Name: Een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-05-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Leer een schaalbaar model om traumatisch hersenletsel bij volwassen Danio rerio te bestuderen. Deze methode onderzoekt pathologieën en neuronale regeneratiemechanismen na letsel met verschillende ernst.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen de Hyde-lableden bedanken voor hun doordachte discussies, de technici van het Freimann Life Sciences Center voor zebravisverzorging en -houderij en de University of Notre Dame Optical Microscopy Core / NDIIF voor het gebruik van instrumenten en hun diensten. Dit werk werd ondersteund door het Center for Zebrafish Research aan de Universiteit van Notre Dame, het Centrum voor Stamcellen en Regeneratieve Geneeskunde aan de Universiteit van Notre Dame, en subsidies van het National Eye Institute of NIH R01-EY018417 (DRH), het National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program (JTH), LTC Neil Hyland Fellowship of Notre Dame (JTH), Sentinels of Freedom Fellowship (JTH) en de Pat Tillman Scholarship (JTH).

Zebravissen werden grootgebracht en onderhouden in de Notre Dame Zebrafish-faciliteit in het Freimann Life Sciences Center. De methoden beschreven in dit manuscript werden goedgekeurd door de University of Notre Dame Animal Care and Use Committee.
1. Traumatisch hersenletsel paradigma
<ol><li>Voeg 1 ml 2-fenoxyethanol toe aan 1 l systeemwater (60 mg Instant Ocean in 1 l gedeïoniseerd RO-water).</li>
	<li>Bereid een beluchte recuperatietank voor met 2 L systeemwater bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Selecteer het gewenste gewicht van de kogellager en een gewenste lengte en diameter van stalen/kunststof buizen en bepaal de energie en slagkracht. OPMERKING: Buizen moeten een binnendiameter hebben waardoor het kogellager kan passeren zonder het pad of de bewegingssnelheid te veranderen.<ol>
<li>Bepaal de kinetische energie bij impact: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq01.jpg"> Waarbij KE = kinetische energie, m = massa (in kg), g = zwaartekracht, h = hoogte (in m) van valpunt tot vis. OPMERKING: Dit levert kinetische energie op in J. Vermenigvuldig de waarde met 1.000 om mJ te bepalen. KE is gebaseerd op een versnellend object, dat optreedt wanneer het kogellager vanuit een stationaire positie valt.</li>
		<li>Genereer een milde TBI (miTBI) met behulp van 7,62 cm lange stalen/kunststof buizen die 1,5 cm boven de plaat op de zebravisschedel eindigen (totale afstand 9,1 cm) en een kogellager van 1,5 g (6,4 mm diameter). Deze produceren een kinetische energie van 1,33 mJ. Deze schade werd empirisch bepaald als gelijkwaardig aan een miTBI op basis van belangrijke pathofysiologische TBI-markers, zoals vasculaire verwonding, subdurale / intracerebrale hematoomvorming, neuronale celdood en cognitieve stoornissen die grotendeels samenvatten wat werd gerapporteerd in de menselijke populatie op een ernstafhankelijke manier.</li>
		<li>Bereken kinetische energie miTBI = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq02.jpg">
</li>
		<li>Genereer een matige TBI (moTBI) met behulp van 12,7 cm lange stalen/kunststof buizen die 1,5 cm boven de plaat op de schedel van de zebravis eindigen (totale afstand 14,2 cm) en een kogellager van 1,5 g (6,4 mm diameter) dat kinetische energie van 2,08 mJ produceert.</li>
		<li>Bereken kinetische energie moTBI = <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq03.jpg">
</li>
		<li>Genereer een ernstige TBI (sTBI) met behulp van 7,62 cm lange stalen /plastic buizen die 1,5 cm boven de plaat op de zebravisschedel eindigen (totale afstand 9,1 cm) en een kogellager van 3,3 g (8,38 mm diameter) dat een kinetische energie van 2,94 mJ produceert.</li>
		<li>Bereken kinetische energie sTBI = <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq04.jpg">
</li>
	</ol></li>
	<li>Vul een petrischaaltje met boetseerklei (figuur 1, stap 1) en gebruik een stomp instrument (d.w.z. de achterkant van een tang) om een verhoogd platform (5 cm x 1,5 cm) te creëren met extra modelleerklei (figuur 1, stap 2).<ol>
<li>Gebruik een scheermesje om het verhoogde platform in de lengte in twee ongeveer gelijke helften te verdelen (figuur 1, stap 3, rode stippellijn). Vorm de twee helften in een kanaal dat plaats biedt aan de lengte van een volwassen vis (figuur 1, stap 4). Gebruik extra klei om muren te bouwen die ~ 2/3 van het vislichaam beveiligen, waardoor het hoofd bloot komt te liggen.</li>
		<li>Vorm een kleine steun in het blootgestelde hoofdgebied loodrecht op de wanden om het hoofd te ondersteunen om rotatie of terugslag van het hoofd bij verwonding te voorkomen (figuur 1, stap 4). OPMERKING: Het kanaal moet diep genoeg zijn om de vis in een dorsale positie te ondersteunen, maar moet de kop nog steeds boven de omringende klei laten rusten. Bovendien moet de hoofdondersteuning de natuurlijke kromming van de vis volgen en de onderkaak en kieuwen ondersteunen.</li>
		<li>Zorg ervoor dat het verlaagde gewicht niet wordt belemmerd door de zijkanten van het kanaal (figuur 1, stap 4).</li>
	</ol></li>
	<li>Maak een stalen schijf met een diameter van 3 mm met behulp van een mini-perforator en 22 g stalen knipperen. Elke schijf kan meerdere keren worden gebruikt.</li>
	<li>Verdoof een vis door hem in een bekerglas te plaatsen met 50-100 ml van 1:1000 (1 ml / 1 l, 0,1%) 2-fenoxyethanol totdat het niet reageert op staartknijpen.</li>
	<li>Plaats de vis, dorsale zijde naar boven, op de kleivorm in het kanaal zodat het lichaam aan de zijkanten is bevestigd en plaats een stalen schijf van 3 mm 22 g op de kop, gecentreerd over het gewenste inslagpunt (figuur 1, stap 5).<ol>
<li>Zorg ervoor dat de vis zo loodrecht mogelijk is uitgelijnd om te voorkomen dat zijn kop naar één kant kantelt, wat een ongelijke impact kan veroorzaken.</li>
	</ol></li>
	<li>Zet de stalen/kunststof buis vast met behulp van een standaard ringstandaard en armklem, zodat de onderkant van de buis 1,5 cm boven de kop van de zebravis ligt (figuur 1, stap 6). Zorg ervoor dat de slang recht is.<ol>
<li>Kijk naar beneden en zorg ervoor dat de buis boven de staalplaat is uitgelijnd.</li>
	</ol></li>
	<li>Laat het kogellager (1,5 g voor milde en matige TBI en 3,3 g voor ernstige TBI) van een vooraf bepaalde hoogte (beschreven in stap 1.3.3-1.3.5) langs de buis op de stalen plaat die zich boven het gewenste neuroanatomische interessegebied bevindt (bijv. Cerebellum, figuur 1, stap 5) om de stompkracht TBI te produceren voor de gewenste ernst van het letsel. Plaats de gewonde vissen in een hersteltank die moet worden gecontroleerd. OPMERKING: Afhankelijk van de ernst van het letsel kunnen mortaliteit of tonisch-clonische aanvallen optreden. Als de vis gedurende een langere periode na de TBI niet reageert, gebruik dan een transferpipet of tang om een staartknijp toe te dienen en te evalueren op een pijnreactie.</li>
</ol>2. Scoren van aanvallen post-TBI bij de volwassen zebravis
<ol><li>Verdoodelijk en verwond de vis volgens het verwondingsprotocol beschreven in sectie 1 en plaats de gewonde vis in een belucht hersteltank van 2 L systeemwater.</li>
	<li>Observeer de vis op tekenen van posttraumatische aanvallen die onmiddellijk beginnen nadat ze in de hersteltank zijn geplaatst. Stel een observatietijd in (d.w.z. 1 uur) en registreer alle aanvalsactiviteit, inclusief de aanvalsscore (hieronder beschreven), de duur van elke aanval en het percentage vissen dat aanvallen heeft ervaren (figuur 2A). OPMERKING: Epileptische aanvallen kunnen onmiddellijk na het letsel optreden, evenals uren of dagen na TBI. Aanvallen kunnen langdurig aanhouden en een enkele vis kan meerdere aanvallen hebben. Het instellen van een observatietijd van 1 uur of meer geeft een goede weergave van de algemene trend van de aanvalspercentages.</li>
