Name: Retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van Stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-08-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 50 s
Description: Leer retrograde speekselklierinfusie voor gentherapie en vaccinatie bij niet-menselijke primaten. Deze reproduceerbare methode maakt vectorgemedieerde genafgifte toegankelijk voor onderzoekers zonder chirurgische achtergrond.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen de heer Cagney Gentry bedanken voor zijn audiovisuele ondersteuning bij het filmen van de procedure. We willen ook het Hefner VA medisch centrum erkennen voor academische ondersteuning bij het nastreven van dit project.

Alle procedures werden uitgevoerd op wake forest school of medicine Clarkson Campus voor dierstudies. Het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) werd geraadpleegd voor ethische overwegingen en details van de procedures werden ter beoordeling voorgelegd. Wake Forest IACUC keurde ons onderzoeksprotocol goed en alle procedures werden uitgevoerd onder het door IACUC goedgekeurde protocol #A17-147.
1. Voorbereiding van het infuusapparaat
<ol><li>Knip maat 10 Polyethyleen Buis (PET10) in lengtes van 25 cm met een schaar.</li>
	<li>Markeer PET10 op 1 cm en 2 cm van het ene uiteinde met een zwarte stift.</li>
	<li>Vul 0,5 ml Ad5-EGFP-oplossing (109 virale deeltjes/ml) voor in een spuit van 1 ml (tuberculine).</li>
	<li>Schuif het niet-gemarkeerde uiteinde van de PET10-buis over een naald van 29-31 G die aan een spuit is bevestigd. Het is over het algemeen gemakkelijker om deze taak onder vergroting uit te voeren.</li>
	<li>Laat de oplossing in de PET10 trekken totdat de buis volledig vol is (zichtbare druppel aan het vrije uiteinde).</li>
	<li>Gebruik volledige standaard PBM's, waaronder chirurgische scrubs, jurk met lange mouwen, ondoordringbare handschoenen, chirurgisch masker, gezichtsscherm, haarkap en schoenovertrekken.</li>
</ol>2. Het dier voorbereiden
OPMERKING: Cynomolgus makaken werden gebruikt voor de videodemonstratie. De anatomie van andere niet-menselijke en menselijke primaten lijkt erg op elkaar en het protocol moet vertaalbaar zijn naar andere soorten.
<ol><li>Injecteer subcutaan 0,05 mg/kg atropine 15 minuten voorafgaand aan de procedure om speekselafscheidingen te minimaliseren en de distributie en retentie van het infusaat te optimaliseren.</li>
	<li>Zorg voor anesthesie met behulp van 5 ml spuiten met intramusculaire ketamine / midazolam (10-15 mg / kg ketamine en 0,01-0, 05 mg / kg midazolam). Bevestig de juiste anesthesie wanneer het verdoofde dier bewusteloos raakt en niet in staat is om op stimuli te reageren.</li>
</ol>3. Uitvoeren van de procedure
<ol><li>Gebruik orale retractors om de open mond te schrap te zetten.<ol>
<li>Plaats het rubberen kussen van het ene uiteinde van het retractor op het harde gehemelte achter de boventanden aan de kant van de mond tegenover de klier die zal worden toegediend. Plaats het rubberen kussen van het andere uiteinde op de onderste hond aan dezelfde kant als het bovenste oprolmechanisme. Laat de veerwerking van het retractor voorzichtig uitzetten en de mond openen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Identificeer de parotis papilla, de opening van Stensen's Duct, op de achterste wang, grenzend aan de bovenste2e kies. Dit kan het beste worden gevisualiseerd met behulp van tandheelkundige lussen voor vergroting.</li>
	<li>Verwijd de parotis papilla voorzichtig met de punt van de conische dilatator. Het is het beste om het punt van de dilatator in het midden of de opening van de papilla te plaatsen en deze vervolgens voorzichtig heen en weer te draaien. Het punt moet langzaam de papilla binnendringen en deze verwijden over ongeveer 20 - 30 s zacht roterend.</li>
	<li>Steek de PET10-slang in de verwijde parotispapillen. Dit kan het beste worden bereikt door het gemarkeerde uiteinde van de PET10-buis met een pincet ongeveer 0,5 cm van het distale uiteinde vast te houden en de punt van de buis voorzichtig in de verwijde papilla in te brengen.<ol>
<li>Breng de buis voorzichtig vooruit, wat vaak wordt vergemakkelijkt door kleine roterende bewegingen om de buis te laten glijden, gevolgd door het afstellen van het pincet 0,5 cm proximaal ten opzichte van de vorige greep. Herhaal dit totdat de 2 cm markering de parotis papilla bereikt.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Breng cyanoacrylaat aan op de wang rond de papilla en de ingebrachte buis en wacht tot deze droog is (geen specifieke hoeveelheid geregistreerd, net genoeg om de ingang van Stensen's duct papilla af te sluiten). Dit duurt meestal minder dan een minuut en helpt de parotis papilla af te sluiten en het morsen van infusaat terug in de mondholte te verminderen.</li>
	<li>Duw de inhoud van de spuit langzaam gedurende 5 minuten met een snelheid van 100 μL/min. Deze langzame infusiesnelheid minimaliseert het risico op kanaalletsel als gevolg van een plotselinge toename van de intra-ductale druk.</li>
	<li>Laat PET10 op zijn plaats gedurende ten minste 5 minuten nadat de infusie is voltooid. Houd het kanaal afgesloten en laat het infundaat in de parotisklier blijven.</li>
	<li>Verwijder PET10 met zachte grip. Het cyanoacrylaat trekt los met de buis.</li>
	<li>Herhaal stap 3.2 tot en met 3.8 aan de andere kant.</li>
	<li>Laat orale retractors langzaam los nadat beide parotis zijn toegediend en beide PET10-buizen zijn verwijderd. OPMERKING: De hele procedure voor beide zijden duurt minder dan 30 minuten.</li>
</ol>4. Post-procedurele zorg
<ol><li>Nadat de infusie is voltooid en het kanaal van Stensen is gedecannuleerd, observeert u de dieren totdat het anesthesie-effect verdwijnt (meestal tussen 20-30 minuten na de procedure).</li>
	<li>Bied het dier drankjes en vervolgens voedsel aan nadat ze volledig wakker zijn en hervat de routinezorg.</li>
</ol>

