Name: Chirurgie en monsterverwerking voor correlatieve beeldvorming van de muriene longklep (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Leer een protocol voor chirurgie en correlative beeldvorming van de muriene longklep met μCT en SBF-SEM. Deze methode behoudt de fysiologische configuratie en koppelt hoge-resolutie ultrastructuur aan anatomische locaties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk wordt gedeeltelijk ondersteund door R01HL139796 en R01HL128847 subsidies aan CKB en RO1DE028297 en CBET1608058 voor DWM.

Het gebruik van dieren in deze studie was in overeenstemming met de landelijke commissie voor de verzorging en het gebruik van dieren in het Kinderziekenhuis volgens protocol AR13-00030.
1. Pulmonale klep excisie
<ol><li>Autoclaaf de benodigde tools die nodig zijn voor de muisdissectie. Dit omvat fijne scharen, micro-forceps, micro vasculaire klemmen, klem aanbrengende tang, microneedle houders, veerschaar en oprolmechanismen.</li>
	<li>Acclimatiseren alle muizen gedurende minimaal 2 weken voor de operatie. Verwijder C57BL/6 muizen, ongeveer 1 jaar oud, uit hun kooien en weeg, euthanaseer vervolgens met een ketamine/xylazine cocktail (3:1 ketamine:xylazine, 0,01 ml per g) overdosis.</li>
	<li>Plaats de muis in een dorsale lighouding op een lade en zet de ledematen vast met tape. Eenmaal vastgezet, voert u de thoracotomie uit.<ol>
<li>Stel het hart bloot door overtollig vetweefsel en fascia te verwijderen.</li>
		<li>Verwijder het rechter atrium en doordrenk door de linkerventrikel met zoutoplossing op kamertemperatuur (0,9% NaCl). De perfusie moet ongeveer 20 ml over 30 s duren. Dit resulteert in de exsanguinatie van de muis.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verwijder het hele hart door de superieure vena cava, inferieure vena cava, longslagader en aorta door te breken. Speciale zorg moet worden genomen voor de longslagader. Snijd ongeveer 2 mm boven de ventriculo-arteriële verbinding, omdat dit zal dienen als de buis voor druk.</li>
	<li>Verwijder de linker- en rechterventrikel om de kamers bloot te stellen aan atmosferische druk. Zorg ervoor dat de structuur van de longstam niet wordt aangetast door het verwijderen van de ventrikels.</li>
</ol>2. Drukfixatie van longklep
<ol><li>Anastomose drukslang met longslagader, waardoor ongeveer 1 mm afstand tussen de sino-tubulaire verbinding en het einde van de slang overblijft om grote bewegingen van de folders en de longstam mogelijk te maken.</li>
	<li>Verhef het reservoir tot een analoge fysiologische druk en vul het met de zoutoplossing. Test het doorstroomsysteem om er zeker van te zijn dat er geen verstoppingen of luchtbellen zijn.</li>
	<li>Bevestig een kraan aan de anastomosed longklep en zorg voor voldoende doorstroming door de slang (d.w.z. geen luchtbellen) door het uitstroomkanaal te schakelen. Zodra de stroom voldoende is, schakelt u de uitstroom naar de anastomosed longklep en zorgt u voor druk van de longstam. Dit wordt geïdentificeerd door pulmonale rompopstand.</li>
	<li>Zodra de druk van de longstam is bevestigd, moet geleidelijk primaire fixatieve oplossing (1,25% glutaraldehyde, 1,0% paraformaldehyde in cacodylaat van 0,15 M) worden opgenomen totdat de zoutoplossing is gezuiverd. Dit wordt gedaan door een deel, ongeveer 25% van de reservoircapaciteit, van de zoutoplossing te verwijderen en te vervangen door het primaire fixatieve. LET OP: De gebruikte fixatsmiddelen (paraformaldehyde en glutaraldehyde) zijn zeer giftig en om de veiligheid te garanderen, moeten geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen (PBM' s) worden gedragen.</li>
	<li>Plaats een fixatief gedrenkt gaas over het weefselmonster om uitdroging te voorkomen.</li>
	<li>Doorlaat het fixatief gedurende 3 uur en vul het reservoir indien nodig bij om een constante druk te behouden. Tijdens de fixatie is het niet ongewoon dat de longklep krimpt vanwege de chemische fixatie. Als dit het geval is, vult u het reservoir voortdurend aan met primair fixatief om fysiologische druk te behouden.</li>
	<li>Bewaar de hartklep in de fixatieve oplossing bij 4 °C tot gebruik. Monsters werden maximaal 1 week bewaard zonder enig waarneembaar verschil.</li>
</ol>3. En bloc monsterkleuring en inbedding15,16
LET OP: De kleuringsreagentia die in deze rubriek worden gebruikt (kaliumferrocyanide, osmiumtetroxide, thiocarbohydrazide, loodaspartaat en uranylacetaat) zijn zeer giftig en moeten met uiterste zorg worden behandeld. Het gebruik van een afzuigkap en een goede PBM wordt geadviseerd.
<ol><li>Kleuring<ol>
<li>Was het monster van de vaste hartklep gedurende 5 minuten met een koude cacodylaatbuffer van 0,15 M. Herhaal de was nog twee keer.</li>