	<li>Scoor vissen met behulp van de Mussulini18-richtlijnen voor fenotypen voor volwassen zebravissen. OPMERKING: Zonder de trackingsoftware te gebruiken, is het moeilijk om aanvalsscores onder de 3 onbevooroordeeld te beoordelen. Daarom mogen alleen aanvalsscores van 3 of hoger worden geregistreerd wanneer de beoordeling zonder software wordt uitgevoerd.</li>
</ol>3. Hersendissectie
<ol><li>Euthanaseer vissen in een 1:500 (2 ml / 1 l, 0,2%) oplossing van 2-fenoxyethanol, totdat de kieuwbewegingen stoppen en ze niet reageren op het beknijpen van de vin, op het gewenste eindpunt.</li>
	<li>Vul een petrischaaltje met boetseerklei en maak een kleine holte om het lichaam te ondersteunen tijdens het dissectie.</li>
	<li>Plaats de vis, dorsale kant naar boven, in de kleivorm. Plaats een dissectiepen door de middellijn halverwege het lichaam van de vis en een tweede pin ~ 5 mm achter de basis van de kop.</li>
	<li>Snijd onder een ontleedbare lichtmicroscoop botweg de oogzenuw af met een paar # 5 Dumont-tang en verwijder de ogen (figuur 2A).</li>
	<li>Oriënteer de vis zo dat het rostrale uiteinde het verst is wanneer u door de microscoop kijkt (figuur 2B). OPMERKING: De volgende stappen zijn voor rechtshandigen. Linkshandige personen kunnen er de voorkeur aan geven om de volgende stappen in een gespiegelde oriëntatie uit te voeren.</li>
	<li>Gebruik #5 tang om langzaam het ene uiteinde van de tang onder de rechter pariëtale plaat te plaatsen, maak een opzettelijke schaaractie die naar het rostrale uiteinde beweegt en verwijder de rechter pariëtale en frontale platen (figuur 2C).<ol>
<li>Houd de tang onder een hoek van 45° of lager om te voorkomen dat de hersenen binnendringen tijdens de dissectie.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Draai de vis 90° met de klok mee. Plaats het ene uiteinde van de #5 tang onder de linker pariëtale plaat en gebruik dezelfde schaarbeweging om de linker pariëtale en frontale platen te verwijderen die het hele dorsale aspect van de hersenen blootleggen (Figuur 2D,E).</li>
	<li>Transect de maxilla botweg met #5 tang. Bewaar de reukbollen en beschadig ze niet als dit de regio van belang is.</li>
	<li>Verwijder de rechter operkel, preopercle, interopercle en subopercle met #5 tang (Figuur 2F).</li>
	<li>Reseceer botweg de musculatuur aan het caudale uiteinde van de calvariumopening met behulp van # 5-tang, waardoor het ruggenmerg wordt blootgesteld.</li>
	<li>Stomp transect het ruggenmerg met # 5 tang. Plaats voorzichtig een tang onder de hersenen en verwijder voorzichtig de hersenen uit het calvarium. OPMERKING: Knijp nooit in de hersenen. Gebruik een tang om de hersenen te "wiegen" of caudaal te reseceren en gebruik het blootgestelde ruggenmerg als een knijppunt om de hersenen te manoeuvreren.</li>
	<li>Fixeer de verwijderde hersenen in 9 delen 100% ethanol tot 1 deel 37% formaldehyde 's nachts bij 4 °C op een rockerplatform.</li>
</ol>4. Oedeemstudies in het zebravisbrein
<ol><li>Verdoodelijk en verwond vissen volgens het verwondingsprotocol beschreven in sectie 1 en laat de vissen herstellen in een hersteltank totdat ze vrij beginnen te zwemmen.</li>
	<li>Plaats de vis na het letsel gedurende 1 dag terug in de normale woonomstandigheden.</li>
	<li>Euthanaseer de vis in 1:500 2-fenoxyethanol, nadat de tijd is verstreken.</li>
	<li>Ontleed de hele hersenen of het gebied van belang volgens het protocol beschreven in sectie 3 en plaats de hersenen onmiddellijk op een kleine weegboot. OPMERKING: Wees voorzichtig bij het overbrengen van de hersenen, gebruik een fijne tang om deze voorzichtig op de weegboot te plaatsen zonder de hersenen te steken of te schrapen, wat kan resulteren in het verlies van weefsel.</li>
	<li>Label (met letselgroep en hersennummer) en tarra een extra kleine droogweegboot op een weegschaal. Gebruik een weegschaal met de mogelijkheid om minimaal 0,001 g te meten om een nauwkeurige meting te krijgen.</li>
	<li>Breng de hersenen over naar de geteerde drogende weegboot en noteer het natte gewicht van de hersenen. Oriënteer de hersenen zo dat ze plat op de weegboot liggen met de dorsale kant naar boven gericht.</li>
	<li>Plaats de droogweegboot en de hersenen gedurende 8 uur in een hybridisatieoven die op 60 °C is ingesteld.</li>
	<li>Na het drogen kunnen de hersenen zich aan de drogende weegboot hechten en kunnen ze moeilijk te verwijderen en over te brengen zijn naar een nieuwe geteerde kleine weegboot. Vermijd het knijpen van de hersenen met een tang, omdat dit kan leiden tot schade aan de droge hersenen en verlies van weefsel. Knijp in plaats daarvan de fijne tang samen en schep, beginnend aan de ventrale kant van de hersenen, in een opwaartse beweging.</li>
	<li>Bepaal het watergehalte van elk brein met behulp van de formule (figuur 4): <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/62709/62709eq05.jpg">
</li>
</ol>5. Het labelen van cellulaire proliferatie over de neuroaxis en het voorbereiden van vast weefsel.
<ol><li>Bereid 10 mM 5-ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) in 2 ml ddH2O.</li>
	<li>Anesthetiseer 3 tot 4 vissen tegelijk in 50-100 ml van 1:1000 (1 ml / 1 l, 0,1%) 2-fenoxyethanol totdat de vissen niet reageren op staartknijpen, op het gewenste tijdstip na verwonding (met behulp van het protocol beschreven in sectie 1).</li>
	<li>Maak een gedeeltelijke incisie op een natte spons en plaats één vis tegelijk in de opening, ventrale kant naar boven.</li>
	<li>Gebruik een naald van 30 G om ~40 μL van 10 mM EdU in het lichaam van de vis te injecteren. Breng de vis terug naar een vuilwatertank gevuld met systeemwater. OPMERKING: Herhaalde injecties kunnen op verschillende tijdstippen worden uitgevoerd om een groter aantal prolifererende cellen te labelen en kunnen nodig zijn als een achtervolgingsperiode van meer dan 1 week gewenst is.</li>
	<li>Verzamel hersenen zoals beschreven in rubriek 3 en plaats ze als groep in een glazen injectieflacon van 5 ml met 2 ml van 9 delen 100% ethanol tot 1 deel 37% formaldehyde. Fixeer de hersenen op 4 °C op een rockerplatform. OPMERKING: Een rocker of shaker platform verbiedt de hersenen om op de bodem te rusten en het telencephalon van hele hersenen om te krullen.</li>
	<li>Rehydrateer de hersenen, in dezelfde glazen flacon die wordt gebruikt om hersenen te fixeren, in wasbeurten van dalende ethanolreeksen, 75%, 50% en 25%, gedurende 15 minuten elk, gevolgd door een 1,5 uur wassen in 5% sucrose / PBS op een rocker bij kamertemperatuur. Bewaar de hersenen een nacht in een glazen injectieflacon in 30% sucrose/PBS bij 4°C op een rockerplatform.</li>
	<li>Verwijder de hersenen van 30% sucrose/PBS en breng ze met een tang over in een 12-well plaat (één behandelingsgroep per put) met putjes gevuld met een 2:1 oplossing bestaande uit 2 delen weefselbevriezingsmedium en 1 deel 30% sucrose/PBS. Incubeer de hersenen 's nachts bij 4 °C op een rockerplatform.</li>
	<li>Breng hersenen over naar de volgende rij putten in de 12-putplaat die de hersenen onderdompelt in 100% TFM gedurende 2-24 uur bij 4 °C.</li>
	<li>Gebruik een cryostaat om de hersenen in TFM in de gewenste oriëntatie op droogijs in te bedden.</li>
	<li>Voer cryosectie uit (16 μm dikke secties) en verzamel de secties op positief geladen dia's. Droog glijden op een schuifverwarmer gedurende 1 uur en bewaar dan bij -80 °C of ga verder met immunohistochemie.</li>
	<li>Bereid een hydrofobe barrière voor op de glijbaan rond de weefselsecties en laat 20 minuten drogen op een schuifwarmer.</li>
	<li>Was de dia's kort in PBS gedurende 5 minuten en vervolgens tweemaal in PBS-Tween 20 (0,05%) gedurende 10 minuten elk.</li>
	<li>Voer EdU-detectie uit met behulp van de EdU Cell Proliferation Kit en de instructies van de fabrikant.</li>
	<li>Analyseer de dia's en kwantificeer de fluorescerende EdU-gelabelde cellen met behulp van een epifluorescente microscoop of een confocale microscoop. Een minimum van 40x objectief zal nodig zijn om individuele cellen duidelijk te onderscheiden.</li>
</ol>

