Name: Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Leer retinale vlakke preparaten maken en immunofluorescentie-kleuring toepassen bij muizen met zuurstof-geïnduceerde retinopathie. Deze methode behoudt de retinale integriteit en maakt vergelijkbaar onderzoek naar vasculaire veranderingen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We bedanken alle leden van ons laboratorium en het oogheelkundig dierenlaboratorium van Zhongshan Ophthalmic Center voor hun technische assistentie. We bedanken ook Prof. Chunqiao Liu voor experimentele ondersteuning. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (NSFC: 81670872; Beijing, China), de Natural Science Foundation van de provincie Guangdong, China (Grant No.2019A1515011347), en high-level ziekenhuisbouwproject van state key laboratory of ophthalmology in Zhongshan Ophthalmic Center (Grant No. 303020103; Guangzhou, provincie Guangdong, China).

Alle procedures met betrekking tot het gebruik van muizen zijn goedgekeurd door de dierexperimentele ethische commissie van Zhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University, China (geautoriseerd nummer: 2020-082), en in overeenstemming met de goedgekeurde richtlijnen van animal care and use committee van Zhongshan Ophthalmic Center en de Association Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Statement for the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Research.
1. Inductie van muis OIR-model
<ol><li>Gebruik muizen met een lagere mate van aangeboren misvorming van de ogen, bijvoorbeeld C57BL / 6J-muizen, en paren ze in een verhouding van man / vrouw = 1: 2. Laat de pups op dezelfde dag geboren worden en begin met het induceren van het OIR-model op P7. Noteer het lichaamsgewicht van muispups strikt voordat u gaat modelleren. OPMERKING: Noteer de dag van geboorte als P0. Noteer regelmatig het gewicht van elke muis. Het lichaamsgewicht van pasgeboren pups is erg belangrijk tijdens de inductie van OIR, omdat de gevoeligheid van muizen in verschillende toestanden voor zuurstof anders is. Sluit de pups meer dan 5 g op P7 uit om vergelijkbare resultaten te garanderen.</li>
	<li>Zorg voor een geschikte leefomgeving voor moeders die borstvoeding geven en hun pups, zoals het instellen van de temperatuur op 23 °C ± 2 °C, het regelen van de luchtvochtigheid op 40% -65%, het dagelijks afwisselen van 12 uur licht en 12 uur duisternis, het toevoegen van watten aan de kooi om te nestelen, zorgen voor voldoende gesteriliseerd voedsel en water en ze in individueel geventileerde kooien (IVC) houden.</li>
	<li>Controleer het vochtigheidsniveau en de temperatuur in de kamer. Regel de luchtvochtigheid tussen 40% en 65% en houd de temperatuur op 23 °C ± 2 °C.</li>
	<li>Controleer de zuurstoftoevoer met zuurstofsensoren, handhaaf een constant zuurstofniveau op 75% en regel het zuurstofdebiet op 0,5-0,75 L/min. Doe 50 g natronkalk op de bodem van de kamer om overmatige CO2 te absorberen en de CO2-waarden onder de 3%22 te houden.</li>
	<li>Controleer het gedrag van moeders die borstvoeding geven, zoals nestbouwgedrag, het bijten van hun pups en het weigeren van borstvoeding minstens één keer per dag. Elimineer moeders die borstvoeding geven met slecht moederschap.</li>
	<li>Plaats de P7 pups (mannelijk en vrouwelijk) en hun zogende moeders in een zuurstofkamer waarin het zuurstofgehalte 75% is gedurende 5 dagen tot P12. Vermijd onnodige opening van de kamer tijdens de periode van modelinductie. Zorg ervoor dat er extra draagmoeders zijn voor vervanging, voor het geval de moeders die borstvoeding geven sterven als gevolg van longletsel terwijl ze in hyperoxie zijn. OPMERKING: Om de vergelijkbaarheid van het experiment te garanderen, beperkt u het aantal tot 6-8 pups voor elke moeder. Besteed aandacht aan het potentiële probleem van zuurstoftoxiciteit, dat de dood van sommige moeders die borstvoeding geven veroorzaakt. De tekenen van hyperoxisch longletsel bij moeders die borstvoeding geven omvatten, maar zijn niet beperkt tot, fluctuerende ademhalingsfrequentie, verminderde activiteit en verminderde voeding. Wanneer het bovenstaande fenomeen zich voordoet, euthanaseer de zogende moeder dan zo snel mogelijk met 1% pentobarbital natrium (50 mg / kg). Bereid sommige draagmoeders voor, bijvoorbeeld 129S1 / SvImJ voor vervanging en gebruik ze alleen als dat nodig is. Het wordt niet aanbevolen om moeders die borstvoeding geven als routine te vervangen, omdat dit zal leiden tot frequente opening van een zuurstofkamer, wat resulteert in onstabiele zuurstofniveaus en maternale agressie.</li>
	<li>Breng de pups en hun zogende moeders terug naar de kamerlucht op P12 en controleer het gewicht van alle pups continu tot P17. Groepeer de pups op basis van het gewicht om ervoor te zorgen dat elke experimentele groep een vergelijkbare gewichtsverdeling heeft.</li>
</ol>2. Bereiding van retinale hele mounts en immunofluorescentiekleuring
<ol><li>Noteer het lichaamsgewicht van de pups. Offer de pups op door een overdosis verdoving (1% pentobarbital natrium 50 mg/kg) of CO 2-inademing. Andere euthanasiemethoden, zoals cervicale dislocatie en bilaterale thoracotomie, kunnen indien nodig worden gebruikt.</li>
	<li>Gebruik een gebogen schaar om de verbinding tussen oogbollen en orbitaal weefsel los te maken. Plaats vervolgens een gebogen tang in het achterste deel van de oogbol, klem de oogzenuw vast en til het oog snel uit de baan. Was de oogbollen in een voorgekoelde 1x fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS) om het haar en bloed van het oppervlak van de oogbollen te verwijderen.</li>
	<li>Plaats de gereinigde oogbollen in een microcentrifugebuis van 2 ml gevuld met 4% paraformaldehyde (PFA) en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur op een shaker met een snelheid van 12-15 omwentelingen per minuut (rpm) (initiële fixatie). LET OP: Paraformaldehyde staat bekend als allergeen, over het algemeen giftig en extreem cytotoxisch. Volg de veiligheidsinstructies strikt op en vermijd inademing en huidcontact.</li>
	<li>Gebruik een kweekschaal en plaats een druppel van 1x PBS in het centrale deel en voer de volgende stappen uit onder een ontleedmicroscoop en plaats één oogbol in deze druppel. Houd de oogbol vast met een tang en prik voorzichtig het hoornvlies bij de cornea limbus met behulp van een spuitnaald van 1 ml. Steek de punt van de schaar in dit gat en knip het hoornvlies voorzichtig af langs het hoornvlies limbus. Pas op dat je het netvlies niet doorsnijdt.</li>