		<li>Dompel de hartklep volledig onder in een oplossing van 1,5% kaliumferrocyanide, 0,15 M cacodylaat, 2 mM calciumchloride en 2% osmiumtetroxide, gedurende 1 uur op ijs.</li>
		<li>Bereid tijdens het incuberen thiocarbohydrazide (TCH)-oplossing door 0,1 g TCH op te lossen in 10 ml ddH2O. Plaats de oplossing gedurende 1 uur in een oven van 60 °C. Roer voorzichtig regelmatig om ervoor te zorgen dat TCH volledig is opgelost. Filtreer de oplossing vlak voor gebruik door een spuitfilter van 0,22 μm.</li>
		<li>Was de monsters met kamertemperatuur ddH 2 O door ze gedurende5minuten in een buis van ddH2O te plaatsen en licht te roeren door de container te schudden. Herhaal dit proces drie keer.</li>
		<li>Plaats het in gefilterde TCH-oplossing gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur. Voer de wasstap drie keer (elk 5 min) uit met kamertemperatuur ddH2O zoals beschreven in stap 3.1.4.</li>
		<li>Als u klaar bent, plaatst u het monster gedurende 30 minuten op kamertemperatuur in 2% osmiumtetroxide. Was het vervolgens opnieuw gedurende in totaal drie keer gedurende 5 minuten elk met kamertemperatuur ddH2O.</li>
		<li>Incubeer het monster in 1% uranylacetaat 's nachts bij 4 °C.</li>
		<li>Maak gedurende deze tijd een oplossing van 0,066 g loodnitraat in 10 ml asparaginezuurvoorraadoplossing. Stel de pH in op 5,5 met 1 N KOH. Plaats de oplossing in een oven van 60 °C om loodnitraat op te lossen.</li>
		<li>Voer na de nachtelijke incubatie de wasstap uit zoals beschreven in stap 3.1.4. Herhaal dit drie keer. Incubeer vervolgens het hartklepweefsel in lood aspartaatoplossing vanaf stap 3.1.8 in een oven van 60 °C gedurende 30 minuten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Dehydratie<ol>
<li>Was de tissues 5 min op kamertemperatuur met ddH2O. Herhaal dit driemaal.</li>
		<li>Maak verse oplossingen van 20%, 50%, 70%, 90% en 100% ethanol in ddH2O. Houd op ijs tot gebruik.</li>
		<li>Om het hartklepweefsel uit te drogen. Voer daaropvolgende behandelingen uit van 20%, 50%, 70% en 90% ethanol op ijs gedurende elk 5 minuten. Voer vervolgens twee daaropvolgende behandelingen van 100% ethanol op ijs gedurende 5 minuten uit.</li>
		<li>Verplaats het weefsel gedurende 10 minuten naar ijskoud aceton. Plaats vervolgens 10 minuten verse aceton op kamertemperatuur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Insluiten<ol>
<li>Maak het harsmengsel (zie tabel met materialen)volgens de specificaties van de fabrikant: 11,4 g component A, 10 g component B, 0,3 g component C en 0,05-0,1 g component D. Meng in eerste instantie de componenten A en B door elk van de componenten te verwarmen tot 60 °C voordat u de componenten C en D toevoegt. Het mengsel verandert in een amberkleur bij het toevoegen van componenten C en D. Het zal uniform zijn wanneer het goed wordt gemengd.</li>
		<li>Maak mengsels met volumeverhoudingen van 25:75, 50:50 en 75:25 hars:aceton. Meng.</li>
		<li>Plaats weefsels in volgende behandelingen van het 25:75, 50:50 en 75:25 hars:acetonmengsel gedurende elk 2 uur bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Plaats weefsels 's nachts in 100% hars bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Plaats de volgende dag weefsels in verse 100% hars gedurende 2 uur bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Breng de hartklepweefsels over naar een inbeddingscapsule, vervang ze door verse 100% hars en plaats ze 48 uur in een oven van 60 °C om uit te harden.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Voer correlatieve beeldvorming uit zoals hieronder wordt weergegeven.</li>
</ol>4. Micro-computertomografie beeldvorming
<ol><li>Monteer het harsmonsterblok met een lijm (lijm of dubbelzijdige tape werkt goed) op een μCT-monsterhouder.</li>
	<li>Plaats de houder in een μCT-kamer en bevestig deze op het podium door de spantang zodanig te schroeven dat er geen beweging van de houder is. Voorbeeldbeweging tijdens de scan vermindert de beeldkwaliteit.</li>
	<li>Open de μCT-gebruikersinterface door op het pictogram te dubbelklikken. Voeg een project toe door het + -teken naast Projecten te selecteren en de benodigde velden in te vullen.</li>
	<li>Zodra dit is gemaakt, zoekt u het gemaakte project en selecteert u het door erop te klikken. Hiermee wordt een tweede kolom Acquisitiesgeopend . Selecteer de + naast Aanwinsten en vul de benodigde velden in.</li>
	<li>Sluit de kamerdeuren en bewapen het systeem door op de bewapeningsknop op het voorpaneel of de μCT te drukken. Maak röntgenfoto's van de gebruikersinterface door de knop te selecteren die opWarmingaangeeft . OPMERKING: Het systeem schakelt de röntgenfoto's automatisch uit na een succesvolle opwarmprocedure. Schakel röntgenfoto's in door de knop te selecteren.</li>
