Ontwikkeling van een laterale flow immunochromatografische strip voor snelle en kwantitatieve detectie van kleine molecuulverbindingen

De procedure beschrijft de bereiding van colloïdaal goud en de assemblage van de immunochromatografische strips. Ten eerste werden chlooraurinezuur en natriumcitraat gebruikt voor de synthese van colloïdaal goud. Natriumcitraat werd toegevoegd aan chloroaurinezuuroplossing en gekookt om colloïdaal goud met de juiste deeltjesgrootte te verkrijgen.

Synthese, het colloïdaal goud antilichaam conjugaat. Na centrifugering werden colloïdale gouddeeltjes opgelost in de juiste oplossing en vervolgens geresuspendeerd om colloïdale goudoplossing te verkrijgen. Dompel het glasvezelmembraan onder in de conjugatie om het geconjugeerde pad voor te bereiden.

Laat kunstmatig antigeen en secundaire antilichamen op het NC-membraan vallen als T-lijn en C-lijn. Bevestig respectievelijk het NC-membraan, het absorberende membraan, het monsterkussen en het glasvezelmembraan in het PVC-bord. Snijd het geassembleerde karton in een strook van 3,5 millimeter breed.

Confect vol procent goudchloridezuuroplossing en 1% natriumcitraatoplossing respectievelijk. Zet de magneetroerder aan en plaats de kolf op een mixer. Voeg 120 milliliter gedestilleerd water toe in een kolf met ronde bodem en verwarm het tot de kook op een thermostatische magneetroerder.

Blijf koken en voeg snel 0,5 milliliter vol procent chloroaurinezuur en vijf milliliter 1% natriumcitraat toe. Blijf vijf tot 10 minuten verwarmen. Observeer de kleur van de oplossing veranderen van lichtgeel naar wijnrood.

Schakel de stroom van de thermostatische magneetmenger uit, koel af tot kamertemperatuur en plaats het mengsel in een schone fles. Bewaren bij vier graden Celsius. De gouden nanodeeltjes laten het Tyndall-effect zien.

De grootte en de morfologie van de gouden nanodeeltjes werden bepaald door ultraviolette spectroscopie en de transmissie-elektronenmicroscoop beeldvorming. Voeg 100 microliter natriumchlorideoplossing toe aan acht buisjes. Stel de colloïdaal goudoplossingen in op pH 5 tot 12 met 0,1 mol per liter kaliumcarbonaat.

Voeg 100 microliter colloïdaal goudoplossing toe aan acht buisjes die natriumchloride bevatten. Ga enkele minuten na het mengen staan voor post. Observeer de kleurverandering van elke buisoplossing en noteer de buis die rood blijft.

Kies de pH-waarde met de laagste hoeveelheid toegevoegd kaliumcarbonaat en een stabiele oplossingskleur als de optimale pH-waarde voor het bereiden van geconjugeerd. Dezelfde aanpak aangepast. Observeerde de kleurverandering en registreer de buis die rood blijft.

Kies de hoeveelheid antilichaam met de laagste concentratie mAB en een stabiele oplossingskleur als de optimale hoeveelheid mAB. Neem 10 milliliter colloïdale goudoplossing en gebruik 0,1 mol per liter kaliumcarbonaat om de oplossing aan te passen aan de optimale pH-waarde. Voeg langzaam SSd mABs toe met de juiste concentratie en schud gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur.

Centrifugeer het mengsel bij 2000 RPM gedurende 20 minuten bij vier graden Celsius. Verwijder het neerslag dat onzuiverheden van het neergeslagen colloïdaal goud bevat. Centrifugeer het mengsel bij 10.000 RPM gedurende 40 minuten.

Gooi het supernatant weg. Het neerslag is colloïdaal goud mAB-geconjugeerd. Voeg Tris zoutzuur, BSA, Tween 20 en PEG 20, 000 toe en meng vervolgens goed om de resuspensiebuffer te bereiden.