<ol><li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surveillance+Report+of+Traumatic+Brain+Injury-related+Emergency+Department+Visits%2C+Hospitalizations%2C+and+Deaths-United+States%2C+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Centers+for+Disease+Control+and+Prevention%2C+U.S.+Department+of+Health+and+Human+Services%22%5BJournal%5D)">Surveillance Report of Traumatic Brain Injury-related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths-United States, 2014.</a> Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services. , (2019).</li>
<li>Galgano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traumatic+brain+injury%3A+current+treatment+strategies+and+future+endeavors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+transplantation%22%5BJournal%5D)">Traumatic brain injury: current treatment strategies and future endeavors.</a> Cell transplantation. 26 (7), 1118-1130 (2017).</li>
<li>Santiago, L. A., Oh, B. C., Dash, P. K., Holcomb, J. B., Wade, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinical+comparison+of+penetrating+and+blunt+traumatic+brain+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+injury%22%5BJournal%5D)">A clinical comparison of penetrating and blunt traumatic brain injuries.</a> Brain injury. 26 (2), 107-125 (2012).</li>
<li>Korley, F. K., Kelen, G. D., Jones, C. M., Diaz-Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergency+department+evaluation+of+traumatic+brain+injury+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Head+Trauma+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Emergency department evaluation of traumatic brain injury in the United States, 2009-2010.</a> The Journal of Head Trauma Rehabilitation. 31 (6), 379-387 (2016).</li>
<li>Faul, M., Xu, L., Wald, M., Coronado, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFaul%2C+M+%22Traumatic+Brain+Injury+in+the+United+States%3A+Emergency+Department+Visits%2C+Hospitalizations+and+Deaths%22">Traumatic Brain Injury in the United States: Emergency Department Visits, Hospitalizations and Deaths</a>. , (2010).</li>
<li>Campbell, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch3+and+DeltaB+maintain+M%C3%BCller+glia+quiescence+and+act+as+negative+regulators+of+regeneration+in+the+light-damaged+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Notch3 and DeltaB maintain Müller glia quiescence and act as negative regulators of regeneration in the light-damaged zebrafish retina.</a> Glia. 69 (3), 546-566 (2021).</li>
<li>Green, L. A., Nebiolo, J. C., Smith, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+exit+the+CNS+in+spinal+root+avulsion%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Microglia exit the CNS in spinal root avulsion.</a> PLoS Biology. 17 (2), 3000159(2019).</li>
<li>Hentig, J., Byrd-Jacobs, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+zinc+sulfate+results+in+differential+effects+on+olfactory+sensory+neuron+subtypes+in+the+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exposure to zinc sulfate results in differential effects on olfactory sensory neuron subtypes in the adult zebrafish.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (9), 1445(2016).</li>
<li>Ito, Y., Tanaka, H., Okamoto, H., Oshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neural+stem+cells+and+their+progeny+in+the+adult+zebrafish+optic+tectum%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Characterization of neural stem cells and their progeny in the adult zebrafish optic tectum.</a> Developmental Biology. 342 (1), 26-38 (2010).</li>
<li>Becker, C., Becker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+zebrafish+as+a+model+for+successful+central+nervous+system+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Restorative+Neurology+and+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Adult zebrafish as a model for successful central nervous system regeneration.</a> Restorative Neurology and Neuroscience. 26 (2-3), 71-80 (2008).</li>
<li>Alyenbawwi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizures+are+a+druggable+mechanistic+link+between+TBI+and+subsequent+tauopathy%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Seizures are a druggable mechanistic link between TBI and subsequent tauopathy.</a> eLife. 10, 58744(2021).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelia-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelia-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>McCutcheon, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+traumatic+brain+injury+in+adult+zebrafish+demonstrates+response+to+injury+and+treatment+comparable+with+mammalian+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">A novel model of traumatic brain injury in adult zebrafish demonstrates response to injury and treatment comparable with mammalian models.</a> Journal of Neurotrauma. 34 (7), 1382-1393 (2017).</li>
<li>Skaggs, K., Goldman, D., Parent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitotoxic+brain+injury+in+adult+zebrafish+stimulates+neurogenesis+and+long-distance+neuronal+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Excitotoxic brain injury in adult zebrafish stimulates neurogenesis and long-distance neuronal integration.</a> Glia. 62 (12), 2061-2079 (2014).</li>
<li>Kishimoto, N., Shimizu, K., Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+regeneration+in+a+zebrafish+model+of+adult+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Neuronal regeneration in a zebrafish model of adult brain injury.</a> Disease Models & Mechanisms. 5 (2), 200-209 (2012).</li>
<li>Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+the+adult+zebrafish+brain+from+neurogenic+radial+glia-type+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors.</a> Development. 138 (22), 4831-4841 (2011).</li>
<li>Marmarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+diffuse+brain+injury+in+rats.+Part+I%3A+Pathophysiology+and+biomechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">A new model of diffuse brain injury in rats. Part I: Pathophysiology and biomechanics.</a> Journal of Neurosurgery. 80 (2), 291-300 (1994).</li>
<li>Mussulini, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seizures+induced+by+pentylenetetrazole+in+the+adult+zebrafish%3A+a+detailed+behavioral+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Seizures induced by pentylenetetrazole in the adult zebrafish: a detailed behavioral characterization.</a> PloS One. 8 (1), 54515(2013).</li>
<li>Kalueff, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10 (1), 70-86 (2013).</li>
<li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+traumatic+brain+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Animal models of traumatic brain injuries.</a> Nature Reviews Neuroscience. 14, 128-142 (2013).</li>
<li>Amamoto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+axolotls+can+regenerate+original+neuronal+diversity+in+response+to+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury.</a> eLife. 5, 13998(2016).</li>
<li>Yamamoto, S., Levin, H., Prough, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild%2C+moderate+and+severe%3A+terminology+implications+for+clinical+and+experimental+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Neurology%22%5BJournal%5D)">Mild, moderate and severe: terminology implications for clinical and experimental traumatic brain injury.</a> Current Opinion in Neurology. 31 (6), 672-680 (2008).</li>
<li>Lund, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+traumatic+brain+injury%2C+acute+phase+course+and+deviations+in+physiological+variables%3A+an+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Scandinavian+Journal+of+Trauma+Resuscitation+and+Emergency+Medicine%22%5BJournal%5D)">Moderate traumatic brain injury, acute phase course and deviations in physiological variables: an observational study.</a> Scandinavian Journal of Trauma Resuscitation and Emergency Medicine. 24, 77(2016).</li>
<li>Levin, H., Arrastia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis%2C+prognosis%2C+and+clinical+management+of+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis, prognosis, and clinical management of mild traumatic brain injury.</a> The Lancet Neurology. 14 (5), 506-517 (2015).</li>
<li>Ruff, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+diagnosing+a+mild+traumatic+brain+injury%3A+a+National+Academy+of+Neuropsychology+education+paper%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%3A+The+Official+Journal+of+the+National+Academy+of+Neuropsychologists%22%5BJournal%5D)">Recommendations for diagnosing a mild traumatic brain injury: a National Academy of Neuropsychology education paper.</a> Archives of Clinical Neuropsychology: The Official Journal of the National Academy of Neuropsychologists. 24 (1), 3-10 (2009).</li>
<li>Ganz, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Biology%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis in fish.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 8 (7), 019018(2016).</li>
<li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain%3A+origin%2C+proliferation+dynamics%2C+migration+and+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Developmental Biology. 295, 263-277 (2006).</li>
<li>Lahne, M., Nagashima, M., Hyde, D. R., Hitchcock, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+Muller+glia+to+regenerate+retinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Reprogramming Muller glia to regenerate retinal neurons.</a> Annual Review of Visual Science. 6, 171-193 (2020).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Onderzoeken naar neurotrauma en bijbehorende gevolgen zijn al lang gericht op traditionele niet-regeneratieve knaagdiermodellen20. Pas onlangs hebben studies verschillende vormen van CZS-schade toegepast op regeneratieve modellen9,11,13,14,21. Hoewel inzichtelijk, worden deze modellen beperkt door hun gebruik van een verwondingsmethode ...