	<li>Pas de podiumrotatie zo aan dat het middelpunt van de rotatie van het monster niet afwijkt van het midden van de monitor (d.w.z. het monster bevindt zich binnen het gezichtsveld voor de hele scan). Voor het systeem dat voor dit experiment wordt gebruikt, houdt dit in dat de fase van de regio van belang (ROI) wordt aangepast onder het vervolgkeuzetabblad zoals hieronder beschreven.<ol>
<li>Stel de instelling van de ROI-fase in door de rotatiehoek op 0° in te stellen en de rand van het monster te markeren. Het monster wordt vervolgens 180° gedraaid en de rand van het monster wordt opnieuw gemarkeerd.</li>
		<li>Pas de x-aspositie van de ROI-fase zo aan dat de rand van het monster zich tussen deze twee uitersten bevindt. Herhaal dit proces voor rotatiehoeken van 90° en 270° voor de y-stand.</li>
		<li>In het geval dat de rotatie van het monster ervoor zorgt dat de randen uit het gezichtsveld bewegen, vermindert u de vergroting van de μCT-behoeften totdat de randen van het monster zichtbaar zijn onder de hierboven ingestelde hoeken en een grove ROI-faseaanpassing kan worden uitgevoerd.</li>
		<li>Eenmaal aangepast bij de onderste vergroting, verplaatst u het monster of de detector om de vergroting te verhogen en kunnen de ROI-posities nauwkeurig worden aangepast. OPMERKING: Dit proces moet mogelijk worden herhaald om de uitlijning te garanderen. Een juiste uitlijning resulteert in een monster dat weinig tot geen horizontale beweging door alle rotatiehoeken van het monster laat zien.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pas de μCT aan op de gewenste scanparameters met behulp van de software van de fabrikant. Deze parameters omvatten buispotentiaal, buisstroom, detectorafstand, monsterafstand, belichtingstijd, traject en het aantal projecties (zie tabel S1 voor de μCT-acquisitieparameters die in dit onderzoek worden gebruikt). OPMERKING: Kalibratieparameters, zoals duidelijke veld- en donkere veldscans, moeten volgens de specificaties van de fabrikant worden bewaard, tenzij anders vermeld. Als een monster bijvoorbeeld te groot is en het systeem het monster niet uit de veldweergave kan verplaatsen, moet het monster worden verwijderd om duidelijke veldkalibratiescans uit te voeren.</li>
	<li>Zodra de parameters zijn ingesteld, kan een benadering van de duur van de scan worden gezien door op de knop Tijdschatting te drukken. Selecteer de startknop om de scan te starten.</li>
	<li>Zorg er na afloop van de scan voor dat de röntgenfoto's zijn uitgeschakeld, schroef de spantang los en verwijder het monster voorzichtig uit de μCT-kamer.</li>
</ol>5. Monsterverwerking en beeldcorrelatie
<ol><li>Reconstrueer μCT-projecties met behulp van een gefilterd projectiealgoritme met de software van de fabrikant (zie tabel met materialen).<ol>
<li>Selecteer het tabblad Recon boven aan het scherm. Selecteer het tabblad Project en acquisitie. </li>
		<li>Selecteer de recon-sjabloon die is gekoppeld aan de teruggefilterde projectie. Druk op de knop Recon starten. </li>
	</ol>
</li>
	<li>Identificeer en segmenteer de longklep met behulp van beeldverwerkingssoftware. Dit vereist voorkennis van de anatomie van de longklep17. Bij verhoogde arteriële druk coapt en blokkeert de blaadjes het lumen van de longklep.</li>
	<li>Identificeer de snijrichting ten opzichte van de scanrichting en het monster. Heroriënteer het monster zodanig dat de snijrichting is uitgelijnd met de gewenste as.</li>
	<li>Identificeer regio's die van belang zijn voor beeldvorming met hoge resolutie. In dit experiment werd gekozen voor de buik (midden) van de folder en de arterio-valvulaire kruising.</li>
	<li>Verwijder de overtollige hars en het monster door scheermesje of schuren voor grote stukken materiaal, of door microtome voor fijnere stukken.</li>
	<li>Eenmaal op een locatie van belang, vergelijkt u het fysieke monster met virtuele μCT-segmenten om de locatie te bevestigen. Dit werd gedaan door anatomische kenmerken aan de doorsnede te vergelijken.</li>
</ol>6. Seriële blok gezicht scannen elektronenmicroscopie18
<ol><li>Verklein de doorsnede van het monster voor SBF-SEM, ongeveer 2,0 x 1,5 x 1,8 mm.</li>
	<li>Monteer het bijgesneden monster met epoxy op de SBF-SEM aluminium stomp.</li>
	<li>Bedek het monsterblok met 35 nm goud. Draai het monster op het platform om een gelijkmatige laag coating aan te brengen.</li>
	<li>Ontlucht de SBF-SEM-kamer en stel de hoogte van het mes in op de eucentrische hoogte van de microscoop.</li>
	<li>Plaats het monster en breng de monsterstub waterpas.</li>
	<li>Afbeelding onder lage vacuümomstandigheden om opladen te voorkomen en met backscatterdetector (zie tabel S2 voor SBF-SEM acquisitieparameters).</li>
	<li>Afbeelding en steek meerdere gebieden van belang bij verschillende vergrotingen met behulp van geautomatiseerde software (zie tabel met materialen).</li>
</ol>