<ol><li>Isenman, L., Liebow, C., Rothman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+secretion+of+mammalian+digestive+enzymes+by+exocrine+glands%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">The secretion of mammalian digestive enzymes by exocrine glands.</a> The American Journal of Physiology. 276, 223-232 (1999).</li>
<li>Perez, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+epithelial+cells%3A+An+unassuming+target+site+for+gene+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Salivary epithelial cells: An unassuming target site for gene therapeutics.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 42, 773-777 (2010).</li>
<li>Kochel, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+virus+serotype-1+DNA+vaccine+induces+virus+neutralizing+antibodies+and+provides+protection+from+viral+challenge+in+Aotus+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A dengue virus serotype-1 DNA vaccine induces virus neutralizing antibodies and provides protection from viral challenge in Aotus monkeys.</a> Vaccine. 18, 3166-3173 (2000).</li>
<li>Ponzio, T. A., Sanders, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+salivary+gland+as+a+target+for+enhancing+immunization+response%5BTitle%5D)+AND+%22Tropical+Diseases%2C+Travel+Medicine+and+Vaccines%22%5BJournal%5D)">The salivary gland as a target for enhancing immunization response.</a> Tropical Diseases, Travel Medicine and Vaccines. 3, 4(2017).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 19403-19407 (2012).</li>
<li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+of+Transgenic+Secretory+Proteins+in+Rhesus+Macaque+Parotid+Glands+After+Adenovirus-Mediated+Gene+Transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Sorting of Transgenic Secretory Proteins in Rhesus Macaque Parotid Glands After Adenovirus-Mediated Gene Transfer.</a> Human Gene Therapy. 19, 1401-1405 (2008).</li>
<li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+systemic+transgene+expression+after+nonviral+salivary+gland+transfection+using+a+novel+endonuclease+inhibitor%2FDNA+formulation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Enhanced systemic transgene expression after nonviral salivary gland transfection using a novel endonuclease inhibitor/DNA formulation.</a> Gene Therapy. 10, 2133-2138 (2003).</li>
<li>Niedzinski, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+Enhancement+of+Nonviral+Salivary+Gland+Transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Zinc Enhancement of Nonviral Salivary Gland Transfection.</a> Molecular Therapy. 7, 396-400 (2003).</li>
<li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+salivary+glands%3A+From+the+bench+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+-+Molecular+Basis+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in salivary glands: From the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. , (2011).</li>
<li>Voutetakis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-Associated+Virus+Serotype+2-Mediated+Gene+Transfer+to+The+Parotid+Glands+of+Nonhuman+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Adeno-Associated Virus Serotype 2-Mediated Gene Transfer to The Parotid Glands of Nonhuman Primates.</a> Human Gene Therapy. 18, 142-150 (2007).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hier beschrijven we een protocol van retrograde infusie in de parotisklier via het kanaal van Stensen. De beschreven methodologie biedt richtlijnen die mogelijk kunnen worden gebruikt door onderzoekers die het nut van speekselweefsel onderzoeken als een site voor gentherapie en andere toepassingen.
Er zijn meerdere kritieke stappen om het succes van de procedure te garanderen. Eerst en vooral moeten alle procedurele stappen voorzichtig worden voltooid. Krachtige versteviging van de mond kan le...