Traumatisch hersenletsel (TBI's) is een wereldwijde gezondheidscrisis en een belangrijke oorzaak van overlijden en invaliditeit. In de Verenigde Staten ervaren ongeveer 2,9 miljoen mensen elk jaar een TBI en tussen 2006-2014 nam de mortaliteit als gevolg van TBI- of TBI-sequelae met meer dan 50% toe 1. TBI's variëren echter in hun etiologie, pathologie en klinische presentatie grotendeels als gevolg van het mechanisme van letsel (MOI), dat ook van invloed is op behandelingsstrategieën en voorspelde prognose2. Hoewel TBI's het gevolg kunnen zijn van verschillende MOI, zijn ze voornamelijk het resultaat van een doordringend of stomp krachttrauma. Penetrerende trauma's vertegenwoordigen een klein percentage TBI's en genereren een ernstig en focal letsel dat is gelokaliseerd in de onmiddellijke en omliggende gespietste hersengebieden3. Daarentegen komen TBI's met stompe kracht vaker voor in de algemene bevolking, omvatten ze een reeks ernst (mild, matig en ernstig) en produceren ze een diffuus, heterogeen en wereldwijd letsel dat meerdere hersengebieden treft1,4,5.
Zebravissen (Danio rerio) zijn gebruikt om een breed scala aan neurologische beledigingen te onderzoeken die het centrale zenuwstelsel (CZS) overspannen 6,7,8,9. Zebravissen bezitten ook, in tegenstelling tot zoogdieren, een aangeboren en robuuste regeneratieve reactie om CNS-schade te herstellen10. Huidige zebravistraumamodellen gebruiken verschillende verwondingsmethoden, waaronder penetratie, excisie, chemische belediging of drukgolven11,12,13,14,15,16. Elk van deze methoden maakt echter gebruik van een MOI die zelden wordt ervaren door de menselijke bevolking, niet schaalbaar is over een reeks ernst van letsels en niet de heterogeniteit of ernstafhankelijke TBI-gevolgen aanpakt die worden gerapporteerd na stompe kracht TBI. Deze factoren beperken het gebruik van het zebravismodel om de onderliggende mechanismen van de pathologieën geassocieerd met de meest voorkomende vorm van TBI in de menselijke populatie (milde stompkrachtletsels) te begrijpen.
We wilden een snel en schaalbaar TBI-zebravismodel met stompe kracht ontwikkelen dat mogelijkheden biedt om letselpathologie, progressie van TBI-sequela en de aangeboren regeneratieve respons te onderzoeken. We pasten het veelgebruikte knaagdier Marmarou17-gewichtsdaling aan en pasten het toe op volwassen zebravissen. Dit model levert een reproduceerbaar bereik van ernst op, variërend van mild, matig tot ernstig. Dit model vat ook meerdere facetten van menselijke TBI-pathologie samen, op een ernstafhankelijke manier, waaronder toevallen, oedeem, subdurale en intracerebrale hematomen, neuronale celdood en cognitieve tekorten, zoals leer- en geheugenstoornissen. Dagen na het letsel verdwijnen pathologieën en tekorten en keren ze terug naar niveaus die lijken op onbeschadigde controles. Bovendien vertoont dit zebravismodel een robuuste proliferatie- en neuronale regeneratierespons over de neuroaxis met betrekking tot de ernst van het letsel.
Hier geven we details over het opzetten en inductie van stompkrachttrauma, het scoren van posttraumatische aanvallen, beoordeling van vasculaire verwondingen, instructies voor het voorbereiden van hersensecties, benaderingen voor het kwantificeren van oedeem en inzicht in de proliferatieve respons na letsel.