<ol><li>Azari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+review+of+the+cost-effectiveness+of+heart+valve+replacement+with+a+mechanical+versus+biological+prosthesis+in+patients+with+heart+valvular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Failure+Reviews%22%5BJournal%5D)">A systematic review of the cost-effectiveness of heart valve replacement with a mechanical versus biological prosthesis in patients with heart valvular disease.</a> Heart Failure Reviews. 25 (3), 495-503 (2020).</li>
<li>Ng, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2-dependent+pathogenesis+of+mitral+valve+prolapse+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">TGF-β-dependent pathogenesis of mitral valve prolapse in a mouse model of Marfan syndrome.</a> Journal of Clinical Investigation. 114 (11), 1586-1592 (2004).</li>
<li>Cheek, J. D., Wirrig, E. E., Alfieri, C. M., James, J. F., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+of+valvulogenic%2C+chondrogenic%2C+and+osteogenic+pathways+in+mouse+models+of+myxomatous+and+calcific+aortic+valve+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Differential activation of valvulogenic, chondrogenic, and osteogenic pathways in mouse models of myxomatous and calcific aortic valve disease.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 52 (3), 689-700 (2012).</li>
<li>Jiménez-Altayó, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stenosis+coexists+with+compromised+%CE%B11-adrenergic+contractions+in+the+ascending+aorta+of+a+mouse+model+of+Williams-Beuren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Stenosis coexists with compromised α1-adrenergic contractions in the ascending aorta of a mouse model of Williams-Beuren syndrome.</a> Scientific Reports. 10 (1), 889(2020).</li>
<li>Thacoor, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitral+valve+prolapse+and+Marfan+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Congenital+Heart+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitral valve prolapse and Marfan syndrome.</a> Congenital Heart Disease. 12 (4), 430-434 (2017).</li>
<li>McAnulty, P., Dayan, A., Ganderup, N. -C., Hastings, K., Dawson, H. A Comparative Assessment of the Pig, Mouse and Human Genomes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcAnulty%2C+P+%22The+Minipig+in+Biomedical+Research%22">The Minipig in Biomedical Research</a>. , CRC Press. (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+structure+and+function+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve structure and function in development and disease.</a> Annual Review of Physiology. 73, 29-46 (2011).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+remodeling+and+organization+in+developing+and+diseased+aortic+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix remodeling and organization in developing and diseased aortic valves.</a> Circulation Research. 98 (11), 1431-1438 (2006).</li>
<li>Sacks, M. S., Merryman, W. D., Schmidt, D. E., David Merryman, D. W., Schmidt, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+biomechanics+of+heart+valve+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">On the biomechanics of heart valve function.</a> Journal of Biomechanics. 42 (12), 1804-1824 (2009).</li>
<li>Sacks, M. S., Yoganathan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+function%3A+a+biomechanical+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+B-Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Heart valve function: a biomechanical perspective.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B-Biological Sciences. 362 (1484), 1369-1391 (2007).</li>
<li>Morales, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-CT+scouting+for+transmission+electron+microscopy+of+human+tissue+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Micro-CT scouting for transmission electron microscopy of human tissue specimens.</a> Journal of Microscopy. 263 (1), 113-117 (2016).</li>
<li>Sacks, M. S., Smith, D. B., Hiester, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aortic+valve+microstructure%3A+Effects+of+transvalvular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">The aortic valve microstructure: Effects of transvalvular pressure.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 41 (1), 131-141 (1998).</li>
<li>Ayoub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+valve+biomechanics+and+underlying+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Heart valve biomechanics and underlying mechanobiology.</a> Comprehensive Physiology. 6 (4), 1743-1780 (2016).</li>
<li>Stella, J. A., Liao, J., Sacks, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+biaxial+mechanical+behavior+of+the+aortic+heart+valve+leaflet%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Time-dependent biaxial mechanical behavior of the aortic heart valve leaflet.</a> Journal of Biomechanics. 40 (14), 3169-3177 (2007).</li>
<li>Korn, E. D., Weisman, R. A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((loss+of+lipids+during+preparation+of+amoebae+for+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29%2FLipids+and+Lipid+Metabolism%22%5BJournal%5D)">loss of lipids during preparation of amoebae for electron microscopy.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA)/Lipids and Lipid Metabolism. 116 (2), 309-316 (1966).</li>
<li>Tapia, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-contrast+en+bloc+staining+of+neuronal+tissue+for+field+emission+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">High-contrast en bloc staining of neuronal tissue for field emission scanning electron microscopy.</a> Nature Protocols. 7 (2), 193-206 (2012).</li>
<li>Hinton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+heart+valve+structure+and+function%3A+Echocardiographic+and+morphometric+analyses+from+the+fetus+through+the+aged+adult%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mouse heart valve structure and function: Echocardiographic and morphometric analyses from the fetus through the aged adult.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 294 (6), 2480-2488 (2008).</li>
<li>Denk, W., Horstmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+block-face+scanning+electron+microscopy+to+reconstruct+three-dimensional+tissue+nanostructure%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+Biology%22%5BJournal%5D)">Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure.</a> Plos Biology. 2 (11), 1900-1909 (2004).</li>
<li>Lincoln, J., Florer, J. B., Deutsch, G. H., Wenstrup, R. J., Yutzey, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ColVa1+and+ColXIa1+are+required+for+myocardial+morphogenesis+and+heart+valve+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">ColVa1 and ColXIa1 are required for myocardial morphogenesis and heart valve development.</a> Developmental Dynamics. 235 (12), 3295-3305 (2006).</li>
<li>Hamatani, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+investigation+of+congenital+bicuspid+aortic+valve+stenosis%2C+compared+with+atherosclerotic+tricuspid+aortic+valve+stenosis+and+congenital+bicuspid+aortic+valve+regurgitation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pathological investigation of congenital bicuspid aortic valve stenosis, compared with atherosclerotic tricuspid aortic valve stenosis and congenital bicuspid aortic valve regurgitation.</a> PLoS One. 11 (8), (2016).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets bekend te maken.