	<li>Verwijder de iris en lens met een tang. Plaats vervolgens de resterende oogschelp in de 4% PFA en bevestig opnieuw gedurende nog eens 45 minuten bij kamertemperatuur op een shaker met een snelheid van 12-15 tpm (secundaire fixatie).</li>
	<li>Gebruik een kweekschaal en doe een druppel van 1x PBS in het centrale deel. Plaats de vaste oogbol in deze druppel. Houd de oogbol vast met een tang. Scheid voorzichtig de retina- en scleralagen met behulp van twee tangen. Plaats de punt van de schaar tussen het netvlies en de scleralagen en knip de sclera naar de oogzenuw. Verwijder de sclera van het netvlies en verkrijg de retinale cup. OPMERKING: Houd de achterste cup bij de oogzenuw met een tang vast, gebruik vervolgens het gebogen uiteinde van een andere tang om op de sclera bij de oogzenuwkop te drukken en masseer het netvlies voorzichtig uit in een voorwaartse veegbeweging als alternatief om het netvlies los te laten.</li>
	<li>Gebruik een tang om de verbinding tussen radiale hyaluoïde vaten en het perifere netvlies los te laten, klem de wortel van de hyaluele vaten die zich dicht bij de oogzenuwkop bevindt en snijd de hyalulitische vaten voorzichtig af.</li>
	<li>Gebruik een pipet van 2 ml met de punt afgesneden om de retinale cup over te brengen. Plaats de retinale cup in één putje in een 48-well plaat en was deze 3 x 5 min met 1x PBS op kamertemperatuur op een shaker met een snelheid van 12-15 rpm.</li>
	<li>Incubeer de retinale cup in een gemengde oplossing van 1% Triton X-100 (in PBS) en 5% normaal ezelserum (in PBS) 's nachts bij 4 °C.<ol><li>Als alternatief kunt u netvliezen blokkeren en permeabiliseren bij kamertemperatuur gedurende 1 uur als alternatief. Verander het blokkerende serum volgens de bron van het secundaire antilichaam.</li>
	</ol></li>
	<li>Als u de retinale vasculatuur labelt met isolectine B4, incubeer dan het netvlies in een put van 48-well plaat met 0,1% normaal ezelserum (400 μL) en IsolectinB4-594 (1:400) 's nachts bij 4 °C op een shaker met een snelheid van 12-15 tpm. OPMERKING: Als u de bloedvaten labelt met andere markers, zoals CD31, of andere cellen labelt, gebruikt u specifieke primaire antilichamen om ze te labelen.</li>
	<li>Incubeer het netvlies met 1:100-1:500 specifieke primaire antilichamen (in 400 μL 0,1% normaal ezelsserum) bij 4 °C op een shaker met een snelheid van 12-15 tpm gedurende 48 uur . (optioneel)</li>
	<li>Na terugkeer naar de kamertemperatuur, wast u het netvlies met 0,1% PBST (0,1% TritonX-100 in PBS) gedurende 3 x 20 minuten op een shaker met een snelheid van 12-15 tpm.</li>
	<li>Incubeer het netvlies met 1:1.000 secundaire antilichamen (in 400 μL 0,1% normaal ezelsserum) 's nachts bij 4 °C op een shaker met een snelheid van 12-15 rpm. (optioneel)<ol><li>U kunt ook het netvlies incuberen met secundaire antilichamen met hoge affiniteit bij kamertemperatuur gedurende 1 uur.</li>
	</ol></li>
	<li>Incubeer het netvlies met DAPI (1:1.000) bij kamertemperatuur gedurende 20-25 minuten om de kern te labelen. OPMERKING: Test de optimale verdunningsverhoudingen voor alle antilichamen die in stap 10-11 en 13-14 in het voorexperiment worden gebruikt.</li>
	<li>Was het netvlies gedurende 3 x 30 minuten met 0,1% PBST op een shaker met een snelheid van 12- 15 tpm bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Breng de retinale cup over op een schone glijbaan met de opening naar boven gericht. Snijd het netvlies radiaal in de posities 3, 6, 9 en 12 uur van perifeer naar centraal door ongeveer 1-1,5 mm van de oogzenuwkop af te snijden.</li>
	<li>Voeg een paar druppels 1x PBS toe om het netvlies drie keer te spoelen. Gebruik luchtgelegd papier om het netvlies te drogen en plat te maken. Voeg een druppel montagemedium (zie materiaaltabel) toe aan het midden van de coverslip en stop met het toevoegen ervan totdat de diameter van de druppel toeneemt tot de helft van de coverslip. Draai snel de deklip om en plaats deze bovenop het uitgespreide netvlies. Vermijd het vormen van bubbels.</li>
	<li>Maak foto's van de retinale flat mounts of bewaar en bescherm de dia's tegen licht bij 4 °C.</li>
</ol>3. Analyse en kwantificering van retinale flat mounts
OPMERKING: Voor het OIR-muismodel registreren de onderzoekers vaak het gebied van centrale retinale vasculaire occlusie en perifere retinale pathologische neovascularisatie tijdens P12-P25. Eerdere studies hebben aangetoond dat het centrale avasculaire gebied van het netvlies het maximum bereikt bij P12 en geleidelijk krimpt van P13 tot P17; tegelijkertijd bereikt het netvlies van OIR-muizen de piek van het neovascularisatiegebied rond P1722,29. Vanaf P17 gaan neovessels geleidelijk achteruit en groeien functionele vaten opnieuw in het avasculaire gebied. De retinale vasculatuur keert in principe terug naar normaal bij P2533.
<ol><li>Maak foto's van retinale platte vattingen met een fluorescentiemicroscoop (zie Materiaaltabel) met een lens met 10x objectief. Kies eerst het DAPI-kanaal en stel de oogzenuwkop in het midden van het gezichtsveld in. Pas vervolgens andere kanalen aan en concentreer je op de oppervlakkige vasculatuur van het netvlies. Vink Tegels in een fotosoftware aan (zie Tabel met materialen) en stel het aantal foto's in dat moet worden gestikt. Klik op Experiment starten om het hele netvlies vast te leggen.</li>
	<li>Gebruik een beeldverwerkingsprogramma (zie Materiaaltabel) om het gebied van vaso-obliteratie (VO) en neovascularisatie (NV) na immunofluorescentiekleuring te kwantificeren.<ol><li>Klik eerst op de Magic Wand Tool en stel een geschikte tolerantie in op basis van het verschil in helderheid en verplaats de cursor naar de achtergrond en klik met de muis. Kies vervolgens de Select Inverse om een basisomtrek van het netvlies te verkrijgen. Gebruik de Lasso Tool om de details van het netvlies verder te schetsen. Met behulp van de histogramfunctie registreert u de pixelwaarde van het hele netvlies en noteert u deze of genereert u een tabel in een databaseprogramma.</li>
