Behandelingstechnieken om stress bij muizen te verminderen

Mijn naam is Dr.Thomas Prevot. Ik ben wetenschapper in het Center for Addiction and Mental Health, of CAMH, en een universitair docent aan de Universiteit van Toronto in het departement Psychiatrie. Mijn fractie heeft een bijzondere interesse in het verminderen van angst en reactiviteit bij muizen bij de uitgangssituatie om de gegevensvariabiliteit te verminderen en het dierenwelzijn te verbeteren.

Muizen hebben bewezen van onschatbare waarde te zijn in basiswetenschap en preklinisch onderzoek, maar zeer weinig laboratoria over de hele wereld controleren op angst bij aanvang en de reactiviteit van hun proefdieren, waardoor de reproduceerbaarheid van gegevens tussen laboratoria wordt bemoeilijkt. Een belangrijke factor die bijdraagt aan angst bij aanvang zijn ongecontroleerde omgevingsvariabelen, zoals huisvestingsomstandigheden, milieuverrijking en blootstelling aan stress. Hoewel standaardisatie van huisvestingsomstandigheden en verrijking dit probleem heeft verbeterd, is blootstelling aan stress tijdens interactie met experimenteerders nog steeds grotendeels ongeadresseerd bij muizen.

Staartbehandeling, het proces van het tillen van de muis bij de staart, is nog steeds de muis veel gebruikte muisbehandelingstechniek, ondanks dat het bijzonder stressvol is. Hoewel er alternatieven voor staartafhandeling zijn ontstaan, waaronder tunnelafhandeling en cup handling. De toepassing van deze technieken is traag verlopen.

Hier beschrijven we een nieuwe techniek, vergelijkbaar met cup handling, die kan worden geïmplementeerd met slechts drie dagen gewennerij, of 3D-handling. Door de mate en complexiteit van interactie geleidelijk te verhogen en te evolueren als reactie op de reactiviteit van de muis op bepaalde verwerkingsmijlpalen, kunnen we stress verminderen en routinematige behandeling vergemakkelijken. We beoordelen de werkzaamheid van 3D-behandeling bij muizen in gedragstests, beoordelen angstachtig gedrag, interactie met experimenteerders en perifeer stresshormoon, corticosteron, niveaus en bieden een vergelijking met tunnelbehandelings- en staartbehandelingstechnieken.

Open voorzichtig de kooi en plaats het deksel op de zijkant. Introduceer je gehandschoende hand in de thuiskooi voordat je probeert de muis op te pakken. Laat de muis ongeveer 30 seconden gewennen aan de aanwezigheid van de hand.

Probeer dan de muis in gecupte handen op te pakken. Als de muis niet gemakkelijk kan worden opgepikt, kop dan beide handen samen en gebruik ze om de muis naar de hoek van de kooi te leiden. Gebruik vervolgens beide handen om de muis op te pakken.

Zodra de muis uit de kooi is verwijderd, houdt u uw handen zo plat en open mogelijk. Laat de muis vrij verkennen. Dit biedt een plat platform voor de muis om op te stappen en beperkt het risico op bijten.

Houd de hand open en plat, met de handpalm omhoog. Plaats uw andere hand naast de muis en laat de muis vrij van hand tot hand bewegen, zonder enige terughoudendheid. Na een minuut hanteren met platte handen, ontspan de palm van uw hand en cup de muis lichtjes in uw hoofd, voordat u de muis voorzichtig tussen de handen rolt.

Ga vier minuten door, afwisselend tussen zacht rollen tussen handen en vrije verkenning van je open handen. Voer de laatste twee minuten een beschuttingstest uit. Laat de muis naar de rand van uw hand bewegen en breng de twee handen samen.

Heel langzaam, cup je handen zodat de muis past in een schuilplaats gevormd door de handen. Zorg ervoor dat u een opening achterlaat, zodat de muis indien nodig kan ontsnappen. Probeer de muis vijf tot 10 seconden in de schuilplaats te houden zonder enige terughoudendheid.

Herhaal de sheltertest drie tot vier keer in de afgelopen twee minuten. Overhaast het proces niet. Als de muis gestrest lijkt door in de hand te worden opgesloten, gaat u door met rollen tussen de handen en vrije verkenning gedurende 30 seconden en probeert u de shelter-test opnieuw uit te voeren.

Laat vrije verkenning in handen gedurende 30 seconden en vervang vervolgens voorzichtig de muis in zijn kooi. Reinig de bovenkant van de tafel van eventuele uitwerpselen en urine met 70% ethanol of een geschikte reinigingsoplossing. Reinig de handschoenen van uitwerpselen en urine indien nodig en spoel bij het overschakelen naar een nieuwe kooi handschoenen af met 70% ethanol of verwissel handschoenen.

Tegen dag twee zou het al haalbaar moeten zijn om de muis in gecupte handen uit de kooi te verwijderen. Als de muis reactief lijkt, voert u de platte hand en vrije verkenning van open hoofden gedurende 30 seconden tot een minuut uit. Ga anders verder met de rol tussen handen en de schuilplaatstest.

Voer de rol uit tussen handen en beschuttingsstappen vanaf dag één gedurende twee tot drie minuten. Voer elke stap meerdere keren uit. Als de muis op zijn gemak lijkt in de asieltest, probeer dan de muis op de rug en het hoofd te aaien.