Hoewel speekselklieren bekend staan om hun exocriene productie van speeksel, hebben onderzoekers al lang hun vermogen erkend om eiwitten rechtstreeks in de bloedbaan af tescheiden 1, waardoor ze een potentieel doelwit zijn voor gentherapie voor systemische toediening, zoals vervangingshormonen of antilichaamproductie. In feite bieden speekselklieren verschillende voordelen ten opzichte van andere weefseldoelen, zoals het inherente vermogen om eiwitten te produceren voor secretie (een eigenschap die spieren missen), zware inkapseling die vectordiffusie kan beperken en goed gedifferentieerd weefsel dat stabiliteit biedt voor niet-integrerende vectoren. Bovendien zijn speekselklieren in het geval van een ernstige bijwerking niet kritiek voor het leven en kunnen ze operatief worden verwijderd. Hoewel niet onmiddellijk intuïtief, zijn parotisklieren ook gemakkelijk toegankelijk vanuit de mond via hun belangrijkste uitscheidingskanaal, Stensen's Duct2.
Gezien de voordelen van speekselweefsel voor gentherapie, is er steeds meer interesse in het verkennen van dit weefseldoel. Talrijke studies zijn al uitgevoerd in knaagdier-, honden- en niet-menselijke primatenmodellen en ten minste één klinische proef bij mensen is aan de gang3,4,5. Om het nut van dit weefseldoel voor gentherapiedoeleinden verder te onderzoeken en te ontwikkelen, zullen meer niet-menselijke primatenstudies moeten worden uitgevoerd. Dit artikel beschrijft een methode voor toegang tot de parotisklieren via Stensen's Duct om een vectored gen voor transductie af te leveren in het niet-menselijke primaatmodel. Om de afgifte van het infundaat en de anatomie van het kanaal bij het binnenkomen van de klier zichtbaar aan te tonen, werd fluoroscopie met behulp van radiocontrast uitgevoerd. Om succesvolle transductie van een vector aan te tonen, werd een Adenovirus serotype 5 (Ad5) vectored egfp-gen gebruikt. Ad5 is een goed beschreven vector die speekselweefsel kan transduceren. Hoewel het te immunogeen is voor ultiem klinisch gebruik, werd voor deze demonstratiestudie een Ad5-vector gekozen om efficiënte transductie te garanderen. Het evalueren van Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) productie is een goed beschreven methode om succesvolle transcriptie en translatie van een vectored gen na transductie aan te tonen en werd hier gedaan.