Verwijdering van de ventrikels dient twee doeleinden. Ten eerste, het blootstellen van de ventrikelzijde aan de atmosferische druk, waardoor alleen een transvalvulaire druk van de arteriële kant van de longklep hoeft te worden uitgeoefend om te sluiten, en ten tweede, het verstrekken van een stabiele basis om verdraaiing van de longstam te voorkomen. Tijdens drukopzetting disteneert de longstam radiaal en inferieur, waardoor deze gevoelig is voor verdraaiing, waardoor de longstam instort. Het voorladen van de longklep me...

De longklep (PV) dient om eenrichtingsbloeding tussen de rechterventrikel en de longslagader te garanderen. Longklepmisvormingen worden geassocieerd met verschillende vormen van aangeboren hartaandoeningen. De huidige behandeling voor aangeboren hartklepziekte (HVD) is valvulaire reparatie of klepvervanging, die meerdere invasieve operaties gedurende de hele levensduur van een patiënt kan vereisen1. Het is algemeen aanvaard dat de functie van de hartklep is afgeleid van de structuur, vaak aangeduid als de structuur-functie correleren. Meer specifiek bepalen de geometrische en biomechanische eigenschappen van het hart zijn functie. De mechanische eigenschappen worden op hun beurt bepaald door de samenstelling en organisatie van de ECM. Door een methode te ontwikkelen voor het bepalen van de biomechanische eigenschappen van muriene hartkleppen, kunnen transgene diermodellen worden gebruikt om de rol van het ECM op de hartklepfunctie en disfunctie2,3,4,5te ondervragen.
Het muriene diermodel wordt al lang beschouwd als de standaard voor moleculaire studies omdat transgene modellen gemakkelijker beschikbaar zijn bij muizen in vergelijking met andere soorten. Murine transgene modellen bieden een veelzijdig platform voor het onderzoeken van hartklep-gerelateerde ziekten6. De chirurgische expertise en instrumentatievereisten om zowel de geometrie als de ECM-organisatie te karakteriseren, zijn echter een belangrijke hindernis geweest bij het voortgang van HVD-onderzoek. Hstologische gegevens in de literatuur geven een beeld van het extracellulaire matrixgehalte van de muriene hartklep, maar alleen in de vorm van 2D-afbeeldingen, en kunnen de 3D-architectuur7,8niet beschrijven . Bovendien is de hartklep zowel ruimtelijk als tijdelijk heterogeen, waardoor het moeilijk is om conclusies te trekken over experimenten met betrekking tot ECM-organisatie als de bemonstering en exterieur niet vastliggen. Conventionele 3D-karakteriseringsmethoden, zoals MRI of 3D-echocardiografie, bieden niet de resolutie die nodig is om ECM-componenten9,10op te lossen .
Dit werk beschrijft een volledig correlatieve workflow waarbij de temporele heterogeniteit als gevolg van de hartcyclus werd aangepakt door de conformatie van de muriene PV met hydrostatische transvalvulaire druk vast te stellen. De ruimtelijke heterogeniteit werd nauwkeurig gecontroleerd door bemonsteringsgebieden van belang en het registreren van datasets van verschillende beeldvormende modaliteiten, met name μCT en seriële blok gezichtsscan elektronenmicroscopie, over verschillende lengteschalen. Deze methode van scouting met μCT voor het begeleiden van downstreambemonstering is eerder voorgesteld, maar omdat de longklep temporele variatie vertoont, was een extra niveau van controle nodig op chirurgisch niveau11.
In vivo studies die muriene hartklepbiomechanica beschrijven, zijn schaars en vertrouwen in plaats daarvan op rekenmodellen bij het beschrijven van het vervormingsgedrag. Het is van cruciaal belang dat lokale extracellulaire gegevens op de nanometerlengteschaal verband houden met de geometrie en locatie van de hartklep. Dit biedt op zijn beurt kwantificeerbare, ruimtelijk in kaart gebrachte distributies van mechanisch bijdragende ECM-eiwitten, die kunnen worden gebruikt om bestaande biomechanische hartklepmodellen12,13,14te versterken .