<table><tbody><tr><td>2-fenoxyethanol</td><td>Sigma Alderich</td><td>77699</td><td></td></tr><tr><td>#00 buckshot</td><td>Remington</td><td>RMS23770</td><td>3.3g gewicht voor sTBI</td></tr><tr><td>#3 buckshot</td><td>Remington</td><td>RMS23776</td><td>1.5g gewicht voor miTBI/moTBI</td></tr><tr><td>#5 Dumont pincet</td><td>WPI</td><td>14098</td><td></td></tr><tr><td>5-ethynyl-2&rsquo;-deoxyuridine</td><td>Life Technologies</td><td>A10044</td><td>EdU</td></tr><tr><td>5ml glazen flacon</td><td>VWR</td><td>66011-063</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Celproliferatie Kit</td><td>Life Technologies</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>CytoOne 12-well plate</td><td>USA Scientific</td><td>CC7682-7512</td><td></td></tr><tr><td>Instant Ocean</td><td>Instant Ocean</td><td>SS15-10</td><td></td></tr><tr><td>Super frost positief geladen slides</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td></td></tr><tr><td>Super PAP Pen Liquid Blocker</td><td>Ted Pella</td><td>22309</td><td></td></tr><tr><td>Weefselbevriezingsmedium</td><td>VWR</td><td>15148-031</td><td></td></tr></tbody></table>