		<li>Verdeel het netvliesbeeld in vier kwadranten. Gebruik in elk kwadrant het gereedschap Lasso om het VO-gebied te tekenen (figuur 2A-C) en gebruik het gereedschap Toverstaf om het NV-gebied te selecteren (figuur 2D-F). Bereken via de pixelinformatie in het histogram de pixelverhouding van VO en NV tot het hele netvlies, dat wil zeggen het percentage VO- of NV-gebied ten opzichte van het hele netvlies. OPMERKING: Er is ook een open-source en volledig geautomatiseerde pijplijn voor de kwantificering van VO- en NV-gebieden in OIR-afbeeldingen met behulp van deep learning neurale netwerken (http://oirseg.org/), die een betrouwbare en tijdbesparende manier biedt voor onderzoekers en de standaard van de kwantificeringverenigt 34.</li>
	</ol></li>
	<li>Leg pixelinformatie vast in een spreadsheettabel, wat handig is voor latere analyse.</li>
</ol>4. In vivo beeldvorming met fluoresceïne fundusangiografie (FFA)
OPMERKING: Voor OIR-muizen kunnen zowel FITC-perfusie als immunofluorescentiekleuring slechts één keer worden gebruikt vanwege de dood van proefdieren. In vergelijking hiermee is een van de voordelen van FFA de observatie van de dynamische veranderingen van retinale vaten van muizen tijdens de ontwikkeling en pathologische toestand in vivo35,36.
<ol><li>Weeg de pups voor de narcose.</li>
	<li>Anesthetiseer pups door intraperitoneale injectie van 0,3% pentobarbital natrium in een dosis van 30-50 mg/kg. OPMERKING: Let voor muizen binnen 1 maand op de verdovingsdoses. Gebruik lagere concentraties en doses verdovingsmiddel om de dood van muizen veroorzaakt door anesthesie te verminderen. Nadat de pups zijn verdoofd, gebruikt u een klein verwarmingskussen om de lichaamstemperatuur op peil te houden. Hypothermie beïnvloedt niet alleen de fysiologische functie van pups, maar leidt ook tot veranderingen in kristallijn en versnelt de ontwikkeling van cataract.</li>
	<li>Gebruik 20 μL mydriatische oogdruppels (0,5% tropicamide + 0,5% fenylefrinehydrochloride) voor elke pup en wacht 5 minuten om langdurige pupilverwijding te bereiken (figuur 3A, B).</li>
	<li>Breng de verdoofde pups voor het beeldvormende apparaat (zie Materiaaltabel). Houd de pups op een klein verwarmingskussen, plaats de pups in een stabiele positie en gebruik regelmatig kunsttranen om vocht in het hoornvlies te houden. Klik op de modus van Infrared Fundus Imaging (IR) om de oogzenuwkop naar het midden van het scherm aan te passen. OPMERKING: Vergeet bij het observeren van één oog van de pups niet om het andere oog te beschermen. Gebruik Hypromellose oogdruppels om te voorkomen dat het hoornvlies witter wordt als gevolg van droogheid.</li>
	<li>Na intraperitoneale injectie van 0,15 ml 0,5% fluoresceïne natriumzoutoplossing, klikt u onmiddellijk op de FA-knop en de injectieknop op het aanraakscherm van het beeldvormingsapparaat om de timing te starten. Neem de beelden op na 3 minuten wanneer de bloedcirculatie van het netvlies de veneuze fase binnengaat en observeer het netvlies niet minder dan 6-8 minuten. OPMERKING: Na intraperitoneale injectie van fluoresceïne natriumzoutoplossing vertonen de huid, het slijmvlies en de urine van de pups duidelijk geelachtig groen. Het grootste deel van het fluoresceïne wordt binnen een dag door de pups uitgescheiden. Het intraperitoneaal injecteren van het fluoresceïnenatrium intraperitoneaal om de andere dag gedurende zes keer veroorzaakt geen significante bijwerkingen37.</li>
	<li>Verplaats de oogzenuwkop naar het midden van het beeldacquisitiegebied en maak de eerste afbeelding van het centrale netvlies. Beweeg vervolgens de lens van het beeldvormingsapparaat horizontaal naar de nasale kant van het oog totdat de oogzenuwkop zich in het midden van één kant van het beeldacquisitiegebied bevindt en maak de tweede afbeelding. Blijf foto's maken van het temporale, superieure en inferieure netvlies, respectievelijk met behulp van deze methode (figuur 3C). OPMERKING: Maak "Five-orientation" -afbeeldingen binnen 12 minuten als de regressiefase optreedt. De positie van de oogzenuwkop in het inferieure beeld mag niet op de zijlijn vallen vanwege de beperkte hoekaanpassing van de lens.</li>
	<li>Sla de afbeeldingen op en gebruik een beeldverwerkingsprogramma voor het naaien.</li>
</ol>5. Beeldverwerking van de fluoresceïne fundus angiografie (FFA)
<ol><li>Open het beeldverwerkingsprogramma en klik op Nieuw in bestand om een nieuw canvas met een zwarte achtergrond te maken (figuur 4A).</li>
	<li>Open eerst een afbeelding van het centrale netvlies in de achtergrondlaag. Klik op Bestand en voeg de tweede afbeelding toe. Pas de dekking van de tweede afbeelding aan op 60%, verplaats en wijzig het formaat van de tweede afbeelding totdat dezelfde delen van de twee afbeeldingen elkaar sterk overlappen. Klik op de knop Schakelen tussen vrije transformatie- en warpmodi en breng indien nodig subtiele aanpassingen aan de vaten aan. Draai vervolgens de dekking van de tweede afbeelding terug naar 100% (figuur 4A, B).</li>
	<li>Selecteer twee afbeeldingen tegelijk en klik op Lagen automatisch mengen. Vink Panorama aan als de overvloeimethode en selecteer de volgende twee zinnen. Klik op OK en voltooi het samenvoegen van de afbeelding van de eerste twee afbeeldingen (figuur 4C, D).</li>
	<li>Neem de eerste twee gestikte afbeeldingen als geheel, voeg de derde afbeelding toe en blijf ze overvloeien. Herhaal de bovenstaande methoden om het naaien van vijf afbeeldingen te voltooien (figuur 4E).</li>
	<li>Gebruik de Crop Tool om afbeeldingen van FFA op verschillende tijdstippen tot een uniforme grootte te knippen en dynamische veranderingen van retinale vasculatuur van P15 naar P25 bij zowel normale als OIR-pups te observeren.</li>
</ol>6. Statistische analyse
<ol><li>Huidige waarden als gemiddelde ± standaarddeviatie (s.d.).</li>
	<li>Gebruik de Student's t-test om twee onafhankelijke steekproeven te vergelijken. Gebruik One-Way ANOVA om meerdere gegevenssets te vergelijken en combineer met de test van Dunnett of Tukey, een veelgebruikte meervoudige vergelijkingstest.</li>
	<li>Voor niet-normaal gedistribueerde gegevens gebruikt u de Mann-Whitney U-test of de Kruskal Wallis-test. Houd rekening met significante statistische verschillen wanneer P < 0,05.</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De gevoeligheid van muizen voor OIR wordt beïnvloed door vele factoren. De pups met verschillende genetische achtergronden en stammen kunnen niet worden vergeleken. Bij BALB/c albino muizen groeien bloedvaten snel terug in het VO-gebied met significante verminderde neovasculaire plukjes38, wat het onderzoek enigszins bemoeilijkt. Bij C57BL/6-muizen is er sprake van verhoogde fotoreceptorschade in vergelijking met BALB/cJ-muizenstam39,40. H...