<table><tbody><tr><td>500 &micro;L U100-spuitpompjes met 30-gauge naalden</td><td>Becton Dickinson</td><td>328466</td><td>vaste naald voor minder verspilling</td></tr><tr><td>Kleefstof (bijv. Ethicon Dermabond)</td><td>Verschillende</td><td></td><td>Cyanoacrylaatkleefstof om de slang in de ductus te verzegelen en vast te houden tijdens de infusie.</td></tr><tr><td>Atropine injectieoplossing</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07 869-6061</td><td>Atropine inj. 0,54 mg/mL</td></tr><tr><td>BD Ultra-Fine Insuline-spuitpompjes 30G</td><td>Walmart</td><td>N/A</td><td>Beschikbaar in 0,5 mL en 1,0 mL maten.</td></tr><tr><td>Cyanoacrylaat (medische lijm)</td><td>Ethicon</td><td>DNX12</td><td>Dermabond topisch huidkleefmiddel</td></tr><tr><td>Tandartslussen met licht</td><td>Amazon (DDP)</td><td>B012M3IV80</td><td>Wordt gebruikt om de visualisatie van de papilla van de ductus van Stensen te verbeteren</td></tr><tr><td>Lacrimale dilatator voor baby's</td><td>Surgipro</td><td>SPOI-137</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine injectieoplossing</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-803-6637</td><td>Ketaset inj. 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Lacrimale dilatator</td><td>Surgipro</td><td>SPOI-132</td><td>Wordt gebruikt om de ductus van Stensen te dilateren.</td></tr><tr><td>Midazolam injectieoplossing</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07 890-6698</td><td>Midazolam inj. 5mg/mL</td></tr><tr><td>Een paar schaar</td><td>Amazon (DDP)</td><td>N/A</td><td>Wordt gebruikt om PET10-buis te snijden</td></tr><tr><td>Polyethyleenslang (PE-10)</td><td>Scientific Comodities, Inc</td><td>BB31695-PE/1</td><td>Slang die de 30G-spuitpomp en de slang in de ductus verbindt.</td></tr><tr><td>Q-tips</td><td>Walmart</td><td>N/A</td><td>Wordt gebruikt om cyanoacrylaat op de wang te verspreiden</td></tr><tr><td>Polyethyleenbuis (PET 10) maat 10</td><td>Scientific Commodities</td><td>BB31695-PE/1</td><td>polyethyleenbuis met lage dichtheid</td></tr><tr><td>Mondopener voor kleine dieren</td><td>Amazon (DDP)</td><td>B01F3LVJXC</td><td>Wordt gebruikt om de mond van het dier open te houden.</td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Amazon (DDP)</td><td>N/A</td><td>Wordt gebruikt om PET10-buis in de ductus van Stenson te steken</td></tr><tr><td>Zinkchloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7646-86-7</td><td>Opgenomen in plasmide-DNA-infusaten</td></tr></tbody></table>

retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte

Retrograde Parotid Gland Infusion through Stensen's Duct in a Non-Human Primate for Vectored Gene Delivery

Speekselklieren zijn een aantrekkelijk weefseldoel voor gentherapie met veelbelovende resultaten die al leiden tot menselijke proeven. Ze zijn inherent in staat om eiwitten in de bloedbaan af te scheiden en zijn gemakkelijk toegankelijk, waardoor ze potentieel superieure weefselplaatsen zijn voor vervangingshormoonproductie of vaccinatie door genoverdracht. Voorgestelde methoden voor genafgifte omvatten transcutane injectie en retrograde infusie via speekselkanalen. We demonstreren hoe retrograde speekselklierinfusie (RSGI) moet worden uitgevoerd bij niet-menselijke primaten. We beschrijven de belangrijke anatomische oriëntatiepunten, waaronder de identificatie van de parotis papilla, een atraumatische methode voor het cannuleren en afdichten van Stensen's Duct met behulp van elementaire tandheelkundige hulpmiddelen, polyethyleenbuizen en cyanoacrylaat, en de juiste infusiesnelheid. Hoewel dit de minst traumatische methode van levering is, wordt de methode nog steeds beperkt door het volume dat kan worden afgeleverd (<0,5 ml) en het potentieel voor trauma aan het kanaal en de klier. We tonen met behulp van fluoroscopie aan dat een infundaat volledig in de klier kan worden afgeleverd en tonen verder aan door immunohistochemie de transductie van een typische vector en expressie van het afgeleverde gen.