een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen

A Scalable Model to Study the Effects of Blunt-Force Injury in Adult Zebrafish

Stomp-kracht traumatisch hersenletsel (TBI) is de meest voorkomende vorm van hoofdtrauma, die een reeks ernst omvat en resulteert in complexe en heterogene secundaire effecten. Hoewel er geen mechanisme is om de verloren neuronen na een TBI bij mensen te vervangen of te regenereren, bezitten zebravissen het vermogen om neuronen in hun hele lichaam te regenereren, inclusief de hersenen. Om de breedte van de pathologieën te onderzoeken die worden vertoond bij zebravissen na een stompe kracht TBI en om de mechanismen te bestuderen die ten grondslag liggen aan de daaropvolgende neuronale regeneratieve respons, hebben we de veelgebruikte knaagdier Marmarou-gewichtsdaling aangepast voor gebruik bij volwassen zebravissen. Ons eenvoudige TBI-model met stompe kracht is schaalbaar, induceert een milde, matige of ernstige TBI en vat veel van de fenotypen samen die worden waargenomen na menselijke TBI, zoals contact- en posttraumatische aanvallen, oedeem, subdurale en intracerebrale hematomen en cognitieve stoornissen, elk weergegeven op een ernstafhankelijke manier van letsel. TBI-sequelae, die binnen enkele minuten na de verwonding beginnen te verschijnen, verdwijnen en keren binnen 7 dagen na het letsel terug naar bijna onbeschadigde controleniveaus. Het regeneratieve proces begint al 48 uur na het letsel (hpi), waarbij de piekcelproliferatie wordt waargenomen door 60 hpi. Ons TBI-model met stompe kracht van zebravissen produceert dus karakteristieke primaire en secundaire TBI-pathologieën die vergelijkbaar zijn met menselijke TBI, waardoor het begin en de progressie van ziekten kunnen worden onderzocht, samen met de mechanismen van neuronale regeneratie die uniek zijn voor zebravissen.

Het voorbereiden van de letsel-inductie rig zorgt voor een snelle en simplistische manier om een schaalbare blunt-force TBI te leveren aan volwassen zebravissen. De graduele ernst van het letselmodel biedt verschillende gemakkelijk identificeerbare maatstaven voor succesvol letsel, hoewel het vasculaire letsel een van de gemakkelijkste en meest prominente pathologieën is (figuur 3). De belasting van vissen die tijdens het letsel worden gebruikt, kan deze indicator gemakkelijker of moeilijker...

We hebben het Marmarou-gewichtsverliesmodel voor volwassen zebravissen aangepast om een breed scala aan pathologieën te onderzoeken na traumatisch hersenletsel met stompe kracht (TBI) en de mechanismen die ten grondslag liggen aan de daaropvolgende neuronale regeneratie. Dit Botte kracht TBI-model is schaalbaar, induceert een milde, matige of ernstige TBI en vat heterogeniteit van letsel samen die wordt waargenomen bij menselijke TBI.

Een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen

Blunt-force traumatic brain injuries (TBI) are the most common form of head trauma, which spans a range of severities and results in complex and ...