Retinale neovascularisatie (RNV), die wordt gedefinieerd als een toestand waarin nieuwe pathologische vaten afkomstig zijn van bestaande retinale aderen, strekt zich meestal uit langs het binnenoppervlak van het netvlies en groeit onder sommige omstandigheden uit tot de glasvochtige (of subretinale ruimte)1. Het is een kenmerk en gemeenschappelijk kenmerk van veel ischemische retinopathieën, waaronder retinopathie van prematuriteit (ROP), retinale ader occlusie (RVO) en proliferatieve diabetische retinopathie (PDR)2.
Talrijke klinische en experimentele waarnemingen hebben aangetoond dat ischemie de belangrijkste oorzaak is van retinale neovascularisatie 3,4. Bij ROP worden pasgeborenen blootgesteld aan zuurstof op hoog niveau in gesloten couveuses om de overlevingskansen te verhogen, wat ook een belangrijke drijfveer is voor het stoppen van vasculaire groei. Nadat de behandeling is voltooid, ervaren de netvliezen van pasgeborenen een relatief hypoxische periode5. Andere situaties worden gezien in de occlusie van centrale of branch retinale aderen in RVO en schade aan retinale haarvaten wordt ook waargenomen die wordt veroorzaakt door microangiopathie in PDR2. Hypoxie verhoogt verder de expressie van angiogene factoren zoals vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) via de hypoxie-geïnduceerde factor-1α (HIF-1α) signaalroute die op zijn beurt vasculaire endotheelcellen begeleiden om in het hypoxische gebied te groeien en nieuwe bloedvaten te vormen 6,7.
ROP is een soort vasculaire proliferatieve retinopathie bij te vroeg geboren baby's en een belangrijke oorzaak van kinderblindheid 8,9, die wordt gekenmerkt door retinale hypoxie, retinale neovascularisatie en fibreuze hyperplasie 10,11,12. In de jaren 1950 ontdekten onderzoekers dat een hoge concentratie zuurstof de ademhalingssymptomen van premature baby's aanzienlijk kan verbeteren13,14. Als gevolg hiervan werd zuurstoftherapie in toenemende mate gebruikt bij premature baby's op dat moment15. Gelijktijdig met het wijdverbreide gebruik van zuurstoftherapie bij te vroeg geboren baby's, nam de incidentie van ROP echter jaar na jaar toe. Sindsdien hebben onderzoekers zuurstof gekoppeld aan ROP en verschillende diermodellen onderzocht om de pathogenese van ROP en RNV16 te begrijpen.
Bij de mens wordt de meeste retinale vasculatuurontwikkeling voltooid vóór de geboorte, terwijl bij knaagdieren de retinale vasculatuur zich na de geboorte ontwikkelt, wat een toegankelijk modelsysteem biedt om angiogenese in de retinale vasculatuur te bestuderen2. Met de voortdurende voortgang van het onderzoek zijn zuurstof-geïnduceerde retinopathie (OIR) modellen belangrijke modellen geworden voor het nabootsen van pathologische angiogenese als gevolg van ischemie. Er zijn geen specifieke diersoorten in de studie van het OIR-model en het model is ontwikkeld bij verschillende diersoorten, waaronder kitten17, rat18, muis19, beagle puppy20 en zebravis21. Alle modellen delen hetzelfde mechanisme waarmee ze worden blootgesteld aan hyperoxie tijdens de vroege retinale ontwikkeling en vervolgens terugkeren naar de normoxische omgeving. Smith et al. merkten op dat het blootstellen van muispups aan hyperoxie van P7 gedurende 5 dagen een extreme vorm van vaatregressie in het centrale netvlies veroorzaakte en ze terugbracht naar de kamerlucht op P12, geleidelijk neovasculaire plukjes veroorzaakte, die naar het glasachtig lichaam groeiden19. Dit was een gestandaardiseerd OIR-muismodel dat ook wel Smith-model wordt genoemd. Connor et al. hebben het protocol verder geoptimaliseerd en een universeel toepasbare methode geleverd om het gebied van VO (vaso-obliteratie) en NV (neovascularisatie) in 2009 te kwantificeren, waardoor de acceptatie en het gebruik van het model22 is toegenomen. Het OIR-muismodel is nu nog steeds het meest gebruikte model vanwege zijn kleine formaat, snelle reproductie, duidelijke genetische achtergrond, goede herhaalbaarheid en hoge slagingspercentage.
Bij muizen begint retinale vascularisatie na de geboorte met de ingroei van bloedvaten van de oogzenuwkop in het binnenste netvlies naar de ora serrata. Tijdens de normale retinale ontwikkeling ontspruiten de eerste retinale vaten rond de geboorte uit de oogzenuwkop en vormen ze een uitdijend netwerk (de primaire plexus) dat de periferie bereikt rond postnatale dag 7 (P7) 23. Dan beginnen de vaten in het netvlies te groeien om een diepe laag te vormen, het netvlies binnen te dringen en een laminair netwerk rond de binnenste nucleaire laag (INL) te vormen zoals bij de mens24. Tegen het einde van de derde postnatale week (P21) is de diepere plexusontwikkeling bijna voltooid. Voor het OIR-muismodel verschijnt vasculaire occlusie altijd in het centrale netvlies vanwege de snelle degeneratie van een groot aantal onrijpe vasculaire netwerken in het centrale gebied tijdens blootstelling aan hyperoxia. De groei van pathologische neovascularisatie vindt dus ook plaats in het midden-perifere netvlies, wat de grens is van het niet-perfusiegebied en het vasculaire gebied. Menselijke retinale vaten hebben zich echter bijna voor de geboorte gevormd. Wat premature baby's betreft, is het perifere netvlies niet volledig gevasculariseerd bij blootstelling aan hyperoxie25,26. Vasculaire occlusie en neovascularisatie komen dus vooral voor in het perifere netvlies27,28. Ondanks deze verschillen recapituleert het muis OIR-model nauw de pathologische gebeurtenissen die optreden tijdens door ischemie geïnduceerde neovascularisatie.
De inductie van het OIR-model kan worden onderverdeeld in twee fasen29: in fase 1 (hyperoxiefase) wordt de retinale vasculaire ontwikkeling gestopt of vertraagd met occlusie en regressie van bloedvaten als gevolg van de afname van VEGF en de apoptose van endotheelcellen24,30; in fase 2 (hypoxiefase) zal de retinale zuurstoftoevoer onvoldoende worden onder kamerluchtomstandigheden29, wat essentieel is voor neurale ontwikkeling en homeostase 19,31. Deze ischemische situatie resulteert meestal in ongereguleerde, abnormale neovascularisatie.
Momenteel is de veelgebruikte modelleringsmethode afwisselend hoge / lage zuurstofblootstelling: moeders en hun pups worden gedurende 5 dagen blootgesteld aan 75% zuurstof op P7 gevolgd door 5 dagen in kamerlucht totdat P17 vergelijkbare resultaten liet zien22, wat het eindpunt is van OIR-muismodelinductie. (Figuur 1). Naast het simuleren van ROP, kan deze ischemie-gemedieerde pathologische neovascularisatie ook worden gebruikt om andere ischemische retinale ziekten te bestuderen. De belangrijkste metingen van dit model omvatten het kwantificeren van het gebied van VO en NV, die worden geanalyseerd van retinale platte mounts door immunofluorescentiekleuring of FITC-dextran-perfusie. Elke muis kan slechts één keer worden bestudeerd vanwege de dodelijke operatie. Op dit moment zijn er weinig methoden om dynamische veranderingen van retinale vasculatuur continu te observeren tijdens het proces van vasculaire regressie en pathologische angiogenese32. In dit artikel geven we een gedetailleerd protocol van OIR-modelinductie, analyse van retinale flat mounts en een workflow van fluoresceïne fundusangiografie (FFA) op muizen, wat nuttig zou zijn om een uitgebreider begrip te krijgen van vasculaire dynamische veranderingen tijdens twee fasen van het OIR-muismodel.