<table><tbody><tr><td>25% glutaraldehyde (aq)</td><td>EMS</td><td>16210</td><td>Primaire fixeermiddelcomponent</td></tr><tr><td>0.9% natriumchloride-injectie</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-4888-10</td><td></td></tr><tr><td>1 mL-sering</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>10 mL-sering</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>200 proof ethanol</td><td>EMS</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>22G naald</td><td>BD</td><td>305156</td><td></td></tr><tr><td>3 mL-sering</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>3-weg stopcock</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td>MX5311L</td><td></td></tr><tr><td>4% osmiumtetraoxide</td><td>EMS</td><td>19150</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>4% paraformaldehyde (aq)</td><td>EMS</td><td>157-4-100</td><td>Primaire fixeermiddelcomponent</td></tr><tr><td>Absorbeerbare hemostaat</td><td>Ethicon</td><td>1961</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>EMS</td><td>10012</td><td></td></tr><tr><td>Zwarte polyamide monofilament naad, 10-0</td><td>AROSurgical instruments Corporation</td><td>TI38402</td><td></td></tr><tr><td>Zwarte polyamide monofilament naad, 6-0</td><td>AROSurgical instruments Corporation</td><td>SN-1956</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 muizen</td><td>Jackson Laboratories</td><td>664</td><td>Ongeveer 1 jaar oud</td></tr><tr><td>Calciumchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10043-52-4</td><td></td></tr><tr><td>Klemtoepasser</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Wattenstaafjes</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-118</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 pincet</td><td>FST</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 pincet</td><td>FST</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7 fijn pincet</td><td>FST</td><td>11274-20</td><td></td></tr><tr><td>Durcupan ACM hars</td><td>EMS</td><td>14040</td><td>Voor inbedding</td></tr><tr><td>Fijn schaar</td><td>FST</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Heliscan microCT</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>Micro-CT</td></tr><tr><td>Ketaminehydrochloride-injectie</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-2053</td><td></td></tr><tr><td>L-asparaginezuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>56-84-8</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>Lodzaniaat</td><td>EMS</td><td>17900</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>laagvacuüm backscatter detector</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VSDBS</td><td>SEM backscatter detector</td></tr><tr><td>Micro-adson pincet</td><td>FST</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP filter, 0,22 µm, PES 33 mm, niet-sterieel</td><td>EMD Millipore</td><td>SLGP033NS</td><td></td></tr><tr><td>Niet-geweven zwammen</td><td>McKesson Corp.</td><td>94442000</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumhexacyanoferraat(II)-trihydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>14459-95-1</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>Kaliumhydroxide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1310-58-3</td><td></td></tr><tr><td>Drukbewakingslijn</td><td>Smiths Medical ASD, Inc.</td><td>MX562</td><td></td></tr><tr><td>Zoutoplossing (steriele 0,9% natriumchloride)</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC 0409-0138-22</td><td></td></tr><tr><td>Size 3 BEEM capsule</td><td>EMS</td><td>69910-01</td><td>Inbeddingscontainer</td></tr><tr><td>Natriumcacodylate trihydraat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6131-99-3</td><td>Buffer</td></tr><tr><td>Solibri retractoren</td><td>FST</td><td>17000-04</td><td></td></tr><tr><td>Sputter, koolstof en e-beam coater</td><td>Leica</td><td>EM ACE600</td><td>Goudcoater</td></tr><tr><td>Chirurgisch microscoop</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>Thiocarbohydrazide (TCH)</td><td>EMS</td><td>21900</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>Tish naaldaanhanger/pincet</td><td>Micrins</td><td>MI1540</td><td></td></tr><tr><td>Trimmer</td><td>Wahl</td><td>9854-500</td><td></td></tr><tr><td>Uranylacetaat</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>Kleurcomponent</td></tr><tr><td>Volumescope rasterelektronenmicroscoop</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>VOLUMESCOPESEM</td><td>Serieel Block Face Scanning Electron Microscope</td></tr><tr><td>Xylazinesteriele oplossing</td><td>Akorn Inc.</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr></tbody></table>

chirurgie en monsterverwerking voor correlatieve beeldvorming van de muriene longklep

Surgery and Sample Processing for Correlative Imaging of the Murine Pulmonary Valve

De onderliggende oorzaken van hartklepgerelateerde ziekte (HVD) zijn ongrijpbaar. Murine diermodellen bieden een uitstekend hulpmiddel voor het bestuderen van HVD, maar de chirurgische en instrumentale expertise die nodig is om de structuur en organisatie nauwkeurig te kwantificeren over meerdere lengteschalen heeft de vooruitgang belemmerd. Dit werk biedt een gedetailleerde beschrijving van de muriene dissectie, en bloc kleuring, monsterverwerking en correlatieve beeldvormingsprocedures voor het weergeven van de hartklep op verschillende lengteschalen. Hydrostatische transvalvulaire druk werd gebruikt om de temporele heterogeniteit te beheersen door de hartklepconformatie chemisch te bevestigen. Micro-computertomografie (μCT) werd gebruikt om de geometrie van de hartklep te bevestigen en een referentie te geven voor de downstream monsterverwerking die nodig is voor de seriële blokkoping elektronenmicroscopie (SBF-SEM). Seriële SEM-beelden met hoge resolutie van de extracellulaire matrix (ECM) werden genomen en gereconstrueerd om een lokale 3D-weergave van de organisatie te bieden. μCT- en SBF-SEM-beeldvormingsmethoden werden vervolgens gecorreleerd om de ruimtelijke variatie over de longklep te overwinnen. Hoewel het gepresenteerde werk uitsluitend op de longklep is, kan deze methodologie worden gebruikt voor het beschrijven van de hiërarchische organisatie in biologische systemen en is cruciaal voor de structurele karakterisering over meerdere lengteschalen.

Anastomose van de longslagader naar de drukslang is weergegeven in figuur 1A. Na het toepassen van hydrostatische druk distent de longstam radiaal (figuur 1B) wat aangeeft dat de longklepbijsluiters zich in een gesloten configuratie bevinden. Longklepconformatie werd bevestigd door μCT. In dit geval waren de bijsluiters coapt (gesloten) en was de annulus circulair (figuur 2A). Figuur 2B,C</stron...

Hier beschrijven we een correlatieve workflow voor de excisie, druk, fixatie en beeldvorming van de muriene longklep om de bruto-conformatie en lokale extracellulaire matrixstructuren te bepalen.

Chirurgie en monsterverwerking voor correlatieve beeldvorming van de muriene longklep

The underlying causes of heart valve related-disease (HVD) are elusive. Murine animal models provide an excellent tool for studying HVD, however, the ...