Dit protocol biedt een eenvoudige, snelle en reproduceerbare methode om een schaalbare stompe kracht traumatisch hersenletsel bij volwassen zebravissen te induceren. De volwassen zebravissen die deze stompe kracht traumatisch hersenletsel ondergaan, vertonen veel van de kenmerken die worden waargenomen bij mensen die lijden aan een stompe kracht TBI. De procedure wordt gedemonstreerd door Mr.James Hentig en Ms.Kaylee Cloghessy, twee promovendi uit mijn laboratorium.Begin met het vullen van een petrischaaltje met boetseerklei. Gebruik vervolgens vingers of de achterkant van een tang om een verhoogd platform te maken met extra modelleerklei. Verdeel het verhoogde platform in de lengte in twee ongeveer gelijke helften met behulp van een scheermesje.Vorm de twee helften in een kanaal, zodat het de lengte van een volwassen vis herbergt. Gebruik extra klei om muren te bouwen om 2/3 van het vislichaam met het hoofd bloot te beveiligen. Vorm een kleine steun in het blootgestelde hoofdgebied loodrecht op de wanden om rotatie of terugslag van het hoofd bij verwonding te voorkomen.Zorg ervoor dat de zijkanten van het kanaal het weggevallen gewicht niet belemmeren. Gebruik een mini-perforator om een stalen schijf van 3 millimeter te maken van een stalen knipperlicht van 22 gauge. Plaats een verdoofde vis die niet reageert op staartknijpen op de kleivorm in het kanaal met de dorsale kant naar boven, zodat zijn lichaam aan de zijkanten wordt vastgezet.Plaats de 3-millimeter 22-gauge stalen schijf op de kop, gecentreerd over het gewenste impactpunt. Lijn de vis loodrecht uit om te voorkomen dat zijn kop naar één kant kantelt, wat een ongelijke impact kan veroorzaken. Gebruik een standaard ringstandaard en armklem om de stalen of plastic buis vast te zetten, zodat deze recht is, zodat de onderkant van de buis 1,5 centimeter boven de kop van de zebravis ligt.Kijk naar beneden op de buis om ervoor te zorgen dat deze boven de stalen plaat is uitgelijnd. Kies het juiste kogellager op basis van de gewenste ernst van het letsel. Laat het kogellager vanaf een vooraf bepaalde hoogte langs de buis op de stalen plaat vallen.Plaats vervolgens de gewonde vis in de bergingstank om te worden gecontroleerd. Vul een petrischaaltje met boetseerklei en maak een kleine holte om het lichaam te ondersteunen tijdens het dissectie. Plaats de vis in de kleivorm met de dorsale kant naar boven.Plaats twee dissectiepennen, een door de middellijn halverwege het lichaam en de andere ongeveer 5 millimeter achter de basis van het hoofd. Gebruik een paar van 5 Dumont-tangen om de oogzenuw botweg af te snijden en de ogen te verwijderen. Plaats het ene uiteinde van de 5 tangen onder de rechter pariëtale plaat.Maak een opzettelijke schaaractie die naar het rostrale uiteinde beweegt en verwijder de rechter frontale plaat. Draai de vis vervolgens 90 graden met de klok mee. Plaats het ene uiteinde van de 5 tangen onder de linker pariëtale plaat en gebruik dezelfde schaarbeweging om de linker pariëtale en frontale platen te verwijderen, waardoor het hele dorsale aspect van de hersenen wordt blootgesteld.Gebruik de 5 tangen om de maxilla botweg zo over te steken dat de reukbollen behouden blijven en niet beschadigd raken. Verwijder met dezelfde tang de rechter opercle, preopercle, interopercle en subopercle. Reseceer vervolgens botweg de musculatuur aan het caudale uiteinde van het calvarium om het ruggenmerg bloot te leggen.Gebruik de tang om het ruggenmerg botweg te transecteren. Plaats de tang voorzichtig onder de hersenen en verwijder voorzichtig de hersenen uit het calvarium. Ontleed de hele hersenen of het gebied van belang met behulp van de instructies in het tekstmanuscript en plaats de hersenen onmiddellijk op een kleine weegboot met behulp van een fijne tang, waarbij u ervoor zorgt dat u de hersenen niet steekt of schraapt.Breng de hersenen over naar de geteerde drogende weegboot en noteer het natte gewicht van de hersenen. Oriënteer de hersenen om ze plat op de weegboot te leggen met de dorsale kant naar boven gericht. Plaats vervolgens de hersenen en de droogweegboot acht uur lang in een hybridisatieoven die op 60 graden Celsius is ingesteld.Om de hersenen over te brengen naar een nieuwe geteerde kleine weegboot zodra deze droog is, knijp je de fijne tang samen en schep je, beginnend aan de ventrale kant van de hersenen, in een opwaartse beweging. Maak een gedeeltelijke incisie op een natte spons. Plaats één vis tegelijk in de opening met de ventrale kant naar boven en gebruik een naald van 30 gauge om ongeveer 40 microliter van 10 millimolar EdU in het lichaam van de vis te injecteren.Breng de vis vervolgens terug naar de vuilwatertank gevuld met systeemwater. Verzamel de hersenen zoals eerder vermeld en plaats ze als een groep in een glazen injectieflacon van 9 milliliter met 2 milliliter van negen delen 100% ethanol tot één deel 37% formaldehyde. Fixeer de hersenen op 4 graden Celsius op een rockerplatform.Gebruik een cryostaat om de hersenen in TFM in de gewenste oriëntatie op droogijs in te bedden. Vasculaire letsel bleek een van de gemakkelijkste en meest prominente pathologieën te zijn om succesvol letsel via dit model te identificeren. Het vermogen om de indicator te identificeren veranderde met de stam van vissen die tijdens het letsel werden gebruikt.Identificatie van vasculair letsel bij wild type AB was moeilijk te onderscheiden tussen milde of matige TBI en onbeschadigde controlevissen vanwege de pigmentatie. Na verwonding vertoonde de milde TBI-vis minimale schaafwonden aan het oppervlak, terwijl de matige TBI-vis beperkte hersenbloedingen vertoonde. De omvang van het letsel was duidelijk bij ernstige TBI-vissen.Vasculaire schade kan daarentegen gemakkelijk worden geïdentificeerd bij het gebruik van albino- of Casper-vissen. Zwelling van het cerebrum als gevolg van letsel werd beoordeeld met behulp van oedeem. Daarentegen hadden zowel matige TBI als ernstige TBI significant oedeem, 1 dpi en 3 dpi, maar het vloeistofgehalte van zowel matige TBI als ernstige TBI keerde terug naar niveaus die leken op onbeschadigde controles met 5 dpi.Deze stompe krachtbeschadiging resulteerde in een robuuste celproliferatierespons die de neuroaxis overspant. Verhoogde EdU-etikettering werd waargenomen in de ventriculaire en subventriculaire zones van de voorhersenen in vergelijking met onbeschadigde controles. De gewonde hersenen vertoonden verhoogde EdU-labeling in de periventriculaire grijze zone, de optische tectale kwabben en aspecten van de voorste hypothalamus in vergelijking met de onbeschadigde vissenhersenen.Na ernstige TBI vertoonden neurogene gebieden in de achterhersenen een verhoogde celproliferatie in vergelijking met de onbeschadigde hersenen. Voor een goede inductie van de verwonding, zorg ervoor dat de vissen vastzitten en stabiel zijn in de mal, en dat de slang recht is om off-center impact te voorkomen of het gewichtsvaltraject te veranderen. Deze procedure biedt een snelle en kosteneffectieve inductiemethode voor stompe krachtletsel toegepast op een regeneratief model dat vooral van toepassing zou zijn op herhaald hoofdtrauma of door letsel geïnduceerde regeneratieve studies.