<table><tbody><tr><td>1 mL steriele spuit</td><td>Solarbio</td><td>YA0550</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts en intraperitoneale injectie</td></tr><tr><td>1&times; Fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS)</td><td>Transgen Biotech</td><td>FG701-01</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>2 ml Microcentrifugebuisje</td><td>Corning</td><td>MCT-200-C</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>48 Well Heldere TC-Behandelde Meerdere Welborden</td><td>Corning</td><td>3548</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Zelfklevende microscoopglazen</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop CC 2019</td><td>Adobe Inc.</td><td></td><td>Voor beeldanalyse</td></tr><tr><td>Koolstofdioxidegas</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor het doden</td></tr><tr><td>Dekglas</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Gebogen pincet</td><td>World Precision Instruments</td><td>14127</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>DAPI-kleuroplossing</td><td>Abcam</td><td>ab228549</td><td>Voor het labelen van nucleus op retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop</td><td>Olmpus</td><td>SZ61</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Fluoresceïne natrium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F6377</td><td>Voor in vivo beeldvorming</td></tr><tr><td>Fluorescente microscoop</td><td>Zeiss</td><td>AxioImager.Z2</td><td>Voor het verkrijgen van fluorescentie beelden van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Fluoromount-G Montagemedium</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Hydroxypropyl methylcellulose</td><td>Maya</td><td>89161</td><td>Voor in vivo beeldvorming</td></tr><tr><td>Isolectine B4 594 antilichaam</td><td>Invitrogen</td><td>I21413</td><td>Voor het labelen van retinale vaatstructuren op retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Muizen C57/BL6J</td><td>GemPharmatech van de provincie Jiangsu</td><td></td><td>Voor OIR model inductie</td></tr><tr><td>Micro-dissectie schaar - rechte kling</td><td>World Precision Instruments</td><td>503242</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Nr. 4 rechte pincet</td><td>World Precision Instruments</td><td>501978-6</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Normaal ezelsserum</td><td>Abcam</td><td>ab7475</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>O2 sensor</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor het monitoren van het O2 niveau</td></tr><tr><td>OxyCycler</td><td>Biospherix</td><td>A84XOV</td><td>Voor OIR model inductie</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde (PFA)</td><td>Sigma</td><td>P6148-1KG</td><td>Voor weefselfixatie</td></tr><tr><td>Pentobarbital natrium</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor anesthesie</td></tr><tr><td>Soda lime</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor het absorberen van overtollig CO2 in de zuurstofkamer</td></tr><tr><td>SPECTRALIS HRA+OCT</td><td>Heidelberg</td><td>HC00500002</td><td>Voor in vivo beeldvorming</td></tr><tr><td>SPSS Statistics 22.0</td><td>IBM</td><td></td><td>Voor statistische analyse</td></tr><tr><td>Transveren dekloring shaker</td><td>Kylin-Bell</td><td>ZD-2008</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Weefselkweekschaal (lage binding)</td><td>Corning</td><td>3261-20EA</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Transfer pipetten</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLBW6818</td><td>Voor bereiding van retinale flat mounts</td></tr><tr><td>Tropicamide</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Voor in vivo beeldvorming</td></tr><tr><td>ZEN Imaging Software</td><td>ZEISS</td><td></td><td>Voor beeldverwerving en export</td></tr></tbody></table>

monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Zuurstof-geïnduceerde retinopathie (OIR) wordt veel gebruikt om abnormale vaatgroei bij ischemische retinale ziekten te bestuderen, waaronder retinopathie van prematuriteit (ROP), proliferatieve diabetische retinopathie (PDR) en retinale ader occlusie (RVO). De meeste OIR-studies observeren retinale neovascularisatie op specifieke tijdstippen; de dynamische vaatgroei in levende muizen langs een tijdsverloop, die essentieel is voor het begrijpen van de OIR-gerelateerde vaatziekten, is echter onderbelicht. Hier beschrijven we een stapsgewijs protocol voor de inductie van het OIR-muismodel, waarbij we de potentiële valkuilen benadrukken en een verbeterde methode bieden om snel gebieden van vaso-obliteratie (VO) en neovascularisatie (NV) te kwantificeren met behulp van immunofluorescentiekleuring. Wat nog belangrijker is, we hebben de hergroei van bloedvaten in levende muizen van P15 tot P25 gevolgd door fluoresceïne fundusangiografie (FFA) uit te voeren in het OIR-muismodel. De toepassing van FFA op het OIR-muismodel stelt ons in staat om het verbouwingsproces tijdens de hergroei van het vat te observeren.

In het OIR-muismodel is het belangrijkste en belangrijkste resultaat de kwantificering van het VO- en NV-gebied. Na 5 dagen vanaf P7 in de hyperoxie-omgeving te hebben geleefd, vertoonde het centrale netvlies van de pups het grootste niet-perfusiegebied. Onder de stimulatie van hypoxie in nog eens 5 dagen werd geleidelijk retinale neovascularisatie geproduceerd die intenser fluoresceerde dan omliggende normale bloedvaten. Na P17 nam het fluorescentiesignaal van pathologische neovascularisatie snel af als de remodellering...

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor de bereiding en immunofluorescentiekleuring van retinale flat mounts en analyse van muizen. Het gebruik van fluoresceïne fundusangiografie (FFA) voor muizenpups en beeldverwerking worden ook in detail beschreven.

Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Dit protocol kan onderzoekers helpen de netvliezen van muizen gemakkelijk te scheiden en de dynamische veranderingen in de retinale vasculatuur van het OIR-muismodel te observeren. De belangrijkste voordelen van deze methode zijn het behoud van de integriteit van de gescheiden netvliezen en het toestaan van elke muis om als zijn eigen controle te dienen, waardoor de resultaten meer vergelijkbaar zijn. Onderzoekers die deze methode voor de eerste keer proberen, kunnen moeite hebben tijdens het maken van de vijf oriëntatiebeelden omdat het een beetje moeilijk is om pups in de juiste positie te plaatsen.Om het weefsel te verzamelen voor retinale montage, gebruikt u een gebogen schaar om de oogbollen los te koppelen van het orbitale weefsel van een geëuthanaseerde C57-Black / 6-pup. Plaats vervolgens gebogen tangen in het achterste deel van de oogbol, klem de oogzenuw vast en til het oog snel uit de baan. Plaats de oogbollen in voorgekoelde PBS om eventuele haren en bloed van het oppervlak te verwijderen.Wanneer alle oogbollen zijn verzameld, breng de gereinigde oogbollen over naar een microcentrifugebuis van twee milliliter met 4% paraformaldehyde en incubeer gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur en 12 tot 15 omwentelingen per minuut. Voeg aan het einde van de incubatie een druppel PBS toe aan het midden van een kweekschaal onder een ontleedmicroscoop en plaats een oogbol in de druppel. Houd de oogbol vast met een tang en gebruik een naald met een spuit van één milliliter om het hoornvlies voorzichtig bij de cornea limbus te prikken.Steek de punt van een schaar in de punctie en knip het hoornvlies langs de cornea limbus, waarbij u voorzichtig bent om het netvlies niet te knippen. Gebruik een tang om de iris en lens te verwijderen en plaats de resterende oogschelp in 4% paraformaldehyde voor een incubatie van 45 minuten bij kamertemperatuur op de shaker. Plaats aan het einde van de incubatie de vaste oogschelp in een verse druppel PBS in het midden van een nieuw cultuurgerecht.Houd de oogschelp vast met één tang en gebruik een tweede paar tangen om de retina- en scleralagen voorzichtig te scheiden. Plaats de punt van de schaar tussen het netvlies en de scleralagen en knip de sclera naar de oogzenuw. Verwijder de sclera van het netvlies om de retinale cup te verkrijgen.Laat met behulp van een tang de verbinding tussen de radiale hyaluoïde vaten en het perifere netvlies los. Gebruik een pipet van twee milliliter met de punt afgesneden om de retinale beker over te brengen in een putje van een 48-well plaat gedurende drie wasbeurten van vijf minuten in PBS op kamertemperatuur op de shaker. Na de laatste wasbeurt incubeer je de cup in 1%Triton X-100 en 5%normaal ezelsserum in PBS 's nachts bij vier graden Celsius.Om de retinale vasculatuur te labelen met isolectine B4, incubeer het netvlies in één putje van een 48-well plaat in 400 microliter 0,1% normaal ezelserum aangevuld met isolectine B4-594 's nachts bij 4 graden Celsius op een shaker. Indien nodig kan tegelijkertijd een ander primair antilichaam worden toegevoegd. Was de volgende dag het netvlies met drie wasbeurten van 20 minuten in 0,1% PBST op de shaker.Na de laatste wasbeurt incubeer het netvlies met een geschikt secundair antilichaam met hoge affiniteit gedurende één uur bij kamertemperatuur voordat u het monster gedurende 20 tot 25 minuten met DAPI labelt. Was aan het einde van de incubatie het netvlies met drie wasbeurten van 30 minuten in 0,1% PBST bij kamertemperatuur met schudden. Breng na de laatste wasbeurt de retinale cup over naar een schone dia met de opening naar boven gericht en gebruik de microscoop om het netvlies radiaal te snijden op de drie,zes, negen en 12 uur posities van de periferie naar het midden, tot één tot 1,5 millimeter van de oogzenuwkop.Spoel het netvlies drie keer met een paar druppels PBS per wasbeurt voordat u luchtgelegd papier gebruikt om het netvlies te drogen en plat te maken. Voeg een druppel montagemedium toe aan het midden van de coverslip totdat de diameter van de druppel de helft van de coverslip bedekt. Plaats vervolgens snel de coverslip montagemediumzijde naar beneden op het uitgespreide netvlies.Zodra alle retinale flat mounts zijn voorbereid, kunnen de monsters worden afgebeeld met confocale fluorescentiemicroscopie. Voeg voor in vivo beeldvorming 20 microliter mydriatische oogdruppels toe om langdurige pupilverwijding te bereiken. Plaats de pups na vijf minuten in een stabiele positie op een klein verwarmingskussen voor het beeldvormingsapparaat.Om vocht in de hoornvliezen te behouden, voegt u regelmatig kunstmatige tranen toe tijdens de beeldvormingsprocedure. Klik vervolgens op Infrared Fundus Imaging op het apparaat om de oogzenuwkop naar het midden van het scherm aan te passen. Intraperitoneaal injecteren 150 microliter 0,5% fluoresceïne natriumzoutoplossing en klik onmiddellijk op de FA- en injectieknoppen op het aanraakscherm van het beeldvormingsapparaat om de timer te starten.Na drie minuten, wanneer de bloedcirculatie van het netvlies de veneuze fase is ingegaan, verwerft u het eerste beeld van het centrale netvlies. Verplaats de lens van het beeldvormingsapparaat horizontaal naar de nasale kant van het oog totdat de oogzenuwkop zich in het midden van één kant van het beeldacquisitiegebied bevindt en maak de tweede afbeelding. Blijf de lens bewegen en verkrijg beelden van het temporale, superieure en inferieure netvlies op dezelfde manier.Als u de retinale afbeeldingen wilt verwerken in een geschikt beeldverwerkingsprogramma, opent u het menu Bestand en klikt u op Nieuw om een nieuw canvas met een zwarte achtergrond te maken. Open het beeld van het centrale netvlies. Klik vervolgens op Bestand om een tweede afbeelding toe te voegen.Pas de dekking van de tweede afbeelding aan op 60% en verplaats en wijzig het formaat van de afbeelding totdat de twee afbeeldingen elkaar overlappen. Klik op Schakelen tussen vrije transformatie- en verdraaiingsmodi en breng indien nodig subtiele aanpassingen aan de vaten aan. Stel vervolgens de dekking van de tweede afbeelding weer in op 100% Selecteer beide afbeeldingen en klik op Lagen automatisch overvloeien.Schakel Panorama in als overvloeimethode en vink ook de selectievakjes aan voor Naadloze tonen en kleuren en Transparante gebieden met behoud van inhoud vullen. Klik op OK om het naaien van de eerste twee afbeeldingen te voltooien. Voeg vervolgens de derde afbeelding toe en naai deze afbeelding aan de eerste twee afbeeldingen zoals gedemonstreerd totdat alle vijf de afbeeldingen van een enkel netvlies zijn gestikt.Wanneer alle afbeeldingen uit de analyse zijn verwerkt, gebruikt u de Crop Tool om de FFA-afbeeldingen bij te snijden tot een uniforme grootte om observatie van de veranderingen in de retinale vasculatuurdynamiek op verschillende ontwikkelingstijdpunten te vergemakkelijken. Na vijf dagen blootstelling aan hyperoxie vertonen de centrale netvliezen van postnatale dag 12 pups een groot niet-perfusiegebied. Bij overdracht naar vijf dagen hypoxische omstandigheden neovasculariseren de netvliezen geleidelijk, waarbij een toename van fluorescentiesignaal wordt vertoond dat sterker is dan dat waargenomen in de omliggende normale bloedvaten.Na postnatale dag 17 neemt de pathologische neovascularisatie snel af en vertoont het netvlies een volledig normaal uiterlijk op postnatale dag 25. Een goede herhaalbaarheid en stabiliteit van zuurstof-geïnduceerde retinopathie model kan worden bereikt door het strooisel grootte en postnatale gewichtstoename van de pups te regelen. Zoals waargenomen, piekt de vaso-obliteratie meestal op postnatale dag 12 en verdwijnt op postnatale dag 25, terwijl de neovascularisatie piekt op postnatale dag 17 en terugvalt op postnatale dag 25.Op postnatale dag 15 tot 25 zuurstof-geïnduceerde retinopathie muizen, neemt de retinale bloedvatdiameter toe en wordt zeer martelend in vergelijking met die waargenomen voor de netvliezen van normale muizen. De tang in de linkerhand speelt vooral een ondersteunende rol. Zorg ervoor dat u niet in de oogbol knijpt, die deze kan vervormen of scheuren.