Dit protocol is belangrijk omdat het is ontworpen om vragen te beantwoorden over de structuurfunctie correleren van de muriene longklep, die over het algemeen lastig is vanwege de inherente heterogeniteit. De gecontroleerde fixatie en correlatieve beeldvorming werden gebruikt om de structuur op meerdere lengteschalen vast te leggen. Lokale beelden met hoge resolutie kunnen vervolgens worden teruggeplaatst naar de precieze anatomische locatie op de longklep.De demonstranten van de procedure zijn Dr.Tai Yi, de directeur van microchirurgie in het Centrum voor Regeneratieve Geneeskunde van het Nationwide Children's Hospital. Begin met het autoclaaf van de gereedschappen die nodig zijn voor de dissectie van de muis, waaronder fijne scharen, microforceps, microvasculaire klemmen, klemaanbrengende tangen, microneedlehouders, veerscharen en oprolmechanismen. Na het euthanaseren van een volwassen C57BL/6-muis, plaatst u deze in een dorsale ligfietspositie op een dienblad, zet u de ledematen vast met tape en voert u de thoracotomie uit.Stel het hart bloot door overtollig vetweefsel en fascia te verwijderen, verwijder vervolgens het rechter atrium en doordrenk de linkerventrikel met zoutoplossing op kamertemperatuur. Verwijder het hele hart door de superieure vena cava, inferieure vena cava, longslagader en aorta te doorsnijden en snijd ongeveer twee millimeter boven de ventriculoatriale verbinding, die zal dienen als de buis voor druk. Verwijder de linker- en rechterventrikels om de kamers bloot te stellen aan atmosferische druk, zodat de longstamstructuur niet wordt beïnvloed door het verwijderen van de ventrikels.Anastomose drukslang met de longslagader, waardoor ongeveer een millimeter afstand tussen de sinotubulaire verbinding en het einde van de slang overblijft om grote bewegingen van de folders en de longstam mogelijk te maken. Verhef het reservoir tot een analoge fysiologische druk en vul het met de zoutoplossing. Test het doorstroomsysteem om er zeker van te zijn dat er geen verstoppingen of luchtbellen zijn.Bevestig een kraan aan de anastomosed longklep en zorg voor voldoende doorstroming door de slang door het uitstroomkanaal te schakelen. Zodra de stroom voldoende is, schakelt u de uitstroom naar de anastomosed longklep en zorgt u voor druk van de longstam die wordt geïdentificeerd door stamopgezette stand. Na bevestiging van de druk van de longstam, geleidelijk primaire fixatieve oplossing opnemen totdat 25% van de reservoircapaciteit van de zoutoplossing is gezuiverd.Plaats een fixatief gedrenkt gaas over het weefselmonster om uitdroging te voorkomen. Doordrenkt het fixatief gedurende drie uur en vul het reservoir om een constante druk te behouden. Bewaar na perfusie de hartklep in de fixatieve oplossing bij vier graden Celsius tot gebruik gedurende maximaal een week.Voor het kleuren, was het vaste hartklepmonster drie keer met koude 0,15 molaire cacodylaatbuffer gedurende vijf minuten en dompel de hartklep volledig onder in een oplossing van 1,5 kaliumferrocyanide, 0,15 molair cacodylaat, twee millimolylcalciumchloride en 2% osmiumtetroxide op ijs gedurende een uur. Was de monsters met dubbel gedestilleerd water op kamertemperatuur door ze vijf minuten in een buis te plaatsen met lichte agitatie. Na nog drie wasbeurten plaatst u het monster in gefilterde thiocarbohydrazideoplossing op kamertemperatuur.Was het monster na 20 minuten driemaal met water, zoals eerder is aangetoond. Plaats vervolgens het monster in 2% osmiumtetroxide bij kamertemperatuur. Was het na 30 minuten drie keer gedurende vijf minuten met water en incubeer het monster 's nachts in 1% uranylacetaat bij vier graden Celsius.Bereid ondertussen een oplossing van loodnitraat voor. Voer de volgende dag de wasstap drie keer uit zoals eerder is aangetoond en incubeer vervolgens het hartklepweefsel in lood aspartaatoplossing bij 60 graden Celsius gedurende 30 minuten. Was de monsters nog drie keer en voer vervolgens een seriële uitdrogingsbehandeling uit op de hartklepweefsels met vers bereide 20, 50, 70 en 90% ethanol op ijs gedurende elk vijf minuten, gevolgd door twee daaropvolgende behandelingen met 100% ethanol.Na uitdroging verplaatst u de weefsels naar ijskoud aceton en plaatst u het vervolgens gedurende 10 minuten in verse aceton op kamertemperatuur. Maak voor inbedding het harsmengsel volgens de specificaties van de fabrikant. Plaats weefsels in volgende behandelingen van 25 tot 75, 50 tot 50 en 75 tot 25 hars tot acetonmengsel gedurende elk twee uur.Plaats ten slotte de weefsels 's nachts in 100% hars. Leg de volgende dag weefsels in verse 100% hars. Breng na twee uur de weefsels over naar een inbeddingscapsule, voeg verse 100% hars toe en plaats het gedurende 48 uur in een oven van 60 graden Celsius om uit te harden.De verwijderde anastomosed longslagader voor en na de toepassing van hydrostatische druk wordt hier getoond. De longstam distends radiaal aan te geven dat de longklep folders zijn in een gesloten configuratie. Microgecomputeerde tomografie bevestigde de bevestiging van de longklep.De bijsluiters werden gesloten en de annulus was rond, terwijl verschillende gradaties van ontoereikende longklepdruk door fixatie of arteriële instorting werden waargenomen. Het micro CT-volume dat virtuele doorsneden weer geeft, was gecorreleerd met optische beelden om de snijrichting en locatie te bevestigen. SBF SEM-beelden met hoge resolutie werden genomen in een lokale regio in een bijsluiter wanneer het specimenblok zich op de gewenste locatie en oriëntatie bevond.Gecorreleerde afbeeldingen tussen de micro CT-volumeweergave virtuele slice, lage resolutie en hoge resolutie SBF SEM-afbeeldingen worden hier weergegeven. In 3D-weergave van een gesegmenteerd gebied van de longklep kunnen extracellulaire componenten zoals endotheelcellen, valvulaire interstitiële cellen en extracellulaire vezels worden geïdentificeerd. Houd er bij het proberen van dit protocol rekening mee dat het uitvoeren van de druk kritiek is en ervoor zorgt dat de opbrengst zo hoog mogelijk is.