Als de muis niet probeert contact te ontvluchten, ga dan verder met de neusplooi. Raak de muis voorzichtig aan op de punt van de snuit. Als het niet bijt of probeert zijn hoofd te draaien, is dit een goed teken van gewent.

Voor de aaien en neus por test, haast het proces niet. Als de muis gestrest lijkt door in de handen te worden opgesloten of niet wil worden aangeraakt, gaat u een paar minuten door met het rollen tussen de handen en probeert u het vervolgens opnieuw. Stop deze sessie na ongeveer drie minuten hanteren, als het dier goed reageert op het asiel, hoofd aaien en neus porren.

En als het dier bereid lijkt te zijn om je handen te verkennen zonder tekenen van stress, zoals pogingen om te ontsnappen, uit de handen springen of contact met de handen vermijden. Als de muis tekenen van stress blijft vertonen of niet goed reageert op de sheltertest of neusplooitest, gaat u door met de sessie tot het bereiken van vijf minuten, zoals op dag één. Plaats de muis in de kooi en maak het tafelblad en de handschoenen schoon.

Op de derde dag doorloopt u dezelfde stappen die dag twee. Pak de muis in de palm van de hand. Breng de muis tussen de handen.

Beperk de muis voorzichtig in gecupte handen. Als de muis goed reageert op deze stappen, probeer dan de muis te aaien en de neusplooitest te proberen. Op de derde dag moet de muis ontspannen genoeg zijn om in de palm van zijn hand te zitten zonder af te gaan, en je moet deze stappen gedurende ongeveer twee tot drie minuten kunnen doorlopen.

Vervang de muis in de kooi en maak het tafelblad en de handschoenen schoon. Op de derde dag. als het dier wordt vastgehouden voor experimentele doeleinden, zoals orale gavage of intra-peritoneale injectie, kunnen de muizen worden onderworpen aan de nekknijptest.

Pak de muis bij de nek van de nek, tussen duim en wijsvinger en til de muis twee tot drie seconden vijf centimeter boven je hand. Dit is normaal gesproken een ongemakkelijke positie voor volwassen muizen, en als de muizen in de buurt van immobile blijven, zijn ze goed gewend aan hantering en zullen ze gemakkelijk te beperken zijn voor injecties. Plaats de muis terug op uw platte hand en laat hem een minuut vrij verkennen.

Dieren werden getest op hun bereidheid om vrijwillig met de experimenteerder te communiceren en het gemak van omgaan in een experimentele context. In studie één hadden muizen die werden behandeld door buisbehandeling of 3D-behandeling minder kans om te vluchten wanneer een experimenteerder een muis probeert op te pikken. Bovendien bracht studie één muis die met behulp van de 3D-techniek werd behandeld meer tijd door in hetzelfde kwadrant als de hand van de experimenteerder, wat wijst op een verhoogde bereidheid om met de experimenteerder te communiceren.

In studie twee hadden muizen die werden behandeld door buisbehandeling of 3D-behandeling minder kans om te vluchten wanneer een experimenteerder de muis probeert op te pikken in vergelijking met muizen met staartbehandeling. In studie twee had de hanteringstechniek echter geen significante invloed op de tijd die in hetzelfde kwadrant als de hand van de experimenteerder werd doorgebracht. Het effect van 3D- en tunnelbehandeling werd vergeleken met staartbehandeling in twee tests van angstachtig gedrag, de nieuwigheid onderdrukte voedingstest en het verhoogde plusdoolhof.

In studie één, in de nieuwigheid onderdrukte voedingstest, was er een trend om angst te verminderen in tunnel behandelde en 3D behandelde muizen. In het verhoogde plusdoolhof was er geen algemeen effect van de hantering. Wanneer samengevat als een Z-score, was er een significante vermindering van de algehele angst in tunnel behandelde en 3D behandelde muizen in vergelijking met staart behandelde muizen.

In studie twee was er geen algemeen effect van behandeling op angstmaatregelen in de nieuwigheid onderdrukte voedingstest of het verhoogde plusdoolhof. Samengevat als een Z-score, had de handlingtechniek geen algemeen effect op angst. Als fysiologische maat voor stress verzamelden we serum van behandelde staart, 3D-behandelde en tunnel behandelde muizen 15 minuten na een korte behandelingssessie en testten we corticosteronniveaus.

Er was geen algemeen effect van behandeling in studie één. In studie twee verminderde 3D-handling de corticosteronspiegels aanzienlijk in vergelijking met staartbehandeling. Op basis van observaties dat hanteringstechnieken bij muizen niet algemeen worden erkend door de wetenschappelijke gemeenschap, beschreven we het gebruik van een nieuwe hanteringstechniek.

In beide gepresenteerde studies verminderde tunnel- en 3D-behandeling de pogingen van muizen om te vluchten wanneer ze werden opgepikt, wat mogelijk routinematige behandeling vergemakkelijkt. Bovendien verminderde deze techniek bij oudere mannelijke muizen angstachtig gedrag en verhoogde interactie met de experimenteerder. Bij jonge vrouwtjes.

deze techniek verlaagde de corticosteronspiegels die werden waargenomen als reactie op de behandeling. Het implementeren van deze techniek kan de gegevensvariabiliteit verminderen, het dierenwelzijn verbeteren en routinematige hantering vergemakkelijken.