Succesvolle procedure, transductie en transcriptie Figuur 1 toont de parotis papilla grenzend aan de2e kies op de achterste superieure wang. De afbeelding toont ook de juiste plaatsing van de mondbeugel, een rubberen uiteinde op het harde gehemelte en het andere rubberen uiteinde op de ipsilaterale hond. Figuur 2 toont een afbeelding genomen na succesvolle cannulatie van de parotis papilla op de 2 cm markering op de PET10. <strong ...

Speekselklieren zijn voorgesteld als een weefseldoelplaats voor gentherapie, vooral op het gebied van vaccinatie door genoverdracht. We demonstreren genafgifte in een niet-menselijk primatenmodel met behulp van retrograde parotisinfusie.

Retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van Stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte

Salivary glands are an attractive tissue target for gene therapy with promising results already leading to human trials. They are inherently capable of ...

Dit protocol is belangrijk omdat het de procedure van retrograde speekselklierinfusie in detail demonstreert. De procedure kan om verschillende medische redenen worden gebruikt, zoals vectored immunoprofylaxe of gentherapie. Deze techniek is gemakkelijk te leren en te reproduceren.De auteurs zijn erin geslaagd om deze procedure meerdere keren met succes uit te voeren, ondanks het feit dat ze geen kaakchirurgen zijn, noch een dergelijke achtergrond hebben. Gebruik na het verdoven tandloepen voor vergroting en identificeer de parotis papilla of de opening van het kanaal van Stenson op de achterste wang naast de bovenste tweede kies. Verwijd de parotis papilla voorzichtig door de punt van een conische dilatator in het midden of de opening van de papilla te plaatsen en draai de dilatator ongeveer 20 tot 30 seconden heen en weer.Houd vervolgens met een pincet het gemarkeerde uiteinde van de polyethyleenbuis die aan de infusaathoudende spuit is bevestigd op ongeveer 0,5 centimeter van het distale uiteinde en steek voorzichtig de punt van de buis in de verwijde papilla. Breng de buis voorzichtig vooruit met kleine roterende bewegingen om de buizen te laten glijden, gevolgd door het afstel

retrograde-parotid-gland-infusion-through-stensen-s-duct-non-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Source: Tadokoro, T., et al. Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) Vector Delivery in Adult Mice. J. Vis. Exp. (2017)This video demonstrates a subpial injection technique for gene delivery to the spinal cord in mice. The procedure involves exposing the dura mater, puncturing the pia mater, and injecting a recombinant adeno-associated virus (rAAV) carrying a fluorescent protein-expressing gene into the subpial space. Following injection and recovery, the virus facilitates gene expression in...

Subpial Gene Delivery in the Mouse Spinal Cord to Evaluate Gene Expression

Deze studies rapporteren over de omkeerbare hechting van adenovirale genvectoren aan kapot metalen oppervlakken van stents en model mesh schijven. Duurzame afgifte van transductie-competente virale deeltjes, afhankelijk van de hydrolyse van cross-linkers die worden gebruikt voor vector immobilisatie, resulteert in een duurzame locatie-specifieke transgen expressie in vasculaire cellen en in stent-achtige slagaders.

Vasculaire Gene Transfer van Metallic stentoppervlakken met adenovirale vectoren Tethered via Hydrolyseerbare Cross-linkers

Hypofunctie van de speekselklieren, een belangrijk nadelig effect van radiotherapie in het hoofd- en nekgebied, vermindert de kwaliteit van leven van een patiënt. Het aantonen van de werkzaamheid van nieuwe therapieën in diermodellen is een voorwaarde voordat er een klinische overgang plaatsvindt. Dit protocol beschrijft retroductale toediening en lokale bestraling van submandibulaire rattenklieren.