surgery-sample-processing-for-correlative-imaging-murine-pulmonary

Research

JoVE Journal

Engineering

Techniek

Hoge frequentie Doppler-echografie is een nieuwe technologie voor de beoordeling van regionale myocardiale functie. Dit werk presenteert eerste bewijs waaruit de toepasselijkheid van deze veelzijdige imaging platform voor de herhaalde meting van het myocard stam, dp / dt, en mitralisinsufficiëntie in de ischemie-reperfusie (IR) muizen hart.

Hoogfrequente hoge resolutie Echocardiografie: eerste bewijs op niet-invasieve Herhaalde Maatregel van myocard Strain, contractiliteit, en mitralisinsufficiëntie in de Ischemie-reperfusie Murine Hart

In this video, we describe the procedure to isolate and chemically fix the mouse pulmonary value in closed conformation via perfusion pressurization.

Pressure Fixation of Isolated Murine Pulmonary Valve: A Procedure to  Isolate and Chemically Fix the Mouse Pulmonary Valve in Closed Conformation

Rechterventrikel (RV) disfunctie is cruciaal voor het ontstaan ​​van hart-en vaatziekten, maar beperkt voorhanden zijn voor de evaluatie ervan. Recente ontwikkelingen in de echografie zorgen voor een niet-invasieve en accurate optie voor longitudinale RV studie. Hierin hebben we een stap-voor-stap echocardiografische onder toepassing van een muizenmodel van drukoverbelasting detail.

Beoordeling van de rechter ventrikel structuur en functie in een muismodel van longslagader Vernauwing door Transthoracale Echocardiografie

Om de cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen neotissue vorming en stenose ontwikkeling in tissue engineered hartkleppen begrijpen, een muizenmodel van heterotopische hartklep transplantatie werd ontwikkeld. Een pulmonale hartklep werd getransplanteerd naar ontvanger via de heterotopische harttransplantatie techniek.

Transplantatie van Pulmonary Valve een muis model van Heterotope Heart Transplantation

Dit protocol geeft een gedetailleerde beschrijving van de echocardiografische benadering voor uitgebreide fenotypering van de hart- en hartklepfunctie bij muizen.

Echocardiografische benaderingen en protocollen voor Comprehensive Fenotypische karakterisering van Valvular hart-en vaatziekten in Muizen

Hier bieden we een nuttige aanpak voor het bestuderen van het mechanisme van rechter ventriculaire mislukking. Een handiger en efficiënter aanpak van de longslagader vernauwing wordt vastgesteld met behulp van chirurgische instrumenten gemaakt inhouse. Bovendien worden methoden voor het evalueren van de kwaliteit van deze aanpak door echocardiografie en catheterisatie geleverd.

Inductie van rechter ventrikel falen door longslagader vernauwing en evaluatie van rechter ventriculaire functie bij muizen

Een knaagdier model van linker hart volume overbelasting van mitralregurgitatie wordt gemeld. Mitralisregurgitatie van gecontroleerde ernst wordt veroorzaakt door het bevorderen van een naald van gedefinieerde afmetingen in de voorste bijsluiter van de mitralisklep, in een kloppend hart, met echografie.

Een beeld Geleid Transapical Mitral Valve Leaflet Punctie Model van controlled volume overbelasting van Mitral Regurgitation in de Rat

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor het behoud van de vasculaire contractiliteit van PCLS-muizenlongweefsel, wat resulteert in een geavanceerd driedimensionaal beeld van de pulmonale vasculatuur en de luchtwegen, die tot 10 dagen kunnen worden bewaard en die vatbaar zijn voor tal van procedures.

Precisie gesneden longplakken als een efficiënt hulpmiddel voor ex vivo longvatstructuur en contractiliteitsstudies

Dit protocol demonstreert microscopiegeleide isolatie en immunofluorescentiekleuring van longaders van muizen. We bereiden weefselmonsters voor die het linker atrium, de longaders en de bijbehorende longen bevatten en kleuren ze voor cardiale troponine T en Connexin 43.

Microdissectie en immunofluorescentiekleuring van myocardiale hulzen in longaders van muizen

We beschrijven een muizenmodel van overbelasting van de rechterventrikeldruk geïnduceerd door pulmonale rompbanden. Gedetailleerde protocollen voor intubatie, chirurgie en fenotypering door middel van echocardiografie zijn opgenomen in de paper. Op maat gemaakte instrumenten worden gebruikt voor intubatie en chirurgie, waardoor het model snel en goedkoop kan worden gereproduceerd.

Een muizenmodel van door drukoverbelasting geïnduceerde rechterventrikelhypertrofie en falen door pulmonale rompbanden

Leer een protocol voor chirurgie en correlative beeldvorming van de muriene longklep met μCT en SBF-SEM. Deze methode behoudt de fysiologische configuratie en koppelt hoge-resolutie ultrastructuur aan anatomische locaties.

Chirurgie en monsterverwerking voor correlatieve beeldvorming van de muriene longklep

Meer video's verkennen