Voeg de resuspensiebuffer toe en dissociëer het neerslag. Het membraanmateriaal stript, inclusief glascellulosemembraan, polyester cellulosemembraan en het PVC-bord. Het membraanmateriaal moet volgen en evalueren met een steriele microscoop om zich te ontdoen van de inhomogeniteit.

Plaats eerst het NC-membraan op het PVC-bord op twee centimeter van de rand van het sectie-uiteinde van het bord. Ten tweede, laat twee milligram per milliliter SSd-BSA op het NC-membraan vallen op twee centimeter van de bovenrand als testlijn en laat 1,5 milligram per milliliter gouden anti-muis IgG op het NC-membraan vallen op twee centimeter van de onderrand als controlelijn. Bevestig de absorberende pad aan de PVC-plaat boven het NC-membraan en overlap met het NC-membraan met twee millimeter.

Trim het glasvezelmembraan tot vijf centimeter lang en twee centimeter breed en gebruik het als een geconjugeerde pad. Dompel het glasvezelmembraan onder in de gouden nanodeeltjes mAB-conjugaatoplossing. Laat een tijdje weken om de gouden nanodeeltjes mAB-absorptie te maken.

Droog het brede membraan in de couveuse op 37 graden. Plak de voorbehandelde geconjugeerde pad onder het NC-membraan en de overlappende lengte met het NC-membraan moet 0,1 centimeter zijn. Trim het Fusion3-membraan in 1,8 centimeter lang en 3,5 centimeter breed en gebruik als monsterpad.

Plaats vervolgens het monsterkussen op het PVC-bord en overlap het geconjugeerde pad met twee millimeter. Knip, monteer de karton in 3,5 millimeter brede stroken met behulp van een snijmachine en compact met behulp van een batch-lamineersysteem. Plaats ten slotte de teststrips in de schaal.

Verzegel ze in een aluminiumfoliezak met droogmiddel en bewaar ze uit de buurt van licht. Het ICS is nu geassembleerd. Laat 50 microliter monsteroplossing op het monstergat vallen om het chromatografieproces te observeren.

Analyseer vervolgens de strips met behulp van een draagbare striplezer. De machine kan de verhouding van de testlijn tot de besturingslijn leveren. Evalueer de specificiteit, gevoeligheid, herhaalbaarheid en stabiliteit van de ICS-test.

De bereide colloïdaal goudoplossingen werden gelezen. Transmissie-elektronenmicroscoopanalyses onthulden dat de deeltjes polyhedraal van vorm waren en uniform waren verdeeld met een gemiddelde diameter van 14 nanometer. Hoge resolutie transmissie elektronenmicroscoop beelden toonden een continu randpatroon met een afstand van 0,117 nanometer gouden nanodeeltjes.

Ultraviolet zichtbare absorptie gaf aan dat verschillende maten colloïdale gouddeeltjes kunnen worden verkregen door het aandeel citraatnatrium en chlooraurinezuur te veranderen. In het kwantitatieve experiment werden de strips met de testresultaten van saikosaponine D gescand met behulp van een draagbare ICS-lezer. We berekenden een standaardcurve door niet-concentraties van saikosaponine D te relateren aan de overeenkomstige absorptie bij elke concentratie.

Na methodologisch onderzoek kan de methode worden toegepast voor kwantitatieve en semi-kwalitatieve detectie van kleine molecuulverbindingen. Deze procedure omvat de bereiding van colloïdaal goud, synthese van gouden nanodeeltjes mAB-conjugaat, assemblage van de strip en methodologisch onderzoek. Dit werk biedt een gedetailleerd protocol voor de ontwikkeling van immunochromatografische strip voor gebruik bij snelle en kwantitatieve detectie van kleine moleculen.

Na het bekijken van deze video hoop ik dat je een goed begrip hebt voor de voorbereiding van de immunochromatografische strip. Bedankt voor het kijken en veel succes voor je experimenten.