beschrijven wij onze gedetailleerde protocol voor de voorbereiding van de single-cohort bijenvolken - een nuttig instrument voor het analyseren van de role-geassocieerde werknemer fysiologie. We beschrijven ook gedetailleerde protocollen voor de behandeling van werknemers met juveniele hormoon en ecdyson de betrokkenheid van deze hormonen in de regulatie van de werknemer gedrag en / of fysiologie te evalueren.

Voorbereiding van de Single-cohort Colonies and Hormoon Behandeling van werkbijen Analyseer Physiology geassocieerd met Rol en / of endocriene systeem

Microbiële consortia binnen bumble bee-hives verrijken en behouden van pollen voor larven van de honingbij. Met behulp van de volgende generatie sequencing, samen met laboratorium en veld gebaseerde experimenten, dit manuscript wordt beschreven protocollen gebruikt om te testen van de hypothese dat fungicide residuen veranderen de stuifmeel microbiome, en de kolonie demografie, uiteindelijk leidde tot de kolonie verlies.

Empirische, Metagenomic en computationele technieken verlichten de mechanismen door welke fungiciden compromis Bee gezondheid

Hier presenteren we een methode om zowel een individuele honingbij als een bijenkolonie voedsel te geven dat besmet is met pesticiden. De procedure evalueert het effect van pesticiden op individuele honingbijen door in vivo voeding van een basislarvenvoeding en ook op de natuurlijke toestand van de bijenkolonie.

Het evalueren van het effect van Environmental Chemicals over Honey Bee ontwikkeling van het individu naar Colony Level

Het verlies van honingbijkolonies is een uitdaging om de bestuivingsdiensten te bestuderen. Huidige beschermingspraktijken van de bestuderende instanties garanderen een alternatieve aanpak om het contact van honingbijen tegen schadelijke pesticiden met behulp van afweermiddelen te beperken. Hier bieden we gedetailleerde methodes voor een visuele tracking protocol om afschermingen voor bijen te screenen.

Video Tracking Protocol voor Screen Deterrent Chemistries voor Honingbijen

Subletale doses van pesticiden kunnen van invloed zijn op de kolonies op manieren die moeilijk op te sporen met behulp van alleen visuele of periodieke methoden. Methoden voor het meten van de totale volwassen bee massa, brood en voedselbronnen door weging netelroos en korf onderdelen en frames te fotograferen, en installeren sensoren, worden geleverd. Data-analyse wordt ook behandeld.

Toezicht op de gevolgen van de kolonie-niveau van blootstelling van de subletale bestrijdingsmiddelen voor bijen

Fungicide sprays op tweezaadlobbige planten kunnen Solitaire bijen aan hoge concentraties van stuifmeel overgedragen fungicide residuen blootstellen. Met behulp van laboratorium gebaseerde experimenten waarbij in vitro-gefokte bijen larven, deze studie onderzoekt de interactieve effecten van de consumptie van fungicide-behandelde stuifmeel afkomstig van planten van de host en niet-host.

In Vitro Fokken van Solitaire bijen: een instrument voor de beoordeling van larvale risicofactoren

Het huidige protocol legt een methode uit om met pesticiden verontreinigde voorzieningen te voeren aan de larven van de solitaire bijen, Osmia excavata. De procedure onderzoekt de ecotoxiciteit van het bestrijdingsmiddel voor de larven van de solitaire bijen.

Evaluatie van het effect van pesticiden op de larven van de solitaire bijen

Bijen kunnen worden geconditioneerd in een appetitief olfactorische leren paradigma (PER-conditioning). Het gebruik van geuren als prikkels, hebben we een methode waarin het gedrag wordt vastgelegd, terwijl tegelijkertijd Calcium Imaging wordt gebruikt om de geur oproept activiteit te meten in champignon lichaam...

In vivo Ca 2 + - Beeldvorming van Mushroom Body neuronen tijdens Olfactorische Leren in de Honey Bee

Wij presenteren een niet-invasieve sampling aanpak voor een efficiënte haarmonsters te verzamelen van ongrijpbare kleine zoogdieren, zoals te zien voor de Amerikaanse pika. Tonen we het nut van deze methode door extractie DNA van bemonsterd haar en versterken van verschillende soorten van moleculaire merkers vaak gebruikt in studies van wilde dieren ecologie en natuurbehoud.

Een niet-invasieve Hair samplingtechniek om High Quality DNA verkrijgen van Elusive kleine zoogdieren

Een duidelijke, gestandaardiseerde methode voor dissectie en isolatie van de zebravis hart op meerdere ontwikkelingsstadia worden beschreven. Annotatie en kwantificatie technieken worden ook besproken.

Hart Dissection in larvale, jeugdige en volwassen zebravis, Danio rerio</em

Leer een laboratoriummethode om agrochemische risico's voor honingbijenkoninginnen te beoordelen met behulp van het Queen Monitoring Cage-systeem. Dit protocol maakt gecontroleerde blootstelling aan imidacloprid mogelijk en monitort de effecten op eiproductie en larvenontwikkeling.

Beoordeling van agrochemisch risico voor gepaarde honingbijenkoninginnen

Meer video's verkennen