monitoring-dynamic-growth-retinal-vessels-oxygen-induced-retinopathy

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Intravitale microscopie kan bij dieren worden gebruikt om retinale vaatdiameters, bloedstroomsnelheden en totale retinale bloedstroom te visualiseren en te meten.

Intravitale Video Microscopie Metingen van retinale bloedstroom in Muizen

Het knaagdier netvlies is lang erkend als een toegankelijke venster naar de hersenen. In dit technisch document bieden we een protocol dat het muismodel van zuurstof geïnduceerde retinopathie van de mechanismen die leiden tot het falen van vasculaire regeneratie binnen het centrale zenuwstelsel na ischemische schade te bestuderen in dienst heeft. Het beschreven systeem kan ook worden ingezet om strategieën te ontwikkelen om hergroei van functionele bloedvaten te bevorderen binnen het netvlies...

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

Veel visie-bedreigende oogbeschadigingen en/of ziekten worden geassocieerd met disfunctionele retinale microvessels. De meting van de retinale arteriole reacties is daarom belangrijk om te onderzoeken van de onderliggende pathofysiologische mechanismen. Dit artikel beschrijft een gedetailleerd protocol voor muis retinale arteriole isolatie en voorbereiding te beoordelen van de effecten van vasoactieve stoffen op vasculaire diameter.

Voorbereiding stappen voor meting van reactiviteit in muis retinale arteriolen Ex Vivo

Zuurstofgeïnduceerde retinopathie (OIR) kan worden gebruikt om ischemische netvliesaandoeningen zoals retinopathie van prematuriteit en proliferatieve diabetische retinopathie te modelleren en om te dienen als model voor proof-of-concept studies bij het evalueren van antiangiogene geneesmiddelen voor neovasculaire ziekten. OIR induceert robuuste en reproduceerbare neovascularisatie in het netvlies die kan worden gekwantificeerd.

Zuurstofgeïnduceerde retinopathiemodel voor ischemische netvliesziekten bij knaagdieren

Hier beschrijven we een geoptimaliseerd protocol voor retinale ader occlusie met behulp van rose bengal en een lasergeleid retinaal beeldvormingscoopsysteem met aanbevelingen om de reproduceerbaarheid ervan in genetisch gemodificeerde stammen te maximaliseren.

Optimalisatie van het Retinal Vein Occlusion Mouse Model om variabiliteit te beperken

Dit artikel beschrijft een gevestigde en reproduceerbare lectinevlekkentest voor de gehele retinale preparaten van mount en de protocollen die nodig zijn voor de kwantitatieve meting van vasculaire parameters die vaak worden gewijzigd in proliferatieve en niet-proliferatieve retinopathieën.

Kwantificering van vasculaire parameters in whole mount retinas van muizen met niet-proliferatieve en proliferatieve retinopathieën

Hier presenteren we drie data-analyseprotocollen voor fluoresceïneangiografie (FA) en optische coherentietomografie (OCT) beelden in de studie van Retinal Vein Occlusion (RVO).

In vivo Vasculaire letseluitlezingen in het netvlies van muizen om de reproduceerbaarheid te bevorderen

Het retinale vaatstelsel van muizen is bijzonder interessant voor het begrijpen van de mechanismen van vasculaire patroonvorming. Dit protocol meet automatisch de diameter van de retinale vaten van muizen op basis van fluorescerende angiografie-fundusbeelden op een vaste afstand van de optische schijf.

Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

In dit rapport stellen we een nieuwe toepassing van licht-uithardende tandheelkundige harsen voor montageplaat van elektroden of microdialyse probes in chronische experimenten. Dit materiaal maakt directe binding aan de schedel.

Toepassing van de Light-cured Dental lijm hars voor permanente montage elektroden of Microdialyseprobes bij chronische experimenten

Orthotope diermodellen van kanker van de eierstokken te repliceren beter mens-en vaatziekten en daardoor meer inzicht in de progressie van kanker en tumor respons op therapie. Een muis model krijgt een intrabursale injectie van luciferase-expressie ovarium tumorcellen. De behandeling wordt toegediend via orale sondevoeding. Tumorgroei wordt bewaakt...

In vivo beeldvorming en therapeutische behandelingen in een orthotope Muis Model van eierstokkanker

Leer retinale vlakke preparaten maken en immunofluorescentie-kleuring toepassen bij muizen met zuurstof-geïnduceerde retinopathie. Deze methode behoudt de retinale integriteit en maakt vergelijkbaar onderzoek naar vasculaire veranderingen mogelijk.

Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Meer video's verkennen