a-scalable-model-to-study-effects-blunt-force-injury-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

In this video, fertilized zebrafish embryos are dechorionated under a stereo microscope and then exposed to a cholesterol synthesis inhibitor, leading to the development of blood vessel ruptures and brain hemorrhages in the larvae. Hemorrhagic larvae, identifiable by distinct red spots, are subsequently separated under a microscope for further analysis.

Modeling Drug-Induced Hemorrhage in Zebrafish Larva

Na spinale doorsnijding, volwassen zebravissen hebben functioneel herstel van zes weken na het letsel. Om te profiteren van larvale transparantie en sneller herstel nemen, presenteren we een methode voor het doorsnijden van de larvale ruggenmerg. Na doorsnijding, zien we zintuiglijke herstel vanaf 2 dagen na het letsel, en C-bocht beweging door 3 dagen na het letsel.

Spinal Cord doorsnijding in het larvale zebravis

Om licht te werpen op de cellulaire en moleculaire mechanismen van neurogenese en regeneratie bij volwassen zebravissen, ontwikkelden we een protocol voor invasieve chirurgie dat mechanische verwondingen veroorzaakt in het volwassen telencephalon van de zebravis en daaropvolgend bewaken van veranderingen in de 'gestoken' hemisfeer door middel van immunohistochemie of in situ hybridisatie.

Steekwond Letsel van de zebravis Adult Telencephalon: Een methode om Onderzoek gewervelde Brain Neurogenese and Regeneration

Hier presenteren we een betrouwbare methode om regeneratie van volwassen nieren te bestuderen door acute nierbeschadiging te induceren door gentamicine-injectie. We tonen aan dat de schade afhankelijk is van de gentamicine-dosering en de omgevingstemperatuur door middel van in situ hybridisatie om lhx1a+ zich ontwikkelende nieuwe nephronen te labelen.

Nier Regeneratie in Adult zebravis door Gentamicin geïnduceerd letsel

Dit artikel beschrijft een methode voor het creëren van een mechanische vaatbeschadiging bij zebravisembryo's. Dit verwondingsmodel biedt een platform voor het bestuderen van hemostasis, verwondingsgerelateerde ontsteking en wondgenezing in een organisme dat bij uitstek geschikt is voor real-time microscopie.

Mechanische vatverwonding in zebravis embryo&#39;s

Hier beschrijven we 3 volwassen zebrafish letsel modellen en hun gecombineerd gebruik met immunosuppressieve medicamenteuze behandeling. Wij bieden begeleiding over de beeldvorming van het herstel van de weefsels en bot mineralisatie daarin opsporen.

Volwassen Zebrafish letsel modellen te bestuderen van de effecten van prednisolon in het herstel van botweefsel

Hier presenteren we een protocol om hersenletsel te kwantificeren, bewegings tekorten en neuroinflammation na bloeden in de hersenen in zebravis larven, in de context van de menselijke intracerebrale bloeding (ICH).

Met behulp van zebravis larven om de pathologische gevolgen van hemorragische beroerte studie

Dit protocol beschrijft de procedures om acute nierschade (AKI) te veroorzaken bij volwassen zebravissen met cisplatine als nefrotoxisch middel. We beschreven de stappen om de reproduceerbaarheid van de techniek te evalueren en twee technieken om respectievelijk ontsteking en celdood in het nierweefsel, flowcytometrie en TUNEL te analyseren.

Acuut nierletselmodel geïnduceerd door Cisplatine bij volwassen zebravissen

Een mechanisch hersenletselmodel bij de volwassen zebravis wordt beschreven om de moleculaire mechanismen te onderzoeken die hun hoge regeneratieve capaciteit reguleren. De methode legt uit om een steekwondletsel te creëren in het optische tectum van meerdere soorten kleine vissen om de regeneratieve reacties te evalueren met behulp van fluorescerende immunostaining.

Steekwondletselmodel van het volwassen optische tectum met behulp van zebravissen en medaka voor de vergelijkende analyse van regeneratieve capaciteit

Volwassen zebravis is in staat tot functioneel herstel na een dwarslaesie en is een vooraanstaand modelsysteem om aangeboren mechanismen van neurale regeneratie op te helderen. Hier beschrijven we zwemuithoudingsvermogen en zwemgedragstests als functionele uitlezingen van regeneratie van het ruggenmerg.

Beoordeling van zwemuithoudingsvermogen en zwemgedrag bij volwassen zebravissen

Dit protocol beschrijft een cryoinjury-model om diepgaande schade aan verschillende caudale myomeren bij volwassen zebravissen te induceren. Deze methode biedt een nieuwe benadering voor het bestuderen van skeletspierregeneratie na ernstig verlies van weefsel bij gewervelde dieren van niet-zoogdieren.

Een cryoletselmodel voor het bestuderen van skeletspierregeneratie van de caudale steel bij volwassen zebravissen

Leer een schaalbaar model om traumatisch hersenletsel bij volwassen Danio rerio te bestuderen. Deze methode onderzoekt pathologieën en neuronale regeneratiemechanismen na letsel met verschillende ernst.

Een schaalbaar model om de effecten van blunt-force letsel bij volwassen zebravissen te bestuderen

Meer video's verkennen