Retroductal Submandibulaire Gland Blaasinstillatie en gelokaliseerde gefractioneerde bestraling in een Rat Model van het speeksel hypofunction

Deze methode beschrijft de plaatsing van de spreekbeurt ader enten bij konijnen, de transductie van de transplantaties en de verwezenlijking van duurzaam transgenic expressie. Hierdoor kan het onderzoek van fysiologische en pathologische rollen van transgenen en hun eiwitproducten in geënte aderen, en het testen van gentherapieën voor ader graft ziekte.

Een konijn Model van duurzaam transgenic expressie in de halsslagader aan gemeenschappelijke halsslagader spreekbeurt transplantaten

Lokale drug levering aan de submandibulaire klieren is van belang in begrip speekselklier biologie en voor de ontwikkeling van nieuwe therapieën. We presenteren een bijgewerkte en gedetailleerde retroductal injectie protocol, ter verbetering van de nauwkeurigheid van de levering en experimentele reproduceerbaarheid. De hier vermelde toepassing is de levering van polymere nanodeeltjes.

Retroductal Nanoparticle injectie aan de lymfkliertest submandibulaire klier

Hier demonstreren we magnetische resonantie (MR)-geleide convectie verbeterde levering (CED) van virale vectoren in de cortex als een efficiënte en vereenvoudigde aanpak voor het bereiken van optogenetische expressie in grote corticale gebieden in de makaak hersenen.

Convectie verbeterde levering van Optogenetische adeno-geassocieerde virale vector aan de cortex van rhesus macaque onder begeleiding van online MRI-beelden

Zoals momenteel geïmplementeerd, vereist optogenetica bij niet-menselijke primaten injectie van virale vectoren in de hersenen. Een optimale injectiemethode moet betrouwbaar zijn en, voor veel toepassingen, in staat zijn om individuele locaties van willekeurige diepte te targeten die gemakkelijk en ondubbelzinnig worden geïdentificeerd in de postmortale histologie. Een injectiemethode met deze eigenschappen wordt gepresenteerd.

Injecties van AAV-vectoren voor optogenetica in verdoofde en wakkere zich gedragende niet-menselijke primatenhersenen

Een chirurgische ingreep wordt beschreven om injecties uit te voeren in de lumbale stortbak van de jonge rat. Deze benadering is gebruikt voor de intrathecale toediening van gentherapievectoren, maar er wordt verwacht dat deze benadering kan worden gebruikt voor een verscheidenheid aan therapieën, waaronder cellen en medicijnen.

Intrathecale vectortoediening bij jonge ratten via lumbale stortbakinjectie

Dit artikel biedt een protocol en een begeleidende video voor de retrobulbaire sinusinjectie tot een totaal volume van 150 μL voor postnatale, juveniele en uitgelopen volwassen muizen. Deze procedure is bijzonder geschikt voor de injectie van kleine muizen (15 g) wanneer injectie van de staartader niet haalbaar is.

Systemische behandeling voor postnatale, juveniele en gerunde volwassen muizen door retrobulbaire sinusinjectie

Dit rapport beschrijft de gelokaliseerde injectiemethode van AAV-vectoren via het nierbekken voor effectieve en veilige genoverdracht naar de nier van de muis.

Effectieve en veilige genafgifte aan de nier van de muis via langzame retrograde injectie van nierbekken van adeno-geassocieerde virusvectoren

Leer retrograde speekselklierinfusie voor gentherapie en vaccinatie bij niet-menselijke primaten. Deze reproduceerbare methode maakt vectorgemedieerde genafgifte toegankelijk voor onderzoekers zonder chirurgische achtergrond.

Retrograde parotisklierinfusie via het kanaal van Stensen in een niet-menselijke primaat voor vectored genafgifte

Meer video's verkennen